sodium - Spinreact
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SODIUM-d SODIUM Enzymatic. Colorimetric Quantitative determination of Sodium IVD 3. Store at 2-8ºC INTENDED USE For the quantitative in vitro determination of Sodium in serum and plasma. PRINCIPLE OF THE METHOD(1) Sodium is determined enzymatically via sodium dependent galactosidase activity with ONPG as substrate. The absorbance at 405 nm of the product O-nitrophenyl is proportional to the sodium concentration. 4. 5. Pipette into a cuvette: Standard R1 720 μL R2 290 μL Standard 30 μL Sample ---- Sample 720 μL 290 μL ---30 μL Mix and read the absorbance after 60 s (A1) and 120 s (A2). Calculate: A= A2 – A1. CALCULATIONS ( A ) Sample x Calibrator conc = mmol/L sodium in the sample ( A ) Calibrator Na+ ONPG o-nitrophenol + galactose -galactosidase ONPG = o-nitrophenyl - -D-galactopyranose CLINICAL SIGNIFICANCE Sodium measurements are used in the diagnosis and treatment of aldosteronism, diabetes insipidus, adrenal hyper-tension, Addison’s disease, dehydration, inappropriate antidiuretic hormone secretion, or other diseases involving electrolyte imbalance. R2 Diluent / Substrate REFERENCE VALUES(2) 136 - 146 mmol/l (313 - 336 mg/dl) These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its own reference range. REAGENTS R1 Buffer / Enzymes QUALITY CONTROL Control Sera are recommended to monitor the performance of assay procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210). If control values are found outside the defined range, check the instrument, reagent and calibration for problems. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances. Tris buffer, pH 9.0 Cryptand -galactosidase 450 mmol/l 5.4 mmol/l 0.8 U/ml Tris buffer O-nitrophenyl galactoside 10.0 mmol/l 5.5 mmol/l PREPARATION R1. Buffer/Enzymes Transfer the contents of one bottle Buffer R1a to one bottle Enzyme R1b and dissolve by swirling gently, ensuring that the entire contents are completely dissolved. Transfer the entire contents to Buffer R1a rinsing vial R1b several times. Avoid the formation of foam. R2. Diluent/Substrate Transfer the contents of one bottle Diluent R2a to one bottle Substrate R2b and dissolve by swirling gently, ensuring that the entire contents are completely dissolved . Transfer the entire contents to Diluent R2a rinsing vial R2b several times. Avoid the formation of foam. STORAGE AND STABILITY R1 is stable for 2 weeks at 2-8 C or 5 days at 15-25 C. R2 is stable for 4 weeks at 2-8 C or 2 weeks at 15-25 C. Do not use reagents over the expiration date. ADDITIONAL EQUIPMENT - Spectrophotometer or colorimeter measuring at 405 nm. - Matched cuvettes 1.0 cm light path. - General laboratory equipment (Note 1). SAMPLES Serum, plasma treated with lithium heparinate. PERFORMANCE CHARACTERISTICS Linearity: The method is linear between sodium concentrations of 37.3 and 187.8 mmol/L Sensitivity: The minimum detectable concentration of sodium with an acceptable level of precision was determined as 37.3 mmol/l. Precision: Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20) Mean (mmol/L) 47.4 124.9 179.8 62.9 125.2 159.6 SD 0.76 1.54 1.08 4.99 2.51 1.94 CV (%) 1.60 1.23 0.60 7.94 2.01 1.21 Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show systematic differences when compared with other commercial reagent (x). The results obtained using 40 samples spanning the range 119 to 226 mmol/L were the following: Correlation coefficient (r): 0.98. Regression equation: y= 1.12x - 13 The results of the performance characteristics depend on the analyzer used. NOTES 1. In order to avoid contamination it is recommended to use disposable material. 2. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers. Instructions for many of them are available on request. BIBLIOGRAPHY 1. Berry, M. N. et al., (1988) Clin. Chem. 34,2295. 2. Tietz, N. W. (1983) Clinical guide to Laboratory Tests, p.384, W.B. Saunders Co., Philadelphia. PACKAGING Ref: 1001385 Cont. R1a, R1b (Lyo.): 3 x 20 mL, R2a, R2b (Lyo.): 3 x 9 mL PROCEDURE 1. Assay conditions: Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 405nm Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 1 cm light path Constant temperature . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC 2. Adjust the instrument to zero with distilled water. BSIS81-I 04/01/12 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected] SODIUM-d SODIO Enzimático. Colorimétrico Determinación cuantitativa de Sodio IVD Conservar a 2-8ºC USO PREVISTO Para determinación cuantitativa in vitro de Sodio en suero y plasma. PRINCIPIO DEL METODO(1) El Sodio se determina enzimáticamente a través de la actividad de -galactosidasa, usando como sustrato ONPG. La absorbancia del producto o-nitrofenil a 405 nm es porporcional a la concentración de sodio. o-nitrofenol + galactosa -galactosidasa ONPG = o-nitrofenil - -D-galactopiranosa SIGNIFICADO CLINICO Este test se utiliza en el diagnóstico y tratamiento de hiperaldosteronismo, diabetes insípida, hiper-tensión suprarrenal, enfermedad de Addison, deshidratación, secreción inadecuada de hormona antidiurética, o de otras enfermedades de desequilibrio electrolítico REACTIVOS R1 Tampón / Enzimas R2 Diluyente/ Sustrato CALCULOS ( A) Muestra x Conc Calibrador = mmol/L sodio en la muestra ( A) Calibrador Na+ ONPG 2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. 3. Pipetear en la cubeta: Estándar Muestra R1 720 μL 720 μL R2 290 μL 290 μL Estándar 30 μL ---Muestra ---30 μL 4. Mezclar y leer la absorbancia después de 60 s (A1) y 120 s (A2). 5. Calcular: A= A2 – A1. TampónTris, pH 9.0 Cryptand -galactosidasa 450 mmol/l 5.4 mmol/l 0.8 U/ml TampónTris O-nitrofenil galactosida 10.0 mmol/l 5.5 mmol/l CONTROL DE CALIDAD Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 and 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el instrumento, los reactivos y la técnica. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. VALORES DE REFERENCIA(2) 136 - 146 mmol/l (313 - 336 mg/dl) Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. R2. Diluyente/ Sustrato Transferir el contenido de 1 vial de Diluyente R2a a un vial de Sustrato R2b agitando ligeramente, asegurándose que todo el contenido se disuelve completamente. Transferir el contenido total al tampón R2a, lavando el vial R2b varias veces. Evitar la formación de espuma. CARACTERISTICAS DEL METODO Linealidad: El método es lineal entre concentraciones de sodio de 37.3 y 187.8 mmol/L Sensibilidad: La mínima concentración de sodio detectable con un nivel de precisión aceptable se determinó a 37.3 mmol/l. Precisión: Intraserie (n=20) Interserie(n=20) Media (mmol/L) 47.4 124.9 179.8 62.9 125.2 159.6 SD 0.76 1.54 1.08 4.99 2.51 1.94 CV (%) 1.60 1.23 0.60 7.94 2.01 1.21 Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x). Los resultados obtenidos con 40 muestras entre 119 y 226 fueron los siguientes: Coeficiente de regresión (r): 0.98 Ecuación de la recta de regresión: y= 1.12x – 13 Las características del método pueden variar según el analizador utilizado. CONSERVACION Y ESTABILIDAD R1 es estable 2 semanas a 2-8ºC o 5 días a 15-25ºC. R2 es estable 4 semanas a 2-8ºC o 2 semanas a 15-25ºC. No usar los reactivos una vez pasada la fecha de caducidad. NOTAS 1. A fin de evitar contaminaciones se recomienda utilizar material de plástico de un solo uso. 2. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este reactivo en distintos analizadores. PREPARACION R1. Tampón / Enzimas Transferir el contenido de 1 vial de Tampón R1a a un vial de Enzima R1b agitando ligeramente, asegurándose que todo el contenido se disuelve completamente. Transferir el contenido total al tampón R1a, lavando el vial R1b varias veces. Evitar la formación de espuma. MATERIAL ADICIONAL - Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 405 nm. - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. - Equipamiento habitual de laboratorio (Nota 1). MUESTRAS Suero, plasma tratado con heparinato de litio. PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 405 nm Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .1 cm paso de luz Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC / 15-25ºC BSIS83-E 04/01/12 BIBLIOGRAFIA 1. Berry, M. N. et al., (1988) Clin. Chem. 34,2295. 2. Tietz, N. W. (1983) Clinical guide to Laboratory Tests, p.384, W.B. Saunders Co., Philadelphia. PRESENTACION Ref: 1001385 Cont. R1a, R1b (Lio.): 3 x 20 mL, R2a, R2b (Lio.): 3 x 9 mL SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]
