area02-res010

XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS POLICLONALES EN RATÓN CONTRA LA
PROTEÍNA EspF DE Escherichia coli ENTEROPATÓGENA
Fernando Valdez Urias Departamento de Ciencias Biológicas Universidad de Occidente,
[email protected]. Asesor Dr. Fernando Navarro García, Centro de Investigación y
Estudios Avanzados del IPN México, D.F. [email protected]
Planteamiento del problema
Escherichia coli enteropatógena (EPEC) es una de las principales causas de
diarrea en niños menores de dos años en países en vías de desarrollo. La
principal característica histopatológica de la infección es una lesión que induce
EPEC en el intestino conocida como lesión A/E (adherencia y eliminación). Para
causar esta lesión, la bacteria inyecta por lo menos seis proteínas a la célula
eucariota; una de ellas es EspF, la cual presenta efectos multifuncionales tales
como: la eliminación de la barrera epitelial y de las microvellosidades, crecimiento
de pedestales de actina, entre otras. Debido a que EspF es muy importante para
la patogénesis de EPEC, el objetivo del presente trabajo fue realizar anticuerpos
policlonales contra EspF utilizando ratones; para que con esta herramienta se
pueda estudiar el funcionamiento de EspF mediante técnicas de Western Blot,
Inmunoflorescencia e Inmunoprecipitación.
Metodología
Se indujo la producción de la proteína recombinante EspF-His a partir de cepas de
E. coli BL21 pLis D3. Se purificó la proteína usando agarosa-NTA acoplada a Ni+
la cual tiene gran afinidad por la bandera de histidinas de EspF. Se determinaron
las mejores condiciones de purificación como el tipo de buffers y tiempo de
interacción del lisado de las bacterias con la resina. Debido a que EspF-His se
procesa y se obtienen varios fragmentos de EspF-His, se procedió a realizar un
segundo paso de purificación haciendo geles de poliacrilamida y electroeluyendo
solo a EspF-His completa para que el anticuerpo la reconozca de manera
específica. Finalmente se inmunizaron ratones BALB/c con EspF-His cada
semana por un mes. Al finalizar la inmunización se sacrificaron los ratones
obteniendo sueros contra EspF-His y se realizó la titulación de los mismos.
Conclusiones
De los ratones inmunizados se obtuvieron anticuerpos policlonales contra EspFHis que permitirán realizar ensayos para conocer mejor el funcionamiento de esta
proteína y a su vez seguir estudiando el papel que juega en la redistribución del
citoesqueleto de la célula eucariota.
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del
Pacífico
Agosto 2014