Requerimientos Sanitarios de la Unión Europea para Productos Alimenticios afectados por Biotoxinas Marinas EXPOMYTILUS Castro, 24 y 25 de noviembre de 2005 Benjamín Suárez Víctor Contreras Laboratorio de Toxinas Marinas Facultad de Medicina, Universidad de Chile Santiago y Castro www.marearoja.cl LA NUEVA SITUACIÓN PARA LA INDUSTRIA DE CULTIVO DE MOLUSCOS Y LOS DESAFÍOS PARA LABTOX y el Sistema de Vigilancia Sanitaria 1) LOS FACTORES DE RIESGO EMERGENTES •Los nuevos requerimientos de los mercados de destino (UE) •La detección en Chile de nuevas toxinas lipofílicas •Nuevas contingencias por toxinas diarreicas en octubre y noviembre de 2005 2) NUESTRAS RESPUESTAS: •Nuevas técnicas de análisis y organización del trabajo •Tecnologías de información y comunicación para la alerta temprana de mareas rojas y apoyo a la toma de decisiones sanitarias Impactos del Brote VPM 2002 de Chiloé sobre producción de choritos de cultivo •2002 desembarque totales < 2001 Total landings and processed shellfish (Mytilids) 1998-2004 •2002 producción a destino nacional disminuyó a un 35% del 2001 90 80 processed volume not processed 60 •Recuperaciones más lentas en el 2003 y 2004 50 40 30 20 Exports vs domestic production 10 0 98 99 00 01 02 03 04 18000 16000 Exports 14000 Domestic 12000 Tons Tons x 1000 70 10000 8000 6000 4000 2000 0 98 99 00 01 02 03 04 38 40 Laboratorio de Toxinas Marinas Universidad de Chile Santiago & Castro 42 CHILOE 44 AYSEN SANTIAGO December 1995 48 MAGALLANES 52 CASTRO May 2002 56 MISIÓN El Laboratorio de Toxinas Marinas (LABTOX) pertenece a la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile, institución que hoy cumple 163 años de existencia Nuestro Programa de Calidad considera a la autoridad competente como un cliente principal y ha sido diseñado para asegurar que los resultados analíticos garanticen la inocuidad de los productos en el marco de las normas sanitarias de Sernapesca y del Ministerio de Salud, y en cumplimiento con las normas que regulan los acuerdos internacionales Para la Unión Europea: Directivas 91/492 y 91/493 CEE, y Decisiones 2002/225 y 2002/226, entre otras. Para los Estados Unidos: normas FDA y NSSP DESARROLLO DEL LABTOX Investigación y Desarrollo en: •bacterias marinas asociadas a dinoflagelados tóxicos •nuevos métodos de detección •nuevas especies marinas afectables por biotoxinas (piure) •desarrollo de TICs para apoyar la toma de decisiones sanitarias •detoxificación de moluscos Financiamiento regular FONDEF, CORFO-FDI, OIEA Septiembre 2004: LABTOX invitado al FAO Codex Expert Meeting on Marine Biotoxins, Oslo Participa en el Comité CODEX Nacional de Productos Pesqueros FUNCIONES LABTOX LABTOX ANALIZA Y COMUNICA RESULTADOS NO TOMA DECISIONES SANITARIAS LABTOX ANALIZA MUESTRAS PARA VPM, VDM y VAM TODOS LOS RESULTADOS DE ANÁLISIS, INCLUYENDO LOS DE INVESTIGACIÓN, SE INFORMAN A SERNAPESCA Y A LA AUTORIDAD SANITARIA 15 a 40 MUESTRAS DIARIAS DE MÁS DE 70 EMPRESAS (Centros y Plantas) (80 EN CONTINGENCIAS RECIENTEs) Desarrollo hacia un Laboratorio Nacional de Referencia •LABTOX participa desde 1998 en el Programa de Aseguramiento de calidad del Instiuto de Salud Pública (PEEC) •Desde el 2002: auditorías anuales por experto externo acreditado por Sernapesca y la FDA, e inspecciones regulares por profesionales responsables de Sernapesca. LABTOX Castro incluido desde 2005 •Julio 2002: aprobación de técnicas oficiales para VPM y VAM por la U.S Food and Drug Administration •Octubre 2002: Rol de Laboratorio Nacional de Referencia para Biotoxinas Marinas otorgado por Sernapesca •Julio 2005: Inspección de la Food and Veterinary Office de la Unión Europea con buenos resultados •Noviembre 2005: Proceso de auditoría interna terminado. Solicitud de auditoría externa al INN según ISO 17025. EQUIPO LABTOX Santiago (18) Investigadores Profesionales Técnicos Ayudantes Apoyo administrativo Castro (6) 3 5 4 3 3 1 2 2 1 Equipo I&D (19) FONDEF AQ FONDEF MR 4 (Santiago y Castro) 15 (Santiago y Castro) Tesistas Tesistas extranjeros 5 2 (Universidad Pompeu Fabra Barcelona) Métodos oficiales aplicados en LABTOX en cumplimiento con Directiva EU2002/225 y USFDA Veneno Paralizante (VPM): bioensayo ratón AOAC Nivel regulatorio: 80 µg STX equivalente/100 gramos de carne Toxinas lipofílicas (entre ellas las diarreicas): Bioensayo ratón (Yasumoto 2004, Protocolos 1 y 2) Una muestra se considera positiva si mueren por lo menos 2 de 3 ratones inyectados con extracto dentro de 24 horas Veneno amnésico (VAM): HPLC with UV detection. Nivel regulatorio: 20 µg/g MUESTRAS ANUALES Nº MUESTRAS POR AÑO 12000 10000 2000 2001 2002 2003 2004 VPM VDM VAM Nº MUESTRAS 8000 Nº MUESTRAS 5382 4804 7929 9503 11420 TOTAL 6000 4000 2000 0 2000 2001 2002 2003 2004 Laboratorio de Toxinas Marinas Universidad de Chile www.labtox.cl LA NUEVA SITUACIÓN PARA LA INDUSTRIA DE CULTIVO DE MOLUSCOS Y LOS DESAFÍOS PARA LABTOX y el Sistema de Vigilancia Sanitaria 1) LOS FACTORES DE RIESGO EMERGENTES •Los nuevos requerimientos de los mercados de destino (UE) •La detección en Chile de nuevas toxinas lipofílicas •Nuevas contingencias por toxinas diarreicas de agosto a noviembre de 2005 2) NUESTRAS RESPUESTAS: •Nuevas técnicas de análisis y organización del trabajo •Tecnologías de información y comunicación para la alerta temprana de mareas rojas y para la gestión productiva) NUEVOS REQUERIMIENTOS DE LA UNIÓN EUROPEA Reglamento 854/2004 Si la autoridad competente decide delimitar una zona de producción, deberá: •Realizar un inventario de las fuentes de contaminación •Examinar las cantidades de contaminantes orgánicos que se liberan en cada época del año según las variaciones estacionales •Determinar las pautas de circulación de los contaminantes atendiendo a las características de las corrientes, la batimetría y el ciclo de las mareas de la zona •Establecer un programa de muestreo de moluscos bivalvos basado en el exámen de los datos obtenidos •No hay tolerancia para las zonas tipo B •Se utilizará E. coli para clasificación y monitoreo NUEVOS REQUERIMIENTOS DE LA UNIÓN EUROPEA Reglamento 854/2004 La distribución geográfica de los puntos de muestreo y la frecuencia del mismo deberán asegurar que los resultados de los análisis sean lo más representativos para la zona en cuestión. Como norma general, la frecuencia de muestreo para el análisis de toxinas en los moluscos deberá ser semanal Para el caso de las toxinas marinas podrá reabrir una zona con la detección de dos resultados consecutivos, separados con un mínimo de 48 hrs. Variabilidad intrapoblacional de la toxicidad Bahía Inglesa Brote Veneno Amnésico (VAM) octubre noviembre 2004 ácido domoico (ug/g) 30 25 BI-01 20 BI-06 15 BI-08 10 BI-09 5 0 0 13 1 14 2 15 3 16 4 5 17 6 18 719 8 20 9 2110 2211 2312 24 13 2514 2615 2716 28 17 29 1819 30 3120121 2 22 3 234 245 25 días ÁREA BI-01 BI-06 BI-08 BI-09 13-Oct 3.4 15-Oct 5.58 (-) 1.74 1.52 17-Oct 5.56 1.06 2.45 (-) 18-Oct 1.43 1.16 1.53 1.52 19-Oct 5.3 7.3 5.4 7.2 20-Oct 5.7 17.6 6.6 7.3 22-Oct 4.8 6 2.3 2.7 24-Oct 8.1 7.2 5.5 9.9 26-Oct 5.2 4.6 3.8 4.0 29-Oct 3.5 4.8 3.1 5.3 1-Nov 3.4 1.5 1.3 2.0 2-Nov 1.6 1 (-) 1.5 3-Nov 0 0 0 0 NUEVAS TOXINAS LIPOFÍLICAS DETECTADAS EN CHILE Distribución actual del Grupo de Toxinas Lipofílicas (Veneno Diarreico, VDM) marzo octubre noviembre 2005 vv Laboratorio de Toxinas Marinas Universidad de Chile www.labtox.cl Biotoxinas detectadas en Chile VPM. Veneno Paralizante de los Mariscos (saxitoxinas) VAM. Veneno Amnésico de los Mariscos (ácido domoico) (este laboratorio, Chiloe, enero 1997) VDM Veneno Diarreico. Ahora llamado complejo de toxinas lipofílicas ácido okadaico y derivados (dinofisistoxinas DTX-1, -2) por método HPLC-FD (LABTOX) Nuevas toxinas lipofílicas detectadas en Chile a noviembre 2005 yessotoxinas (YTXs) pectenotoxinas (PTXs) (abril 05) colaboración con el Cawthron Institute Dr. Patrick Holland, Nueva Zelanda azaspirácidos (AZAs) (sept 05) colaboración con el Cork Institute of Technology. Irlanda, Dr. Kevin James Laboratorio de Toxinas Marinas Universidad de Chile www.labtox.cl Acido okadaico y derivados (producen diarreas) CH 3 O O O HO O OH CH3 H OH CH2 R3 O O CH3 OR1 O O CH3 R2 OH o k a d a ic a c id ( O A ) d in o p h y s is t o x in - 1 ( D T X 1 ) d in o p h y s is t o x in - 2 ( D T X 2 ) d in o p h y s is t o x in - 3 ( D T X 3 ) R1 H H H acyl R2 H C H3 C H3 C H3 R3 C H3 C H3 H C H3 Pectenotoxinas (no producen diarreas) CH O C H3 O O 1 OH CH 3 7 O OH OH C H3 O pec tenotoxin-1 pec tenotoxin-2 pec tenotoxin-3 pec tenotoxin-4 pec tenotoxin-6 pec tenotoxin-7 CH3 R (P T X 1) CH 2 O H (P T X 2) CH 3 (P T X 3) CHO (P T X 4) CH 2 O H (P T X 6) CO O H (P T X 7) CO O H C H3 C-7 R R R S R S CH3 O 1 O O O O HO CH 3 O 3 O CH3 O OH OH O O O OH CH3 O R 7 O OH O CH3 pectenotoxin-2 seco acid (PTX2SA) 7-epi-PTX2SA CH3 C-7 R S O O CH3 Yessotoxinas (no producen diarreas) R n 1 2 h o m o y e s s o t o x in H O C H y e s s o t o x in 3 1 H O C H H O 3 4 5 - h y d r o x y y e s s o t o x in R 2 4 5 - h y d r o x y h o m o y e s s o t o x in H C O O H 1 c a r b o x y y e s s o t o x in H O C H O 2 c a r b o x y h o m o y e s s o t o x in H H 3 1 H O C H 4 5 , 4 6 , 4 7 t r in o r y e s s o t o x in H 3 1 2 O N a O 3 S O N a O O ( )n 3 S O H H 3 H H O O H H H O H H C H 3 O O O O H H O H H C H O H 4 2 ,4 3 ,4 4 ,4 5 ,4 6 ,4 7 ,5 5 -h e p ta n o r-4 1 -o x o Y T X 4 2 ,4 3 ,4 4 ,4 5 ,4 6 ,4 7 ,5 5 -h e p ta n o r-4 1 -o x o h o m o Y T X C H O H C H C H H 3 3 O H O S O O H H a d r ia t o x in 3 S O 3 O H H O H H H N a O 3 S O H H O H H O H O O H C H C H 3 H O O H C H O H H C H N a O O 3 C H 3 3 3 N a 3 Atlas of Dinoflagellates v. 1.0 Intergovernmental Oceanographic Commission Azaspirácidos (AZP) Un nuevo síndrome tóxico en Europa y en Chile (producen diarreas) ■ Los azaspirácidos han sido identificados en mariscos en: ■ 1. Noruega (1999) AZP AZP AZP 2. U.K. (1999 & 2000) 3. Francia (2000) AZP AZP AZP AZP 4. España (2000) AZP ■ Estas toxinas probablemente están distribuidas en toda Europa ■ Fueron detectadas en 1990 en choritos de Irlanda consumidos en Holanda James et al., Toxicon 40 (2002) 909 y Braña et al., Toxicon 42 (2003) 105 Nuevos Azaspirácidos identificados en choritos (Irlanda) Azaspiracid (AZA1) R1 = H, R2 = Me Azaspiracid-2 (AZA2) R1 = Me, R2 = Me O R1 R3 HO A O H Azaspiracid-3 (AZA3) R1 = H, R2 = H O H B O C CH3 Azaspiracid-4 (AZA4) AZA3; R3 = OH Azaspiracid-5 (AZA5) AZA3; R4 = OH CH3 I NH D HHOO O H E HO H GO O H CH3 H OH R2 R4 CH3 F CH3 Los análogos hidroxilados de AZA-3 se han encontrado sólo en moluscos 3 Azaspirácidos identificados en fitoplancton (James et al 2004) Ceratium tripos Protoperidinium ■ ■ ■ La mayor parte de las muestras contienen principalmente Ceratium y Dinophysis spp. Se identificaron 3 Azaspirácidos en 200 células mediante LC-MS3 Protoperidinium spp. está en todas partes pero ni se había pensado en su tóxicidad NUEVAS TOXINAS LIPOFÍLICAS DETECTADAS EN CHILE No Muestra 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 recurso almeja clam ostión ostión ostión ostión almeja chorito chorito chorito No Muestra 1 almeja 2 chorito 3 chorito Marzo 2005 recurso Área Coquimbo Chiloé Tongoy Tongoy Tongoy Tongoy Coquimbo Reloncaví Reloncaví Reloncaví PTX-2 seco acid PTX-2 0.012 <0.010 0.048 <0.010 0.078 0.012 0.035 <0.010 0.15 0.013 0.12 0.020 <0.010 <0.010 <0.010 <0.010 <0.010 <0.010 <0.010 <0.010 Área Punta Chilín Yaldad Canal Hudson Azaspirácidos 0,006 0,039 0,016 totales (ug/g) (ug/g) (ug/g) Carboxy-YTX <0.020 <0.020 <0.020 <0.020 <0.020 <0.020 <0.020 <0.020 0.035 <0.020 YTX <0.010 <0.010 0.027 0.019 0.027 0.028 <0.010 0.44 0.41 <0.010 45-OH-YTX <0.020 <0.020 <0.020 <0.020 <0.020 <0.020 <0.020 <0.020 0.095 <0.020 Agosto 2005 VDM Criterios SERNAPESCA para decidir estados de contingencia Norma SMB/NT3 noviembre 2005 Plan de Contingencia para Biotoxinas Marinas y otras Emergencias de Contaminación Veneno Diarreico (Grupo de toxinas lipofílicas) Nivel 2 Decisión Se inicia muestreo intensivo • Dinophysis acuta • Protoperidinium crassipes Nivel 1 Se inicia muestreo intensivo • • • Dinophysis acuta Niveles superiores Protoperidinium crassipes Niveles superiores Dinophysis acuminata Niveles cuantitativos Cierre cautelar inmediato y muestreo intensivo Observación de toxinas lipofílicas detectables por bioensayo ratón (por lo menos 2 de 3 ratones muertos en 24 horas) Cierre cautelar inmediato hasta la detección de dos muestras negativas consecutivas Muestreo intensivo: cada dos días, dos muestras de agua para análisis de fitoplancton y una muestra de carne. En todos los casos se procede a la evaluación de áreas contiguas y a controles del producto final Laboratorio de Toxinas Marinas Universidad de Chile www.labtox.cl NUEVAS CONTINGENCIAS Y VEDAS CAUTELARES 1 AGOSTO - 25 NOVIEMBRE 2005 A LA FECHA SE HAN PRODUCIDO 24 CONTINGENCIAS 18 por toxinas lipofílicas 4 por VPM 2 por VAM Toxinas lipofílicas II REGIÓN 2 III 6 IV 4 X 6 NUEVAS CONTINGENCIAS Y VEDAS CAUTELARES 1 AGOSTO - 25 NOVIEMBRE 2005 RESPUESTAS DE LABTOX ANTE LA NUEVA SITUACIÓN •Nuevas contrataciones, equipos e infraestructura en Santiago y Castro •Nuevo plan de trabajo interno para asegurar tiempos de respuesta exigidos •VPM y VAM: 24 horas (*) •Toxinas lipofílicas (VDM): 48 horas (*) (desde el ingreso a LABTOX) •Muestras en períodos sin contingencia Análisis VPM y VAM de lunes a viernes, 9 a 18 hrs Análisis toxinas lipofílicas: se reciben de lunes a jueves hasta las 18 horas. Se procesan durante el viernes para informar día sábado •Muestras en períodos de contigencia determinados por Sernapesca: Se establecen turnos nocturnos y de fin de semana para informar durante 7 días RESPUESTAS DE LABTOX ANTE LA NUEVA SITUACIÓN •Contratación y entrenamiento de nuevos profesionales para LABTOX Castro •Para toxinas paralizantes: puesta a punto de la técnica HPLC con detección fluorescente de Lawrence y cols. 2005 aprobada por la UE como alternativa futura al bioensayo ratón (radioensayo y ensayo electrofisiológico en funcionamiento) •Para toxinas lipofílicas (ex - diarreicas): puesta a punto de método de Yasumoto y cols 2004 (Protocolos 1 y 2) para toxinas lipofílicas en cuerpo entero •Puesta en marcha de métodos para toxinas lipofílicas y amnésica en LABTOX Castro (primer semestre 2006) •Construcción de nuevo Bioterio para la producción de 4000 ratones/mes en LABTOX Castro con la asesoría del Dr. Sergio Romero (ISP) y contratación de técnico •Colaboración internacional con: El Laboratorio Comunitario de Referencia de Biotoxinas Marinas (Vigo; Dr, Luis Botana) para nuevo Protocolo Normalizado para bioensayos Dr. Kevin James, Instituto Tecnológico de Cork, Irlanda, para el análisis LC-MS de toxinas lipofílicas TECNOLOGÍAS DE INFORMACIÓN y COMUNICACIÓN PARA LA ALERTA TEMPRANA DE MAREAS ROJAS Y APOYO A LA TOMA DE DECISIONES SANITARIAS (mr-SAT) Víctor Contreras Resultado del Proyecto FONDEF MR02i1004 Universidad de Chile Laboratorio Plancton Andino mr-SAT GIS Server DBMS and Web Server Objetivos •Proceso de datos ambientales durante FANs •Apoyar en línea la toma de decisiones de la Autoridad Competente •Contribuir a la organización de procesos productivos antes de un cierre cautelar y documentar las condiciones para su apertura • Uso intensivo de TIC’s para: •Comunicación en línea de estados ambientales •Resultados de Análisis en Laboratorios •Seguimiento de la evolución de brotes tóxicos •Coordinación de respuestas de equipos en emergencias • Uso de dispositivos de conectividad móvil (smart phones, PDAs, WAP) que faciliten la distribución de la información a productores, consumidores, detallistas, medios de comunicación y público en general. Estado Actual Centros de Cultivo en posiciones remotas/aisladas Varios Programas de Monitoreo Varias Entidades Muestreadoras Laboratorios de Análisis en Diversas Ciudades Autoridades Competentes •SERNAPESCA (exportaciones) Consumidores (Que quieren comer con calidad y seguridad) •Autoridad Sanitaria (consumo doméstico) Con mr-SAT Autoridades Centros de Cultivo en posiciones remotas/aisladas •SERNAPESCA y Autoridad Sanitaria pueden: • Tener acceso en tiempo real a los diversos estados del monitoreo y conocer dónde están ocurriendo Programas de Monitoreo generan sus Acciones utilizando mr-SAT mr-SAT GIS Server •Informar sus decisiones a todos los estamentos involucrados Entidades Muestreadoras DBMS and Web Server Laboratorios de Análisis -Web Site -Listas de Correo -Mensajería (SMS, WAP) -Servicios con accesos Públicos y Restringidos •Consultar y coordinar en tiempo real para tomar decisiones. Consumidores Resultados: Procesos Puestos en línea con mr-SAT ON LINE: Emisión de Formularios mr-SAT Programas de Monitoreo GIS Server DBMS and Web Server Entidades Muestreadoras Laboratorios de Análisis Aplicaciones Web para: Regulaciones Sanitarias y Trazabilidad de mitílidos: Autoridades Competentes Autoridades Competentes Red de Centinelas Consumidores Ambientales Aplicaciones Web para: Trazabilidad para productores de moluscos Productores Gestión para centros de cultivo y de proceso Consumidores Resultados: Conocimientos disponibles para la toma de decisiones y la gestión productiva Modelo de datos robusto y consistente basado en escalabilidad Diccionario de datos contiene (entre otros): Especies de microalgas Niveles regulatorios para biotoxinas Técnicas analíticas y bioensayos empleados (VPM, VAM, toxinas lipofílicas) Información legal sobre centros de cultivos Programas de muestreo mr-SAT GIS Server DBMS and Web Server Entidades de muestreo, recursos humanos Datos oceanográficos y ambientales (mareas, vientos, su dirección, radiación solar, precipitaciones y otras variables climáticas) Representación geospacial de centros de acuicultura: Centros de cultivo: (semilleros, áreas de crecimiento, plantas de proceso) Estacioens de monitoreo Centros poblados Ubicación de fuentes potenciales de contaminación Bosques, cursos de agua, ríos, topología y otras carácteristicas fisicas Disponibilidad sobre el Web, incluidas PDA’s, Smartphones, Wap Estación Meteorológica de Palqui LOS NUEVOS DESAFÍOS QUE DERIVAN DE LAS DECISIONES DE LA Food and Veterinary Office (FVO) PARA EL FUTURO CERCANO A corto plazo Negativa a la solicitud de exportación de moluscos vivos Mayores costos por inicio de muestreos semanales enero 2006 A mediano plazo (2006-2007) •Cambios en los métodos de análisis reglamentarios para toxinas diarreicas (UE, Codex) •Nuevos niveles regulatorios más exigentes para toxinas paralizantes y diarreicas •Se considerará una ingesta promedio de 250 gramos •Énfasis en la calidad de aguas de las zonas de crecimiento El Proyecto FONDEF AQ02I1007 “Desarrollo de Tecnologías y Normas para la Detoxificación de Toxinas Marinas en Moluscos de Importancia Comercial” 1) Investigación por recurso, cinética de intoxicación-detoxificación 2) Etapas del proceso de elaboración que inciden en la detoxificación 3) Normas para plantas de proceso (bioseguridad, tratamiento de residuos) 80 días - 40 días proceso de conserva 80 µg/100 g 80 µg/100 g T1 T2 T3 T4 T1 T2 Laboratorio de Toxinas Marinas Facultad de Medicina Universidad de Chile Instituto de Educación Rural, Ten Ten Planta Conservera Piloto RESULTADOS ESPERADOS ACCIÓN ADMINISTRATIVA RESULTADO a. Al detectarse fitoplancton tóxico, aumentar frecuencia de muestreos (T1) Retardar inicio de la veda b. Reducir frecuencia de muestreos durante el período tóxico >80 ug/100 g (T1 + T2) Reducción de costos c. Aumentar frecuencia de muestreos bajo los 80 ug/100 g (T3) Adelantar apertura d. Plantas habilitadas para detoxificar (T3 + T4) Mantener la producción RESULTADO FINAL: 80 µg/100 g Disminuir días de veda preservar puestos de trabajo y mantener producción T1 T2 T3 T4 (1 día de veda en Chiloé 2002 = US$186.000)