Cecilia Venturini
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Facultad de Ciencias Veterinarias UNLP Laboratorio de Inmunoparasitología Diagnóstico de neosporosis y toxoplasmosis en cuadros neurológicos en pequeños animales Toxoplasmosis 1908-1909: Toxoplasma gondii fue descubierto por Nicolle y Manceaux (Túnez 1908, 1909) en un roedor (Ctenodactylus gundi) e independientemente fue descripto por Splendore (San Pablo, Brasil, 1908) en un conejo de laboratorio 1970: Frenkel, Dubey y Miller describen por primera vez el ciclo biológico 1980: Toxoplasmosis-SIDA Neosporosis 1984: Bjerkås y col. informaron el hallazgo de un esporozoo formador de quistes que era el causante de meningoencefalitis y miositis 1988: Dubey propuso incluir al parásito en un nuevo género: Neospora, siendo Neospora caninum la especie tipo 1998: McAllister y col. comprobaron que los perros eran hospedadores definitivo de este parásito 2001: en Argentina, Basso y col. realizaron el primer hallazgo de ooquistes de N. caninum en materia fecal de caninos infectados naturalmente Toxoplasma gondii Neospora caninum Quistes (bradizoítos) Taquizoitos Ooquistes (esporozítos) Ciclo biológico Toxoplasma gondii Ciclo biológico Neospora caninum Toxoplasmosis = Neosporosis Signos clínicos Diagnóstico Diagnóstico • Presencia de signos clínicos • Métodos directos: Aislamiento del parásito Presencia de lesiones histopatológicas compatibles Identificación de parásitos por IHQ Detección de ooquistes en materia fecal Identificación por PCR e hibridización “in situ” • Método indirecto: Detección de anticuerpos Aislamiento en cultivo de células Histopatología e inmunohistoquímica Confirmed clinical Neospora caninum infection in a boxer puppy from Argentina W. Basso, M.C. Venturini, D. Bacigalupe, M. Kienast, J.M. Unzaga, A. Larsen, M. Machuca and L. Venturini. Vet.Parasitology 131: 299- 303. 2005. Ooquistes en materia fecal Inmunofluorescencia indirecta (IFI) Métodos moleculares PCR: identificación de especie PCR-enzimas de restricción: existen diferentes genotipos de T.gondii con características biológicas diferentes Microsatélites: permiten identificar y caracterizar aislamientos de N. caninum IMPORTANTE!!!! Título de Ac SEROCONVERSIÓN 400 200 IgG 100 2 50 5 IgM 7 1ra 14 21 28 2da Muestras pareadas Días Para determinar que hay seroconversión es necesario observar una diferencia de al menos 2 diluciones en el resultado con intervalo de al menos 3 semanas Por ejemplo (los valores son solo ejemplos) 1ra muestra: 1:100 2da muestra: 1:200 NO HAY SEROCONVERSION 1ra muestra 1:100 2da muestra 1: 800 HAY SEROCONVERSION NEOSPOROSIS Y TOXOPLASMOSIS EN PERROS CON SIGNOS CLINICOS EN DIEZ AÑOS DE DIAGNOSTICO SEROLÓGICO • Se utilizaron 1001 sueros de perros de áreas urbanas, con signos clínicos neurológicos • Fueron remitidos para el diagnóstico serológico de toxoplasmosis y neosporosis al Laboratorio de Inmunoparasitología, desde 1997 hasta 2010 M.C. Venturini, J. Unzaga, W. Basso , D.Bacigalupe, A.Larsen, L Pardini, G.Moré, L. Venturini. AAVDL. 2010 Signos Clínicos Neurológicos paresia o parálisis del tren posterior, convulsiones, tetraplegia, encefalitis, ataxia y uveítis Diagnóstico • Prueba utilizada: inmunofluorescencia indirecta (IFI) a partir de 1:50 hasta ≥ 1/800 • Antígenos la cepa RH de T.gondii y la cepa NC-1 de N. caninum, elaborados en el Laboratorio de Inmunoparasitología • Conjugado: anti IgG canina • Se consideraron 3 intervalos de edad • Se analizó la distribución de los animales de acuerdo a los títulos de anticuerpos Sueros positivos a T. gondii por edad y título serológico Toxo 50 100 200 400 800 Total (%) Neg ≤12m 18 5 6 3 12 44 (16,6)a 220 65% 13-60 41 23 25 24 22 135 (31,1)b 299 ≥61m 25 26 26 21 26 124 (40,9)c 179 Total 84 54 57 48 60 303 (30,3)% 698 Sueros positivos a N. caninum por edad y título serológico Neo ≤12m 50 100 9 200 400 800 Total (%) Neg 5 7 22 43 221 67% (16,3) 13-60 15 29 14 11 30 99 (22,8)d 335 ≥61m 15 28 24 21 26 114 (37,6)e 189 Total 39 57 43 39 78 256 (25,6) 745 Seroconversión a T. gondii y N. caninum Seroconversión a Toxoplasma gondii Seroconversión 28% No seroconversión 72% Seroconversión a Neospora caninum Seroconversión 21% No seroconversión 79% Conclusiones • La prevalencia para toxoplasmosis y neosporosis en perros con signos clínicos fue del 30,3% y 25,6% respectivamente • La seroprevalencia de ambas enfermedades fue significativamente menor en los perros de hasta 12 meses, lo que indicaría la importancia de la transmisión horizontal de estos parásitos • La mayor proporción de animales seropositivos para toxoplasmosis se observó entre los títulos más bajos. • La mayor proporción de animales seropositivos para neosporosis se observó entre los títulos más altos Conclusiones • Se podría considerar que los animales infectados menores de 12 meses manifiestan signos de neosporosis acompañados de títulos serológicos altos • Se podría considerar que los títulos para toxoplasmosis, generalmente más bajos, se relacionan con infecciones crónicas y no necesariamente con los signos clínicos que manifiestan los animales. Prevención: neosporosis • Evitar la ingestión de carne cruda, placentas, fetos en áreas rurales Prevención: toxoplasmosis • Utilizar productos comerciales o cocidos de preparación casera para la alimentación de los gatos • Los animales castrados y bien alimentados adquieren hábitos sedentarios y tienen menor tendencia a cazar • Disponer de recipiente para que el gato defeque y limpiarlos diariamente ya que en 24 hs los ooquistes esporulan y se hacen infectantes • Los ooquistes son muy resistentes en el medio ambiente Prevención: toxoplasmosis • higiene habitual de manos con agua y jabón • utilizar guantes para realizar tareas con tierra (horticultura, jardinería) • cocinar adecuadamente los productos cárneos (70ºC -20ºC por 24 hs. o más)
