Toxicidad Coclear y Vestibular Específica Inducida por Nuevos

TRABAJO CIENTÍFICO
Toxicidad Coclear y Vestibular Específica Inducida por Nuevos
Aminoglucosidos Semi Sintéticos: Implicaciones para el
Tratamiento de la Enfermedad de Ménière
Specific Cochlear and Vestibular Toxicity Induced for New Semi
Synthetic Aminoglycosides: Implications for the
Treatment of Meniere’s Disease
Julierme G. da Silva1, Ivone Carvalho1, Alexandre P.Corrado2,
José Antonio A. de Oliveira2, Miguel A Hyppolito2.
1- Facultad de Ciencias Farmacéuticas de Ribeirão Preto de São Paulo, Ribeirão Preto, SP, Brasil.
2- Facultad de Medicina de Ribeirão Preto, Universidad de São Paulo, Ribeirão Preto, SP, Brasil.
RESUMEN
Los antibióticos aminoglucósidos (AAG) son drogas bactericidas potentes con amplio espectro de acción y comportamiento farmacocinético,
así como puede inducir importantes efectos colaterales como nefrotoxicidad y ototoxicidad. La ototoxicidad ocurre tanto a nivel coclear
como vestibular, pero algunos AAG como la neomicina son predominantemente cocleotóxicos y otros como la estreptomicina y gentamicina
predominantemente vestíbulotóxicos. En la enfermedad de Ménière (EM) hay daños cocleares y vestibulares con crisis de vértigo,
pérdida auditiva progresiva y fluctuante, zumbidos y desequilibrio. El vértigo puede ser tratado a través de la laberintectomia del oído
afectado utilizándose AAG predominantemente vestíbulo toxicos. El presente estudio tiene como objetivo la obtención de nuevos AAG
con ototoxicidad y vestíbulotoxicidad selectivas y disociadas. Para esto utilizamos la neomicina y obtuvimos, entre otras dos fracciones
moleculares, la neamina y la N-metil neobiomidina-B (NMB). Las fracciones fueron testadas por ensayos para verificar su acción coclear
y vestibular a través de medidas como potenciales evocados auditivos de tronco cerebral (PEATC), emisiones otacústicas por productos de
distorsión (OEA-PD) y microscopía electrónica de barrido (MEB). Solamente la NMB se mostró vestíbulotóxica selectiva, sin causar daño
a las células ciliadas externas o internas, comprobado por MEB, PEATC y OEA-PD, en los animales estudiados. La NMB parece ser el
primer compuesto con características vestíbulotóxicas selectivas que podría ser utilizada en ensayos clínicos para el tratamiento de la EM
Palabras clave: Aminoglucósidos, ototoxicidad, vestíbulotoxicidad, enfermedad de Ménière.
SUMMARY
The aminoglycosides antibiotics (AGA) are potent bactericidal drugs with broad spectrum of action and pharmacokinetic behavior, and
can induce significant side effects such as nephrotoxicity and ototoxicity. Ototoxicity occurs both cochlear and vestibular, but some AGA
as neomycin are predominantly cocleotoxic and others such as streptomycin and gentamicin predominantly vestíbulotoxic. In Ménière;s
disease (MD) there cochlear and vestibular damage with spells of vertigo, fluctuating hearing loss and progressive, tinnitus and imbalance.
Vertigo can be treated through the labyrinthectomy affected ear using predominantly vestibulotoxic AGA. This study aims to obtain new
AGA with selective and dissociated ototoxicity and vestíbulotoxicity. We used neomycin that was obtained, among other two molecular
fractions, the neamina and N-methyl neobiomidina-B (NMB). The fractions were tested by trials to verify their vestibular and cochlear
action through measures such as auditory evoked potentials (BAEP), otoacoustic emission distortion product (OEA-PD) and scanning
electron microscopy (SEM). Only the NMB showed selective vestibulotoxicity without causing damage to outer or internal hair cells,
evidenced by SEM, ABR and OEA-PD in the studied animals. The NMB appears to be the first compound with selective vestibulotoxicity
features that could be used in clinical trials for the treatment of MD
Key words: Aminoglycosides, ototoxicity, vestibulotoxicity, Ménière’s disease
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Hyppolito y Cols. Toxicidad Cocleo-vetibular, Aminoglucósidos y Enfermedad de Meniere
INTRODUCCIÓN
Los antibióticos amino glucósidos (AAG) poseen anillos
aminociclitoles (derivados de poli-hidrociciclo-hexano)
unidos a amino-azúcares por ligaduras glucosídicas.
Son altamente potentes en el tratamiento de infecciones
causadas por bacilos gram-negativos, como especies
de pseudonomas, enterobacterias, cocobacilos y el
Micobacterium tuberculosis1, 2, 3.
Entre los aminoglucósidos se puede citar la
estreptomicina, neomicina, gentamicina kanamicina,
etc., aislados de microorganismos de la orden de los
actinimicetaes2,3.
Estos antibióticos presentan efectos colaterales
agudos, sub-agudos y crónicos, como la nefrotoxicidad y
ototoxicidad (coclear y vestibular), siendo este el principal
inconveniente en su uso crónico2,3,4. Pero, los antibióticos con
vestíbulotoxicidad selectiva son estudiados con importante
aplicación en el tratamiento de la enfermedad de Ménière
(EM), con el objetivo de producir ablación química de las
células sensoriales del laberinto posterior, con destrucción
del mismo, resultando en control de los síntomas de vértigo
que son los más importantes en esta enfermedad5, 6, 7, 8, 9.
AAG como la gentamicina por ejemplo, han sido
utilizados desde la década de 1950 para la ablación química
vestibular en los casos de vértigo intratable asociada a
la enfermedad de Ménière. El inconveniente es que la
gentamicina, así como la estreptomicina causa lesión
también a la cóclea, con daño irreversible de sus células
ciliadas externas traduciéndose en pérdida de la audición,
principalmente para frecuencias agudas5,6,7,8,9.
La gentamicina que hoy es comercializada está
compuesta por tres componentes mayores que son: el GMC1, GMC2 y GM-C1a, que constituyen el 90% al 100% de
la composición química de la droga4,6.
Estudios realizando la purificación y separación de
los tres compuestos de la gentamicina mostraron que el
componente C2 es más cocleotóxico que vestíbulotóxico,
mientras que el componente C1a es el más vestíbulotóxico4,
6, 10, 11
.
Así, proponemos la fragmentación química del sulfato
de neomicina B que será realizada para explorar la
correlación entre la estructura química de los derivados,
por modificación molecular de los agrupamientos amino de
neamina, con su actividad en cuanto a la cocleotoxicidad
o vestíbulotoxicidad selectivas, que permita su uso futuro
en tratamiento de enfermedades laberínticas como la
enfermedad de Ménière.
MATERIAL Y MÉTODOS.
Obtención química de los derivados.
Los derivados obtenidos fueron sintetizados a partir
del sulfato de neomicina comercial (GIBCO). Los
productos obtenidos fueron analizados por espectrometría
de resonancia magnética nuclear RNM 1H a 400MHz en
Hyppolito y Cols. Toxicidad Cocleo-vetibular, Aminoglucósidos y Enfermedad de Meniere
aparato Bruker Advance DPX 400 y por espectrometría de
infrarrojo (IR) en el espectrómetro IRFT –Nicolet Modelo
Protege 460, en celda de KBr. Los análisis de cromatografía
delgada (CCD) fueron realizados utilizando placas de silica
gel 60 GF 254 MERK®10,12.
La neamina en la forma de base libre se obtuvo por
el método de Leach y Teeters. La obtención de la metilneobiosamidina fue hecha por la reacción de metanólisis
ácida del sulfato de neomicina tratada con éter etílico
anhidro purificada en CCD y analizada por RNM 1H para
verificación de la pureza e identificación.12,13,14,15,16
Testes biológicos de ototoxicidad y vestíbulotoxicidad
El estudio fue aprobado por el comité de ética en
investigación(es) animal de la Facultad de Medicina
de Ribeirão Preto de la Universidad de São Paulo (Nº:
070/2005).
Los animales seleccionados fueron las cobayas,
obtenidas del Bioterio Central de la Universidad de São
Paulo-Campus Ribeirão Preto, a través de la investigación
del reflejo de Preyer.
Escogimos animales con peso variando entre los 400
y 600 g., por la facilidad del manoseo del meato acústico
externo, para la realización de los exámenes audiológicos
de emisiones otacústicas (EOA) y potenciales auditivos
evocados de tronco encefálico (PAETE), así como por
facilitar la inoculación de la droga vía intratimpánica.
Después de un reposo auditivo de 24 horas, los animales
eran reevaluados y esta vez realizamos la otoscopía manual.
Los animales que presentaron señales de otitis externa o media
aguda fueron descartados para el experimento. Los animales
que presentaron tapón de cerumen, de fácil remoción fueron
incluidos en el experimento y los que presentaron cerumen
de difícil remoción o alteraciones inflamatorias del conducto
auditivo externo, o también conducto auditivo muy estrecho
para acomodar adecuadamente la sonda del equipo de EOA,
fueron descartados.
Las cobayas fueron entonces sometidas a una selección
auditiva por EOA por producto de distorsión (EOA-PD)
y evaluación electrofisiológica a través de los PEATE,
en cabina con aislamiento acústico y bajo anestesia con
clorhidrato de ketamina (65mg/Kg) y xylazina (6,5 mg/Kg).
Las que presentaron EOA-PD presentes en las dos orejas
y PEATE mostrando onda l, con 5 dB de estímulo, fueron
consideradas para el experimento18,19,20.
La
inoculación
intratimpánica
era
realizada
inmediatamente la realización de los exámenes auditivos a
través de visión otomicroscópica. La droga era inoculada
por jeringa desechable graduada de 0.1 ml de aguja 30g ½.
El control del volumen inoculado dependió del reflujo de la
droga por el orificio de inoculación y varió de 0,3 a 0,6 ml.
Después de la inoculación, los animales permanecieron 3
horas con la cabeza inclinada 45° en decúbito dorsal, para
minimizar el desplazamiento de la droga de la hendidura
auditiva por la trompa de Eustaquio21.
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Los exámenes de EOA-PD y PEATE fueron realizados
en el undécimo día después de la inoculación y enseguida los
animales fueron sacrificados para la realización del estudio de
microscopía electrónica de superficie.
Para la evaluación funcional de las células ciliadas externas
cocleares utilizamos EOA-PD (Equipo: ILO 92 CAE System
Otodynamics LTD)
El test de EOA-PD fue realizado pre-tratamiento y
momentos antes de los animales ser sacrificados, siguiendo la
relación de frecuencia 2F1-F2 =1,22 a una resolución 2 puntos
por octava18,19.
Consideramos las EOA a partir de 1,5 kHz pues las
dimensiones del conducto auditivo externo de la cobaya hacen
con que haya una dificultad de detección de las emisiones
otoacústicas abajo de esta frecuencia, obteniendo respuestas
que coinciden con las respuestas del ruido18, 19.
De esta manera, al analizar la frecuencia de 2 kHz ofrecemos
un tono puro un poco arriba y un poco abajo de tal modo que la
relación entre ellas sea de 1,22 obteniendo así, automáticamente,
una respuesta de frecuencia resultante siguiendo la relación
1F1-F2 (abajo de la frecuencia evaluada) y 2F2-F1 (arriba de
la frecuencia resultante). Se debe aún llevar en consideración
que las intensidades de f2 y f1 pueden ser iguales o diferentes.
En este estudio utilizamos intensidades iguales a 70 dB. La
intensidad del estímulo desencadenante puede variar en un
rango de 0 a 70 dB NPS o pueden ser medidas en la banda de
0.5 a 8 KHZ18,19.
Las EOA resultantes suelen ser en torno de 55 dB NPS
menos intensas que el estímulo provocante. En este caso, un
estímulo de 70 dB NPS, probablemente tendríamos una emisión
otacústica producto de distorsión de más o menos 10 o 15 NPS,
lo que varía de individuo para individuo18,19.
De este modo fue observado el llamado “DPGRAM”, el
audiociclograma. Donde se tiene un estímulo que es el sonido y
una respuesta que también es un sonido y que provee la función
de las células ciliadas externas cocleares responsables por las
frecuencias analizadas18, 19.
En este estudio consideramos como más importante las EOA
en las frecuencias más agudas que evalúan el estado funcional
de las células ciliadas externas en la espira basal de la cóclea, no
obstante, la evaluación es cualitativa. Fueron consideradas las
EOA-PD como presentes y ausentes18, 19.
Para la evaluación do PEATE utilizamos el programa
Compass Meridiam 200-Nicolet LTD. Los siguientes parámetros
fueron utilizados:
Con disección microscópica las cócleas fueron prefundidas
con solución de fijación con glutaldeido de 3% a 4° Celsius
y mantenidas en la solución por 24 horas para la fijación.
Los pasos siguientes fueron realizados en el Laboratorio de
Microscopia Electrónica del Departamento de Imunología y
Agentes Biopatogénicos de la FMRP-Universidad de São Paulo.
A través de ventana redonda fue inyectado para fijación una
solución de glutaldeido a 3% en tampón fosfato 0,1M pH=7,4
por 4 horas a 4° Celsius, lavadas 3 veces por 5 minutos con el
mismo tampón, después fueron fijadas con peróxido de Osmio
1% por 2 horas a 4° Celsius y sometidas a una deshidratación
a la temperatura ambiente en una batería creciente de
etanol (50%,70%,90% y 95 una vez por 10 minutos en cada
concentración) y etanol absoluto 3 veces por 15 minutos.
Terminada la deshidratación, se siguió para el secado por
el método del punto critico en CO2, donde el material quedó
desprovisto de agua. Después de ser fijado en porta especimen
adecuado, el material fue revestido en cámara de vacío con
vapores de oro y examinados en microscopio electrónico de
barrido (JEOL SCANNING MICROSCOPE-JSM 5200)22.
Drogas utilizadas, dosis y vía de administración.
Las muestras fueron preparadas en la concentración
de 0,22N. Escogidas empíricamente, considerando lo que
los estudios de la literatura relatan para la aplicación de la
gentamicina intratimpánica en humanos. La concentración
en normalidad tiene el objetivo de estandarizar el número de
moléculas aplicadas en el test, con el fin de comparar mejor
los resultados obtenidos. Para que las muestras estén libres de
contaminación, después de disueltas son filtradas en MILLEXGS MILIPORE® de porosidad de 0,22 µm, acomodadas en
eppendorf esterilizados en mufia a temperatura de 200°C por un
período de 2 horas.
1. Neomicina: concentración de 267 mg/ml, vía
intratimpánica en el oído derecho. Neamina:
concentración de 72mg/ml, vía intratimpánica en el oído
derecho.
2. N-metil-neobiosamidina: concentración de 88 mg/ml,
vía intratimpánica;
3. Xilazina: (2g/100ml)-6,5mg /Kg, vía intraperitoneal;
4. Clorhidrato de ketamina: (50mg/ml)-65 mg/Kg, vía
intraperitoneal.
El oído izquierdo de cada animal fue considerado su propio
control, en el que se inyectó agua para dilución de fármacos
(Equiplex®) y cuyo volumen varió de 0,3 a 0,6 ml por oído hasta
su reflujo por el orificio de inoculación.
GRUPOS DE ESTUDIO
Estímulo en Tone Burst 4 KHz, a intensidades de 60, 40,
20, 10 y 5 dB, con audífono de inserción auricular20; banda de
estímulo 11/seg; amplificación 5 µV/200 nV; filtros pasa alta y
pasa baja 150 y 3 KHz.
Grupo 1: 6 animales-neomicna 267mg/ml
intratimpánica-oído derecho), aplicación única.
Para la evaluación anatómica de lesión a las células ciliadas
externas utilizamos la microscopia electrónica de barrido. Las
cobayas fueron sacrificadas en el tiempo programado después
de la administración de las drogas vía intraperitoneal y entonces
sacrificadas después de anestesia con éter, habiendo sido
decapitadas y sus cócleas removidas de la bula.
Grupo 3: 6 animales–N metil-neobiosamidina 88 mg/ml (vía
intratimpánica-oído derecho), aplicación única
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(vía
Grupo 2: 6 animales–neamina 72mg/ml (vía intratimpánica–
oído derecho), aplicación única.
Hyppolito y Cols. Toxicidad Cocleo-vetibular, Aminoglucósidos y Enfermedad de Meniere
Hyppolito y Cols. Toxicidad Cocleo-vetibular, Aminoglucósidos y Enfermedad de Meniere
RESULTADOS
estar involucrados en algunos casos. Varias patologías tales
como sífilis, otitis media, meningitis, trauma, otosclerósis
y enfermedades auto inmunes pueden llevar a un cuadro
semejante a la enfermedad de Ménière, cursando con
hipertensión endolinfática5, 7.
De la fragmentación química de los siguientes compuestos
fueron obtenidos conforme el esquema siguiente:
En cuanto a los estudios de oto y vestíbulotoxicidad,
la N-metil-neobiosamidina mostró toxicidad selectiva
vestibular en los 6 oídos analizados, mostrando un patrón
de normalidad en cuanto al análisis bajo microscopia
electrónica de superficie, con presencia de células ciliadas
externas e internas normales y destrucción de las células
ciliadas vestibulares tanto en las máculas sacular o utricular
cuanto en las ampollas de los canales semicirculares.
(figura1)
Ha sido demostrado que el sáculo excesivamente
dilatado puede extenderse en dirección al interior de uno de
los canales semicirculares y mecánicamente comprometer
la cresta ampular, causando así vértigo instantáneamente.
En relación a los síntomas cocleares, parece que la
hidropesía podría interferir con la progresión de las ondas
endococleares 5,7,8,9.
Los exámenes de EOA-PD se mostraron presentes
y el PAETE mostró umbrales de 5 dB, sin alteraciones
morfológicas de las células ciliadas externas e internas, en
las 6 oídos analizados (figura 2 A, 2B, 2C)
La Neomicina mostró daño a las células ciliadas externas
de la cóclea en las 6 oídos testados, con preservación de
las células ciliadas internas y lesión vestibular en 3 de los
oídos testados. La Neam ina acarreó lesión coclear, pero
no acarreó lesión vestibular. Los datos referentes a los
hallazgos en los 3 grupos están descritos en la tabla 1.
FIGURA 2B - Ejemplo de EOA-PD normal (presente) oído
derecho de la cobaya tratada con NMB.
FIGURA 1. Microscopía electrónica de barrido de mácula
utricular de la cobaya tratada con N- metil-neobiosamidina.
Notar las alteraciones ciliares con desarreglo o fusión de los
cilios remanescentes y la evidente presencia de sustancia
globular, indicando lesión celular (3500x de aumento).
La enfermedad de Ménière atípica y caracterizada por
la presencia sintomática auditiva o vestibular, aisladamente
siendo que a coclear es caracterizada por la sordera
neurosensorial fluctuante y progresiva. Esta última está
asociada a la presión mientras que vestibular presenta vértigo
paroxístico, no estando aliada a la pérdida auditiva5,7,8.
.
FIGURA 2C - Ejemplo del análisis de PAETE con 5 dB de
umbral en oído derecho de la cobaya tratada con NMB.
DISCUSIÓN
Los AAG fueron los primeros antibióticos antituberculosis
estudiados y utilizados, siendo considerados actualmente
en el tratamiento de la tuberculosis que tiene su incidencia
creciente, principalmente con el advenimiento del SIDA1,
2, 3
.
Esquema 1: Fragmentación química del sulfato de neomicina, resultando en neamina y N-metil-neobiosamidina.
FIGURA 2A. MEB de la espiral coclear basal de un cilio de
después de la inyección con NMB. Note las células ciliadas del
órgano de Corti normales.
La enfermedad de Ménière es una patología del oído
interno que se caracteriza por crisis paroxísticas de vértigo
típico, hipoacusia neurosensorial fluctuante, zumbidos
y sensaciones de presión en el oído. Es de prevalencía
elevada y su incidencia a pesar de sufrir influencias raciales
genéticas y ambientales, está lejos de ser pequeña5, 7.
El problema básico del Ménière, sea él de causa conocida
o no, reside en la mala absorción de la endolinfa a nivel del
ducto y/o saco endolinfático. A medida en que la producción
de endolinfa se mantiene constante y su reabsorción esté
disminuida o abolida ocurrirá un acumulo de ese líquido en el
interior del sistema endolinfático (hidropesía) con elevación
de la presión hidrostática y, finalmente hipertensión del
sistema aumentada, con todas sus consecuencias5, 7, 8, 9.
En aproximadamente un cuarto de los pacientes con
Ménière es posible identificar una causa. Hasta el 20% de
los pacientes presentan historia familiar positiva para esta
enfermedad, sugiriendo que aspectos genéticos pueden
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La triada sintomática de la enfermedad de Ménière está
compuesta por síntomas vestibulares, auditivos y presión
aural. Normalmente esos síntomas aparecen en conjunto;
entretanto, muchos pacientes desarrollan aisladamente los
síntomas vestibulares o auditivos en un primer momento
por meses o años hasta el cuadro tornarse completo. El
vértigo paroxístico es el síntoma más incapacitante de esa
enfermedad, estando presente en 96,2 % de los casos5,7,8,9.
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No existe tratamiento eficaz en la enfermedad de Ménière
hasta el momento, sus tratamientos clínicos o quirúrgicos
disponibles no son completamente efectivos o promueven
riesgos para los pacientes. Debido a estos inconvenientes,
el uso de antibiótico aminoglucósido vestíbulotóxico
(estreptomicina e gentamicina) ha sido propuesto para
provocar una laberintectomía química en el oído enfermo
siendo indicada principalmente para los pacientes con
enfermedad bilateral incapacitante o en enfermedad
incapacitante comprometiendo oído único. Con la lesión
química del epitelio vestibular los principales síntomas
incapacitadores como el vértigo son casi totalmente
abolidos. El uso de esta técnica es más seguro de lo que
cirugías intracraneanas, no obstante, existen limitaciones
porque los antibióticos aminoglucósidos utilizados son
también lesivos a la cóclea, provocando sordera variable e
irreversible, debido a la doble acción del antibiótico en la
cóclea y en el laberinto5,7,8,9.
Varios autores han relatado índices bastante elevados
en el control del vértigo usando el método de inyección
intratimpánica de estreptomicina, al mismo tiempo en que
preservan la audición a niveles aceptables, pero diferentes
estudios dejan clara su insatisfacción con esta terapéutica7,8,9.
El estudio de la relación estructura actividad de los residuos
de fragmentación de los antibióticos aminoglucósidos puede
originar productos simplificados, conectividad vestibular
selectiva y desasociada de la actividad coclear y que pueden
mostrarse más seguros y efectivos para el tratamiento de la
enfermedad de Ménière, como pudimos observar en estos
Hyppolito y Cols. Toxicidad Cocleo-vetibular, Aminoglucósidos y Enfermedad de Meniere
estudios de modificación de tests de estructura y actividad
para el compuesto N-metil-neobiosamidina.
El uso de neamina como prototipo, conteniendo unidades
I y II (esquema 1) representa una tentativa de eliminación de la
actividad cocleotóxica, una vez que la unidad 3-aminoglucosa
(III) fue reconocida como tóxica por Owada (1962). Como
descrito en la literatura la unidad 3-aminoglucosídica no es
fundamental para actividad biológica, siendo el blanco de
innumeras enzimas inactivantes en el proceso de desarrollo
de la resistencia a los antibióticos aminoglucósidos.
CONCLUSIÓN
El compuesto N- metil-neobiosamidina se mostró
efectivo en cuanto a su actuación vestibulotóxica selectiva,
sin causar daños cocleares cuando estudiado en MEB, EOAPD y PAETE, siendo el primer compuesto derivado de AAG
con esta característica lo que permitiría su uso en ensayos
clínicos para el tratamiento de la enfermedad de Ménière.
BIBLIOGRAFIA.
1. CHAMBERS, H. F. and SANDE M. A.; Fármacos
antimicrobianos (CONTINUAÇÃO): OS Aminoglicosídeos.
In: GOODMAN & GILMAN, (eds.) As Bases Farmacológicas
da Terapêutica, 9.ed, Rio de Janeiro - RJ, McGrawHill, 1996,
capo 46, p. 812-825.
2. MITSCHER, L. A.; Antibiotics and antimicrobial agents.
In:FOYE, W.O. e1. all. (eds.) Principies Of Medicinal
Chemistry, 5.ed, Baltimore. Willians & Wilkins, r 2002, capo
34, p. 788-791.
3. TRABULSI, L. R., SOARES, L. A; Antibióticos
Aminoglicosídeos. In: Penildon r Silva (eds.) Farmacologia, 6.
ed, Rio de Janeiro - RJ, Guanabara Koogan, 2002, cap.103, p.
1040-1048.
4. HUTCHIN, T and CORTOPASSI, G.; Proposed molecular
and cellular mechanism for aminoglycoside ototoxicity.
Antimicrobial Agents And Chemotherapy, 1994, V. 38, (11)
2517-2520.
5. PARELLA, M. M., COSTA, S. S., CRUZ, O. L. M., Doença
de Méniére e outras vestibulopatias periféricas. In: COSTA, S.
S. et alI. (eds.) Otorrinolaringologia Princípios e Prática, 1 ed,
Porto Alegre - RS, Artes Médicas Sul, 1994, capo 25, p. 238248.
6. SONG, B.B., SHA, S. H., and SCHACHT, J. Iron chelators
protect from aminoglycoside-induced cochleo- and vestibulotoxicity. Free Radical Biology And Medicine. 1998. V. 25 (2).
p. 189-195.
7. MUROFUSHI, T., HALMAGYI, G.M., and YAVOR, R.A
Intratympanic gentamicin in meniere’s disease: results of
therapy. American Joumal Of Otology, 1997, V. 18, (1), p. 2527.
8. CHEN, J. M., KAKIGI, A, HIRAKAWÁ, H., MOUNT, R. J..
HARRISON, R V. Middle ear instillation of gentamicin and
streptomicn in chinchillas: morphologic appraisal of selective
ototoxicity, Joumal of Otolaryngology 1999, V. 28. N. 3. p.
121-128.
9. RAUCH, S. O., and O. A S. J. G.; Intratympanic gentamidn
for treatment of intractable Meniere’s disease: a preliminary
report. Laryngoscope. 1997. V. 107, (1), p. 49-55.
10.OWADA, K.; Experimental studies on the toxicity of kanamycin,
its hydrolyzed products and neomycin, Chemotherapia, 1962,
V. 5, p. 277-293.
11. MARTIN, A. R.; Antibacterial antibiotics. In: DELGADO,
J.N.; and REMERS, W.A. (eds.) Textbook Of Organic
Medicinal And Pharmaceutical Chemistry, 5.ed, Philadelphia,
Lippincott-Raven, 1998, cap.10, p. 291-299.
12.FORD, J. H., BERGY, M. E., BROOKS, A A, GARRETT.
E. R., ALBERTl J., DYER, J. R. CARTER, H. E.; Further
Characterization of Neomicin B and neomicin C, Joumal of the
American Chemical Society, 1955, V. 77, p. 53115314.
13.BOTTO, R. E., COXON, B.; Nitrogen- 15 Nuclear Resonance
Spectroscopy of Neomicin B and Related Aminoglycosides,
Joumal of the American Chemical Society, 1983, V.105, p.
1021-1028.
14.LEACH, B. E.; TEETERS, C. M.; Neamine, an Antibacterial
Degradation Product of Neomycin. Journal of the American
Chemical Society, 1951, 73,(6), 2794-2797
15.LEACH, B. E.; TEETERS, C. M. The Identy of Neamine and
Neomycin A. Journal of the American Chemical Society, 1952,
74, (12),3187-3188.
16.ALPER, P. B., HUNG, S. C., WONG, C. H.; Metal Catalyzed
Diazo Transfer for the Synthesis of Azides from Amines,
Tetrahedron Letters, 1996, V. 37, (34), p. 6029-6032.
17.GROVE, O. C., RANOALL, W. A Assay Melhods of
Antibíotics: A Laboratory Manual (Antibiotics Monographs,
02) Medical Encyclopedia Inc, New York, 1955.
18.KEMP, D. T., Stimulated acoustic emíssions from withín the
human audítory system. Journal of the Acoustical Society of
America, 1978, V. 64, N. 5, p. 1386-1391.
19.HAREL, N., KAKIGI, A, HIRAKAWA, H., MONT, R J.,
HARRISON, R V., The effects of anesthesia on otoacoustic
emissions, Hearing Research, 1997, V. 110, p. 25-33.
20.SOCKALINGAM, R, FREEMAN, S., CHERNY, L, SOHMER,
H., Effect of High-Dose Cisplatin on Auditory Brainstem
Responses and Otoacoustic Emissions in Laboratory Animais,
The American Joumal of Otology, 2000, V. 21, p. 521-527.
21.DEMARCO, R.C. Uso da gentamicina intra-timpânica para
induzir ablação vestibular unilateral em cobaias. 2001, 99
p. Dissertação (Mestrado), Faculdade de Medicina, Ribeirão
Preto-Universidade de São Paulo, 2001.
22.SAITO, T.; MANABE, Y.; HONDA, N.; YAMADA, T.;
YAMAMOTO, T.; SAITO, H. Semi quantitative analysis by
scanning electron microscopy of cochlear hair cell damage by
ototoxic drugs. Scanning Microsc, Chicago, v.9, n.1, p.271-80,
1995.
23.QUEMA1: fragmentación química del sulfato de neomicina,
resultando en neamina y N- metil-neobiosamidina.
Rev. Ac. Ec. ORL 2012; (8)1: 35-40