Mancha De Aceite

Fotos: Farfán, 2009
M Sc. SOLANGE BENÍTEZ
Bacterióloga. UCMC
Universidad Nacional de Colombia
Asohofrucol
Universidad Nacional de Colombia
I. A. Ph.D. LILLIANA HOYOS
Profesora Asistente
Universidad Nacional de Colombia
Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural

Caracterizar mediante técnicas biológicas, bioquímicas y
moleculares el agente etiológico de la enfermedad mancha
de aceite incidente en cultivos de gulupa (Passiflora edulis
Sims) en zonas productoras de Colombia.
Objetivo I
Observaciones en campo y obtención de aislamientos.
Objetivo II
Pruebas de hipersensibilidad en pimentón.
Objetivo III
Pruebas de patogenicidad en gulupa.
Análisis de cortes histopatológicos
Objetivo IV
Pruebas bioquímicas
Pruebas moleculares
El Peñol
Buenavista
Características generales de las zonas recolectadas:
Manizales
Sta. Rosa de Cabal
La pradera
La Unión
Toro
Roldanillo
Granada
San Bernardo
Venecia
•15‐20 C°.
•1.400‐2.300 msnm.
San Martín
Cajamarca
Ibagué
Villa Rica
•1‐3 años.
Muestras de Gulupa y Maracuyá.
Garzón
Gigante
La Argentina
La mayoría de aislamientos a partir de muestras de hojas
afectadas corresponden a un 59 %, lo cual es un indicativo
de que los síntomas iniciales de la enfermedad de
mancha de aceite son foliares (tipo III).
Benítez y Hoyos , 2009. Rev. Col. Cie. Hort.
Día 1-3
Día 7
Día 8-9
Día 14-15
Día 20
Día 30
Día 45
Tejido sano de gulupa.
Corte trasversal de hoja infectada
en estado 4.
Avance de lesión.
Corte trasversal hoja sana de gulupa,
nervadura central.
Corte trasversal de hoja infectada
asociada lesión a nervadura
Disrupción celular y algunas fibras de
pared celular
Fotos: Farfán, 2009
I.
Xanthomonas
axonopodis
II.
Stenotrophomonas sp.
Árbol de análisis filogenético obtenido por Neighbour Joining de secuencias ADNr 16S de aislamientos bacterianos patogénicos obtenidos de gulupa. MEGA 4.1. Bootstrap: 1000 réplicas.
•
641 pb
•
•
641 pb
520pb
Munhoz, 2009.
PCR anidada para la confirmación del agente causal específicamente pv. passiflorae.
Pruebas bioquímicas: Sistema de Identificación API 20NE®
Familia: Xanthomodaceae
Aislamientos
analizados
N° total de aislamientos analizados
Pruebas moleculares
Xanthomonas axonopodis
X. campestris
Pantoea Stenophomo E. nas sp.
cloceae aglomerans
o E. amylovo
ra
Xanthomonas Stenophomonas
sp.
axonopodis
LMG 11002, 957 R‐22580
y 11087
E. cloceae
Amplificació
n de región específica Pantoea de ITS 16S‐
agglomera
23S. pv. ns P5WAM passiflorae
y AE10
15/22
1/22
3/22
10/18
1/18
2/18
22
Familia: Enterobacteriaceae
2/22
1/22
Amplificación y secuenciación de ADNr 16S
5/18
18
0/10
10
Manifestación de Observación de síntomas en Inicio de manifestación de Periodo de Fase de Establecimiento (Est I)
Fase Patogénica (Est II)
síntomas: otros órganos: P, C y E, síntomas:
Incubación: Establecimiento y Establecimiento Infección II
Enfermedad ‐
Las Penetración e condiciones
favorables
de la enfermedad
de “Mancha
detraslado de población aceite”
es:
Colonización (fase Infección I
Colonización I.
resistencia a estrés bacteriana. Necrosis estable
Coloniza. II
exponencial).
oxidativo etc.
generalizada, defoliamiento.
•HR: infección
70-90%
• T: 20-30°C
•Alta humedad de la lámina foliar para su diseminación.
Mora et al., 2009 reportan que la incidencia en los lotes infectados varía del 30% al 95% donde los factores ambientales que favorecieron el desarrollo y la incidencia de esta enfermedad fueron una precipitación media de 3,29 mm, temperatura media de 20,8°C, humectación de la lámina foliar 366,5 por minuto y una humedad relativa media de 72.1%.
Índices de Severidad % (Proceso de la enfermedad).
98,9
85,7
Estado 4.
Inicio de Necrosis: Desarrollo de factores de patogenicidad. Actividad metabólica.
71,4
Estado 3.
54,74
42,9
57,1
Halos aceitosos en tallos
y presencia de síntomas
en hojas ascendentes.
57,1
Necrosis: 2 x 109
UFC/4cm2. Capacidad
máxima por cm2.
Estado 2.
28,6
Estado 1.
Estado 0.
14,3
Dispersión de población bacteriana por haces vasculares.
7
2 X104 UFC/4cm2
(Fase epifítica).
0
1
1 X108 UFC/4cm2
(Clorosis).
3
5
7
9
Disrupción del PL
11
13
15
Días Pos‐Inoculación (Tiempo). Xanthomonas axonopodis en gulupa (P.edulis Sims)
20
30
45
Los agentes bacterianos causales de la
enfermedad de “Mancha de aceite” en gulupa
(P.edulis) son X. axonopodis y
Stenotrophomonas sp.
Patovariedad en X. axonopodis:
•No hubo coincidencia en los productos de
amplificación con primers específicos
•No se puede concluir con certeza si es o no X.
axonopodis pv. passiflorae.
Fotos: Farfán, 2009
Síntomas:
•Lesiones iniciales manchas acuosas de
bordes irregulares, acompañadas de necrosis y
normalmente de color amarillento en el ápice
o lámina lateral de las hojas.
• Prevalencia de lesión tipo III
•Cuando el progreso de la enfermedad es
máximo ocurre desprendimiento foliar
(pérdida de área fotosintética)
• Halos aceitosos en otros órganos como
frutos, tallos y flores.
•Enfermedad sistémica.
Fotos: Farfán, 2009
Histología:
Las masas bacterianas se alojan principalmente en los
espacios intercelulares del parénquima lagunar y cortical.
En estados avanzados de la enfermedad se observan masas
bacterianas en los haces vasculares.
Enfermedad de mancha de aceite :
Fase I: Infección y establecimiento de inóculo.
Periodo de incubación 5 días hasta el inicio de manifestación
de síntomas.
Población bacteriana aumentó 100.000 veces hasta el 7 día
pos-inoculación.
Fase II: Enfermedad.
Movimiento de inoculo a otras localizaciones de la planta
dispersión de síntomas.
Fotos: Farfán, 2009