LABORATORIO No. 10 AMILASA Las enzimas son

Universidad de San Carlos de Guatemala
Cent ro Universitario de Occidente
División de Ciencias de la Salud
Escuela de Medicina
Lic. José Manuel Arriaga Romero, Q.B.
MANUA L DE PRA CTICAS DE LABORA TORIO
CURSO DE BIOQUIMICA
AÑO 2,016
LABORATORIO No. 10
AMILASA
Las enzimas son proteínas biológicas específicas que catalizan reacciones bioquímicas sin
alterar el punto de equilibrio de la reacción o sin ser consumidas o experimentar algún cambio en su
composición. Las reacciones son con frecuencia específicas y esenciales para funciones fisiológicas,
como la hidratación de dióxido de carbono, conducción nerviosa, degradación de nutrientes y uso de
energía.
La amilasa, producida principalmente en el páncreas exocrino y en las glándulas salivales,
escinde los enlaces alfa-1-4 glucosídicos de los polisacáridos (almidón y glucógeno). Se encuentra
elevada en el suero de pacientes con pancreatitis aguda alcanzando los valores más elevados entre las
24 y 30 horas posteriores al ataque, declinando luego para volver a los ni veles normales entre las 24 y
48 horas.
También se ve aumentada en este caso la excreción urinaria de la enzima, persistiendo la
hiperamilasuria 3 a 5 días, luego de que la actividad sérica ha alcanzado los niveles normales. También
es posible encontrar valores aumentados en cualquier caso de “abdomen agudo” o intervención
quirúrgica en regiones próximas al páncreas.
La parotiditis bacteriana se asocia también con elevaciones en los niveles de amilasa sérica.
FUNDAMENTO
La alfa-amilasa hidroliza el sustrato definido 2-cloro-p-nitrofenil-alfa-D-maltrosídico (CNP-G3)
para liberar 2-cloro-p-nitrofenol (CNP), formándose 2-cloro-nitrofenil-alfa-D-maltosídico (CNP-G2),
maltotriosa (G3) y glucosa. El CNP absorbe a 405 nm y la velocidad de aparición del color es
directamente proporcional a la actividad enzimática.
MATERIALES
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Suero para las determinación de amilasa
Reactivo para amilasa
Cubetas fotométricas
Micropipetas
Puntas para micropipetas
Fotómetro
Reloj
PROCEDIMIENTO
1. Seleccionar la longitud de de onda adecuada para la prueba, la cuál es de 405 nm
2. Poner en cero el aparato con agua destilada.
3. Marcar 1 tubo de ensayo como M (Muestra)
4. Proseguir de acuerdo al siguiente esquema:
Pipetear en el tubo M
1000 ml de Reactivo de Amilasa
Universidad de San Carlos de Guatemala
Cent ro Universitario de Occidente
División de Ciencias de la Salud
Escuela de Medicina
Lic. José Manuel Arriaga Romero, Q.B.
MANUA L DE PRA CTICAS DE LABORA TORIO
CURSO DE BIOQUIMICA
AÑO 2,016
Pre incubar de 3 – 4 minutos. Luego agregar:
Suero del Paciente
20 microlitros
3) Mezclar inmediatamente y leer absorbancia luego de 1 minuto y a los 2 minutos.
CALCULO DE RESULTADOS
Amilasa (U/l)= A/min x 3,953
Valores de Referencia: Hasta 125 U/l
Linealidad: La reacción es lineal hasta una actividad de amilasa de 2000 U/l.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
a) Compare los resultados obtenidos con los valores de referencia correspondientes
b) Profundice, en forma ordenada, sobre las condiciones clínicas en las que se podrían obtener
valores fuera de lo normal de cada uno de ellos, estableciendo las causas probables.
c) Explique qué significado tiene la linealidad de la prueba.
CONCLUSIONES: Saque sus propias conclusiones sobre la práctica realizada.
RECOMENDACIONES: De sus recomendaciones pertinentes sobre la práctica