DISTRIBUCIÓN ESPACIO TEMPORAL DEL FITOPLASMA DE LA PUNTA MORADA DE LA PAPA EN LAS ZONAS PRODUCTORAS DEL PAÍS E IMPLEMENTACIÓN DE LA TÉCNICA DE PCR EN TIEMPO REAL PARA SU DETECCIÓN OPORTUNA EN MATERIAL PROPAGATIVO Y DE IMPORTACIÓN Resumen ejecutivo La papa ocupa el cuarto lugar mundial en importancia alimentaria, después del trigo, el maíz y el arroz; pero mientras la tasa de crecimiento de producción de estos tres últimos productos ha disminuido, la de papa se ha acelerado, aumentando así su importancia relativa frente a otros alimentos. De ahí la importancia de los estudios que tienen como fin atacar el síndrome “punta morada” de la papa, el cual ocasiona pérdidas muy elevadas en México (hasta 100% en algunos casos), pues se considera que afecta al 70% de la superficie sembrada de papa del país. Varias investigaciones han mostrado que esta enfermedad está relacionada con fitoplasmas, por lo tanto, el objetivo general de este estudio es analizar factores epidemiológicos y la distribución espacio-temporal de fitoplasmas en las principales zonas paperas del país. Los objetivos específicos de esta investigación fueron: a) establecer un protocolo de detección altamente sensible y específico del fitoplasma de la “punta morada” de la papa en material propagativo y de importación, el cual consistió en utilizar la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para detectar cantidades diminutas de DNA en fitopatógenos; b) analizar la distribución espacio-temporal de fitoplasmas en las zonas paperas del país para determinar las zonas de mayor afección; c) identificar malezas e insectos hospederos de los fitoplasmas de la punta morada de la papa. La investigación tuvo varias etapas: a) se colectó el material de estudio (brotes y planta s completas de papa) para seleccionar aquellas con sintomatología típica de fitoplasmas: escoba de bruja, amarillamiento, acortamiento de entrenudos, tubérculos aéreos, enrojecimiento de las hojas apicales, principalmente; b) se utilizaron oligonucleótidos (“primers”) universales para fitoplasmas; y c) se extrajeron y analizaron los ácidos nucléicos totales a partir del tejido foliar, los tallos y las nervaduras de las hojas mediante la metodología establecida en el kit comercial Plant-DNAzol; los DNA se congelaron a -20 °C hasta su procesamiento, y la concentración de DNA total se determinó en el espectrofómetro a 260 nm. Demanda o problemática que atiende Después del tizón tardío, la “punta morada” de la papa y el “brote del hilo” son las enfermedades que más seriamente afectan los rendimientos en el cultivo de papa. La “punta morada” se asocia a síndromes en el follaje, y el “brote de hilo” es observado durante la germinación del tubérculo, que presenta tallos extremadamente débiles, deficientes en clorofila que les da la apariencia de “Hilos blancos” típicos de la enfermedad. Los síntomas de la punta morada son enrollamiento y enrojecimiento de las hojas apicales, amarillamiento de las hojas y aparición de tubérculos aéreos. La presente investigación se centra en la detección y estudio molecular del patógeno Phytoplasma spp presente en las enfermedades de la papa. Resultados obtenidos y/o descripción. Características de la tecnología generada El diagnóstico molecular en tubérculo semilla mediante la técnica PCR (reacción en cadena de la polimerasa) en tiempo real ayudó a los investigadores a obtener los siguientes resultados: a) extracción de DNA de plantas de papa y de tubérculo de las principales zonas paperas del país y de plantas de papa cultivadas en invernadero; b) detección del patógeno Phytoplasma spp por PCR; c) caracterización molecular de los productos ribosomales amplificados; d) identificación de malezas hospedantes de fitoplasmas; e) identificación de Paratrioza (Bactericera) cockerelli como insecto vector de fitoplasmas; y f) establecimiento de ensayos en el Sistema de Detección de Secuencias 7000 (SDS) para la detección y cuantificación de fitoplasmas. Impactos La detección y cuantificación del patógeno mencionado en infecciones tempranas o en plantas y tubérculos no sintomáticos puede evitar la movilización de material propagativo infectado a zonas que están libres de dicho patógeno. Costos estimados de la aplicación de los resultados y/o tecnología generada El uso de la técnica PCR en tiempo real tiene mucha aceptación desde hace cinco años en el diagnóstico molecular. Es ampliamente usada en el campo clínico, alimentos y microbiología veterinaria y es una herramienta útil en laboratorios de investigación para detectar y cuantificar fitopatógenos que causan muchas enfermedades en cultivos agrícolas. Esta investigación constituye una aportación de conocimiento científico, por lo tanto no se puede cuantificar la aplicación de resultados porque es parte del proceso científico para librar tempranamente del patógeno a las plantaciones de papa. Ámbito de aplicación El ámbito en el que se puede aplicar esta investigación es la comunidad científica. Información adicional o comentario Los investigadores hacen una recomendación: considerando que en las próximas décadas la importancia económica de la papa no sólo se mantendrá sino que aumentará, es necesario profundizar en el conocimiento de las principales plagas que atacan al cultivo de este tubérculo. Clave del proyecto: SAGARPA 2002-C01-609 Sistema Producto y/o línea estratégica de atención: biocontrol de plagas Investigador: doctora NORMA ELENA LEYVA LÓPEZ Institución: Instituto Politécnico Nacional, (CIIDIR-IPN, Sinaloa)