Finocchiaro Inmunoterapia Genética 2014.pdf

Inmunoterapia
Genética
Unidad de Transferencia Genética
Instituto de Oncología “Ángel H. Roffo”
Universidad de Buenos Aires
¿Qué es el cáncer?
Enfoque
Reduccionista
¿El producto de la
proliferación clonal de
células adultas anormales
que se dividen sin control?
¿Qué es el cáncer?
Enfoque
Visión Holísta
Reduccionista
¿El producto de la
proliferación clonal de
células adultas anormales
que se dividen sin control?
¿La interacción entre células
tumorales y células facilitadoras del
nicho tumoral que colaboran en la
transformación neoplásica?
Vacunas
antitumorales
Anticuerpos
monoclonales
Inmunoterapia activa
específica: activa el sistema
Inmunoterapia pasiva:
inmune. Respuesta prolongada.
Memoria inmunológica
respuesta inmediata
pero transitoria:
no involucra el sistema
inmune del paciente
Inmunoterapia local
Toxicidad local:
Se restringie a los sitios
de administración.
Inmunoterapia local
clásica
Inmunoterapia
genética
Dosis
farmacológicas.
Picos de alta
concentración,
dolor y
toxicidad local.
mínima toxicidad
Producción continua
y sostenida.
Concentraciones ~
fisiológicas.
Inmunoterapia
sistémica
Un tumor es …
Un tejido complejo o un
órgano aberrante
heterogéneo donde las
células tumorales
conviven e interaccionan con
las colaboradoras de su
entorno (microambiente)
en continua coevolución
durante la
progresión tumoral.
Estrategias tumorales para evitar el
ataque del sistema inmune.
Las células tumorales
liberan factores que:
- atraen células del
microambiente tumoral
- Transforman células inmunes
inmaduras en supresoras.
Este microambiente,
. protege al tumor del ataque
del sistema inmune y,
. potencia su crecimiento
y diseminación.
A medida que el tumor crece, produce proporcionalmente más:
Factores
inmuno
supresores
Células inmunes supresoras.
A medida que el tumor crece, produce proporcionalmente más:
+++
Factores
inmuno
supresores
+++
+++
Células inmunes supresoras.
A medida que el tumor crece, produce proporcionalmente más:
Promueven angiogénesis, invasión y metástasis.
Capaces de diferenciarse en:
células endoteliales: forman vasos
sanguíneos que alimentan al tumor.
+++
Factores
inmuno
supresores
osteoclastos activos: disuelven tejido
óseo y propician la metástasis ósea.
+++
+++
Células inmunes supresoras.
Células mieliodes supresoras:
A medida que el tumor crece, produce proporcionalmente más:
B7
Tolerancia
IL2
+++
Factores
inmuno
supresores
+++
+++
Células inmunes supresoras.
A medida que el tumor crece, produce proporcionalmente más:
Tolerancia
AP
C
B7
IL2
+++
Factores
inmuno
supresores
+++
+++
Células inmunes supresoras.
A medida que el tumor crece, produce proporcionalmente más:
Tolerancia
+++
Factores
inmuno
supresores
+++
+++
Células inmunes supresoras.
Estrategias antitumorales del sistema inmune.
Transformación del
microambiente tumoral
inmunosupresor en
inmunoestimulatorio
Activación de la
respuesta inmune local
y sistémica
¿Qué es el cáncer?
Enfoque
Visión Holísta
Reduccionista
¿El producto de la
proliferación clonal de
células adultas anormales
que se dividen sin control?
¿La interacción entre células
tumorales y células facilitadoras del
nicho tumoral que colaboran en la
transformación neoplásica?
Terapias convencionales
enriquecen en
• células tumorales con propiedades de células madre
• baja tasa de replicación y diferenciación.
• activan mecanismos citoprotectores y antiapoptóticos.
• capaces de acumular múltiples mutaciones
• alta capacidad para expulsar drogas tóxicas de su
interior.
Terapias convencionales
100 CMT forman tumores en ratones
50.000 células más diferenciadas
¡¡¡no pueden!!!
responsables de la iniciación y
recurrencia de los tumores
generan tumores más agresivos.
Propiedades de las células madres tumorales:
proliferación ilimitada y multipotenciales
Autorrenovación: produce una célula madre idéntica
División
asimétrica
División
simétrica
Diferenciación: se divide en múltiples células tumorales más diferenciadas.
Tratamiento
dirigido
Tendrá efecto
en la
disminución de
la masa tumoral
a corto plazo.
En un gran número de casos no se logra un beneficio significativo, o
al menos clínicamente relevante en la sobrevida.
do
dirigi
o
t
n
mie
Trata
Tratamiento
dirigido
Inhibiría
el crecimiento tumoral
la recurrencia,
la agresividad y
aumentaría la supervivencia.
Tendrá efecto
en la
disminución de
la masa tumoral
a corto plazo.
do
dirigi
o
t
n
mie
Trata
Tratamiento
dirigido
Esto va transformando
el lecho quirúrgico
inmunosupresor en
inmunoestimulatorio.
CD8
CTL
r
isula
t
a
i
r
Inju
CD4
TH
Cicatrización
CD8
CTL
También esta induciendo
la duplicación de las
células madre tumorales
(mecanismo de reparación)
¿Qué es el cáncer?
Enfoque
Visión Holísta
Reduccionista
¿El producto de la
proliferación clonal de
células adultas anormales
que se dividen sin control?
Las células madre tumorales
necesitan de la interacción con el
microambiente para mantener su
crecimiento y autorreplicación.
CD8
CTL
r
isula
t
a
i
r
Inju
CD4
TH
Cicatrización
CD8
CTL
+
Transformar
el lecho quirúrgico
protumoral
en antitumoral.
CD8
CTL
r
isula
t
a
i
r
Inju
CD4
TH
Cicatrización
CD8
CTL
Un microambiente antitumormoral
puede “reprogramar” un genotipo
maligno para que exhiba un
fenotipo normal.
+ MB
Administración de
sustancias
inmunoestimulatorias
CD8
CTL
r
isula
t
a
i
r
Inju
CD4
TH
Cicatrización
CD8
CTL
Mantiene o atrae al
microambiente
protumoral
+ MB
que favorece el desarrollo y
progresión tumoral.
Y la tumorigenicidad
de células normales.
1. Finocchiaro LME, Fiszman GL, Karara AL & Glikin GC: Suicide gene and cytokines combined non viral gene therapy
for canine spontaneous melanoma. Cancer Gene Ther. 15, 165-172 (2008).
2. Finocchiaro LME & Glikin GC: Cytokine-enhanced vaccine and suicide gene therapy as surgery adjuvant treatments
for spontaneous canine melanoma. Gene Ther. 15, 267-276 (2008).
3. Finocchiaro LME, Riveros MD & Glikin GC: Cytokine-enhanced vaccine and suicide gene therapy as adjuvant
treatments for metastatic melanoma in a horse. Vet. Rec. 164, 278-279 (2009).
4. Finocchiaro LME, Villaverde MS, Gil-Cardeza ML, Riveros MD & Glikin GC: Cytokine-enhanced vaccine and interferonβ plus suicide gene as combined therapy for spontaneous canine sarcomas. Res Vet Sci. 91, 230-234 (2011).
5. Finocchiaro LME & Glikin GC: Cytokine-enhanced vaccine and suicide gene therapy as surgery adjuvant treatments
for spontaneous canine melanoma: 9 years of follow-up. Cancer Gene Ther. 19, 852-861 (2012).
6. Finocchiaro LME, Spector A, Rossi UA, Gil-Cardeza ML, Suarez JL, Riveros MD, Villaverde MS & Glikin GC: The
potential of suicide plus immune gene therapy for treating osteosarcoma: the experience on canine veterinary
patients. In Sarcoma: Symptoms, Causes and Treatments. E.J. Butler (Ed.). Nova Science Publishers, Inc. (New York,
U.S.A.), pp. 107-122 (2012). ISBN: 978-1-62100-362-5.
7. Finocchiaro LME & Glikin GC: Cytokine-enhanced vaccine and interferon-β plus suicide gene therapy as surgery
adjuvant treatments for spontaneous canine melanoma: 6 years of follow-up. Cancer Gene Ther. enviado (2014).
Primeros protocolos de terapia génica veterinaria de America latina
con tecnología 100% argentina.
bench ( )
rug
MELANOMA MALIGNO MUCOSO
CANINO maligno,
Altamente
metastásico y letal.
De rápido crecimiento,
invasión local y metástasis temprana.
Baja respuesta a las terapias convencionales y
a adyuvantes: BCG o Corinebacterium parvum.
Cancer Gene Ther. (2008) 15: 165-172.
Suicide gene and cytokines combined nonviral gene
therapy for spontaneous canine melanoma
LME Finocchiaro, GL Fiszman, AL Karara and GC Glikin
Unidad de Transferencia Genética
Instituto de Oncología “Ángel H. Roffo”
Universidad de Buenos Aires
Células Xenogenicas
Diagnóstico:
Melanoma
Controle
s
No
tratados
Solo
cirugía
Solo
gen suicide
Gen
GCV
Suicida
hIL-2 hGM-CSF
Semanalmente
durante 5
semanas.
Luego cada
2, 4,12 y 24
semanas.
Análisis
de los
resultados
Gen Suicida: Timidina Kinasa del Virus Herpes Simplex
HSV-TK
GCV + ATP → GCVMP + ADP
CELL-TK
GCVMP + ATP → GCVDP + ADP
CELL-TK
GCVDP + ATP → GCVTP + ADP
DNA pol
dNTPs + GCVTP ⁄⁄→ DNA
ATP
Ganciclovir
Guanosina
Efecto bystander
Efecto espectador o por contigüidad
GCV-PPP
ROS, TNFα
α, IL-1/6
Escasa infiltración inmune
Microambiente tumoral inmunosupresor
Infiltración inmune (IL12, IL2;
IFN)
Inmunoestimulación del
microambiente tumoral
++
X
X
X
X X XX
Inactivación y
apoptosis
.
++
Destrucción tumoral
Vacuna tumoral
GCV-PPP
ROS, TNFα
α, IL-1/6
Escasa infiltración inmune
Microambiente tumoral inmunosupresor
Infiltración inmune (IL12, IL2;
IFN)
Inmunoestimulación del
microambiente tumoral
++
X
X
X
X X XX
Inactivación y
apoptosis
.
++
Destrucción tumoral
Vacuna tumoral
hIL-2
hGM-CSF
Cancer Gene Ther. (2008) 15: 165-172.
Suicide gene and cytokines combined nonviral gene
therapy for spontaneous canine melanoma
LME Finocchiaro, GL Fiszman, AL Karara and GC Glikin
NO TRATADO
M0
29%
CIRUGÍA
M1-1
9%
M0-1
18%
M0-1
53%
GEN SUICIDA
M0
48%
M0-1
43%
TERAPIA COMBINADA
M1-1
12%
M0
56%
M0-1
31%
M0
76%
M1-1
9%
M0-1
16%
M1-0=2%
Cancer Gene Ther. (2008) 15: 165-172.
Suicide gene and cytokines combined nonviral gene
therapy for spontaneous canine melanoma
LME Finocchiaro, GL Fiszman, AL Karara and GC Glikin
SURVIVAL (days)
UNTREATED
CONTROLS
SURGERY
CONTROLS
SUICIDE GENE
COMBINED
THERAPY (CT)
OVERALL
69 (10-169)
82 (43-216)
94 (46-159)
160 (57-509)
vs. CT: p<
0.0001 (n=17)
0.02 (n=23)
0.05 (n=16)
- (n=45)
METASTASIS-FREE
41 (10-169)
133 (43-216)
> 159 (41-159)
> 509 (57-509)
vs. CT: p<
0.0001 (n=17)
0.003 (n=23)
0.005 (n=16)
- (n=45)
Cancer Gene Ther. (2008) 15: 165-172.
Suicide gene and cytokines combined nonviral gene
therapy for spontaneous canine melanoma
LME Finocchiaro, GL Fiszman, AL Karara and GC Glikin
GEN SUICIDA
RC
6%
PT=31%
RP=38%
EE=25%
TERAPIA COMBINADA
TTO
GEN SUICIDA
TERAPIA
COMBINADA
RTA
%
Duration
mediana
(dïas)
%
Duration
mediana
(dïas)
RO
44
89 (71-129)
47
129 (72-509)*
RP
38
89 (71-127)
31
123 (72-232)
RC
6
129
16
156 (128-509)
EE
25
87 (46-159)
27
151 (64-275)
PT
31
84 (51-125)
27
119 (57-210)
RC=16%
PT=26%
RP=31%
EE=27%
Cancer Gene Ther. (2008) 15: 165-172.
Suicide gene and cytokines combined nonviral gene
therapy for spontaneous canine melanoma
LME Finocchiaro, GL Fiszman, AL Karara and GC Glikin
GEN SUICIDA
RC
6%
PT=31%
RP=38%
EE=25%
TERAPIA COMBINADA
TTO
GEN SUICIDA
TERAPIA
COMBINADA
RTA
%
Duration
mediana
(dïas)
%
Duration
mediana
(dïas)
RO
44
89 (71-129)
47
129 (72-509)*
RP
38
89 (71-127)
31
123 (72-232)
RC
6
129
16
156 (128-509)
EE
25
87 (46-159)
27
151 (64-275)
PT
31
84 (51-125)
27
119 (57-210)
RC=16%
PT=26%
RP=31%
EE=27%
Cancer Gene Ther. (2008) 15: 165-172.
Suicide gene and cytokines combined nonviral gene
therapy for spontaneous canine melanoma
LME Finocchiaro, GL Fiszman, AL Karara and GC Glikin
bench (
rug
)
> 80 %
Esferoides: Excelente modelo predictivo de la respuesta in vivo de
los tumores respectivos a las terapias
Esta respuesta ocurre tanto in vivo como in vitro .
Se independiza del microambiente tumoral.
Gene Ther. (2009) 17: 26-36.
Suicide gene therapy on spontaneous canine melanoma:
correlations between in vivo tumors and their derived
multicell spheroids in vitro
María L. Gil Cardeza (MSc), Marcela S. Villaverde (MSc), Gabriel L. Fiszman
(PhD) , Natalia A. Altamirano (MSc), Ruth A. Cwirenbaum,
Gerardo C. Glikin (PhD) and Liliana M. E. Finocchiaro (PhD)
Resistencia multicelular
al Gen Suicida
recrecimiento tumoral y
repoblación de la zona
necrosada por el gen
suicida.
Gene Ther. (2009) 17: 26-36.
Suicide gene therapy on spontaneous canine melanoma:
correlations between in vivo tumors and their derived
multicell spheroids in vitro
María L. Gil Cardeza (MSc), Marcela S. Villaverde (MSc), Gabriel L. Fiszman
(PhD) , Natalia A. Altamirano (MSc), Ruth A. Cwirenbaum,
Gerardo C. Glikin (PhD) and Liliana M. E. Finocchiaro (PhD)
GEN SUICIDA
RC
6%
PT=31%
RP=38%
EE=25%
TERAPIA COMBINADA
Resistencia multicelular
al Gen Suicida
recrecimiento tumoral y
repoblación de la zona
necrosada por el gen
suicida.
RC=16%
PT=26%
RP=31%
EE=27%
Cancer Gene Ther. (2008) 15: 165-172.
Suicide gene and cytokines combined nonviral gene
therapy for spontaneous canine melanoma
LME Finocchiaro, GL Fiszman, AL Karara and GC Glikin
GEN SUICIDA
RC
6%
PT=31%
RP=38%
EE=25%
TERAPIA COMBINADA
TTO
GEN SUICIDA
TERAPIA
COMBINADA
RTA
%
Duration
mediana
(dïas)
%
Duration
mediana
(dïas)
RO
44
89 (71-129)
47
129 (72-509)*
RP
38
89 (71-127)
31
123 (72-232)
RC
6
129
16
156 (128-509)
EE
25
87 (46-159)
27
151 (64-275)
PT
31
84 (51-125)
27
119 (57-210)
RC=16%
PT=26%
RP=31%
EE=27%
14
70
TamanoTumor (cm3)
50
40
30
(B,C) relativas al volumen tumoral inicial
c
20
12
T am an o tu m o r
(A) Respuestas objetivas al gen suicida
60
10
8
6
4
2
10
0
0
0
0
10
20
30
10
20
40
9
50
8
45
40
40
7
Tamano tumor
30
dias
dias
35
6
30
5
25
4
20
3
15
2
10
1
5
0
0
10
20
30
40
0
50
0
10
20
30
40
50
di a s
di as
40
12
35
Tamano tumor
Tamano tumor
10
30
25
20
15
8
6
4
10
2
5
0
0
0
10
20
30
40
0
50
10
20
30
40
50
di as
di a s
30
1
25
Tamano tumor
0, 9
Tamano tumor
0, 8
0, 7
0, 6
0, 5
0, 4
20
15
10
0, 3
5
0, 2
0, 1
0
0
0
0
10
20
30
40
10
50
20
30
40
50
di as
di as
16
3
14
Tamano tumor
Tamano tumor
2,5
2
1, 5
1
12
10
8
6
4
2
0,5
0
0
0
0
10
20
30
di as
40
50
10
20
30
di as
40
50
Gene Ther. (2009) 17: 26-36.
Suicide gene therapy on spontaneous canine melanoma:
correlations between in vivo tumors and their derived
multicell spheroids in vitro
María L. Gil Cardeza (MSc), Marcela S. Villaverde (MSc), Gabriel L. Fiszman
(PhD) , Natalia A. Altamirano (MSc), Ruth A. Cwirenbaum,
Gerardo C. Glikin (PhD) and Liliana M. E. Finocchiaro (PhD)
Resistencia multicelular
al Gen Suicida:
recrecimiento tumoral y
repoblación de la zona
necrosada por el gen
suicida.
Células madre tumorales
Pequeña proporción de células dentro del tumor que repuebla a
largo plazo el grueso del tumor y mantiene la habilidad de
regenerarse continuamente.
Ponti et al. European J. Cancer 42 (2006 ) 1219 –1 22 4
Keith B, Simon M. Cell 129 (2007), 465-472. Review
Resistencia multicelular
al Gen Suicida:
recrecimiento tumoral y
repoblación de la zona
necrosada por el gen
suicida.
Células madre tumorales
Pequeña proporción de células dentro del tumor que repuebla a
largo plazo el grueso del tumor y mantiene la habilidad de
regenerarse continuamente.
Ponti et al. European J. Cancer 42 (2006 ) 1219 –1 22 4
Keith B, Simon M. Cell 129 (2007), 465-472. Review
Resistencia a las terapias:
Baja tasa de replicación y diferenciación.
Activación de mecanismos
citoprotectores y antiapoptóticos.
Resistencia a múltiples drogas.
???
Células madre tumorales
Pequeña proporción de células dentro del tumor que repuebla a
largo plazo el grueso del tumor y mantiene la habilidad de
regenerarse continuamente.
Aproximadamente una de cada cuatro c
élulas seleccionadas aleatoriamente
células
de una muestra de melanoma humano pod
ía formar tumores en ratones muy
podía
inmunosuprimidos (Quintana et al
).
al.. Nature 456 2008
2008).
Células madre tumorales
Pequeña proporción de células dentro del tumor que repuebla a
largo plazo el grueso del tumor y mantiene la habilidad de
regenerarse continuamente.
Aproximadamente una de cada cuatro c
élulas seleccionadas aleatoriamente
células
de una muestra de melanoma humano pod
ía formar tumores en ratones muy
podía
inmunosuprimidos (Quintana et al
al.. Nature 456 2008)
2008)..
C57BL/6
B16F-10 3x106
ßgal/GCV
250
Int. Immunopharmacol. In press (2014).
mm3
ßgal/GCV
+Vac
GS/GCV
GS/GCV
+Vac
Suicide plus Immune Gene
Therapy prevents Local Relapse
and increases Overall Survival in
an Aggressive Mouse Melanoma
Setting
MS Villaverde, K Combe, AG Duchene,
MX Wei, GC Glikin and LME Finocchiaro
C57BL/6
B16F-10 3x106
ßgal/GCV
250 mm3
2.000 mm3
ßgal/GCV
+Vac
GS/GCV
GS/GCV
+Vac
C57BL/6
B16F-10 3x106
ßgal/GCV
0/8=0%
250 mm3
ßgal/GCV
+Vac
GS/GCV
GS/GCV
+Vac
4/6=67%
P< 0.015
4/7=57%
P< 0.026
5/6=83%
P< 0.003
Aspectos microscópicos de la pseudocápsula
βg
GS
4
2
3
0
1
2
0: ausencia de
pseudocápsula
4
3
1: pseudocapsula
de tejido fibroso
GS+Vac
βg+Vac
3: tejido conectivo
4
2
1
4
2: Células
tumorales viables
4
3
4: células inmunes
3
1
4
2
coronal plane
i
♥
tumor
riñón
vejiga
βgal
riñón
tumor
βgal + Vac
GS
GS + Vac
sagittal plane
MicroTomografía por Emisión de Positrones: PET.
Inyección retro orbital de 6 ± 1 MBq de 18F-fluorodeoxyglucose.
Toma de imágenes 1 hora más tarde.
Timo agrandado
ßgal/GCV
0%
ßgal/GCV
+Vac
0%
GS/GCV
43%
GS + vac
p<0.03
GS/GCV
+Vac
83%
p<0.003
Micro PET.
Terapia génica combinada
Activa la respuesta
inmune sistémica
Vacuna sc
Transforma el
microambiente tumoral
inmunosupresor en
inmunoestimulatorio
Encapsula y confina el
tumor local
GS + vac
Gen Suicida
Micro PET.
Terapia génica combinada adyuvante de cirugía
Vacuna sc
GS + vac
Gen Suicida
Micro PET.
Cancer Gene Ther. (2012). 19: 852-861.
Cytokine-enhanced vaccine and suicide gene
therapy as surgery adjuvant treatment for
spontaneous canine melanoma : 9 years of follow
up
LME Finocchiaro
and GCGen
Glikin
Unidad
de Transferencia
ética
Instituto de Oncología “Ángel H. Roffo”
Universidad de Buenos Aires
MELANOMA CANINO MUCOSO ORAL /
DIGITAL
Altamente maligno, metastásico y letal.
Resistente a las terapias convencionales.
Responde a nuestro tratamiento.
Células
Xenogénicas
Cirugía
Total
Gen suicida
Fragmentos formolizados
hIL-2
hGM-CSF
Cirugía
Parcial
Controles
Cirugía
Recidiva
Post-quirúrgica
Vacuna
subcutánea
Gen Suicida
Semanalmente
por 5 semanas.
Luego cada 2, 4,
9, 18 semanas.
Tto Combinado n=283
G.Suicida
GCV
EL
19%
Sin
recidiva
local
Cx
(SRL)=49% Parcial
32%
116
61
172
LEL
10%
Enfermedad local
(EL)=90%
P<0,0001 Log-rank test
Análisis de Kaplan Meier
Control Cx n=135
Tto Combinado n=283
G.Suicida
GCV
PT
13%
EL
19%
Sin
recidiva
local
Cx
(SRL)=49% Parcial
32%
LEL
10%
Enfermedad local
(EL)=90%
Control Cx n=135
RC
PT
14%
22%
EE
32%
RP
32%
G.Suicida
GCV
Respuesta local
Respuesta sistémica
RC
TC
10%
M0-1=9%
RP=16%
LEL:59%
M1-1=10%
M1-0=1 %
EE=15%
SRPQ=49%
M0=84%
PT=9%
49%
84% y 82%
89
241
SRPQ: 10%
Cx
M0-1=46%
M0=44%
PT=91%
M1-1
10%
p<0,0001 Log-rank test
Análisis de Kaplan Meier
Remisión Completa de metástasis en órganos distantes
1) Cocker macho de 15 años
2) Mestiza hembra de 15 años
Remisión Completa de metástasis en órganos distantes
Pastor Alemán hembra de 13 – 15 años
.
14/10/05: Enucleación por melanoma ocular
. 11/11/06: metástasis hepáticas múltiples.
Extirpación de un lóbulo hepático
completo y parte del 2do, quedando
múltiples nódulos imposibles de resecar.
.
. 5/1/07: 39 días: Hígado: Sin evidencia
ecográfica de metástasis.
. 26/04/08: 524 días: Libre de enfermedad.
Excelente estado clínico y calidad de vida.
. 27/04/08: 525 días: eutanasia no relacionada.
. 27/11/06: Se derivó a terapia génica.
CAUSA DE MUERTE %
Cx (n=134)
CXC
CxP
(n=92)
(n=42)
TC (n=179)
CXC
CxP
(n=103)
(n=76)
ENFERMEDAD LOCAL (L)
METASTASiS (M)
ENFERMEDAD (L+M)
NO RELACIONADA
50
49
99
79
21
100
26
15
40
79
11
90
1
0
60
11
ABANDONARON PROTOCOLO
0
0
21
12
VIVOS
1
0
10
5
Cx vs. TC
CXC
CxP
(p<)
(p<)
ns
ns
8x10-22
0,05
Prolongación significativa de la sobrevida libre de enfermedad
~ 2 añ
años
~ 8 añ
años
Number of subjects at risk
Days
DCS-CT
RCS-CT
MCS-CT
MPS-CT
DCS-ST
RCS-ST
MCS-ST
MPS-ST
0
175
191
175
85
82
93
82
40
100
156
170
175
72
23
26
30
4
200
133
138
156
42
7
9
10
0
300
110
111
128
23
4
4
5
0
400
77
62
73
15
3
3
3
0
500
67
52
63
7
0
0
2
0
750
40
22
33
3
0
0
0
0
1000
33
16
19
0
0
0
0
0
1250
9
12
13
0
0
0
0
0
1500
4
5
6
0
0
0
0
0
1750
3
3
4
0
0
0
0
0
2000
2
2
3
0
0
0
0
0
2250
2
2
2
0
0
0
0
0
2848
1
1
1
0
0
0
0
0
Prolongación significativa de la supervivencia
Supervivencia
Controles Cirugía
(n=135)
Tratamiento combinado (n=283)
(días)
Cx completa
(n=93)
Cx parcial
(n=42)
Cx completa
(n=191)
Cx parcial
(n=92)
Mediana toda causa
91 (10-568)
65 (29-159)
610 (35-2848)
201 (36-797)
Mediana melanoma
99 (10-568)
65 (29-159)
>2855 (35-2855)
250 (36-797)
~ 8 añ
años
LME Finocchiaro, MD Riveros and GC Glikin
Cytokine-enhanced vaccine
and suicide gene therapy as
surgery adjuvant treatments of
metastatic melanoma
in a gray stallion
Vet. Rec. 164, 278-279 (2009).
Padrillo tordillo pura sangre de 13 años
Región perianal y prepucio
Lesiones múltiples pre-quirúrgicas
Resultado post-quirúrgico / GS
GS
35 días
post-GS
Metastásis subcutáneas en cuello, lomo, hombros
A 1528 días
posttratamiento:
excelente
calidad de vida
y plena
función
reproductiva.
Finocchiaro LME, Villaverde MS, Gil Cardeza ML, Riveros MD and Glikin
GC
Cytokine-enhanced vaccine and interferon-β plus suicide
gene as combined therapy for spontaneous canine sarcomas
Res Vet Sci. (2011) 91: 230–234.
Finocchiaro LME, Spector A, Rossi UA, Gil-Cardeza ML, Suarez JL,
Riveros MD, Villaverde MS & Glikin GC
The Potential of Suicide plus Immune Gene Therapy for
Treating Osteosarcoma:
the Experience on Canine Veterinary Patients
In Sarcoma: Symptoms, Causes and Treatments. E.J. Butler (Ed.). Nova
Science Publishers, Inc. (New York, U.S.A.), (2012). ISBN: 978-1-62100-3625. In press.
Remisión completa de un osteosarcoma en hombro
Dogo de
Burdeos
3 años
GS
GCV
Día 0:
diagnóstico: OSA
osteoblástico
IFNβ
Gen suicida + IFN
peritumoral
Día 94: Rta. Parcial
vac
Lesión proliferativa
en metáfisis de la
cabeza del húmero
Día 988: muerte no relacionada
Día 325: sin
Metástasis
Día 282: Rta.
Completa
No produjo toxicidad local o sistémica, alergia, o disfunción
orgánica.
Alcance local
Restringe toxicidad
a los sitios de
inyección
Lisis tumoral
aguda, destrucción
de mucosa
gástrica, sistema
inmune etc.
Falla orgánica
múltiple:
riñón, corazón,
hígado, etc.
GS
GCV
IFN
β
BLM
Terapia genética
Mínima toxicidad
local
Producción continua
y sostenida durante
meses
en concentraciones
fisiológicas.
Una sola aplicación
local postquirúgica,
sostenida por la
vacuna, alcanza para
retrasar o evitar la
recidiva.
Mejoró o restauró
la calidad de vida previa a la enfermedad
de todos los pacientes tratados
Mejoró:
el ánimo
el estado cínico
el perfil
hematológico
• la química
sanguínea.
•
•
•
Aumentó:
•
•
•
•
•
•
el
la
la
el
la
el
apetito
fuerza y energía
movilidad
alerta
interacción social
bienestar general
Conclusión:
El tratamiento logró:
prevenir o retrasar
la recurrencia y
las metástasis,
prolongar la
supervivencia
mejorar la
calidad de vida.
Conclusión:
Seguridad y Efectividad
validada por:
alto número de
pacientes: > 600
9 y 6 años de
seguimiento
protocolos clínicos
veterinarios.
ideal
bench (
bed
)
real
Modelos experimentales murinos
x días
x días
x días
x días
Pacientes humanos o caninos
III
IV
II
III
n meses
z meses
y meses
x meses
Modelos experimentales murinos
x días
x días
x días
x días
Pacientes humanos o caninos
III
IV
II
III
n meses
z meses
y meses
x meses
En conclusión…
Presentan respuestas anatómicas y fisiológicas similares
Están bajo influencias ambientales y emocionales similares.
Factibilidad, seguridad,
toxicidad, efectividad,
esquemas de
tratamiento.
Un protocolo clínico para
definir la seguridad y
efectividad de un tratamiento
en:
Pacientes caninos
Pacientes humanos
Requiere entre 1 y 3 años
Requiere entre 5 y 15 años