Uso de la morfología de las colonias para la identificación

Uso de la morfología de las colonias para la
identificación presuntiva de los microorganismos
Capítulo 8
Iván Ferrer Rodríguez, PhD
Catedrático
Identificación de bacterias
 El manejo de la morfología de las colonias con maestría y la interpretación de la
tinción Gram son esenciales en la identificación de bacterias en el área clínica.
 Pueden proveer una identificación presuntiva.
 Pueden aumentar la calidad en el manejo de un paciente.
 Pueden jugar un rol importante en el control de calidad en sistemas automatizados.
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Observación inicial
 Normalmente se observa la colonia
en un cultivo primario luego de 1824 horas de incubación (overnight).
 Este examen se conoce como
lectura de placas.
 Cuando las bacterias crecen en la
superficie de un medio de cultivo
sólido, permanecen fijas en su
posición y forman masas de muchos
millones de células visibles a simple
vista.
 Evaluación macroscópica.
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Observación inicial
 Las colonias así formadas varían desde un tamaño diminuto hasta masas de
varios milímetros de diámetro.
 El tamaño, forma, textura, olor y en algunos casos el color son útiles para la
identificación de las bacterias.
 Estas características dependen del medio de cultivo y de las condiciones de
incubación.
 Selección de medios en los SOPs.
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Observación inicial
 La morfología de las colonias es una de las características básicas de las bacterias
y es indispensable su estudio para comenzar correctamente una identificación
preliminar.
 Las características morfológicas más importantes de una colonia bacteriana
aislada sobre un medio de cultivo sólido son:
 Hemólisis
 Color
 Tamaño
 Consistencia
 Forma o margen
 Pigmentación
 Elevación
 Olor
 Densidad
 Primero se examinan los medios selectivos y no selectivos para determinar
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preliminarmente si es gram-positivo o gram-negativo.
Observación inicial
MacConkey:
 Inhibe los organismo gram-
positivos.
 Inhibe crecimiento de algunos
gram-negativos fastidiosos,
Haemophilus y Neisseria.
 Promueve crecimiento de bacilos
gam-negativos, Enterobacterias.
 Permite diferenciar entre
fermentadores y no fermentadores
de lactosa.
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Fermentador
No fermentador
Observación inicial
 Segundo, se examinan otros medios
como el Agar sangre (BA) y Agar
Chocolate (CA) que promueven
crecimiento de organismos
fastidiosos.
 Si crece en BA, normalmente crece
en CA.
 Si crece en CA, no necesariamente
crece en BA.
 Algunas especies de Haemophilus y
Neisseria gonorrhoeae NO crecen en
BA, pero crecen en CA.
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Observación inicial
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Escherichia / Citrobacter
Klebsiella / Enterobacter
 Colonia rosa y seca.
 Colonia grande, mucoide.
 Figura 8-3.
 Figura 8-4.
Hemólisis
 Algunas bacterias, principalmente los cocos, pueden causar hemólisis de RBC
en un medio de cultivo sólido como el agar sangre.
 Esto se debe a la liberación de unas sustancias llamadas hemolisinas.
 La hemólisis adyacentes a la colonia puede ser intensa o ligera y se observa
como un halo verdoso más o menos claro alrededor de la colonia.
 Es útil en la identificación de las bacterias, en especial ayuda a diferenciar los
diferentes tipos de Streptococcus.
 La hemólisis puede ser alfa, beta o gamma.
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Hemólisis
Streptococcus B-hemolítico
 La hemólisis total o completa se
denomina hemólisis beta.
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Hemólisis
Streptococcus pneumonia
 La alfa es una hemólisis parcial de
las RBC y se caracteriza por una
coloración verdosa.
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Hemólisis
 La ausencia de hemólisis se
denomina hemólisis gamma.
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Tamaño
 El tamaño de las colonias bacterianas es bastante uniforme en condiciones de
cultivo.
 La visualización del tamaño normalmente se hace a simple vista, aunque se
podrían utilizar lupas o estereoscopios para discernir mejor.
 En términos generales las colonias se describen por comparación como grandes,
medianas o pequeñas, pero sin medirlas.
 Por ejemplo, el tamaño de las colonias de los bgn es mayor al de los cgp y
Staphylococcus tiene mayor diámetro que Streptococcus.
 Las características de una colonia se deben estudiar en el mismo tipo de medio,
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para evitar las diferencias surgidas por la diferencia en la composición de los
medios de cultivo (SOPs).
Tamaño
 El tamaño de las colonias bacterianas se puede clasificar en las siguientes
categorías:
 Pequeñas o puntiformes: 1 mm de diámetro o menor
 Medianas: hasta 4 mm de diámetro
 Grandes: mayores de 4 mm de diámetro
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Forma o margen
B. anthracis: medusa head
 La morfología de una colonia viene
dada por su borde y la forma de
elevarse sobre el medio de cultivo.
 El borde puede ser (Figura 8-8):
 Liso o suave
 Áspero o rugoso
 Filamentoso
 Irregular
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Forma o margen
 Algunas especies de Proteus
producen Swarming en medios
como BA o CA.
 Es como una manta brumosa que se
extiende sobre la superficie del
medio más allá de donde están las
bacterias.
 Puedes ver un ejemplo en la
Figura 8-9.
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“Swarming “
Elevación y densidad
Elevación
Densidad
 La elevación normalmente se
 La densidad normalmente se
describe como:
 Plano
 Elevado
 Convexa
 Umbilicate – depresión central
 Umbonate
describe como:
 Transparente
 Translucidas – deja pasar luz,
pero no permite ver
 Opaco
 Puedes ver estos ejemplos en la
 Puedes ver estos ejemplos en la
Figura 8-11.
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Figura 8-12.
Color y pigmentación
Color
Pigmentación
 En términos generales, el color se
 La pigmentación es una
usa para describir un género.
 Puede ser blanco, gris, amarillo.
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característica intrínseca de las
especies (Figura 8-15).
Consistencia
 La consistencia se determina
tocando la colonia con un asa
estéril.
 Las colonias pueden tener una
consistencia variable:
 Seca y frágil
 Grasienta y cremosa
 Viscosa y pegajosa
 La mayoría de las colonias tienes
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consistencia mantecosa, siendo fácil
obtener porciones pequeñas de la
misma.
 En algunas ocasiones las colonias
son extremadamente viscosas y
tienden a formar filamentos
mucosos cuando intentamos
retirarlas con el asa.
Olor
Algunos ejemplos:
 Ciertos tipos de bacterias
descomponen los sustratos que
utilizan para su metabolismo
desprendiendo sustancias volátiles
que proporcionan un olor
característico a los cultivos.
 Staphylococcus aureus – medias viejas
 Pseudomonas aeruginosa – olor a
frutas, uvas
 Proteus mirabilis – putrefaccion
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Crecimiento en caldo
Thioglycollate
Figura 8-19
 Streamers
 Serpentinas
 Vines
 Enredaderas
 Puffballs
 Puffballs
 Scum
 Escoria
 Importante para determinar
arreglos.
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Hoja de Reporte de Desconocidos
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Resumen
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