Influencia del explanto inicial en la conservación de Nierembergia

Influencia del explanto inicial en la conservación de Nierembergia linariaefolia
Faroni, A.1; Mata, D.2; Hompanera, N. 1.
1
Instituto de Recursos Biológicos, INTA Castelar, C.C. 45, (1712) Castelar, Argentina.
2
Instituto de Floricultura, INTA Castelar, C.C. 45, (1712) Castelar, Argentina.
E-mail: [email protected]
Introducción
Líneas mejoradas y cultivares de especies ornamentales nativas (Nierembergia linariaefolia)
son resguardadas en el Banco Base de Germoplasma del IRB, INTA Castelar, a través de
una conservación in vitro.
En un estudio previo se mostró que los protocolos aplicados en papa y batata, colecciones
que tradicionalmente conserva el Banco, permite mantener esta especie a corto plazo. El
intervalo entre subcultivo, en promedio, fue alrededor los 120 días (Hompanera et al., 2004).
Dado que, se observaron diferencias, en un mismo medio en el crecimiento de los
explantos, altura y proliferación de nuevas yemas, el presente estudio es evaluar la
influencia del tipo de explanto inicial, yema o segmento nodal, sobre el período de repique,
en N. linariaefolia cv. Nieve.
Objetivo
Determinar la influencia del tipo de explanto inicial, yema o segmento nodal, sobre el
desarrollo de los materiales, e inicio de necrosis que afecten la longevidad de los mismos
entre subcultivos, en los tres medios que se utilizan en el banco de conservación in vitro,
para el mantenimiento del germoplasma de N. linariaefolia cv. Nieve.
Materiales y métodos
Material Vegetal: N. Linariaefolia cv Nieve.
Se evaluaron:
- dos tipos de explantos:
yemas de 1cm y segmentos nodales de 1,5cm aproximadamente con 6 ó 7 nudos, y
- tres medios de cultivo:
CP - Conservación papa (Medio MS + 40g D-Sorbitol + 8g Agar- Agar
M15 - Conservación batata1 (Sales MS +15g D-Manitol + 20mg Putrescina + 20g
Sacarosa + 8g Agar- Agar)
M20 - Conservación batata2 (Sales MS + 20g D-Manitol + 20mg Putrescina + 20g
Sacarosa + 8g Agar- Agar)
Los explantos fueron disectados de plantas que se encontraban en un medio MS (Murashige
& Skoog, 1962) sin hormonas. Se sembró un explanto por tubo y se colocaron en una
cámara a temperatura de 25 ± 2º C, con una intensidad de luz de 3000 lux y un fotoperíodo
de 9 horas de luz. Los tubos fueron distribuidos al azar en una única gradilla.
Los parámetros evaluados fueron: longitud del brote principal, desarrollo de raíces, número
de vástagos laterales, material necrosado y/o mortandad del explanto, a los 30, 60, 90 y 120
días. El ensayo comprendió 6 tratamientos con 16 repeticiones. Los datos se analizaron
estadísticamente con ANOVA y Test de Tukey (p < 0,05)
Resultados y discusión
A los 30, 60, 90 y 120 días, para un mismo medio, diferencias observadas en la altura de los
explantos no fueron significativas (p<0,05) entre yemas y segmentos nodales (Tabla 1). Las
diferencias observadas estuvieron relacionadas con el medio utilizado. Los menores
tamaños del brote principal correspondieron a los tratamientos T5 y T6, siembras efectuadas
sobre el medio Cp con 40gr de D- Sorbitol, sustancia que actúa aumentando la
concentración osmótica del medio y consecuentemente disminuyendo la disponibilidad de
las sustancias asimilables (Pence, V.C. et al. 2002).
Tabla 1. Altura del explanto, a los 30, 60, 90 y 120 días
Tratamiento 30 días
60 días 90 días 120 días
T1
3,56 a
7,94 a 12,19 a 12,94 a
T2
2,69 a
6,75 a 10,63 ab 12,06 a
T3
3,13 a
6,81 a
9,94 b 11,69 a
T4
3,69 a
8,38 a 10,75 ab 11,31 a
1b
T5
1,06 b
1,25 b
1,38 c
1,59
b
T6
1b
1,31 b
1,31 c
Referencias: T1: yema en M15; T2: segmento nodal en M15; T3: yema en M20; T4: segmento
nodal en M20; T5: yema en Cp; T6: segmento nodal en Cp. (p<0,05).
En cuanto al número de yemas (Tabla 2), los tratamientos T2 y T4, donde se utilizaron
segmentos nodales como explantos iniciales, mostraron diferencias significativas (p< 0,05)
con respecto a las siembras con yemas, tratamientos T1 y T3. En el tratamiento T6, se
observaron diferencias respecto al tratamiento T5, a los 30 y 60 días pero no fueron
significativas. A los 90 días, ambos tratamientos, fueron los que presentaron la mayor
cantidad de yemas.
Cabe señalar, que a los 30 días, en el tratamiento T6, se observó una pronunciada clorosis
que afectó al 44% de los explantos y que en algunos casos llevó a una necrosis que tornaba
impredecible la supervivencia de los mismos. A los 120 días, en el tratamiento T6, los
explantos muertos representaban el 25% de los materiales sembrados inicialmente.
Situación indeseable en un protocolo de conservación de germoplasma.
En el primer período, los explantos en medios con una concentración menor de azúcares no
asimilables, fueron los que desarrollaron la mayor cantidad de vástagos laterales y sistema
radicular. A los 60 días esos tratamientos, comenzaron a mostrar síntomas de
marchitamiento, clorosis y senescencia de las hojas inferiores, los primeros indicios de
agotamiento del medio. Resultados semejante informaron Hompanera et al. 2004, para los
cvs. Estrella y Cielo que obtuvieron los mejores resultados en el medio de conservación de
papa.
Tabla 2. Número de yemas por explanto.
Tratamiento 30 días
60 días 90 días 120 días
0,50 b
T1
0,44 c
0,31 b
0,50 b
2,99 a
T2
2,44 a
2,44 a
2,69 a
0,56 b
T3
0,06 c
0,44 b
0,56 b
2,63 a
T4
1,75 ab
2,25 a
2,56 a
3,06 a
T5
0,19 c
1,75 a
3,56 a
2,94 a
T6
0,88 bc
2,56 a
3,56 a
Referencias: T1: yema en M15; T2: segmento nodal en M15; T3: yema en M20; T4: segmento nodal
en M20; T5: yema en Cp; T6: segmento nodal en Cp. (p<0,05).
Conclusiones
Un mayor período entre repique, con menor longitud del explanto, mayor número de
vástagos y poco desarrollo radicular, condiciones deseables en la conservación de
materiales in vitro, se logra en Nierembergia linariaefolia cv. Nieve utilizando como explanto
inicial, la siembra de yemas en el medio de conservación de papa, medio con alto contenido
de azúcares no asimilables.
En los medios que contienen menor cantidad de azúcares no asimilables, el desarrollo de
los explantos, crecimiento y cantidad de vástagos, en una primera etapa es mayor, pero por
agotamiento del medio, se reduce el período entre intervalo de repique.
Bibliografía
Escandón, A.S., Alderete, M., Trotta, M., Facciuto, G., Hagiwara, J.C., Mata, D., Soto, S. y Miyajima, I.
2003. El uso de herramientas biotecnológicas (cultivo de tejidos) en la domesticación y el
desarrollo de germoplasma en Scoparia spp. IV Simposio de Recursos Genéticos para América
latina y el Caribe. p. 143. 10 al 14 de noviembre, Mar del Plata.
Hompanera, N., G. Facciuto, A. Escandon y S. Soto. 2004 Evaluación de medios de cultivo para la
conservación de los recursos genéticos de especies nativas ornamentales en el banco in vitro del
IRB. II Congreso Argentino de Floricultura y Plantas Ornamentales. VI Jornadas Nacionales de
Floricultura y I Encuentro Latinoamericano de Floricultura. p. 54-56. 26 al 29 de Octubre, Buenos
Aires.
Murashige, T. and Skoog, F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco
tissue cultures. Physiol. Plant. 15: 473-497
Pence, V.C.; Sandoval, J.A.; Villalobos A, V.M.; Engelmann, F. (eds.). 2002. In vitro collecting
techniques for germplasm conservation. International Plant Genetic Resources Institute (IPGRI).
100 p. IPGRI Technical Bulletin. no. 7. QK 725 P4. 63596. Rome (Italy).
Soto, S, L. Bullrich, D. Mata, G. Facciuto, J.C. Serpa, J.C. Hagiwara, Morisigue, I. Miyajima and N.
Kobayashi. 2005 New clones of Nierembergia linariaefolia obtained from population native to
Argentina. V International Symposium on New Floricultural Crops. ISHS Acta Horticulturae: 683
Junio. Paraná, Brasil.