M - UIBcongres

Análisis de miRNAs normalizadores en muestras de plasma congeladas
para su uso como indicadores de calidad
Andrés M.1, Arenaz I.1, Ramos F. 2, Andrade M. 3, Ledesma M.3, Tamayo D.1, Buesa A.1, Pocovi
M.4, Giraldo P.3
1
Biobanco del Sistema de Salud de Aragón, Zaragoza
2
Sevicio de Hematología, Hospital de León-INBIOMED, León
3
Instituto de Investigación Sanitaria Aragón, Zaragoza
4
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular y Celular. Facultad de Ciencias,
Universidad de Zaragoza
Introducción
Los miRNAs circulantes, pequeñas secuencias de RNA con función reguladora,
están siendo estudiados como prometedores biomarcadores de enfermedad,
aunque para los estudios precisos de análisis de expresión de miRNAs es
necesaria una correcta normalización tanto en controles como en pacientes.
Los genes normalizadores comúnmente utilizados, 5S o U6, no son del todo
adecuados, puesto que 5S muestra una extensa variabilidad en su expresión y
U6 tiene un bajo nivel de expresión en las muestras de plasma.
Mientras que para las muestras de sangre periférica (SP) es posible comprobar
la calidad del RNA con relativa facilidad mediante las técnicas habituales, no
puede decirse lo mismo para las muestras de plasma, con lo que los miRNAs
normalizadores podrían ser candidatos como indicadores de calidad de la
muestra.
Objetivo
Confirmar que hsa-miR-16-5p puede utilizarse como miRNA normalizador y
como indicador de calidad de miRNAs en muestras de plasma congeladas.
Materiales y métodos
Se analizaron los perfiles de expresión de miRNAs en muestras de plasma
congeladas procedentes de SP en tubos EDTA (N=40 controles y N=240
casos).
La extracción del RNA total y la retrotranscripción a cDNA se realizó mediante
kits específicos de biofluídos (Exiqon). Las reacciones de PCR fueron
realizadas en un detector ABi7900HT (Applied Biosystems).
Para la selección de los controles endógenos más estables se utilizó el
programa informático GeNorm.
Resultados
El hsa-miR-16-5p tuvo la variabilidad más baja (M value=1,4) en su expresión
entre todas las muestras analizadas.
La funcionalidad de los miRNAs analizados no se vio alterada en las
condiciones aplicadas en este trabajo.
Conclusión
El hsa-miR-16-5p puede ser un firme candidato como miRNA normalizador en
plasma. Al no verse afectada su funcionalidad en estas condiciones, podría
proponerse como un indicador de calidad de miRNAs en muestras de plasma
congeladas.