Documento 792840

UNIVERSIDAD ESPECIALIZADA DE LAS AMÈRICAS
FACULTAD DE SALUD Y REHABILITACIÒN INTEGRAL
TECNICO DE INSTRUMENTACIÒN QUIRÙRGICA
CATEDRA: BIOQUÌMICA I
TEMA: ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
PRESENTADO POR:
YIRA ARMUELLES
CED. 4-715-930
NATALIE BEITIA
CED.4-776-1896
ANGELICA JAEN
CED. 4-763-1912
NORA MARTINEZ
CED. 4-724-844
ISABEL RYFKOGEL
CED. 4-786-2119
ALEJANDRA LEZCANO
CED. 4-780-1247
KEISY CASTILLO
CED. 4-756-916
FACILITADOR: JOSÈ SANCHEZ
PRIMER TRIMESTRE 29/05/2015
1
INDICE









Introducción………………………………………………………….………………..3
Marco teórico………………………………………………………………………….3
Objetivo general y especifico………………………………………..………………3
Materiales……………………………………………………………..……………….4
Métodos……………………………………………………………….……………….5
Resultados……………………………………………………………..………………7
Discusiones…………………………………………………………………………….8
Conclusiones y recomendaciones…………………………………..………………10
Bibliografía……………………………………………………………….…………….10
2
INTRODUCCIÓN
El siguiente experimento está basado en el reconocimiento de la actividad enzimática mediante la
comprensión de uno de los principales procesos ocurridos en los organismos vivos, esta es la representación
química de la digestión de almidón usando la saliva que como todos conocemos es uno de los elementos
primarios que nos permiten la transformación de los alimentos de compuestos más grandes a cadenas más
simples para seguir todo el proceso de la digestión y por consiguiente obtención de energía de los mismos, por
ende efectuaremos diferentes procedimientos para identificar la enzima en dicha solución (la saliva) mediante
la inclusión de identificadores , también con los mismos identificadores, reconoceremos la composición de los
productos finales obtenidos de dicha reacción.
Marco teórico
El proceso de la digestión comienza en la boca, donde los alimentos son embebidos por la saliva, triturados y
divididos por la acción de la masticación y, una vez formado el bolo, deglutidos. La saliva es una secreción
compleja proveniente de las glándulas salivales mayores en el 93% de su volumen y de las menores en el 7%
restante, las cuales se extienden por todas las regiones de la boca excepto en la encía y en la porción anterior
del paladar duro. Es estéril cuando sale de las glándulas salivales, pero deja de serlo inmediatamente cuando
se mezcla con el fluido crevicular, restos de alimentos, microorganismos, células descamadas de la mucosa
oral, etc. Las glándulas salivales están formadas por células acinares y ductales, las células acinares de la
parótida producen una secreción esencialmente serosa y en ella se sintetiza mayoritariamente la alfa amilasa,
esta glándula produce menos calcio que la submandibular, las mucinas proceden sobre todo de las glándulas
submandibular y sublingual y las proteínas ricas en prolina e histatina de la parótida y de la submandibular.
Las glándulas salivales menores son esencialmente mucosas. El 99% de la saliva es agua mientras que el 1%
restante está constituido por moléculas orgánicas e inorgánicas. La saliva es un buen indicador de los niveles
plasmáticos de diversas sustancias tales como hormonas y drogas, por lo que puede utilizarse como método
no invasivo para monitorizar las concentraciones plasmáticas de medicamentos u otras sustancias.
La saliva contiene la enzima amilasa, la cual inicia los primeros pasos de la digestión de los polisacáridos,
almidón y glucógeno y los descompone en cadenas más cortas de distintos largos. Las enzimas son proteínas
que catalizan todas las reacciones bioquímicas. Además de su importancia como catalizadores biológicos,
tienen muchos usos médicos y comerciales. Un catalizador es una sustancia que disminuye la energía de
activación de una reacción química. Al disminuir la energía de activación, se incrementa la velocidad de la
reacción. La mayoría de las reacciones de los sistemas vivos son reversibles, es decir, que en ellas se
establece el equilibrio químico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la formación de equilibrio químico, pero no
afectan las concentraciones finales del equilibrio.
Objetivo general:

Determinar la actividad enzimática encontrada en la saliva.
Objetivos específicos:



Reconocer la característica proteica de la enzima amilasa.
Observar la actividad enzimática al mezclar la saliva con el almidón.
Analizar los productos obtenidos de la reacción (digestión de polisacáridos).
3
MATERIALES








Instrumentos de laboratorio
utilizados
3 tubos de ensayo con tapa
2 vasos regulares
1 vaso térmico
Estufa eléctrica
Termómetro
Pipeta










Materiales necesarios para el
laboratorio
2 goteros
Papel toalla
2 Toallones
Marcador
Regla
Bata de laboratorio
Computadora
Mar King tape
Alcohol tópico
Almidón




Soluciones a utilizar
Lugol (iodo)
Benedict
Biuret
Solución biológica:
Saliva
4
MÉTODOS

Instrucciones para la preparación de las muestras que serán usadas en el laboratorio.




Se debe de lavar los tubos de ensayo antes y después de haber sido utilizados. Lavado con
Alcohol (10 %) (100) y Jabón (100 ml de H2O).
Colocar todos los materiales a utilizar sobre la mesa.
Preparar las soluciones y los reactivos para el experimento.
Solución de Almidón: (se necesita agua caliente)
 Llena medio tubo cónico pequeño con polvo de almidón y vacía su contenido en el vaso
graduado señalado Al, agrega 3 ml de agua fría y revolver bien para formar una pasta lisa.
Después mientras se revuelve, se le agrega gradualmente agua caliente hasta la marca de 50 ml.
Permitir que la solución se enfríe antes de hacer las pruebas.
Procedimiento:
a) ¿Es la enzima amilasa una proteína?
recolectar
saliva(no moco)
en un vaso,
agregar 10 ml
de agua y
revolver
llenar el tubo
de ensayo (1)
con 1ml de
solucion de
saliva
llenar el tubo
de ensayo (2)
con 1ml de
agua (control)
agregar 1 ml de
solución Biuret
a los tubos de
ensayo (1) y (2)
colocar los
tubos en un
vaso y observar
los cambios
lavar con
cuidado los dos
tubos de
ensaye que se
usaron antes de
proceder con el
siguiente
experimento
5
b) Examina la actividad enzimática de la amilasa
1. llenar los tubos de ensaye 1, 2 y 3 con 1 ml de solución de almidón
2. agregar 1 ml de la solución de saliva a los tubos de ensaye 1 y 2 y revuelve
3. colocar los tubos de ensaye en un vaso
4. esperar 10 minutos
5. agregar 2 gotas de solución de benedict a los tubos de ensaye 1 y 3
6. agregar 2 gotas de solución de iodo al tubo de ensaye 2
7. examinar los cambios de color en los tres tubos de ensaye
6
RESULTADOS
Preguntas
Respuestas
a) ¿Qué cambio observaste en el
tubo de ensaye 1?
Se tornó a un color verde olivo
b) ¿Qué cambio observaste en el
tubo de ensaye 2?
Se mantuvo el color celeste
c) ¿qué indica la aparición del color
morado?
Presencia de proteína.
b)
Preguntas
Respuestas
a. ¿qué cambio observaste en el
tubo de ensaye 1?
b. ¿qué indica la aparición de un
color naranja-amarillo? explica
c. ¿qué cambio observaste en el
tubo de ensaye 2?
d. ¿qué indica esto? explica
Coloración a amarillo
e. ¿qué cambio observaste en el
tubo de ensaye 3? explica
No hubo cambios
Reacción es positiva
Cambio de color a azul
Presencia de polisacáridos (almidón)
7
DISCUSIONES
Es importante iniciar explicando algunas de las reacciones que han ocurrido durante este experimento.
El efecto de la temperatura utilizada en este caso el baño maría, sobre las enzimas podemos explicarla con la
siguiente premisa: puesto que la estructura proteica es la que determina la actividad enzimática, cualquier
causa que perturbe esta estructura puede llevar a una pérdida de actividad. Aunque el rango general de
temperaturas adecuadas para las reacciones enzimáticas es muy estrecho, los cambios ligeros suelen tener
una considerable influencia. La temperatura óptima para la mayoría de las reacciones enzimáticas está, con
pocas excepciones, entre 30°C y 40°C,( razón por la cual usamos este rango en la experiencia), en que la
actividad es máxima. Al aumentar la temperatura, la velocidad de reacción aumenta y, para casi todas las
enzimas, un incremento de 10°C duplica e incluso triplica la velocidad de reacción.
Por otro lado, sin embargo, ese mismo aumento de temperatura acelera también la inactivación de la enzima
por desnaturalización térmica. Para muchas enzimas la región de inactivación térmica extensiva está muy
próxima de la temperatura óptima.
El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La
reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de
coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de
los enlaces peptídicos. Las proteínas están formadas por aminoácidos unidos mediante enlaces peptídicos,
mismos enlaces que presentan 2 pares de electrones libres que forman un complejo de coordinación con el ion
cúprico que se forma por la disociación del sulfato de cobre contenido en el reactivo de Biuret, el complejo
formado da origen al color violeta.
Comprobamos que el líquido del tubo adquirió un cierto color verdoso olivo. Dándonos asi una reacción
negativa, probablemente por la desnaturalización de la enzima de la saliva a causa de un aumento exorbitante
de temperatura puesto que a pesar que iniciamos a 40 0C luego al observar el color verde teníamos una
temperatura de 78 0C.
Para el procedimiento de la parte b, la Prueba de Benedict se usa para detectar la presencia de azúcares
reductores porque este contiene cobre y éste se reduce en presencia de azúcares reductores. Durante esta
reacción el azúcar se oxida y se torna de color amarillo-naranja. La reacción antes mencionada se conoce como
una reacción oxidación-reducción.
Un punto interesante de esta práctica es la explicación del proceso de digestión de la saliva sobre el almidón.
Se remueve el tubo para que la saliva se mezcle con el almidón, se añadió un poco de agua para facilitar esa
mezcla. Como la amilasa de la saliva (enzima que “digiere” el almidón hasta transformarlo en maltosa) actúa
normalmente a la temperatura corporal (37 ºC), pudimos agilizar el proceso calentando un poco , evitando la
desnaturalización de las enzimas por excesivo calor, después el reactivo de benedict y lugol determinan
presencia de diferentes compuestos finales de la reacción.
8
También la glucosa es el azúcar reductor más abundante en el organismo. Su concentración en la sangre está
sometida a un cuidadoso mecanismo de regulación en individuos sanos y, en personas que padecen diabetes,
aumenta sustancialmente. Esto lleva a que éste sea el azúcar reductor generalmente considerado en las
reacciones de glucosilación no enzimática de interés biológico.
Los azúcares reductores son aquellos azúcares que poseen su grupo carbonilo intacto, y que a través del
mismo pueden reaccionar como reductores con otras moléculas. Estos provocan la alteración de las proteínas
mediante la reacción de glucosilación no enzimática.
El método de reacción de Lugol se usa para identificar polisacáridos. El almidón en contacto con unas gotas de
Reactivo de Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico) toma un color azul-violeta característico.
El tubo 1 contenía saliva y almidón los cuales en presencia de la temperatura optima da como resultado la
producción de azucares reductores como ejemplo, la maltosa, esta al actuar en presencia del biuret se torna de
un color amarillo- naranja , indicador de la oxidación del péptido con el cobre.
El tubo 2 tenía saliva y almidón , al agregar el lugol, se tornó de un color azul característico de la reacción del
yodo en contacto con polisacárido en este caso el almidón.
Y al final el tubo 3 el cual solo tenía almidón , al reaccionar con el biuret no tiene ningún cambio puesto que el
mismo no actúa sobre polisacáridos sino sobre azúcares reductores.
9
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica y estructural que catalizan reacciones químicas, siempre que
sean termodinámicamente posibles: una enzima hace que una reacción química que es energéticamente
posible , pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinéticamente favorable, es decir, transcurra a
mayor velocidad que sin la presencia de la enzima.
La Amilasa es una enzima que fragmenta el almidón en sus componentes. La amilasa, denominada también
ptialina o tialina, es un enzima hidrolasa que tiene la función de digerir el glucógeno y el almidón para formar
azúcares simples.
Fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme Payen en 1833, quien la bautizó en un
principio con el nombre de diastasa.
Los órganos productores de amilasa sérica son: Las glándulas salivares; sobre todo en las glándulas parótidas,
que secretan amilasa que forma parte de la saliva para degradar almidones y el páncreas.
Es importante reconocer la importancia de los factores que afectan la actividad enzimática:
Concentración del sustrato.- A mayor concentración del sustrato, a una concentración fija de la enzima se
obtiene la velocidad máxima. Después de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentración del
sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reacción.
Concentración de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentración de la
enzima aumenta la velocidad enzimática hacia cierto límite.
Temperatura.- Un incremento de 10°C duplica la velocidad de reacción, hasta ciertos límites. El calor es un
factor que desnaturaliza las proteínas por lo tanto si la temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su
actividad.
En este punto es algo muy esencial puesto que es uno de los factores más importantes para que la enzima
realice un trabajo óptimo.
pH.- El pH óptimo de la actividad enzimática es 7, excepto las enzimas del estómago cuyo pH óptimo es ácido.
Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean activadores o coenzimas para
funcionar adecuadamente. Para las enzimas que tienen cofactores, la concentración del cofactor debe ser igual
o mayor que la concentración de la enzima para obtener una actividad catalítica máxima.
BIBLIOGRAFÍA









http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1698-69462006000500015
http://www.eltiempo.com/archivo/documento/MAM-45946
http://www.buenastareas.com/ensayos/Benedict-y-Lugol/48501549.html
http://mazinger.sisib.uchile.cl/repositorio/lb/ciencias_quimicas_y_farmaceuticas/schmidth02/parte02/02.
html
http://tertuliadeamigos.webcindario.com/practicas02.html
https://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/bolarios/BiologiaCCAA/Guiones/Practica1.htm
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572008000200008
http://genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm
http://www.salud180.com/salud-z/amilasa
10