VDRL - Masterlabor.com

VDRL (AGLUTINACION EN PORTA)
Ref.: KVDRL-250
Reactivos para la determinación de reaginas plasmáticas
Solo para uso in vitro en el laboratorio clínico
Conservar a 2-8ºC
250 determinaciones
PRINCIPIO DEL METODO
La prueba de VDRL
es una técnica no treponémica de
aglutinación en porta para la detección cualitativa y
semicuantitativa de reaginas plasmáticas. La suspensión
antigénica, una mezcla de lípidos complejos, es aglutinada en
presencia de reaginas presentes en la muestra del paciente
afectado por sífilis.
SIGNIFICADO CLINICO
Las reaginas son un grupo de anticuerpos dirigidos contra
componentes del propio organismo, originadas en pacientes que
sufren infección por Treponema pallidum, agente causal de la sífilis.
Este microorganismo produce lesiones en el hígado y corazón,
liberando al torrente circulatorio pequeños componentes de estos
órganos no reconocidos por el propio individuo. El sistema
inmunológico del paciente reacciona dando lugar a la formación
de reaginas, -anticuerpos frente a estos fragmentos1-5.
REACTIVOS
Ag VDRL
Solución alcohólica con una mezcla de lípidos
(cardiolipina, lecitina y colesterol).
DIL VDRL Tampón fosfato 2 mmol/L, NaN3 0,95 g/L, pH, 6,0.
Control + Suero humano con título de reaginas ≥ 1/8. NaN3 0,95 g/L.
Control – Suero animal. NaN3 0,95 g/L.
Precauciones: Todos los componentes de origen humano han
resultado ser negativos para el antígeno HBs, HCV y para el anti-HIV
(1/2). Sin embargo, deben tratarse con precaución como
potencialmente infecciosos.
PREPARACION (Suspensión de Antígeno)
1. Atemperar el Ag VDRL y DIL VDRL a temperatura ambiente (2329ºC).
2. Abrir un vial de Ag VDRL y pipetear 0,4 mL de DIL VDRL en un
frasco de vidrio de 25 mL de fondo plano.
3. Mediante pipeta de vidrio, añadir 0,5 mL de Ag VDRL, gota a
gota, sobre el DIL VDRL, haciendo girar vigorosamente el frasco
sobre una superficie plana.
4. Continuar la rotación durante 10 segundos más.
5. Añadir 4,1 mL de DIL VDRL dejando que descienda por la pared
del frasco.
6. Tapar el frasco y agitarlo verticalmente unas 30 veces durante 10
segundos.
7. Reposar 5 minutos. La suspensión antigénica está lista pasa su
uso. Homogeneizar antes de su empleo.
CONSERVACION Y ESTABILIDAD
Todos los reactivos del kit están listos para su uso, y son estables
hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial,
cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, y se evita la
VDRL
contaminación durante su uso. La Suspensión del Antígeno una vez
recién preparada es estable 24 horas a 15-25ºC. No congelar.
Indicadores de deterioro de los reactivos: presencia de turbidez.
MATERIAL ADICIONAL
- Agitador rotatorio de velocidad regulable a 180 r.p.m.
- Portas de vidrio
- Microscopio óptico (100 x)
MUESTRAS
Suero fresco, plasma o liquido cefaloraquídeo. Estable 7 días a 28ºC o 3 meses a -20ºC.
Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de
usar. No utilizar muestras bemolizadas o lipémicas.
PROCEDIMIENTO
Método cualitativo
1.
Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura
ambiente (Nota 1).
2.
Depositar 50 µL de la muestra a ensayar y una gota de cada
uno de los controles Positivo y Negativo, sobre círculos distintos
de un porta de vidrio.
3.
Homogeneizar suavemente la suspensión del antígeno VDRL
antes de usar, y dispensar una gota (20 µL) sobre cada una de
las gotas anteriores.
4.
Situar el porta sobre el agitador rotatorio a 180 r.p.m. durante
4 minutos (Nota 2).
Método semicuantitativo
Las muestras positivas pueden ser tituladas. El título se define como
la dilución mayor que da resultado positivo.
1.
Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9
g/L.
2.
Proceder para cada dilución, como en la prueba cualitativa.
LECTURA E INTERPRETACION
Examinar mediante microscopio óptico (100 x) la presencia o
ausencia de aglutinación inmediatamente después de retirar el
porta del agitador.
Interpretación
Tipo de aglutinación
Agregados grandes o medianos
Agregados pequeños
Ningún agregado o ligera rugosidad
Lectura
R
W
N
Resultado
Reactivo
Reactivo débil
No Reactivo
CARACTERISTICAS DEL METODO
Sensibilidad analítica: se corresponde a la observada utilizando
el “Human Reactive Serum” de la CDC (Centre for Disease
Control)
Efecto prozona: No se observa efecto prozona hasta títulos ≥ a
1/128.
Sensibilidad diagnóstica: 78 % (en sífilis primaria) y 100 % (en sífilis
secundaria). Especificidad diagnóstica: 98 %.
Interferencias: Bilirrubina (20 mg/dL), hemoglobina (10 g/L) y
lípidos (10 g/L), no interfieren. Los factores reumatoides (300
UI/mL), interfieren. Otras sustancias pueden interferir6.
NOTAS
1.
La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2.
El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos
positivos.
3.
La prueba VDRL no es específica para el diagnóstico de
sífilis. Se recomienda el ensayo de todas las muestras
Reactivas con métodos treponémicos como el TPHA y FTAAbs para la confirmación de resultados.
4.
Un resultado negativo no excluye el diagnóstico de la sífilis.
El diagnóstico clínico no debe realizarse únicamente con
los resultados de un único ensayo, sino que debe
considerarse al mismo tiempo los datos clínicos del
paciente.
5.
La
mononucleosis
infecciosa,
neumonía
viral,
toxoplasmosis, embarazo y enfermedades autoinmunes
pueden causar falsos resultados positivos.
BIBLIOGRAFIA
1. George P. Schimid. Current Opinion in Infectious Diseases 1994;
7: 34-40.
2. Sandra A Larsen et al. Clinical Microbiology Reviews 1995; 8
(1): 1-21.
3. Sandra Larsen et al. A manual of Test for Syphilis American
Public Health Association 1990: 1-192.
4. Joseph Earle Moore et al. Gastrointestinal Haemorrhage 1952;
150(5): 467-473.
5. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory
test, 3th ed. AACC Press, 1997.
6. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory test, 4th ed.
AACC Press, 1995.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda utilizar el control positivo y negativo para controlar
la funcionalidad del reactivo, así como modelo de comparación
para la interpretación de los resultados.
V01/06