Informe de laboratorio Enzimas de Restricción Nombre: Número de

Informe de laboratorio
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Enzimas de Restricción
Nombre: _______________________________
Número de estudiante: ___________________
Fecha:
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Hipótesis: Redacta una hipótesis basada en las variables del experimento
(¿De qué dependen los cortes de la enzima de restricción? ¿Cómo esperas que
se vea en una gel?)
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Resultados y Análisis
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A. Resultados.
Incluye en este espacio una foto de la gel teñida de tu grupo.
B. Determinación del tamaño de los fragmentos de restricción del ADN
1. La figura a continuación indica el tamaño del
marcador o “ladder” de ADN. También tienes
información del orden en que se cargaron las
muestras en cada carril.
1 | Informe Lab Enzimas de Restricción
2. Mide y anota la distancia que
viajó cada fragmento de ADN en
la gel (con excepción del más
grande de 23,130 bp que no va a
caber en una línea recta en el
paso 4).
En cada caso mide desde la
parte baja del pozo hasta la parte
baja de cada banda. Anota la
distancia en centímetros y
decimales (milímetros).
3. Mide y anota la distancia que
viajó cada fragmento de ADN del
marcador en el diagrama de la
gel con excepción del más
grande que no va a caber en una
línea recta en el paso 4. En cada
caso mide desde la parte baja del
pozo hasta la parte baja de cada
banda. Anota la distancia en centímetros.
Distancia de migración
Fragmentos
(cm)
(Pares bases, bps)
570
725
2027
2322
3000
4361
6557
4. Abre el programa Xcel y haz la gráfica siguiendo las instrucciones
del lab de PCR si tiene Xcel de 2007. Si tiene la versión anterior
puede utilizar las instrucciones que siguen.
5. copia la tabla con el tamaño de los fragmentos y la distancia de
migración que mediste.
6. Marca la tabla y marca Insert → Chart → Chart type → Custom →
Logarithmic → Next.
7. En la siguiente pantalla ve a Series y bajo la gráfica aparece de
nuevo series. Oscurece distancia y luego ve a remove.
8. En la caja de Category X axis coloca el curso. Luego ve a la tabla y
marca los valores bajo distancia y dale Enter o Next.
9. Chart title: Migración de marcador de ADN en un PCR.
10. Category (x) axis: Distancia de migración (cm)
11. Value (y) axis: Pares de bases (bps) → Finish.
12. Ahora marca la gráfica y dale copy.
13. Ve al informe en Word y en Edit marca Paste.
2 | Informe Lab Enzimas de Restricción
14. Para dibujar la pendiente asegúrate que tienes el toolbar de
Drawing. Si no lo tienes ve a View → Toolbars → Drawing.
Generalemente sale en la parte inferior.
15. En el toolbar selecciona la raya que aparece al lado de la palabra
Autoshapes.
16. Ahora ve a la gráfica y tira la pendiente. Trata de alinear el mayor
número de puntos. Los que queden fuera deben estar en una
posición en donde la mitad esta sobre la pendiente y la otra mitad
bajo la pendiente.
17. Si no te quedó bien alineada ve a Draw → Rotate → Free rotate.
Aparecerá un punto verde con una flecha de forma circular.
18. En el punto verde puedes moverlo con el cursor hasta alinear bien
la pendiente.
19. Mide y extrapola la distancia de migración del ADN amplificado por
PCR utilizando esta curva. Verifica el número de bases en el eje
vertical. Observa la línea roja en la figura. Aunque en WORD es
difícil alinear totalmente las líneas al calcular los pares de bases
trata de aproximarlo lo más posible ¿Cuántos pares de bases tiene
cada banda?
Carril Distancia de Tamaño calculado de
migración
cada banda (bps)
20. Copia la gráfica de Xcel a tu informe y coloca el informe contestado
en tu libreta de laboratorio con cinta adhesiva . Intercala en tu
informe la gráfica en este lugar. Llama al informe: EnzRest
seguido por tu inicial y apellido. Ejemplo: EnzRest YRobles.
Incluye la gráfica que hiciste en Xcel en el inciso que sigue. Envía
una copia del archivo de Xcel junto con tu informe.
21. Gráfica de Enzimas de Restricción: Inserta la gráfica aquí.
A. Contesta:
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1. Si uno de los carriles tiene un plasmidio (Circular) sin cortar con enzimas
de restricción a que podría deberse que se ven 3 bandas?
2. Si al cortar con la enzima de restricción 1 se producen dos bandas en un
plasmidio, ¿cuántos cortes hizo la enzima 1?
3. Si en otro carril tuvieras el mismo plasmidio de la pregunta anterior pero
cortado con otra enzima. ¿Cuántos cortes hizo la segunda enzima para
que se produjera un solo pedazo?
4. ¿Por qué al cortar con ambas enzimas se producen tres bandas?
5. Utilizando la ilustración del
mapa de restricción del fago
lambda de ADN enumera el
número y tamaño de los
fragmentos de ADN al
cortarse tanto con Hind III
como con Eco RI.
Pedazo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
Tamaño
6. Analiza tus resultados y acepta o rechaza tu hipótesis.
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7. ¿Puede determinarse el tamaño de los plasmidios superenroscados
utilizando fragmentos estándar y electroforesis? ¿Por qué?
8. ¿Por qué se calientan los fragmentos de ADN antes de la electroforesis?
9. Indica el número de bandas que obtendrías en una electroforesis si tienes
un pedazo de ADN lineal con tres lugares de restricción para BamH1 y lo
cortas con esta enzima.
10. Si el pedazo de ADN de la pregunta anterior tiene forma circular, indica el
número de bandas que observarías en una electroforesis.
Avalúo
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1. Marca en la tabla que sigue tu autoevaluación de este laboratorio
antes y después del experimento.
Destrezas
Autoevaluación
Antes
Después
1. Realizar una digestión del ADN con
enzimas de restricción.
2. Predecir el número de bandas a base de
forma del ADN y número de lugares de
restricción
3. Preparar una gráfica logarítmica en Xcel
4. Determinar gráficamente el tamaño de los
fragmentos de ADN.
Suma de valores antes y después
Promedio = Suma / 4
2. Escribe una reflexión sobre lo que dominas y no dominas y cuánto
ganaste en destrezas durante el taller.
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11. Describe en tus propias palabras y en forma resumida cada una de
las destrezas aprendidas.
a. Realizar una digestión del ADN con enzimas de restricción.
b. Predecir el número de bandas a base de forma del ADN y número de lugares de
restricción.
c.
Preparar una gráfica logarítmica en Xcel.
d. Determinar gráficamente el tamaño de los fragmentos de ADN.
YRG:UIPR:2-13rev
MLGL- 9-14 rev
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