INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA QUÍMICA Y FUNCIONALIDAD DE LOS ALIMENTOS PRÁCTICA 6 DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS 1. OBJETIVOS a) Conocer el fundamento del método de extracción de lípidos Soxhlet. b) Realizar la determinación del extracto etéreo de un producto alimenticio. c) Analizar las ventajas y desventajas de este método con respecto a otros. 2. INTRODUCCIÓN El concepto de lípidos abarca un grupo muy amplio de compuestos de estructura heterogénea, solubles en disolventes orgánicos, no polares y prácticamente insolubles en agua. Son muy abundantes en la biosfera, estando presentes en las células vegetales y animales (membranas), particularmente en las constituyentes de semillas y del tejido subcutáneo, adiposo. La distinción entre aceites y grasas basada en un estado físico, líquido y sólido respectivamente, es muy relativa, pues el estado físico depende de la temperatura ambiental. Por lo general los aceites, provienen de los vegetales (35-49% en oleaginosas), mientras que las grasas son productos de origen animal (4-15% en huevo, carnes y leche). Los lípidos se consumen en forma aislada, mantequilla y aceites para ensaladas; o bien, contenidos en los alimentos (quesos, carnes, etc.). MANUAL DE PRÁCTICAS DE QUÍMICA Y FUNCIONALIDAD DE LOS ALIMENTOS Los lípidos representan la forma más concentrada de calorías en los alimentos. Nos proveen de ácidos grasos imprescindibles (linoléico, linolénico, etc.), de algunas vitaminas y de precursores de hormonas. También ayudan a mantener la temperatura corporal, al ser buenos aislantes del calor. Imparten atributos de textura, apariencia y sabor que hacen a los alimentos apetecibles. Sin embargo son centro de controversia con respecto a su toxicidad y riesgo de enfermedades coronarias. Por todas estas propiedades es necesaria su cuantificación. El término extracto etéreo se refiere al conjunto de sustancias extraídas con éter etílico anhidro; aunque se pueden emplear otros disolventes no polares como éter de petróleo, hexano, cloroformo, etc., los rendimientos y composición de los extractos resultantes difieren con los obtenidos con el éter etílico. En la determinación del extracto etéreo en carnes, la AOAC recomienda el uso tanto del éter etílico como el del petróleo y solamente éste último para salchichas de cerdo. Los lípidos extraíbles con este éter son los ácidos grasos libres, acilglicéridos, fosfolípidos, lecitinas, esteroles, ceras, carotenoides y clorofilas. La determinación de lípidos se realiza con la muestra previamente deshidratada en una estufa. Los tipos de extractores pueden ser continuos como el Goldfisch, Underwrites, Knorr, etc., y discontinuos como el Soxhlet y sus modificaciones. Éste método es bastante eficaz, pero utiliza gran cantidad de disolvente. 3. INVESTIGACIÓN PRELIMINAR a) Definir y clasificar a los lípidos y señalar cuáles son solubles en éter etílico, éter de petróleo y hexano. b) Explicar en qué consisten otros métodos de determinación de lípidos. c) Explicar brevemente en qué consisten otros métodos de determinación de lípidos. d) Comparar el método Soxhlet con los otros con respecto a las ventajas y desventajas que presentan, así como las aplicaciones. 33 PRACTICA 6 MANUAL DE PRÁCTICAS DE QUÍMICA Y FUNCIONALIDAD DE LOS ALIMENTOS 4. MATERIALES Y REACTIVOS Bombas de agua Cartuchos para Soxhlet Extractores Soxhlet Mangueras Matraces de bola y fondo plano 250 mL Parrillas eléctricas Puntas de sujeción Refrigerantes Soportes universales Éter de petróleo anhidro Harina entera de soya 5. DESARROLLO EXPERIMENTAL a) Colocar en el cartucho con una capa de algodón la harina deshidratada (registrar su peso) y tapar con otra capa delgada de algodón. b) Colocar el cartucho en el extractor. c) Adicionar 40 mL de éter de petróleo al matraz de bola (previamente puesto a peso constante). Ponerlo en la parrilla y conectarlo al extractor y éste al refrigerante con la manguera inferior conectada a la bomba de agua y la superior al recipiente con agua. d) Iniciar el calentamiento manteniendo un goteo continuo (2-3 gotas por segundo) de la parte inferior del extractor. Reflejar por espacio de 4 horas. e) Quitar el cartucho y volver a reflejar, cuidando de que no se vacíe el extractor, para así recuperar el disolvente. f) Una vez que se haya recuperado totalmente el éter, se desmonta el equipo y se pone a peso constante el matraz de bola con el extracto etéreo (grasa). Hacer la determinación por triplicado. % Extracto Etéreo = Peso del matraz con grasa – peso del matraz solo x 100 muestra 34 PRACTICA 6 MANUAL DE PRÁCTICAS DE QUÍMICA Y FUNCIONALIDAD DE LOS ALIMENTOS 6. INFORME DE RESULTADOS a) Tabular los resultados de la cantidad y porcentajes de los extractos etéreos, la media, desviación estándar y coeficiente de variación. Con base en lo anterior, discutir la reproducibilidad de los resultados. b) Comparar el porcentaje del extracto etéreo (media) obtenido con el reportado en la literatura. Explicar la posible desviación. c) Realizar observaciones y recomendaciones a la práctica. 35 PRACTICA 6