CONTROL DE CALIDAD DE LA CURVA DE CALIBRADO PARA EL ION CROMO (QC)

Análisis Instrumental I
Informe de Laboratorio
Integrantes:

Fecha: 12/02/2021
Curso: 6-1
CICLO II (2020-2021)
Practica #8 CONTROL DE CALIDAD DE LA CURVA DE CALIBRADO PARA EL ION CROMO (QC)
Objetivo de la practica:
 Aprender a realizar controles de calidad en curvas de calibrado para emplear de forma adecuada los
controles de calidad en las curvas cuando sea necesario.
 Aplicar el control de calidad (QC) en la elaboración de la curva de calibración como herramienta para
la posterior validación de métodos de ensayo.
 Elaborar una curva de calibración para el ion cromo aplicando el control de calidad en la validación
(QC) del método de ensayo.
Instrucciones o consideraciones previas (Marco teórico)
Los parámetros utilizados para la validación de métodos son los siguiente: exactitud, precisión, especificidad,
límite de detección, límite de Cuantificación, linealidad, intervalo de linealidad y robustez.
EXACTITUD: (VERACIDAD): Expresa la cercanía entre el valor que es aceptado, sea como un valor
convencional verdadero (material de referencia interno de la firma), sea como un valor de referencia aceptado
(material de referencia certificado o estándar de una farmacopea) y el valor encontrado (valor promedio)
obtenido al aplicar el procedimiento de análisis un cierto número de veces.
PRECISION: expresa la cercanía de coincidencia (grado de dispersión) entre una serie de mediciones
obtenidas de múltiples muestreos de una misma muestra homogénea bajo condiciones establecidas. Puede
considerarse a tres niveles: repetibilidad, precisión intermedia y reproducibilidad. Debe determinarse
utilizando muestras originales y homogéneas. Sin embargo, si no es posible obtener una muestra homogénea
puede ser determinada usando muestras preparadas o una disolución de la muestra.
ESPECIFICIDAD: Habilidad de evaluar inequívocamente el analito en presencia de componentes que se
puede esperar que estén presentes. Típicamente éstos pueden incluir impurezas, productos de degradación, la
matriz, etc.
LIMITE DE DETECCION: Cantidad más pequeña de analito en una muestra que puede ser detectada por
una única medición, con un nivel de confianza determinado, pero no necesariamente cuantificada con un valor
exacto. Es comúnmente expresado como concentración del analito.
LIMITE DE CUANTIFICACION: Cantidad más pequeña del analito en una muestra que puede ser
cuantitativamente determinada con exactitud aceptable. Es un parámetro del análisis cuantitativo para niveles
bajos de compuestos en matrices de muestra y se usa particularmente para impurezas y productos de
degradación. Se expresa como concentración del analito.
LINEALIDAD: Habilidad (dentro de un ámbito dado) del procedimiento analítico de obtener resultados de
prueba que sean directamente proporcionales a la concentración de analito en la muestra.
INTERVALO DE LINEALIDAD: Ámbito entre la menor y la mayor concentración de analito en la muestra
(incluyendo éstas concentraciones) para las cuales se ha demostrado que el procedimiento analítico tiene el
nivel adecuado de precisión, exactitud y linealidad.
ROBUSTEZ: Medida de la capacidad de un procedimiento analítico de permanecer inafectado por pequeñas
pero deliberadas variaciones en los parámetros del método y provee una indicación de su fiabilidad en
condiciones de uso normales.
Reactivos de laboratorio:
 Dicromato de Potasio
 Agua destilada
 Ácido Sulfúrico
Materiales
 Matraces Volumétricos
 Pipetas Volumétricas
 Vasos de Precipitación
 Picetas
 Guantes
Equipos de laboratorio:
 Espectrofotómetro GENESYS 20
 Balanza Analítica
Técnica operatoria o procedimiento (Actividades por desarrollar)
 Preparar una solución estándar de Dicromato de potasio que contenga 500 µg ION Cromo/ml
 De esta solución prepare 4 estándares de trabajo en matraces volumétricos de 25 ml, enrase con agua
destilada
 Prepare un estándar de trabajo (QC) adicional, que tenga una concentración igual al punto medio de la
curva de calibrado (30 µg Cromo/ml) 14
PARTE INSTRUMENTAL:
 Encienda el instrumento 15 minutos antes de ser utilizado.
 Longitud de onda: 430 nm,
 Lea las absorbancias de los estándares de la curva de calibrado y del QC preparado
Resultados obtenidos
 Cálculos para la preparación de la Solución Estándar
500 µg / ml ión Cr
FACTOR DE CONVERSIÓN
250 ml Solución estándar
1g = 1000.000 µg
500 µg
1 ml
x
250 ml
x= (500) (250) / 1 = 125.000 µg (Cr)
125.000 µg (Cr) x 1g/ 1000.000 µg = 0.125 g Cr/ml
294,19 g K2Cr2O7
103,98 g ión Cr
0,125 g ión Cr
x
𝑋=
294,19 K2Cr2O7 ∗ 0,125 g ión Cr
= 𝟎, 𝟑𝟓𝟑𝟔 𝒈 𝐊𝟐𝐂𝐫𝟐𝐎𝟕
103,98 𝑖ó𝑛 𝐶𝑟
 Estándares de trabajo
1. Primer estándar
V1:…..
C1: 500 µg / ml ión Cr
𝑉1 ∗ 𝐶1 = 𝑉2 ∗ 𝐶2
𝑉 ×𝐶
𝑉1 = 2𝐶 2
1
25 𝑚𝑙×10 𝑢𝑔/𝑚𝑙
V2: 25 ml
𝑉1 =
C2: 10 µg / ml ión Cr
2. Segundo estándar
V1:…..
C1: 500 µg / ml ión Cr
𝑉1 = 0,5 𝑚𝑙
500 𝑢𝑔/𝑚𝑙
𝑉1 ∗ 𝐶1 = 𝑉2 ∗ 𝐶2
𝑉 ×𝐶
𝑉1 = 2𝐶 2
1
25 𝑚𝑙×20 𝑢𝑔/𝑚𝑙
V2: 25 ml
𝑉1 =
C2: 20 µg / ml ión Cr
𝑉1 = 1 𝑚𝑙
3. Tercer estándar
V1:…..
C1: 500 µg / ml ión Cr
𝑉1 ∗ 𝐶1 = 𝑉2 ∗ 𝐶2
𝑉 ×𝐶
𝑉1 = 2𝐶 2
500 𝑢𝑔/𝑚𝑙
1
25 𝑚𝑙×30 𝑢𝑔/𝑚𝑙
V2: 25 ml
𝑉1 =
C2: 30 µg / ml ión Cr
𝑉1 = 1,5 𝑚𝑙
4. Cuarto estándar
V1:…..
C1: 500 µg / ml ión Cr
𝑉1 ∗ 𝐶1 = 𝑉2 ∗ 𝐶2
𝑉 ×𝐶
𝑉1 = 2𝐶 2
500 𝑢𝑔/𝑚𝑙
1
25 𝑚𝑙×40 𝑢𝑔/𝑚𝑙
V2: 25 ml
𝑉1 =
C2: 40 µg / ml ión Cr
𝑉1 = 2 𝑚𝑙
5. Quinto estándar
V1:…..
C1: 500 µg / ml ión Cr
𝑉1 ∗ 𝐶1 = 𝑉2 ∗ 𝐶2
𝑉 ×𝐶
𝑉1 = 2 2
V2: 25 ml
𝑉1 =
C2: 50 µg / ml ión Cr
𝑉1 = 2,5 𝑚𝑙
500 𝑢𝑔/𝑚𝑙
𝐶1
25 𝑚𝑙×50 𝑢𝑔/𝑚𝑙
500 𝑢𝑔/𝑚𝑙
ALICUOTA
VOL. DILUCION
0,5
1
1,5
2
1
25 ml
25 ml
25 ml
25 ml
25 ml
 Estándar de trabajo Qc Adicional
Nivel 3
Concentración: 30 ug/ ión Cr/ml
QC
V1:…..
C1: 500 µg / ml ión Cr
𝑉1 ∗ 𝐶1 = 𝑉2 ∗ 𝐶2
𝑉 ×𝐶
𝑉1 = 2𝐶 2
1
25 𝑚𝑙×30 𝑢𝑔/𝑚𝑙
V2: 25 ml
𝑉1 =
C2: 30 µg / ml ión Cr
𝑉1 = 1,5 𝑚𝑙
Nivel No.
0
1
2
3
4
5

Curva de Calibrado
CONCENTRACION ug/ml
ION CROMO
10
20
30
40
50
500 𝑢𝑔/𝑚𝑙
Concentración ug/ml
0
10
20
30
40
50
Absorbancia de muestras
QC30
ABB
0
0,038
0,105
0,165
0,231
0,304
0,161
CURVA DE CALIBRADO
0,35
Absorbancias
0,3
0,25
y = 0,0062x - 0,0137
R² = 0,9934
0,2
0,15
0,1
0,05
0
-0,05 0
10
20
30
40
50
60
Concentracion ug/ml
Y=mx-b
Y= 0,0062x-0,00137
0,161=0,0062x-0,00137
0,161 + 0,00137
𝑥=
0,0062
X= 26,1887
Porcentaje de recuperación: 80 -120%
% 𝑑𝑒 𝑅𝐸𝐶𝑈𝑃𝐸𝑅𝐴𝐶𝐼𝑂𝑁 =
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑐𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑜 (𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖ó𝑛)
𝑥100
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑐𝑜 ( 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑢𝑟𝑣𝑎)
% 𝑑𝑒 𝑅𝐸𝐶𝑈𝑃𝐸𝑅𝐴𝐶𝐼𝑂𝑁 =
26,1887
𝑥100
30
% 𝑑𝑒 𝑅𝐸𝐶𝑈𝑃𝐸𝑅𝐴𝐶𝐼𝑂𝑁 = 87,2956
Conclusiones
 Se logró validar el método de ensayo utilizado aplicando el control de calidad mediante la elaboración
de la curva de calibración del ion cromo y con un estándar de trabajo (QC), posteriormente se
determinó los criterios de calidad que nuestra muestra cumplió: Porcentaje de aceptación (estable)
Recomendaciones
 Realizar los cálculos correctamente para la preparación de la solución estándar, para su dilución y
elaboración de los estándares de trabajo.
 Utilizar de una correcta el espectrofotómetro e ingresar la cubeta de forma en que la parte fina este
en dirección a la luz y esta pueda atravesarlo fácilmente.
Bibliografía
1. ICH- Techical Coordination- R. Bass, (1998); ICH Topic Q1A Stabilitu testing Guidelines: Stability
testing of new drug substances and product.
2. ICH-FDA Guidelines For the photstability testing of new drug substances and products; availability;
notice Federal Register vol. 62 N°95 (05,1997)