PRÁCTICA No.7 PRUEBAS HEPÁTICAS 1

 Centro Universitario de Occidente‐USAC
División de Ciencias de la Salud Escuela de Medicina Curso de Bioquímica Lic. José Manuel Arriaga Romero, Q.B.
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO 2015
PRÁCTICA No.7
PRUEBAS HEPÁTICAS 1
TRANSAMINASAS
Introducción
Aunque el término "pruebas de función hepática es de uso general, es impreciso, ya que muchos de los ensayos que
reflejan la salud del hígado no son medidas directas de su función. Además, las pruebas de función hepática de uso
general pueden ser anormales incluso en pacientes con un hígado sano.
Desde un punto de vista práctico, los exámenes de laboratorio que generalmente se emplean en la evaluación de las
enfermedades hepáticas se pueden dividir en:
a) Exámenes relacionados con la función EXCRETORA del hígado (bilirrubina sérica, que mide la capacidad del hígado
para detoxificar los metabolitos y de transporte aniones orgánicos en la bilis y las enzimas canaliculares fosfatasa
alcalina y gamma glutamil transpeptidasa)
b) Exámenes relacionados con la función SINTÉTICA del hígado (principalmente la concentración de albúmina sérica y el
tiempo de protrombina).
c) Concentraciones séricas de enzimas intracelulares relacionadas a la INTEGRIDAD de los hepatocitos (especialmente
las aminotransferasas séricas).
Pruebas de laboratorio relacionadas con la integridad de los hepatocitos
La medición de la actividad sérica de ciertas enzimas intracelulares es de considerable utilidad para estimar la
integridad de los hepatocitos ya que su necrosis se asocia a una liberación significativa de las mencionadas enzimas a la
circulación. En las llamadas “pruebas hepáticas” se incluyen a las enzimas transaminasas. Hay dos tipos de
aminotransferasas: alanina aminotransferasa (ALT, antes conocida como SGPT) y aspartato aminotransferasa (AST,
antes conocida como SGOT).
1. Aspartato aminotransferasa (AST, previamente denominada SGOT [serum Glutamic-oxalacetic
transaminase] o TGO [transaminasa glutámico oxaloacética])
Esta enzima está presente en las células parenquimatosas del corazón, músculo e hígado. Su ubicación subcelular
corresponde al citoplasma y la mitocondria. La elevación de la actividad sérica de la AST generalmente se acompaña de
otras alteraciones de los exámenes de laboratorio hepático y refleja necrosis hepatocelular. Los niveles de alteración son
variables pudiendo alcanzar hasta 20 o 30 veces el valor normal o valores aún superiores. El grado de alteración puede
ser orientador desde el punto de vista diagnóstico. Los niveles de AST pueden alterarse en patologías extrahepáticas
(Infarto al miocardio, enfermedades musculares particularmente las miopatías inflamatorias o la rabdomiólisis). En estas
circunstancias la elevación de los niveles de AST es aislada. En el caso de las patologías hepáticas la elevación de AST
traduce un fenómeno de necrosis de los hepatocitos el cual puede ser secundario a un fenómeno de daño celular agudo
(ej: hepatitis virales, hepatitis por drogas o tóxicos, isquemia hepatocelular) o a un proceso inflamatorio crónico de
variadas etiologías (ej: hepatitis crónica viral o autoinmune).
2. Alanino aminotransferasa (ALT, previamente denominada SGPT [serum Glutamic-piruvic transaminase] o
TGP [transaminasa glutámico pirúvica])
Esta enzima es una enzima citosólica que se encuentra mayormente en los hepatocitos lo que le otorga una mayor
especificidad que la AST. Su significado es básicamente el mismo que esta última es decir se eleva marcadamente en
fenómenos de necrosis celular aguda y en menor grado cuando existe un proceso crónico destructivo de los hepatocitos.
Niveles moderadamente elevados de aminotransferasas (3-15 veces el valor normal) sugieren procesos inflamatorios
crónicos asociados a virus o al consumo de alcohol. Las alteraciones pueden ser fluctuantes en el tiempo, lo que a veces
puede inducir a confusión. Ocasionalmente, la obstrucción biliar aguda puede asociarse a una elevación significativa de
los niveles de AST y ALT.
Característicamente, estos niveles declinan rápidamente (24-48 horas) permitiendo hacer el diagnóstico diferencial
con otros cuadros.
Objetivos
1. Adquirir conocimiento sobre los diferentes desórdenes hepáticos existentes
2. Familiar al estudiante con algunas de las pruebas de laboratorio útiles para la evaluación del funcionamiento
hepático y el diagnóstico de hepatopatías
3. Adquirir conocimiento sobre las pruebas que son útiles en el diagnóstico diferencial de las hepatopatías
Materiales
 Suero para las determinaciones químicas
 Reactivos para la determinación de:
o AST/TGO
o ALT/TGP
 Cubetas de lectura
 Micropipetas
 Puntas para micropipetas
 Fotómetro
 Reloj
Procedimientos
1) ALAT/TGP
a. Marcar dos tubos: B y M, respectivamente
b. Agregar 100 µl de substrato para ALT/TGP a ambos tubos y precalentar por dos minutos a 37 °C
c.
d.
e.
f.
g.
h.
i.
j.
k.
Agregar 20 µl de agua destilada al tubo B
Agregar 20 µl de muestra al tubo M
Mezclar bien e incubar por exactamente 30 minutos a 37 °C
Agregar 100 µl de reactivo 3,4-DNFH a ambos tubos
Mezclar e incubar por 10 minutos a 37 °C
Agregar 1 ml de diluyente de enzimas a ambos tubos
Mezclar bien, retirar del baño y dejar en reposo por dos minutos
Leer la absorbancia de ambos tubos a 505 nm (AB y AM), poniendo el espectrofotómetro en cero de
absorbancia con agua destilada
Cálculo de la actividad de ALT
i.
Restar la absorbancia de B (blanco) de la absorbancia de M (muestra) para obtener la absorbancia
corregida de la muestra (AMcorr):
AMcorr = AM – AB
l.
ii.
Utilizando AMcorr determinar la actividad de TGP (en UI/L) utilizando la tabla correspondiente
Registre el resultado en una tabla, conjuntamente con el de AST, bilirrubina total, bilirrubina directa, bilirrubina
indirecta y fosfatasa alcalina (Laboratorio No. 8)
NOTA: LA LINEALIDAD DE LA PRUEBA ES DE 1.8 UI/L a 104 UI/L Y LOS VALORES DE REFERENCIA SON hasta 12
UI/L a 37 °C
2) ASAT/TGO
a. Marcar dos tubos: B y M, respectivamente
b. Agregar 100 µl de substrato para ALT/TGP a ambos tubos y precalentar por dos minutos a 37 °C
c. Agregar 20 µl de agua destilada al tubo B
d. Agregar 20 µl de muestra al tubo M
e. Mezclar bien e incubar por exactamente 30 minutos a 37 °C
f. Agregar 100 µl de reactivo 3,4-DNFH a ambos tubos
g. Mezclar e incubar por 10 minutos a 37 °C
h. Agregar 1 ml de diluyente de enzimas a ambos tubos
i. Mezclar bien, retirar del baño y dejar en reposo por dos minutos
j. Leer la absorbancia de ambos tubos a 505 nm (AB y AM), poniendo el espectrofotómetro en cero de
absorbancia con agua destilada
k. Cálculo de la actividad de ALT
i. Restar la absorbancia de B (blanco) de la absorbancia de M (muestra) para obtener la absorbancia
corregida de la muestra (AMcorr):
AMcorr = AM – AB
ii. Utilizando AMcorr determinar la actividad de TGP (en UI/L) utilizando la tabla correspondiente
3) Registre el resultado en una tabla, conjuntamente con el de ALT, bilirrubina total, bilirrubina directa, bilirrubina
indirecta y fosfatasa alcalina (Laboratorio No. 8)
NOTA: LA LINEALIDAD DE LA PRUEBA ES DE 1.8 UI/L a 74 UI/L Y LOS VALORES DE REFERENCIA SON hasta 12
UI/L a 37 °C
Reporte: EL REPORTE DE ESTE LABORATORIO SE HARÁ EN CONJUNTO CON LA PARTE 2 DEL MISMO
(Laboratorio No. 8)
2