XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico

XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
EFECTO DE 2 MODIFICADORES DE CROMATINA EN LA EXPRESION DEL
miR-124-3p EN LINEAS CELULARES DE ASTROCITOMA HUMANO
Juan Carlos Cruces Márquez, Centro de Estudios Científicos y Tecnológicos No. 6 Miguel
Othón de Mendizábal del Instituto Politécnico Nacional, [email protected]. Asesor Dr.
Francisco Jesús Arenas Huertero, Laboratorio de Investigación en Patología Experimental
del Hospital Infantil de México Federico Gómez, [email protected]
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Los microRNAs (miRNAs) son pequeños RNA mensajeros (RNAm) maduros que
no codifican para proteínas, pero que actúan regulando la expresión de los genes
de manera pos-traduccional en el citoplasma de las células. Los expresan desde
los virus hasta el ser humano. Cuando baja su expresión, las proteínas de sus
RNAm blancos se incrementan y pueden alterar procesos celulares. Cuando es
alta su expresión, regulan negativamente disminuyendo los niveles de las
proteínas. El miR-124-3p participa en procesos de diferenciación neuronal y glial,
por lo que su función es importante en estas células.
Previamente se demostró que el miRNA-124-3p disminuye de manera importante
su expresión en 4 líneas celulares de astrocitoma humano. Debido a que
modificaciones de la cromatina, como la compactación, pueden participar en esta
baja expresión, el objetivo del trabajo fue evaluar el efecto de un inhibidor de
metilación de DNA, 5-azacitidina (5-aza) y de las desacetilasas de histonas,
Butirato de Sodio (BuNa) en la expresión del miR-124-3p en 4 líneas celulares de
astrocitoma humano: A172, D54, T98 y U373.
METODOLOGÍA
Las células se expusieron a concentraciones de 8mM de BuNa, 12µM de 5-aza y a
la combinación de ambos, durante 24 horas. Posteriormente se lisaron, se extrajo
el RNAm total y se cuantificó la expresión del miR-124-3p a partir de 100 ng de
RNA, en PCR (Reacción en Cadena de Polimerasa) en tiempo real. La expresión
relativa se comparó con la obtenida de células sin exponer a ningún agente y al
gen constitutivo miR-16.
CONCLUSIONES
Los resultados mostraron que la morfología de las células en presencia de los
diferentes tratamientos no fue afectada, aparentemente. Se debe hacer análisis
ultraestructural para corroborar los datos. Con respecto a los resultados
preliminares de PCR en tiempo real, el gen constitutivo utilizado (miR-16), fue
afectado con los diferentes tratamientos y es necesario usar otro gen como base
de integridad y de expresión de la reacción. No se observaron diferencias en la
expresión de miR-124-3p en ninguna de las líneas celulares por efecto de los
modificadores de la cromatina.
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del
Pacífico
Agosto 2014