Selección de bacterias ácido lácticas productoras de sustancias

XI Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2010
Facultad de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de Rosario
Selección de bacterias ácido lácticas productoras de
sustancias inhibitorias aisladas de sangre aviar de
matadero
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Altina, M.G. ; Bonansea, E.F. ; Zbrun, M.V. ; Soto, L.P. ; Signorini, M.L. ;
1,2
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Rosmini, M.R. ; Frizzo, L.S.
1
Departamento de Salud Pública. Facultad de Ciencias Veterinarias, UNL.
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3
Facultad de Ciencias Agropecuarias, UCA.
INTA-EEA Rafaela
[email protected]
La sangre de matadero representa un grave problema por su alto poder
contaminante y además es considerada una materia prima rica en proteínas
de alto valor biológico. Por esto, ha sido necesario contar con mecanismos
de conservación de la sangre frente a numerosos grupos bacterianos
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aerobios provenientes del estómago e intestino del animal faenado . Una
posibilidad para evitar el deterioro es la biopreservación mediante cultivos
de Bacterias Ácido Lácticas (BAL). La acción preservativa de las BAL es
atribuida a la combinación de la acción de metabolitos antimicrobianos
producidos durante el proceso fermentativo, tales como ácido láctico,
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acético, peróxido de hidrógeno, diacetaldehido, reuterina y bacteriocinas .
Por lo mencionado anteriormente, este trabajo se focalizó en seleccionar
cepas productoras de sustancias inhibitorias (SI), importantes en la
bioconservación de la sangre aviar. Para realizar la búsqueda de cepas
productoras de SI, se utilizaron cultivos over night en caldo MRS de las BAL
aisladas de sangre de matadero aviar pertenecientes al cepario del DSPVFCV-UNL, los que fueron centrifugados para eliminar cualquier resto celular.
Seguidamente, 1,5ml de cada sobrenadante fueron distribuidos en
microtubos estériles, con la identificación de la cepa correspondiente (ELC
SN). Al resto del sobrenadante, se le ajustó el pH entre 6-6,5 con NaOH 3M.
Luego, se centrifugó nuevamente y fueron rotulados como extracto libre de
células neutralizado (ELC N). Para realizar el ensayo de difusión en agar se
utilizaron 7 cepas tapiz (Escherichia coli, Salmonella dublin, Pseudomonas
fluorescens, Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum, Enterococcus
faecium y Lactobacillus acidophilus) incubadas over night en caldo BHI para
las primeras 3 (cepas patógenas/alterantes halladas en sangre de matadero
aviar) y en caldo MRS para el resto (BAL). Transcurrido el tiempo de
incubación, se preparó una suspensión del microorganismo en agua estéril
con una absorbancia de entre 0,2 y 0,3 a 620nm, correspondientes a una
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población del orden de 10 UFC/ml . De esta suspensión se tomaron 80 µl
de cada cepa tapiz y se inocularon tubos con agar suave (0,8%); MRS para
BAL y BHI para el resto. Una vez que el medio agarizó, fueron realizados
hoyos de 5mm de diámetro utilizando sacabocados estériles.
Posteriormente, se colocaron en cada hoyo 50 µl del ELC (SN o N) a
analizar, trabajando siempre bajo gabinete estéril. Después de incubar las
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placas en heladera para permitir que los ELC difundieran en el medio
agarizado, se incubaron a 37ºC durante 24h en aerobiosis. Finalizado el
período de incubación, se observó presencia o ausencia de halos de
inhibición de crecimiento del microorganismo tapiz. Los halos considerados
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positivos fueron los que presentaron un diámetro igual o mayor a 1mm . De
las 210 cepas probadas, 156 (75% del total) ELC SN presentaron 1 o más
halos de inhibición frente a las cepas tapiz. Dentro de éste porcentaje, 46
microorganismos presentaron halos en las placas correspondientes a los
ELC N. Respecto a las cepas tapiz, L. casei no fue inhibida por ningún ELC.
L. acidophilus fue inhibido por 19 ELC SN y 3 ELC N. L. plantarum lo fue por
23 ELC SN y 11 ELC N. E. faecium presentó 89 halos de inhibición para los
ELC SN pero solamente 3 para los ELC N. Tanto E. coli como S. dublin
presentaron más de 100 halos de inhibición para los ELC SN pero solo 3 y 8
para los ELC N respectivamente. La cepa tapiz patógena/alterante restante,
P. fluorescens, fue inhibida por 68 ELC SN y por 13 ELC N. Con estos
resultados preliminares se puede concluir que aproximadamente el 75% de
las cepas testeadas ejercen algún efecto inhibidor sobre el crecimiento de
los microorganismos tapiz. A su vez, el 22% de los ELC N probados,
presentaron inhibición frente a las cepas indicadoras. Esto demuestra la
existencia de sustancias inhibidoras diferentes a los ácidos orgánicos. Con
estas cepas se realizarán diversas pruebas para determinar qué tipos de
sustancias se hallan presentes en los sobrenadantes seleccionando
preferentemente a las productoras de bacteriocinas. Respecto a las cepas
utilizadas como tapiz, L. casei no fue inhibida por ninguna SI, por lo cúal no
la consideramos de utilidad para este tipo de ensayos. Por su parte, L
plantarum fue inhibida principalmente por los ELC N contrariamente a lo que
ocurrió con E. faecium y L. acidophilus que lo fueron por los ELC SN.
Concluyendo, este trabajo nos permitió detectar 46 cepas capaces de inhibir
a las tapices mediante SI no ácidas.
BIBLIOGRAFÍA
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Tecnologia Agroalimentària Institut de Tecnologia Agroalimentària.
Universitat de Girona. 2003.