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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
EVALUACIÓN DE LA PARTICIPACIÓN DEL CANAL CATIÓNICO TRPV4 EN LA
DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS EPITELIALES
Juan Pablo Cruz Santos Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología del Instituto
Politécnico Nacional, [email protected]. Asesora Dra. María del Refugio García Villegas Centro
de Investigación y de Estudios Avanzados del IPN, rgarcí[email protected]
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
El TRPV4 (Transient Receptor Potential Vanilloid 4) es un canal de cationes que
pertenece a la familia de receptores de potenciales transitorios (TRP), éste canal causa
la movilización de calcio y está vinculado con la transducción del dolor. En el laboratorio
se ha estudiado el comportamiento del TRPV4 durante la diferenciación de células
epiteliales y se ha observado que éste canal inicialmente se encuentra dentro del núcleo
de la célula y posteriormente sale del núcleo para posicionarse en la membrana. Este
comportamiento es el objeto de estudio en el laboratorio.
METODOLOGÍA
Previamente en el laboratorio se han realizado estudios bioinformaticos para localizar las
secuencias correspondientes a las regiones transmembranales del canal y de igual
forma se ha encontrado una Señal de Localización Nuclear (NLS) en el dominio amino
citoplásmico del TRPV4. Con estos antecedentes, durante mi estancia en el laboratorio
me encargué de diseñar una construcción para fusionar el dominio amino citoplásmico
del TRPV4 con la secuencia de la proteína amarilla fluorescente del vector pEYFP-N1,
para investigar si la NLS del domino amino es la encargada de dirigir al canal al núcleo
de la célula y con el fin de que la construcción no sea toxica para las células en modelos
in vivo. Para ello se diseñaron oligos con sitios de restricción de las enzimas EcoRI y
BglII para delimitar el domino amino del canal y amplificar por PCR este fragmento. El
vector pEYFP-N1 se cortó con las mismas enzimas de restricción, posteriormente se
ligaron para insertar el fragmento del canal en el vector y obtener la construcción
V4NH-YFP. Posteriormente se transformaron bacterias competentes (DH5α) para clonar
la construcción. Las DH5α se cultivarán y se realizará la extracción del plásmido, será
necesario secuenciarlo para verificar que se haya obtenido la construcción diseñada.
Posteriormente se debe transfectar la construcción en la línea celular NG108-15
(neuroblastoma de rata y glioma de ratón) y se localizará la proteína de fusión con el
fragmento de TRPV4 usando microscopía de fluorescencia.
CONCLUSIONES
La presente investigación no se ha concluido, hasta la fecha no se ha logrado clonar la
construcción para observarla en el modelo celular. Si se logran los resultados deseados,
posteriormente se tendrá que mutar la NLS para identificar si es encargada de la
localización del canal. Se han identificado otras NLS en el canal que faltaría investigar.
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Agosto 2014