XV FORUM NACIONAL DE CIENCIA Y TÉCNICA Serie de 2199 estudios cromosómicos en muestras de vellosidades coriónicas y placentarias. Laboratorio de Citogenética. Villa Clara. Autor: Dra. María Elena de la Torre Santos CI: 66102103417 Coautores: Tec. Estrella Reyes Hernández CI: 61082521372 Lic. Norbelys Hernández Aguilar CI: 79070611420 Dr. Armando Eugenio Iglesia Yera CI: 65111506702 Dra. Ana Esther Algora Hernández CI: 60082521372 Dra. Gisela Noche González CI: 60100515177 Hospital Pediátrico José Luís Miranda Centro Provincial de Genética MINSAP Santa Clara Villa Clara Año de terminación: 2006 Año de presentación: 2006 RESUMEN Introducción: Actualmente el diagnóstico cromosómico fetal forma parte de la atención a la embarazada de alto riesgo en el mundo desarrollado y es un componente indispensable de los programas preventivos de genética que impulsa la Organización Mundial de la Salud. Puede realizarse en diferentes tejidos como células contenidas en el líquido amniótico, vellosidades coriónicas, placentarias y sangre fetal del cordón umbilical. Objetivos: Analizar las biopsias coriónicas y placentarias realizadas durante los años 1994 y 2005 en el laboratorio de citogenética de Villa Clara y evaluar las ventajas del procedimiento. Método: Se revisaron los registros de diagnóstico prenatal del Laboratorio de citogenética desde enero de 1994 hasta diciembre del 2005, con el fin de obtener el número de gestantes a las que se les realizó diagnóstico prenatal citogenético por biopsia coriónica o placentaria. Se analizó la edad gestacional al momento de la toma de la muestra y la cantidad de muestra obtenida en la punción, correlacionándolo con la obtención o no de resultado citogenético. Resultados: Se realizaron un total de 2199 estudios cromosómicos prenatales en muestras de vellosidades coriónicas y placentarias, siendo el principal motivo de indicación la edad materna avanzada (70%). Un total de 42 muestras resultaron positivas para aberraciones cromosómicas. Se observó un incremento notable de estudios en los últimos años. Se demostró estrecha relación entre la cantidad de muestra y la obtención de resultado citogenético, no así con la edad gestacional en que se realiza el proceder. Conclusiones: El diagnóstico prenatal citogenético por vellosidades coriónicas y placentarias es un método seguro, confiable rápido y económico. INTRODUCCIÓN Los defectos cromosómicos son una importante causa de morbilidad y mortalidad. En alrededor del 50% de los abortos espontáneos del primer trimestre, se documenta una cromosomopatía como la causa de la pérdida gestacional. Cerca del 97% de los embriones y fetos afectados con Trisomía 21 o Síndrome Down, son abortados espontáneamente. Sin embargo, los fetos que logran escapar de estos mecanismos depuradores, consiguen llegar al término del embarazo y nacen con defectos congénitos y retardo mental. Es de esta manera como los problemas cromosómicos de todo tipo afectan a uno de cada 156 recién nacidos. Algunos neonatos afectados mueren poco después de nacer, otros logran sobrevivir cuando las malformaciones que acarrean pueden ser reparadas quirúrgicamente, aunque se desenvuelven con retardo mental, en mayor o menor grado y aún otros, afectados por rearreglos cromosómicos balanceados, viven normalmente hasta cuando intentan reproducirse, momento en el que aparecen los abortos a repetición o el nacimiento de hijos afectados por malformaciones múltiples y retardo mental (1). En la actualidad el diagnóstico cromosómico fetal forma parte de las normas de atención de la mujer embarazada de alto riesgo en la mayoría del mundo desarrollado (2) y es un componente indispensable de los programas preventivos en genética que impulsa la Organización Mundial de la Salud (3). Puede realizarse en diferentes tejidos de origen embriofetal como células contenidas en el líquido amniótico, en vellosidades coriónicas y placentarias y en sangre fetal procedente del cordón umbilical. El diagnóstico prenatal citogenético se inició en Cuba en el año 1984, en Ciudad de La Habana,(4,5) como parte de un subprograma dentro del Programa Nacional de Diagnóstico y Prevención de Enfermedades Genéticas dirigido por el Centro Nacional de Genética Médica. Posteriormente se extiende a 6 provincias del país comenzando Villa Clara en el año 1988. Sufrió importantes afectaciones a nivel nacional por la falta de reactivos hasta que en el año 2003 con la ignauración del nuevo y moderno Centro Nacional de Genética Médica se pone en marcha la reactivación de este y otros estudios genéticos. Actualmente se han creados laboratorios de citogenética en todas las provincias y se proyecta la construcción de otros en diferentes municipios del país. El laboratorio de citogenética de Villa Clara siempre se ha mantenido realizando estudios prenatales. Es el único del país que analiza muestras de vellosidades coriónicas y placentarias y está llevando a cabo el entrenamiento a técnicos y profesionales de otras provincias. Este trabajo es la generalización de uno presentado en el XIII Forum de Ciencia y Técnica en el II Forum Ramal de Salud. (6) Con este trabajo nos trazamos como objetivos: 1- Analizar las biopsias coriónicas y placentarias realizadas durante el período comprendido desde 1994 hasta 2005. 2- Evaluar las ventajas del procedimiento y la repercusión económica del mismo. MATERIAL Y MÉTODO Se revisaron los libros registros de diagnóstico prenatal del Laboratorio de Citogenética de la provincia de Villa Clara en el período comprendido desde enero de 1994 hasta diciembre del 2005 con el fin de obtener el número de gestantes a las que se les realizó diagnóstico prenatal citogenético por biopsia coriónica o placentaria. Se analizó la edad gestacional al momento de la toma de la muestra y la cantidad de muestra obtenida en la punción. Se incluyeron en la muestra todas las gestantes a las que se les realizó el proceder, independientemente de la provincia de procedencia. La mayor cuantía corresponde a embarazadas de Villa Clara, Sancti Spíritus y Cienfuegos en relación con el territorio al que ha dado cobertura el laboratorio. Se registraron casos aislados de otras provincias. Las muestras se tomaron por personal especializado en el salón habilitado para dicho proceder, previo consentimiento informado de la gestante, con las medidas de asepsia y antisepsia requeridas, utilizando trocars espinales calibre 20 y bajo seguimiento sonográfico. Fueron recibidas por un técnico del laboratorio que rotula, limpia, evalúa y envasa las muestras. Treinta y tres muestras fueron tomadas en la Ciudad de la Habana y transportadas de forma inmediata a nuestro laboratorio con las medidas de conservación requeridas. En el laboratorio dichas muestras fueron procesadas por método directo o semidirecto (cultivo de 24 horas) según las condiciones propias de cada muestra o las circunstancias del laboratorio. Se procesaron, extendieron y tiñeron para ser analizadas al microscopio óptico. Se analizaron entre 10 y 20 metafases por caso y se incrementó el conteo ante mosaicismo o dudas diagnósticas. Los casos positivos que lo requerían, los mosaicismos y otros con diagnóstico dudoso se confirmaron con cultivo a largo plazo de líquido amniótico. A los padres de los fetos con diagnósticos positivos se les brindó asesoramiento genético. Todos los fetos interrumpidos en la provincia fueron examinados meticulosamente en el Departamento de Anatomía Patológica del Hospital materno Mariana Grajales por un equipo multidisciplinario de Patólogos y Genetistas Clínicos y se les tomó muestra de tejidos fetales (piel y tendón) para confirmar el diagnóstico. En aquellas muestras donde no se obtuvo resultado se analizó la situación particular de cada caso, se dio asesoramiento a la paciente y se realizó la repetición del diagnóstico prenatal siempre que fue aceptado. Se analizaron los datos en porcientos y se realizaron tablas y gráficos. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Durante el período comprendido desde enero del año1994 hasta diciembre del 2005 se realizaron un total de 2199 estudios cromosómicos prenatales en muestras de vellosidades coriónicas y placentarias en el laboratorio de citogenética de Villa Clara. El principal motivo de indicación fue la edad materna avanzada, representando un 70% del total de la muestras, lo que coincide con estudios de diagnósticos prenatales citogenéticos realizados en otros laboratorios de país(7). Otras indicaciones fueron el hijo previo con cromosomopatía (más frecuentemente el Síndrome Down), hijo previo multimalformado fallecido con sospecha de enfermedad cromosómica no diagnosticada, diagnóstico de sexo en portadoras obligadas de enfermedad recesiva ligada al cromosoma X sin posibilidades de diagnóstico molecular y signos sonográficos sospechosos de enfermedad cromosómica entre otros. En el gráfico 1 se muestra la cantidad de estudios realizados en cada año de estudio, observándose un incremento significativo por años. Durante los primeros años se realizaron solamente biopsias coriónicas, o sea con edad gestacional inferior a 13 semanas. A medida que pasaron los años se fue tomando experiencia en el proceder y en la década del 90 aparecen serias dificultades con el suministro de reactivos para la realización de cultivos de líquidos amnióticos a las gestantes entre 16 y 19 semanas. Sucedió que un número significativo de embarazadas con alto riesgo para cromosompatías no se podía realizar el diagnóstico prenatal citogenético por tener una edad gestacional de más de 15 o 16 semanas. Se realizó una revisión bibliográfica donde reportaban estudios de vellosidades en el segundo en el segundo trimestre, y a partir de 1997 comenzamos a hacer extensiva la toma de muestra de vellosidades placentarias, obteniéndose buenos resultados. En el gráfico 2 se muestra la cantidad de biopsias coriónicas y placentarias realizadas según semanas de edad gestacional, puede observarse que la edad gestacional mínima es de 9 semanas con tres pacientes y la máxima de 27 semanas con 2. El mayor número de gestantes tenían entre 15 y 20 semanas. Las muestras tomadas con más de 24 semanas de edad gestacional fueron de pacientes con signos sonográficos sospechosos de cromosomopatías. Estas muestras fueron procesadas de forma directa o semidirecta, lo que permite la obtención de resultados en un tiempo mínimo de 2 días si el caso en análisis lo requiere. Los casos positivos que así lo requerían y aquellos con diagnóstico dudoso se repitieron con cultivo de líquido amniótico, entre estos últimos tenemos: - 46,X,r(X) con resultado 45,X en líquido amniótico y madre con cariotipo en sangre periférica 46,X,r(X)/45,X . Continúo el embarazo. - 46,XY/47,XYY con resultado 46,XY en líquido amniótico. Seguimiento del embarazo y recién nacido normal. - 45,X con resultado 46,XY(1)/45,X(35) en líquido amniótico . Se interrumpió. Disgenesia gonadal mixta, con genitales masculinos. - 45,X con líquido amniótico 46,XX(33)/45,X(3). Óbito fetal a las 35 semanas con insuficiencia placentaria. - 48,XX,+2,+X .Se confirma en líquido amniótico 46,XX. Seguimiento del embarazo y recién nacido normal. - 92,XXXX. Se confirma en líquido amniótico 46,XX. Seguimiento del embarazo y recién nacido normal. - 47,XXX Se confirma en líquido amniótico 46,XX. Seguimiento del embarazo y recién nacido normal. - 47,XX,+7. Se confirma en líquido amniótico 46,XX. Seguimiento del embarazo y recién nacido normal. Es necesaria la confirmación de estos casos pues se han descrito mosaicismos y pseudomosaicismos de los cromosomas sexuales en este tipo de muestras, así como mosaicismos confinados a la placenta.(8,9). En nuestra extensa muestra estos han sido los casos que realmente requerían una confirmación, lo que representa el 0,36%, concordando con el índice aceptado internacionalmente. Fueron aclarados los resultados con la amniocentesis. Todas las trisomías 21 y 18 libres fueron confirmadas como tales, así como y las aberraciones estructurales. Las muestras de vellosidades son evaluadas por un técnico en la materia y se cuantifica su cantidad en miligramos. Varios laboratorios internacionales aceptan como buenas las muestras de 10 mg y más y no aceptan para procesamiento las muestras inferiores o las consideran fallidas. Nuestro laboratorio aceptacomo óptima una muestra mayor de 5 mg pues esa es la cantidad mínima a sembrar en cada placa. Teniendo en cuenta que este es un proceder obstétrico riesgoso procesamos todas las muestras que se extraen, inclusive las más pequeñas. Se diagnosticaron un total de 42 casos positivos, con un índice de positividad del 1,9 %. Ellos fueron: - 18 Trisomías 21 (Síndromes Down) - 3 Trisomías 18 - 1 Trisomía 13 - 1 Triploide - 9 Aberraciones de los cromosomas sexuales - 2 Aberraciones estructurales balanceadas - 8 Diagnósticos de sexo masculino en portadoras de enfermedades recesivas ligadas al sexo sin diagnóstico molecular. El gráfico 3 muestra la cantidad de biopsias coriónicas y placentarias con y sin resultado citogenético analizándolas con la cantidad de muestra obtenida en la punción. Se puede observar que existe una relación directamente proporcional entre la cantidad de la muestra y la obtención de resultados. El gráfico 4 muestra la relación entre la obtención o no de resultados y la edad gestacional con que se realiza la punción. Se observa que no existe relación para este indicador. El número de gestantes con complicaciones posteriores a la toma de la muestra, específicamente el aborto, fue de un 0,64% considerado bajo. Los recién nacidos examinados fueron todos normales. Actualmente se está realizando el cultivo de las células del líquido amniótico con medio Amniomax II, un frasco de 10cc tiene un valor de $41.67 en el mercado internacional y permite la realización de 2 a 3 casos según características individuales de crecimiento celular. Las muestras de vellosidades se siembran en medio RPMI 1640 enriquecido con suero fetal de ternera al 10% y por cada muestra se utilizan solamente entre 3 y 6 cc de medio. Con ello queremos hacer ver que la disminución en el consumo de medios de cultivo es notable. Esta cantidad de casos hubiese requerido aproximadamente 750 frascos de Amniomax ($ 31 252.50). Una muestra de vellosidades directa o semidirecta se calcula en $3.00, o sea en todos estos casos se han invertido $ 6597.00. No planteamos que este proceder sustituye absolutamente al cultivo del líquido amniótico pero sí que representa una opción a tener en todos los laboratorios de citogenética que realizan diagnóstico prenatal. Podemos demostrar que este es un método alternativo, más económico, con obtención rápida de resultados, confiable y cuyo procesamiento técnico no es complicado. En nuestro laboratorio se han entrenando técnicos y especialistas de las provincias de Sancti Spíritus, Cienfuegos, Ciego de Ávila y Matanzas. Recientemente se adiestraron en este proceder técnicos del Centro Nacional de Genética. Importancia socio-económica del diagnóstico prenatal citogenético en muestras de vellosidades coriónicas y placentarias: - Permitió mantener el diagnóstico prenatal citogenético en la región central del país en épocas de escasez de reactivos, cuando otros laboratorios de citogenética redujeron o cesaron sus servicios prenatales. Facilitó la realización de estos estudios a embarazadas de provincias a las que nuestro laboratorio no daba cobertura como Pinar del Río, Ciudad de la Habana, Matanzas, Ciego de Ávila, Camagüey y Gramma - Brindó seguridad a las madres con alto riesgo para cromosomopatías acerca del estatus de su futuro hijo, dando tranquilidad a aquellas con resultados normales y la oportunidad de tomar una decisión concreta a las que tuvieron resultados positivos. - La rapidez en el diagnóstico del proceso directo y semidirecto permite dar el resultado en 48 horas a embarazadas con bajo riesgo genético a las que en el ultrasonido de pilotaje se le detectan signos sospechosos de cromosomopatías. Así mismo disminuye la ansiedad materna al reducir el tiempo de espera del resultado. - Disminuye el consumo de medios de cultivos y otros reactivos utilizados en los laboratorios de citogenética lo que permitiría ampliar la cobertura e ir disminuyendo la edad o incorporando otros criterios de indicación de manera paulatina. CONCLUSIONES 1– El diagnóstico prenatal citogenético por vellosidades coriónicas y placentarias es un método seguro, confiable y rápido. 2 - Con el diagnóstico prenatal citogenético por biopsia coriónica o placentaria se logra reducir el volumen de medios de cultivo y otros reactivos a consumir en los laboratorios de citogenética, resultando un método económico. RECOMENDACIONES 1- Dadas las ventajas de este método de diagnóstico prenatal citogenético y con vistas a tener opciones en los Laboratorios de Citogenética, recomendamos extender el diagnóstico prenatal en muestras de vellosidades coriónicas y placentarias al resto de los laboratorios del país. BIBLIOGRAFIA 1 – Castro Volio I y cols Diagnóstico prenatal citogenética mediante amniocentesis durante los trimestres II y III de gestación en Costa Rica. http://rbt.ots.ac.cr/revistas/49-3/castro/castro.html. 2 - Annas, G.J. & S. Elias. Legal and ethical implications of fetal diagnosis and gene therapy. Am. J. Med. Genet 1990; 35: 215-218 3 - Anónimo. Fetal diagnosis of hereditary diseases. WHO working group. Bull. WHO 1994; 62: 345-355. 4 – Menéndez F, Casaña H, Quintana J, Quiñones O, Méndez LA, Nazabal I y cols. Cytogenetic prenatal diagnosis in Havana, Cuba. Am J Hum Genet 1987;41:3 (supplement). 5 – Quintana J, Oliva J, Rondón R, Nazabal JI, Carrillo L, Menéndez F. Cuban experience of chorionic villus sampling: cytogenetic findings. Data from 1987 to 1989. Early fetal diagnosis: recent progress and public health implication. Ed. M. Macek, M.A. Ferguson-Smith, M. Spala. Karolinum-Charles University Press, Prague, 1992. 6 - de la Torre Santos, Maria Elena, y cols Estudios cromosómicos en muestras de vellosidades corionicas y placentarias. Ponencia presentada en el XIII Forum de Ciencia y Tecnica, II Forum Ramal de la Salud. Ciudad de La Habana, 17 diciembre de 1999. 7 – Quintana J y cols. Resultados del diagnóstico prenatal cromosómico en Ciudad Habana. Rev Cubana Obstet Ginecol 1999,25(3):153-8 8 - Benn P. Trisomy 16 and trisomy 16 mosaicism: a review. Am J Med Genet 1998 sep 1;79(2):121- 33 . 9 - Richard S. Olney,Richard S y cols. Chorionic Villus Sampling and Amniocentesis: Recommendations for Prenatal Counseling. Morbidity and Mortality Weekly Report. July 21, 1995 / 44(RR-9);1-12 Gráfico 1 : Total de estudios citogenéticos en muestras de vellosidades coriónicas y placentarias realizados en el Laboratorio de <citogenética de Villa Clara. ESTUDIOS CITOGENÉTICOS EN MUESTRAS DE VELLOSIDADES CORIÓNICAS Y PLACENTARIAS. VILLA CLARA . 1994 - 2005 400 351 350 número de muestras 300 250 242 2001 2002 291 2003 2004 223 185 200 150 100 244 294 116 97 68 61 50 24 0 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2005 años Fuente: Registros del Laboratorio de Citogenética de Villa Clara. Gráfico 2: Biopsias coriónicas y placentarias realizadas según edad gestacional TOTAL DE MUESTRAS DE VELLOSIDADES CORIÓNICAS Y PLACENTARIAS SEGÚN EDAD GESTACIONAL 450 421 400 381 350 328 número de muestras 300 283 250 200 165 150 127 93 100 88 87 56 50 46 33 3 30 10 12 2 1 2 0 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 semanas Fuente: Registros del Laboratorio de Citogenética de Villa Clara. Gráfico 3: Biopsias coriónicas y placentarias con y sin resultado citogenético según la cantidad de muestra obtenida en la punción. MUESTRAS DE VELLOSIDADES CORIÓNICAS Y PLACENTARIAS CON Y SIN RESULTADOS EN RELACIÓN CON LA CANTIDAD DE MUESTRA. 120.00% 100.00% 80.00% 60.00% 40.00% 20.00% 0.00% menor 5 mg 5 - 9 mg 10 - 19 mg 20 y más mg cantidad de muestra sin resultado con resultado Fuente: Registros del Laboratorio de Citogenética de Villa Clara. Gráfico 4: Biopsias coriónicas y placentarias con y sin resultado citogenético según la edad gestacional al momento de la punción. MUESTRAS DE VELLOSIDADES CORIÓNICAS Y PLACENTARIAS EN RELACIÓN CON LA EDAD GESTACIONAL 120% 100% 80% 60% 40% 20% 0% 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 26 27 edad gestacional con resultado sin resultado Fuente: Registros del Laboratorio de Citogenética de Villa Clara. ANEXO Consentimiento informado para diagnóstico prenatal citogenético (DPC) Servicio de citogenética de Villa Clara Yo_________________________________________________________ hago constar Que he recibido comprensible información acerca de la técnica utilizada para la detección prenatal de anomalías cromosomicas fetales. 1- Que el proceder obstétrico implica bajo riesgo de aborto y/o infección para el feto y el embarazo, siendo siempre este riesgo menor que el de la afección genética que se busca (1% -2%) 2- Es posible que sea necesario repetir la toma de muestra. 3- En caso de que exista un embarazo múltiple los resultados serán de un solo feto o será necesario tomar dos muestras. 4- Si se obtienen resultados normales del estudio, esto no elimina la posibilidad de otros defectos congénitos o retraso mental que no se detectan con esta prueba. 5- En la indicación de análisis cromosómicos es posible que el crecimiento de las células fetales no tenga éxito y no se obtengan resultados, que estos no sean concluyentes o no garanticen un 100% de seguridad, ya que en raras ocasiones se encuentran células maternas en las muestras. 6- Se recomienda reposo absoluto, físico y sexual durante las 72h posteriores al proceder, cualquier situación anormal en ese tiempo, avisar o asistir a nuestro servicio para recibir orientación de conducta o presentarse al cuerpo de guardia de su Hospital materno. Reconociendo estos riesgos y limitaciones, expreso mi conformidad con el proceder y los estudios genéticos prenatales. Embarazada:______________________ Médico:_______________________ Autor: Dra. María Elena de la Torre Santos. Edad: 39 años. Escolaridad: Universitario. Ocupación: Especialista de primer grado en Genética Clínica. Profesor asistente. Dirección particular: Carretera Central 728 entre Colón y Cabo Brito. Santa Clara. Teléfono: 208392 CI: 66102103417 Centro de trabajo: Hospital Pediátrico José Luís Miranda. Organizaciones a que pertenece: CDR, FMC, CTC, ANIR Porciento de participación: 50% Coautores: Tec. Estrella Reyes Hernández Edad: 44 años. Escolaridad: Técnico medio. Ocupación: Técnico medio en Microbiología. Dirección particular: Calle 4ta interior número 53ª entre C y D. Reparto Vigía. Santa Clara. CI: 61082521372 Centro de trabajo: Hospital Pediátrico José Luís Miranda.. Teléfono 272013 Organizaciones a que pertenece: CDR, FMC, CTC, ANIR Porciento de participación: 20% Lic. Norbelys Hernández Aguilar Edad:26 años Escolaridad: Universitario Ocupación: Tecnico Superior A en medios diagnósticos Dirección particular: Matagua. Manicaragua CI: 79070611420 Centro de trabajo: Hospital Pediátrico José Luís Miranda. Teléfono 272013 Organizaciones a que pertenece: CDR, FMC, CTC, ANIR Porciento de participación: 10 % Dr. Armando Eugenio Iglesias Yera Edad: 40 años. Escolaridad: Universitario Ocupación: Especialista de primer grado en Gineco-obstetricia. Profesor instructor. Dirección particular: Prolongación de Colón 61 entre A y B. Reparto Villa Josefa. Santa Clara. CI: 65111506702 Centro de trabajo: Hospital Gineco-obstétrico Mariana Grajales. Avenida 26 de Julio y Circunvalación. Teléfono 272012 Organizaciones a que pertenece: CDR, CTC, PCC, ANIR. Porciento de participación: 10% Dra. Ana Esther Algora Hernández Edad: 45 años Escolaridad: Universitario Ocupación: Especialista de segundo grado en Genética Clínica. Profesor asistente. Dirección particular: Calle 8va edificio 5 apto 8. Reparto Escambray. Santa Clara. Teléfono: 208642 CI: 60082521372 Centro de trabajo: Hospital Pediátrico José Luís Miranda.. Teléfono 272013 Organizaciones a que pertenece: CDR, FMC, CTC, PCC, ANIR Porciento de participación: 5 % Dra. Gisela Noche González Edad: 45 años Escolaridad: Universitario Ocupación: Especialista de primer grado en Medicina General Integral. Master en Asesoramiento Genético. Dirección San Miguel CMF 16-3 #359 entre San Pedro y Virtudes. Santa Clara CI: 60100515177 Centro de trabajo: Hospital Pediátrico José Luís Miranda. Teléfono 272013 Organizaciones a que pertenece: CDR, FMC, CTC, PCC, ANIR Porciento de participación: 5 %