Separación de los pigmentos de la hoja de espinaca mediante

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Separación de los pigmentos de la hoja de espinaca mediante
cromatografía en capa fina
Introducción
La cromatografía en capa fina (CCF) es una forma de cromatografía de adsorción
sólido-líquido que constituye una técnica importante en Química Orgánica para el análisis
rápido de muestras que en algunos casos puede estar en el rango de los 10-9 g.
Frecuentemente se usa para el seguimiento de la evolución del progreso de una reacción, o
para el control y seguimiento de las separaciones que se producen mediante una
cromatografía en columna preparativa.
Para realizar el análisis de una muestra por CCF se utiliza un adsorbente sólido
como gel de sílice (SiO2. H2O) o alúmina (Al2O3), unido a una placa rectangular de de vidrio o
plástico. El adsorbente sirve de fase estacionaria. La muestra se aplica en disolución con un
capilar de vidrio en un extremo de la placa, pero no sobre el mismo borde. A continuación se
introduce la placa en un tanque cerrado conteniendo un disolvente o mezcla de disolventes
(fase móvil), de manera que la placa quede apoyada sobre el fondo y el punto con la
muestra, por encima del nivel del líquido. El tanque contiene una atmósfera saturada en el
disolvente para lo cual se introduce un trozo de papel de filtro que debe. La fase móvil
asciende por capilaridad, de forma que se produce el mayor o menor avance de los
componentes de de la mezcla, según su polaridad.
Procedimiento
a. Preparación de la muestra
En un mortero, machacar una hoja de espinaca con una mezcla de 4 ml de hexano y
2 ml de etanol. Con una pipeta Pasteur transferir el extracto a un tubo de ensayo y
agitar con mucha suavidad con una cantidad igual de agua, evitando la formación de
http://www.ugr.es/~quiored/doc/p23.pdf
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emulsiones. Eliminar la fase acuosa con ayuda de una pipeta Pasteur, y el lavar
sucesivamente dos veces con 2 ml de agua para eliminar el etanol. Transferir la fase
orgánica a un tubo de ensayo y añadir con una espátula sulfato sódico anhidro para
eliminar el agua.
b.- Preparación de la placa de cromatografía.
Marcar la placa, con ayuda de un lápiz los puntos en donde se va depositar la
muestra (tres puntos). Con un capilar, tomar un poco de la disolución
orgánica
conteniendo los pigmentos y pinchar la placa de cromatografía en los tres puntos con
concentraciones diferentes. Para evitar que la mezcla difunda por la placa, vaciar el
contenido del capilar poco a poco sobre el punto, y soplar suavemente cada vez, para
secar el disolvente.
c.- Desarrollo de las placa
Preparar varias mezclas de disolventes, desarrollar las placas. Preparar unos 10 ml de
eluyente cada vez, empezando por una mezcla de Hexano/Acetona 7:3
Disolventes
Mezclas
Hexano
Cloroformo
Acetona
Etanol
Una buena separación revela la presencia de al menos siete puntos coloreados
Pigmento
Color
Carotenos
Naranja
Clorofila a
Verde azulado
Xantofilas
Amarillo
Clorofila b
Verde
1. Dibujar en cada caso la placa con los resultados obtenidos
2. Calcular el Rf de cada uno de los puntos obtenidos
3. Indicar cual sería la mezcla de disolventes más adecuada para realizar la separación
Bibliografía
Experimental Organic Chemistry 3th Edition. Gilbert & Martin. Harcourt, página 171
http://www.ugr.es/~quiored/doc/p23.pdf