COLESTEROL

COLESTEROL
Método Enzimático-Colorimétrico
Fabricante: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) – España
IVD
PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO
CONSERVAR A 2 - 8º C.
LEER LAS INSTRUCCIONES ANTES DEL USO
REF
Presentaciones:
6 x 25 mL reactivo
6 x 100 mL reactivo
1000 mL reactivo
GN 2015000:
5 x 50 mL reactivo*
Blanco
---10 µL
1000 µL
Muestra / Standard
10 µL
---1000 µL
Mezclar, incubar 5 minutos y leer las absorbancias contra blanco de reactivo antes
de 60 minutos.
CALCULO:
Con calibrador o standard:
(* para autoanalizadores DIRUI)
PRINCIPIO DEL METODO:
El reactivo Colesterol de Gernon determina la concentración de Colesterol en suero
o plasma mediante hidrólisis enzimática y oxidación y posterior cuantificación
fotométrica del indicador colorimétrico generado, cuya concentración es
proporcional a la concentración de Colesterol.
Método CHOD-PAP:
Esterasa
Ester de colesterol + H2O ----------------------Æ Colesterol + Ac. Grasos
Oxidasa
Colesterol + O2 ----------------------------------Æ 4-Colestenona + H2O2
Peroxidasa
2 H2O2 + 4-Aminoantipirina + Fenol--------------Æ Quinonaimina + 4H2O
SIGNIFICACIÓN CLINICA:
El Colesterol es un componente de la membrana celular y es un precursor de las
hormonas esteroideas y los ácidos biliares sintetizados por las células del cuerpo y
absorbido por los alimentos. El Colesterol es transportado por las lipoproteinas.
Existen 4 clases de Lipoproteínas: HDL (alta densidad), LDL (baja densidad), VLDL
(muy baja densidad) y Quilomicrones.
El LDL contribuye a la formación de placas ateroscleróticas en las arterias y su
incremento se encuentra muy relacionado con el riesgo de afección coronaria,
incluso a valores normales de Colesterol total. En cambio, el HDL tiene un efecto
protector, impidiendo la formación de placas ateroscleróticas. Además muestra
una relación inversa con la incidencia de enfermedades coronarias.
La cuantificación del nivel de Colesterol sirve para realizar una evaluación general,
mientras que se aconseja determinar la concentración de HDL y LDL para obtener
una valoración del riesgo de padecer una patología coronaria.
REACTIVOS:
Se encuentra listo para el uso.
Reactivo:
Fenol
Colesterol-Esterasa
Colesterol Oxidasa
Peroxidasa
4-Aminoantipirina
PIPES (pH 6.9)
PROCEDIMIENTO:
Existen aplicaciones para los principales sistemas automáticos.
Longitud de onda: 500 nm
Paso óptico: 1 cm
Temperatura: T ambiente (20-25ºC) / 37ºC
Reacción: punto final
Medida: contra blanco
Muestra / Standard
Agua destilada
Reactivo
Cont.
Referencias:
GN 20125:
GN 20600:
GN 21100:
MUESTRA:
Suero o plasma.
Estabilidad: 3 meses a –20ºC ó 7 días a 2-8ºC.
Deben descartarse muestras contaminadas.
2.4 g/L
>800 U/L
>250 U/L
>500 U/L
0.08 g/L
27.3 g/L
CONSERVACIÓN:
El reactivo es estable hasta fecha de caducidad si se mantiene a 2-8ºC, protegido
de la luz y de contaminación. No debe congelarse.
El reactivo debe estar libre de turbidez y de partículas. La medida no se ve
afectada por un eventual cambio de color en el reactivo siempre que la
absorbancia a 500 nm sea inferior a 0.300.
[Col]muestra = [Col]STD * (∆A
muestra/
∆A
STD)
CALIBRADORES Y CONTROLES:
Se recomienda el uso del multicalibrador Biocal (GN 90999) para calibrar la
técnica.
Se recomienda el uso de los controles Gernorm (GN 90998) y Gerpath (GN 90997)
para controlar a dos niveles la técnica.
CARACTERÍSTICAS DEL METODO:
Rango de medida:
Pueden determinarse concentraciones de Colesterol entre 0.113 y 750 mg/dL. Si
los valores exceden el límite máximo, debe diluirse la muestra en solución salina
(1+4) y multiplicar el resultado obtenido por 5.
Especificidad / Interferencias:
No se han observado interferencias de hemoglobina hasta 5 g/L y bilirrubina hasta
10 mg/dL. Otras sustancias pueden interferir en la determinación del Colesterol.
Sensibilidad / Límite de detección:
El límite inferior de detección es 1 mg/dL.
Precisión intra ensayo (n=20):
Muestra 1 (mg/dL): media: 99.8, SD: 1.21, CV: 1.22%
Muestra 2 (mg/dL): media: 185.3, SD: 1.41, CV: 0.76%
Precisión inter ensayo (n=20):
Muestra 1 (mg/dL): media: 96.3, SD: 4.20, CV: 4.36%
Muestra 2 (mgl/dL): media: 185.0, SD: 12.77, CV: 6.91%
Comparación con otros métodos:
Se han analizado 50 muestras utilizando el reactivo de Gernon (y) y otro de un
fabricante de la competencia (x).
La correlación ha sido: r= 0.997
La relación ha sido: y = 0.980 x + 2.280 mg/dL
RANGO DE VALORES
Nivel deseable: inferior a 200 mg/dL (5.2 mmol/L)
Riesgo moderado: entre 200 mg/dL y 240 mg/dL (5.2-6.2 mmol/L)
Riesgo elevado: más de 240 mg/dL (>6.2 mmol/L)
Cada laboratorio debe establecer su propio rango de referencia.
BIBLIOGRAFÍA:
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999
IU/GN/21000/R2/0612
PRECAUCIONES EN EL MANEJO:
Reactivo: contiene Azida sódica. Evítese cualquier contacto con piel y membranas.
No ingerir.
Deben tomarse las precauciones necesarias en el uso de reactivos de laboratorio
clínico.
Deben seguirse las disposiciones locales para la gestión de residuos.
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com
CHOLESTEROL
Enzymatic-Colorimetric Method
Manufacturer: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - Spain
IVD
FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE
PROCEDURE:
Application sheets for automated systems are available on request.
Wavelength: 500 nm
Optical path: 1 cm
Temperature: R.T. (20-25ºC) / 37ºC
Reaction: End point
Measurement: against reagent blank
STORE AT 2 - 8º C.
READ INSTRUCTIONS
REF
Package:
6 x 25 mL reagent
6 x 100 mL reagent
1000 mL reagent
GN 2015000:
5 x 50 mL reagent*
Sample / Standard
10 µL
---1000 µL
Mix, incubate 5 minutes and read the absorbance against reagent blank within 60
minutes.
CALCULATION:
With standard or calibrator:
(*for DIRUI autoanalyzers)
PRINCIPLE:
Gernon Cholesterol reagent quantifies the concentration of cholesterol after
enzymatic hydrolysis and oxidation. The colorimetric indicator is quinoneimine
which is generated from 4-aminoantipyrine and phenol by hydrogen peroxide
under the catalytic action of peroxidase.
Method CHOD-PAP:
Esterase
Cholesterol ester + H2O ----------------------Æ Cholesterol + Fatty acid
Oxidase
Cholesterol + O2 ----------------------------------Æ Cholesterol-3-one + H2O2
Peroxidase
2 H2O2 + 4-aminoantipyrine + Phenol--------------Æ Quinoneimine + 4H2O
SUMMARY:
Cholesterol is a component of cell membranes and a precursor for steroid
hormones and bile acids synthesized by body cells and absorbed with food.
Cholesterol is transported in plasma via lipoproteins. There are four classes of
lipoproteins: high lipoproteins (HDL), low density lipoproteins (LDL), very low
density lipoproteins (VLDL) and chylomicrons.
While LDL contributes to atherosclerotic plaque formation within the arterial intima
and is strongly associated with coronary heart disease; HDL has a protective effect
impeding plaque formation and shows an inverse relationship to coronary
diseases.
The determination of the individual total cholesterol level is used for screening
purposes while for a better risk assessment it is necessary to measure additionally
HDL and LDL cholesterol.
REAGENTS:
Ready to use.
Reagent:
Phenol
Cholesterol esterase
Cholesterol oxidase
Peroxidase
4-Aminoantipyrine
PIPES (pH 6.9)
Blank
---10 µL
1000 µL
Sample / Standard
Distilled water
Reagent
Cont.
Reference:
GN 20125:
GN 20600:
GN 21100:
SPECIMEN:
Serum or plasma.
Stability: 3 months at -20ºC or 7 days at 2-8ºC.
Discard contaminated specimens.
2.4 g/L
>800 U/L
>250 U/L
>500 U/L
0.08 g/L
27.3 g/L
STORAGE:
The reagent is stable up to the end of the indicated month of expiry, if stored at
2-8ºC, protected from light and contamination is avoided. Do not freeze the
reagents.
The reagents must be free of turbidity and particles. It has to be mentioned, that
the measurement is not influenced by occasionally occurring color changes, as
long as absorbances of the reagent is < 0.300 at 500 nm.
[Col]sample = [Col]STD * (∆A
sample/
CALIBRATORS AND CONTROLS:
It is recommended to use the multicalibrator Biocal (GN 90999) to calibrate the
method.
It is recommended the use of the controls Gernorm (GN 90998) and Gerpath (GN
90997) to control at two levels the method.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS:
Measuring range:
The test has been developed to determine cholesterol concentrations within a
measuring range from 0.113 – 750 mg/dL. When values exceed this range
samples should be diluted 1+4 with NaCl solution (9 g/L) and the result multiplied
by 5.
Specificity / Interferences:
No interferences were observed to hemoglobin up to 5 g/L and bilirubin up to 10
mg/dL. A list of drugs and other interfering substances with cholesterol
determination has been reported.
Sensitivity / Limit of detection:
The lower limit of detection is 1 mg/dL.
Precision intra-assay (n=20):
Sample 1 (mg/dL): mean: 99.8, SD: 1.21, CV: 1.22%
Sample 2 (mg/dL): mean: 185.3, SD: 1.41, CV: 0.76%
Precision inter-assay (n=20):
Sample 1 (mg/dL): mean: 96.3, SD: 4.20, CV: 4.36%
Sample 2 (mg/dL): mean: 185.0, SD: 12.77, CV: 6.91%
Method comparison:
A comparison of Gernon Cholesterol (y) with a commercially available test (x)
using 50 samples gave following results:
y = 0.980 x + 2.280 mg/dL
r = 0.997
REFERENCE RANGE
Desirable: lower than 200 mg/dL (5.2 mmol/L)
Borderline high risk: between 200 mg/dL and 240 mg/dL (5.2-6.2 mmol/L)
High risk: over 240 mg/dL (>6.2 mmol/L)
Each laboratory should establish its own reference range.
LITERATURE:
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999
IU/GN/21000/R2/0612/EA
WARNINGS AND PRECAUTIONS:
The reagent contains sodium azide as preservative. Do not swallow. Avoid contact
with skin and mucous membranes.
Refer to the safety data sheet and take the necessary precautions for the use of
laboratory reagents.
Refer to local legal requirements for waste management.
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
∆ASTD)
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com