Efecto de la temperatura y del ph sobre una enzima

Efecto
del
PH
y
Temperatura
sobre
una reacción enzimática
• Objetivos:
♦ Medir la Actividad enzimática de B−Glucosidasa con respecto a temperaturas diferentes y Ph
diferentes.
♦ Calcular la velocidad de reacción enzimática
♦ Medir la temperatura optima para la enzima.
♦ Medir el PH optimo de la enzima
♦ Hacer curvas de calibrado
♦ Realizar gráficos con ecuación de la recta, velocidad V/s Temperatura, velocidad V/s Ph.
Resultados:
Tabla de datos
Tubos
[PNF](nm)
1
2
4
5
6
7
0.00666
0.0133
0.02
0.0266
0.0333
0.04
Absorvancia
(405nm)
0.126
0.23
0.3
0.359
0.390
0.430
M=8.81x; B=0.1014
A=8.81x + 0.1014
Para calcular la concentración de [PNF] :
Vinicial*Cinicial=Vfinal*Cfinal (V=velocidad , C=concentración)
Ejemplo de calculo [PNF]
[PNF]=(0.1*0.2)/3 =0.0066
1
*Para calcular el coef de extinción (mM)
A=* l*C
=8.81 (1/mM*cm)
Efectos de la temperatura
Tabla de datos
TUBO
1
2
3
4
T° (°C)
16
40
60
100
A(405nm)
0.474
0.482
0.502
0.401
Control
−0.009
−0.006
−0.007
0.000
Calculo de la velocidad enzimática:
V(UI/ml)= (A/*l )*(1/t)*(V/v)*Fd
A= Absorvancia del tubo menos la absorvancia del control
*l =Pendiente de la curva de calibrado (8.60)
t = Tiempo (5 Min)
V= volumen del ensayo (E+S)
V= volumen de enzima (0.1 ml)
Fd = factor dilucion del ensayo =volumen total/volumen de ensayo
Fd=3ml/0.9+0.1=3
Calculo de tubo 1 (ejemplo):
V(UI/ml )=(0.474−(−0.009))/5.23*(1/5min)*(1ml/0.1ml)*3 =0.554 (UI)
Tabla de datos
Tubo
1
2
3
4
T° (°C)
16
40
60*
100
V(UI/ml)
0.554
0.560
0.584 *
0.460
Efectos del PH sobre la reacción enzimática
Tabla de datos
2
TUBO
B
1
2
3
4
PH
5.0
4.0
5.0
6.0
7.0
A (405 nm)
−
0.243
0.482
0.95
0.288
Control
−
0.1
0.0
0.01
0.003
Cálculos de la velocidad de reacción enzimática:
Calculo de tubo 1 (ejemplo):
V(UI/ml )=(0.243−0.1)/5.23*(1/5min)*(0.1+0.9ml/0.1ml)*3 =0.164 (UI)
Tabla de datos
TUBO
1
2
3
4
PH
4.0
5.0
6.0
7.0
V (UI/Ml)
0.164
0.553
1.08
0.327
3