Manejo y control de Staphylococcus aureus

P bl H á d Já
Pablo Hernández Jáuregui, MVZ, PhD.
i MVZ PhD
Dirección Técnica CyTA Labs
Micrografía electrónica de transmisión de S aureus que muestra la adhesión entre las bacterias, y formación en cadenas, fenómeno requerido para la multiplicación bacteriana . La proteína de clonación (Clf) que marcada sobresale de las células es responsable de esa dh
4
2
1
3
4
6
5
Esquema que muestra la invasión intravascular de S.aureus (1), la adhesión al
fibrinógeno (2), la invasión al endotelio vascular (3), la estimulación de factores
inflamatorios (4) , extravasación de polimorfonucleares (5) y la liberación de S.aureus de
la célula endotelial (6).
B
A
Micrografía electrónica de transmisión de células endoteliales (A) S. aureus fuera de la célula (flecha roja) e incorporación por endocitosis al citoplasma. (B) Vaso al citoplasma (B) Vaso sanguíneo con célula endotelial con ruptura de membrana citoplásmica (flechas azules) y numerosas partículas de S aureus a punto de liberación de sus nichos vesiculares vesiculares. Microfotografía de dos células en cultivo primario de la glándula mamaria de una vaca, con inoculación de S aureus. Note la adhesión de S aureus
,
((flechas) a las )
células epiteliales de cadenas y grupos para lo cual la bacteria usa su proteína de adhesión a la fibronectina (Fnb).
Identificación de vacas infectadas con
Staphylococcus aureus;
Leche con alteraciones físicas g
grumos, coágulos,
g
sangre.
Conteo de células somáticas; Fosomatic, prueba de
C lif i
California;
cuenta
t celular
l l
alta.
lt
Mi bi l í de
Microbiología
d
leche positiva a Staphylococcus aureus (Gram
positivo coagulasa positivo,
positivo,
positivo Sal y Manitol positivo,
positivo
DNAasa positivo, Vogues/Poskauer positivo,
hemólisis positivo).
)
Prueba de coagulación del plasma. S aureus usa su proteína coagulasa lo cual induce al plasma a formar un coagulo. Existen otros estafilococos como S intermedius, hycus
d
h
que también tienen esa proteína de b
d
virulencia.
Prueba de Voges‐Proskauer (VP). Esta prueba detecta la producción de acetil‐metilcarbinol
(
(acetoína), el cual se convierte a diacetilo
í ) l l i
di
il en presencia de KOH y O2 atmosférico.
Staphylcoccus aureus ß‐Galactosidasa negativo, Producción de acetoína positivo Reducción de nitratos positivo, Resistencia a Novobiocina
negativo, Resistencia a Polimixina B positivo.
Los estafilococos hycus, intermedius, no producen acetoína, lo que permite diferenciar d
í l i dif
i entre estafilococos coagulasa positivos.
Prueba de Voges‐Proskauer positiva (precipitado de color rojo) . Mismos cultivos que fueron coagulasa positivos por lo que corresponden a estafilococos aureus.
d
fl
Manejo del ganado positivo a Staphylococcus aureus
Aislamiento y organización de corral para alojar a las vacas
positivas. Ordeña al final.
Incremento de las medidas de higiene en pre y post ordeño,
desinfección de pezones antes del ordeño. Despunte en
recipiente tasa de fondo negro (todos los animales del
establo) y eliminación de la leche en contenedor con
desinfectante.
Evaluación de cada vaca positiva, respecto a
número de lactancias, días en leche, cuarto (s)
afectados.
Selección de vacas con probabilidades de
eliminación de Staphylococcus aureus del cuarto
afectado.
Selección de vacas para tratamiento durante la
lactancia y para secado.
Selección de vacas que no tienen posibilidad de
eliminación
li i
ió de
d Staphylococcus
S h l
aureus y su
programación a rastro.
B
A
Recordar que porque los nichos de persistencia son
intracelulares, los antibióticos deben ser suministrados por
dos ciclos de 7 días cada uno
Tratamiento de nichos de persistencia
Desinfección de narinas desde becerras al nacer hasta
vacas en producción o en secado.
Desinfección de pezones vigilancia de integridad de la piel
y tratamiento de hiperqueratosis.
hiperqueratosis
A
B
Dos células de descamación de epitelio nasal de un individuo colonizado con S aureus. Note que conforme el grado de queratinización y por ello exhibición de receptores, los S aureus
t
l S ( tí l fé i (partículas esféricas negras) son más numerosos en la ) á l célula del cuadrante B.
Fórmula:
Beliarbamidico
Excipiente c.b.p
p
p
50%
100g
g
Inactivated whole vaccines generally induce many of the desirable immune responses particularly the infectivity neutralizing responses, particularly the infectivity‐neutralizing antibody. Generally, they do not induce a class I MHC‐restricted cytotoxic T‐cell response, which has been shown to
be the major response required to clear intracellular infections caused by many viruses and some bacteria and parasites.
parasites
Expression and Delivery of Heterologous Antigens
Using Lactic Acid Bacteria
Mark A. Reuter, Sean Hanniffy, and Jerry M. Wells
There has been increasing interest in developing delivery Th
h b
i
i i
i d l i d li
vehicles for use as mucosally administered vaccines. Lactobacillus lactis is a harmless noninvasive bacterium
with a history of safe use in the food industry, which makes y
y
it more acceptable than attenuated pathogens for vaccine delivery
COMO CONTROLAR LA COLONIZACIÓN?
TERNERAS Y VACAS
DESINFECCIÓN DE NARINAS Y PEZONES Y
SUSTITUCIÓN DE COLONIZACIÓN DE S AUREUS EN NARINAS POR CEPA NO VIRULENTA
VACUNACIÓN CONTRA FACTORES DE ADHERENCIA DE S AUREUS
Vacunación con EcoStaph y biotipo del establo
Vacuna con antígenos
V
tí
recombinantes
bi
t
expresados
d
en Lactococcus lactis, contra las proteínas de
virulencia; adhesión a la fibronectina (Fnb) y al de
clonación (Clf). Staphylococcus coagulasa negativo,
Staphylococcus aureus biotipo aislado del establo
para la inducción de Ac antitoxinas beta.
EcoStaph también contiene antígenos contra
adhesinas de E coli
Staph PM+3
Bacterina inactivada para el control de la adhesión de
Staphylococcus aureus
Construcción de un Biológico Recombinante, mediante la
clonación de fragmentos de DNA apropiados en plásmidos.
Expresiión de
E
d las
l prote
t ínas en Lactococcus
L t
llactis
ti .
Evaluación de la correcta expresión de los antígenos en la
pared celular de L. lactis mediante técnicas de; ELISA
Inmunofluorescencia y Western blot.
Iniciadores en
pOri23-FnBPA
pOri For
508 bp
pOri23-ClfA
pOri23-FnBPA
pOri Rev
inicio For 488bp final Rev
PCR en pOri23-FnBPA
L
pOri For-Rev
inicioFor-finalRev
c. neg.
Western blot:
E cl30s clo/n cl clspec clery wt
•
•
•
•
•
•
•
•
•
E:
cl:
fn:
cl-fn:
cl30s:
Clo/n:
clspec:
clery:
wt:
E
cl
fn cl-fn wt
escalera,
L. lactis cl crecimiento exponencial
L lactis fn crecimiento exponencial
L.
L. lactis cl-fn crecimiento exponencial
L. lactis cl crecimiento exponencial, tratamiento 30 min con lizozima.
L. lactis cl crecimiento estacionario (overnight).
L. lactis cl crecimiento exponencial, tratamiento con espectinomicina.
L. lactis cl crecimiento exponencial, tratamiento con eritromicina.
L. lactis wild type crecimiento exponencial
L. Lactis transformado con
proteínas fn-cl. Note el
reconocimiento del
antígeno en la superficie
marcado por la fluoresencia
(flechas)
L. Lactis sin transformar. La
reacción de fluorescencia
está ausente por carecer de
los antígenos
H
B
Fotografía de una ratona con tres días posparto y en lactancia. Note la g
p p
y
glándula con inoculación de S.aureus de color café (flecha) en comparación con la glándula contra lateral con la aplicación de solución salina. Hígado (H) Bazo (B).
Disección de las glándulas mamarias de una ratona inoculada con S.aureus y su control de inoculación con solución salina. Note las zonas de hemorragia y necrosis en la glándula que recibió S.aureus
(flecha). L
L
Microfotografía de sección de glándula mamaria inoculada con S.aureus. Se
g
g
Observa intensa fagocitosis en células inflamatorias que ocupan el lumen (L).
Algunos staphylococcus han invadido células del epitelio acinar (flechas).
Grupo
Grado 1
Testigo 1
Grado 2
X
S.aureus
S.aureus
Control
X
Control
X
S.aureus
X
S.aureus
X
S.aureus
X
Control
X
Control
X
X
S.aureus
Control
X
S.aureus
X
S.aureus
X
Control
X
Inmunizada 3
S.aureus
X
Inmunizada 1
Inmunizada 2
Inóculo
X
X
Testigo 2
Testigo 3
Grado 3
S.aureus
X
S.aureus
X
Control
X
S.aureus
X
S.aureus
X
Control
***
Sí
No
No
3
¿
Ecostaph + ABD
Sí
Sí
Sí
Sí
Sí
No
Sí
*
Sí
Sí
Sí
2
Saponinas
Start vac Hpra
Sí
Sí
Sí
No
Sí
No
No
***
Sí
No
No
2
Base oleosa
Lisygin Boheringer
Sí
Sí
Sí
No
No
Sí
No
¿
¿
No
No
2
AlOH
Mastivac Ovejero
Sí
Sí
¿
No
¿
¿
No
**
Sí
No
No
2
¿
Ady
yuvantes
No
Núm
mero de
Apliicaciones
No
Antifactor
Ac A
Clonación
Ac. Proteina A
Sí
Ac. Antitoxina
AyB
Fibrronectina
No
Slim
me
Sí
Autó
óctono
Sí
Biottipo 5
Sí
Staph aureus
Com
mpleto
Hipramastivac
Inac
ctivado
Lisa
ado celular
Staph Coagulasa
gativos
Neg
Prod cto
Producto
Epidemiología
Monitoreo de muestra de leche por corral con
periodicidad de 30 días.
M titi subclínica
Mastitis
b lí i
Vigilancia y tratamiento de mastitis subclínica