Leucemias Agudas I

LEUCEMIAS AGUDAS,
CLASIFICACION, DIAGNOSTICO,
TRATAMIENTO Y APORTACION
DE LAS NUEVAS TECNICAS
DIAGNOSTICAS.
Ana Maria Gómez García
FIR 3º año Análisis Clínicos
CANCERES INFANTILES
MIELOBLASTICAS
LINFOBLASTICAS
LEUCEMIAS
CRONICAS
Expansión de elementos
maduros de MO
AGUDAS
Expansión clonal de
precursores hematopoyeticos
80% L.infantiles son LLA
15% son LMA
Restantes son indiferenciadas o cronicas
(LMC, LMMC JUVENIL)
LEUCEMIAS AGUDAS
EN LA INFANCIA
ANTECEDENTES HISTORICOS
Virchow, 1845
Ehrich, 1891 Citoquimica
Farber, 1948 empleo Aminopterina
ESTRATEGIAS DE ESTUDIO DE
LAS L.A:
METODOS DE LABORATORIO PARA CARACTERIZAR BLASTOS LEUCEMICOS:
DATOS
LABORATORIO
CLINICA
MORFOLOGIA
L.A.
BIOLOGIA
MOLECULAR
INMUNOFENOTIPO
FISH
CITOGENETICA
Complejo diagnostico de las Leucemias en la Actualidad.
DEFINICION LEUCEMIA
Proliferación neoplásica a partir de una célula
hematopoyética inmadura que ha perdido la
capacidad de diferenciarse.
Disminución del tejido hematopoyetico normal en
MO y posterior invasión de sangre periférica y
otros órganos.
Enfermedad oncológica más frecuente
diagnosticada en menores de 15 años.
ETIOLOGIA
La mayoría carecen de etiología clara
Factores predisponentes:
Factores genéticos
Anomalías cromosómicas
Inmunodeficiencias congénitas
Radiaciones ionizantes
Fármacos mielotóxicos.
Enfermedades inmunológicas
Virus
CLINICA
SINTOMAS CONSTITUCIONALES: astenia,
debilidad, perdida peso, sudoración nocturna.
SINTOMAS POR INFILTRACION DE LA MO:
- desplazamiento serie roja: Anemia ( palidez)
- desplazamiento serie blanca: Fiebre (50%),
infecciones 2ª a neutropenia.
- desplazamiento serie plaquetar: diátesis
hemorrágicas
(petequias, sangrado) por la plaquetopenia.
CLINICA
1.
2.
3.
4.
5.
SINTOMAS POR INFILTRACION DE ALGUN
ORGANO O TEJIDO:
- 50-80% hepatoesplenomegalia
- linfoadenopatias
- 40% niños dolor óseo o articular
- hipertrofia gingival
- infiltración piel, mediastino y SNC (5-7% de
niños con L.A.)
DATOS DE LABORATORIO
95% Anemia normocítica, normocrómica y
arregenerativa ( ret )
El compromiso de 2 o mas
series hematopoyeticas
Neutropenia.
MIELOGRAMA
90% Trombocitopenia.
16% carecen de blastos en SP.
CARACTERISTICAS SERICAS
LDH elevada: Se correlaciona con la masa
tumoral y la gravedad de la enfermedad
Otras menos frecuentes
Hipercalcemia
Hiperuricemia
Aumento de transaminasas
Uremia
FROTIS SANGUINEO NORMAL
PLAQUETAS
LINFOCITO
NEUTROFILO
MONOCITO
AUTOANALIZADOR : ADVIA 120
SISTEMA AUTOMATIZADO PARA
ESTUDIO DEL HEMOGRAMA
ADVIA 120: AUTOANALIZADOR
HEMATOLOGICO
Autoanalizador por citometria de flujo.
Tres sistemas analíticos:
1Citómetro de flujo con lámpara diodo laser para canales:
RBC/PLAQ
BASOLOBULARIDAD
RETICULOCITOS
2.Citometro de flujo con lámpara tungsteno para canal de
PEROXIDASA.
3.Colorimetro para medir HEMOGLOBINA.
Autoanalizador hematologico:
Graficas serie blanca
tamaño
Complejidad nuclear
mieloperoxidasa
Graficas serie roja
CONCENTRACIO
N DE Hb
TAMAÑO
Serie plaquetar
VOLUMEN
DENSIDAD
HEMOGRAMA AUTOMATIZADO DE
SANGRE NORMAL
DIAGNOSTICO DIFERENCIAL
Reacciones leucemoides linfocitarias:
mononucleosis infecciosa, Bordetella Pertussis….
Hiperplasia linfoide madura en niños< 2 años.
Otros: Anemia aplasica, linfoma, neuroblastoma,
síndromes hemorrágicos (purpura
trombocitopenica aguda), síndrome
mielodisplasico…
MONONUCLEOSIS INFECCIOSA
AUTOMATIZADO
MANUAL
Atipias linfocitarias
LEUCEMIA AGUDA VISTA AL
M.OPTICO
BLASTOS
LEUCEMIA AGUDA (SISTEMA
AUTOMATIZADO:
LEUCEMIAS
AGUDAS.CLASIFICACION FAB
British Journal of Hematology, 1976 Aug ; 33(4): 451-8
Proposals for the Classification of the Acute Leukaemias
FRENCH-AMERICAN-BRITISH (FAB) CO-OPERATIVE GROUP
Bennett JM , Catovsky D, Daniel MT , Flandrin G, Galton DA, Gralnick HR, Sultan C,
Accepted for publication 26 January 1976
PROBLEMAS CON LA CLASIFICACION FAB:
•No todas las L. Agudas tienen 30% blastos (traslocaciones especificas).
•Excluye leucemias bifenotipicas.
•No incluye L. multilínea u otras poco frecuentes
•Excluye información esencial para tto y pronostico.
CLASIFICACION MORFOLOGICA
FAB (1976)
MIELOBLÁSTICA
LINFOBLÁSTICA
L1
L2
L3
Tamaño celular
Morfología Nuclear
Nucleolos
Basofilia citoplasmática
Vacuolas citoplasmáticas
L1: cels pequeñas
L2: cels pequeñas y grandes
L3: tipo Burkitt.
M0
M1
M2
M3
M4
M5
M6
M7
minimamente diferenciada
Sin maduración
Con maduración
promielocitica
mielomonocitica
monoblástica
eritroleucemia
megacarioblástica
LEUCEMIA AGUDA
CLASIFICACION OMS ( 2001)
L.MIELOIDES AGUDAS
L.LINFOIDES AGUDAS
De precursor de cel B
De precursor de cel T
De Burkit
L.MIELOIDE CRONICA
L.LINFATICA CRONICA
LEUCEMIA AGUDA
CLASIFICACION OMS ( 2001)
L. AGUDA 20%
BLASTOS
CLASIFICACION OMS:
MORFOLOGIA
GENETICA
FENOTIPO
CLASIFICACION INMUNOFENOTIPICA
EGIL (1995)
Mas usada
LINFOBLASTICAS
AGUDAS
MIELOBLASTICAS
AGUDAS
BIFENOTIPICAS AGUDAS
SCORE INMUNOFENOTIPICO DE LAS LEUCEMIAS BIFENOTIPICAS
ESTUDIO INICIAL DE LA LEUCEMIA.
CITOMETRIA DE FLUJO
Paneles de anticuerpos monoclonales empleados para el estudio inicial de las
LAs (FITC/ PE/ ECD/ PC5/ PC7)
LLA
DE
LLA
deFENOTIPO
fenotipo B B
cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3
nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34
CD45/ CD4/ CD8/ CD3/ CD19
CD10/ CD20/ CD45/ CD34/ CD19
CD38/ CD22/ CD45/ HLADR/ CD19
CD15/ CD13/ CD45/ CD33/ CD19
KOR-SA/ 7.1/ CD45/ CD24/ CD19
IP (DNA)/ pan-B
LLALLA
DE de
FENOTIPO
fenotipo T T
LMA
LMA
cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3
nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34
CD45/ CD4/CD8/ CD3/ CD19
CD7/ CD34/ CD3/ HLADR/ CD5
CD7/ CD1a/ CD45/ CD33/ CD56
CD7/ CD13/ CD45/ CD10/ CD2
CD38/ TCRαβ/ CD45/ TCRγδ/ CD3
cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3
nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34
CD45/ CD4/ CD8/ CD3/ CD19
CD15/ CD13/ CD45/ CD33/ CD34
CD7/ CD117/ CD45/ CD34/ CD56
CD65/ CD135/ CD45/ CD2/ CD34
CD64/ CD11b/ CD45/ CD14/ CD16
HLADR/ CD235a/ CD45/ CD34/ CD41
INMUNOFENOTIPOS
LEUCÉMICOS
LEUCEMIAS 2001-2005
MIELOIDES
MIELOIDES 25%
75%
LINFOIDES
LINFOIDES
LEUCEMIA T
LEUCEMIA B
LEUCEMIAS NIÑO JESUS 2005
LINFOIDES
LLA T
INTERMEDIA
LLA T PRO T
MIELOIDE M0
CD56+
MIELOIDES
MIELOIDE M0
LLA PROB
LLA B PROBPREB
MIELOIDE M3
MIELOIDE M4
MIELOIDE M5
LMMJ
LLA B
COMUN
LMC
LEUCEMIAS LINFOBLÁSTICAS
AGUDAS B (EGIL):
FRECUENCIA
SUBTIPOS
CD34+
MARCADORES
INMUNOLOGICOS
TdT +
5%
LAL B1 o
pro-B
CD79a+ y/o CD 22+
y/o CD19+,CD34+
CD19+
CD22+
CD10++
60%
15%
3%
LAL B2 o
comun
LAL B3 o
pre- B
LAL B4 o
maduros
CD79a+ y/o CD 22+
y/o CD19+,CD34±
CD 10+
CD79a+ y/o CD 22+
y/o CD19+,
Cad µ
intracitoplasmatica
CD79a+ y/o CD 22+
y/oCD19+,
Ig Sup+
CD34+/TdT+
CD19+
CD22+
CD20++
IgM+
CD10 +d
CD10+/-
CD20++
IgM+
CD19+
CD22++
Ig super+
CD22+
CD19+
LEUCEMIAS LINFOBLÁSTICAS
AGUDAS T (EGIL):
FRECUENCIA
15%
MAS
FRECUENTE
SUBTIPOS MARCADORES
INMUNOLOGICOS
LAL T1 o
pro-T
+ CD 7 Y CD3
citoplasmático, CD34+
LAL T2,
pre-T
A lo anterior añadir +
CD 2 y/o CD 5 y/o
CD8.
LAL T3,
tímicocortical
+ CD1a
LAL T4,
madura
Demostración de la
existencia de CD 3 de
sup en ausencia de CD
1a.
TdT+
CD34 +
CD3+
CD7+
TdT+
CD2+ CD3+
CD8+
CD5+
CD7+
CD4+
CD8+
CD1a+
CD2
TdT +
CD3+
CD5
CD7
CD2+
CD3+
CD4 o
CD8
TdT+
CD5+
CD7+
LEUCEMIAS LINFOBLASTICAS T
Menos frecuentes ( 15% LAL pediátricas).
Mas agresivas (30% recaen a los dos
años).
Menos caracterizadas citogeneticamente
(25-50% presentan cariotipos alterados).
Menos información pronostica.
Ttos menos específicos.
CLASIFICACION INMUNOLOGICAMORFOLOGICA
TIPO
inmunolog
TdT
HLA
DR
CD10
CALLA
CD3
CD1
a
CD7
CD2
CD5
CD8
CD19
CIg
SIg
Tipo
FAB
proB
+
+
-
-
-
-
-
+
-
-
L1L2
COMUN
+
+
+
-
-
-
-
+
-
-
L1L2
PreB
+
+
±
-
-
-
-
+
+
-
L1L2
B
NEG
+
±
-
-
-
-
+
-
+
L3
ProT
+
-
±
+cit
-
+
-
-
-
-
L1L2
PreT
+
-
±
+cit
-
+
+
-
-
-
L1L2
TIMICO
CORTICAL
+
-
-
+cit
POS
+
+
-
-
-
L1L2
TIMICO
MADURO
-
-
-
+sup
NEG
+
+
-
-
-
L1L2
LEUCEMIAS AGUDAS
1.
DIAGNOSTICO
2.
TRATAMIENTO
3.
TRANSPLANTE
4.
EMR
COMO SE REALIZA UN
DIAGNOSTICO?
ANALIZADORES AUTOMATICOS.
EXTENSION DE SANGRE PERIFERICA.
EXTENSIONES DE MEDULA OSEA
CITOQUIMICA DE EXTENSIONES MO.
CITOMETRIA DE FLUJO DEL ASPIRADO DE
MEDULA OSEA PARA TIPIFICAR LA LEUCEMIA
CITOGENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR
FROTIS NORMAL MO
megacariocito
eritroblastos
MO PATOLOGICA
LEUCEMIA
MIELOIDE AGUDA
LEUCEMIA LINFOIDE AGUDA
CONTRIBUCION DE LA CITOQUIMICA
AL DIAGNOSTICO HEMATOLOGICO
La citoquímica estudia la composición qca. de las
células y hace posible detectar y precisar la
localización de algunos principios inmediatos,
enzimas y sust.inorgánicas (metales pesados).
Compuestos:
Carbohidratos: reacción del ác peryódico de Shiff
o reacción del PAS.
Enzs oxidantes: reacción de las peroxidasas.
Enzs hidrolíticas: fosfatasas alcalinas, ácidas, ßglucuronidasa, muramidasa, N-acetil- ßglucosaminidasa, esterasas inespecíficas.
Componentes inorgánicos: hierro⇒azul de Prusia
o de Perls.
CITOQUIMICA
Tipos FAB
L1
L2
L3
PAS
+
GRANO
+
GRANO
-
MPX
-
-
-
P acida
+T
+T
-
Cloroacetato
esterasa
-
-
ANAE
( naftol
acetato
estarasa)
+T
+T
MO
M1
M2
M3
M4
M5
M6
+
-
+
++
+++
-
-
-+
++
+++
-
-
-
-
-
++
-+
-
-+
-
-
+
++
-
FOTOS CITOQUIMICA
ANAE
PAcida
PAS
MPX
GRACIAS