Validación de métodos analíticos Para determinación de trazas de activo y detergente Ley general de salud • • Materia de control sanitario de actividades, establecimientos, productos y servicios (25): Art. 33. se considera adulterado un producto cuando: 1. Su naturaleza o composición no corresponda a aquellas con que se etiquete, anuncie, expenda, suministre o cuando no corresponda a las especificaciones de su autorización. 2. Haya sido objeto de tratamiento que disimule su alteración o encubra defectos en su proceso o en la calidad sanitaria de las materias primas utilizadas. Nom- 059- 2015 • • • • • • 3.69 Limpieza. Al proceso para la disminución de partículas no viables a niveles establecidos. 3.124 Validación de limpieza. A la evidencia documentada de que un procedimiento de limpieza para las áreas y equipos usados en la fabricación de medicamentos reduce a un nivel preestablecido los residuos del agente de limpieza y producto procesado. 9.11.1 se debe realizar la validación de limpieza con el objetivo de demostrar la efectividad de los procedimientos de limpieza 9.11.2 los métodos de limpieza deben ser acordes a la naturaleza de los productos 9.11.2.1 deben contar con un programa para el uso de sanitizantes el cual debe incluir un agente esporicida. 9.11.2.3 cuando el método de limpieza incluya procesos de sanitización, esterilización y/o descontaminación, estos deberán ser validados. Nom- 059- 2015 • • • • 9.11.2.4 las interacciones entre los diferentes agentes sanitizantes deben ser evaluadas y ser incluidas en la validación 9.11.3 se deben utilizar métodos analíticos validados considerando la técnica de muestreo, para detectar trazas de contaminantes, detergentes y/o sanitizantes. 9.11.4 se deben validar los procedimientos de limpieza de las superficies que estén en contacto con el producto 9.11.5 si varios productos son procesados en el mismo equipo, y se utiliza el mismo procedimiento de limpieza, puede usarse un producto representativo para la validación o el criterio del “peor caso”. Esta selección debe estar basada en la solubilidad y dificultad de limpieza y los cálculos de los limites residuales con base en una combinación de la concentración y toxicidad. Nom- 059- 2015 • 9.11.6 la validación de limpieza debe realizarse en tres aplicaciones consecutivas del procedimiento de limpieza con resultados satisfactorios. • 9.11.7 la vigencia de la limpieza de los equipos de fabricación, accesorios, utensilios y todas las tuberías deben establecerse con base en los resultados de la validación. • 9.11.8 se debe establecer un programa periódico para la determinación de trazas de productos incluidos en la validación de limpieza. Esta periodicidad debe establecerse con base en la valoración de riesgos. Validación de limpieza • Remoción de residuos y contaminantes a un nivel controlado, los residuos y contaminantes, pueden deberse a una contaminación cruzada del producto manufacturado previamente en el equipo o de los procedimientos de limpieza (detergentes – sanitizantes) o de productos de degradación que resultan del proceso de limpieza mismo, así como también microorganimos. Validación de limpieza • • • • • Buen diseño del sistema Plan maestro de validación exhaustivo Desarrollo de procesos de limpieza efectivos Técnica analítica adecuada Criterios de aceptación justificables-específicos • • ¿Qué tan limpio es limpio? -> LAAR Monitoreo continuo de datos y evaluación -> MEV SELECCIÓN DE PEOR CASO • • • • • Considerar: Considerar solubilidad, toxicidad, presencia de colorantes. Historial de limpieza Potencia o concentración Formulación mas difícil de limpiar Realizar una matriz de cada producto con esta información • • • • • • • Tipo de producto Ingrediente activo Concentración Tamaño de lote Cantidad de activo por lote Solubilidad de ingrediente activo Dosis letal Establecimiento de limites • • • • Las autoridades regulatorias no establecen limites para productos específicos, esperan que las compañías farmacéuticas establezcan limites lógicos y científicamente fundamentados. Deben ser prácticos, alcanzables y verificables Los productos de degradación deben ser verificados Los resultados individuales de los puntos de muestreo obtenidos de la validación se deben analizar para evaluar el impacto, por ejemplo: • El alto nivel de contaminación que puede existir en un punzón o aguja llenadora, ya que el riesgo potencial es que todo el contaminante vaya a un solo paciente Inspección visual • • • • Soportar con estudios de recobro Las condiciones de luz y la apariencia de la superficie pueden tener un efecto significativo sobre la capacidad de un operador para ver residuos de producto Frotar la superficie por probar con una tela blanca o negra y verificar si la tela presenta residuos. Las autoridades regulatorias requieren que esta terminología sea “cuantificable” en la literatura se establece que la mayoría de los productos son visibles a aproximadamente 100 mcg/25 cm2 = 4 mcg/cm2 Propiedades farmacológicas • No mas del 0.1% de la menor dosis diaria (dosis dividida entre un factor de seguridad de 1000) de cualquier producto estará presente en la mayor dosis de otro producto Propiedades toxicológicas • No mas de la ingesta diaria aceptada de cualquier residuo de ingrediente activo aparecerá en otro producto. Criterio 10 ppm • Asume que el residuo es tan dañino como los metales pesados • Útil para materiales que no cuentan con datos toxicológicos • No adecuado para materiales muy activos farmacológicamente. 10 ppm Determinación de las superficies de los equipos Limites microbianos • Medidas preventivas para evitar que haya contaminación microbiológica. • • • • Secado del equipo previo al almacenamiento No se debe permitir agua estancada en el equipo Se deben establecer tiempos de almacenamiento del equipo sin limpiar y del equipo limpio El control de la carga microbiológica através de la limpieza es importante para asegurar la efectividad de la esterilización o sanitización. Uso de detergentes • Un problema asociado con los detergentes es que los proveedores no dan una composición especifica, lo que hace difícil al usuario evaluar los residuos • Se debe evaluar la eficiencia para la remoción del detergente • Los detergentes usados deben ser fácilmente removibles • Se recomienda minimizar el uso de detergentes a menos que sea estrictamente necesario. Muestreo • • • • • Swab (Hisopo) Enjuague Placebo Directamente de la superficie con FTIR con fibra óptica Un muestreo adecuado incluye también la transportación y almacenamiento de la muestra Swab (hisopo) Desventajas Ventajas • • Buena reproducibilidad Buena eficiencia de extracción • • • No es capaz de accesar algunas áreas Asume uniformidad de la contaminación de la superficie Debe extrapolar del area muestreada al area total. Enjuague Principio: poner el solvente en contacto con la superficie a muestrear para remover cuantitativamente el residuo. Tipos de muestreo por enjuague: 1. Muestreo después que el proceso de lavado ha terminado, la solución de enjuague para el muestreo puede ser diferente a la que se utiliza para el lavado 2. La muestra se toma del ultimo enjuague. Nota: La consistencia del proceso de enjuague es critico para el recobro, como regla general el muestreo por enjuague debe ser restringido a sistemas Clean in place (CIP) Enjuague Ventajas • • • • Elimina la posibilidad de contaminar el equipo en el muestreo o al armar el equipo Puede muestrear ubicaciones inaccesibles Adaptable a tuberías o ductos en sistemas cerrados Permite el muestreo en superficies porosas Desventajas • • • Solubilidad del residuo en la solución de enjuague puede ser una limitante para un buen recobro. Un mal uso considerar que si el agua cumple con el criterio farmacopeico se concluya que el equipo esta limpio En ocasiones se requiere mayor sensibilidad del método analítico. Métodos específicos • • • Miden de manera inequívoca el residuo en presencia de las interferencias esperadas. Se prefiere este tipo de métodos porque indica exactamente cuanto esta presente y la identidad del residuo. Es mas fácil cumplir el criterio de aceptación con métodos específicos Métodos no específicos • • Miden cualquier especie con una cierta respuesta, el mas común es el TOC. Se considera todo el carbón medido como si fuera el residuo, si el resultado esta dentro de limites se asegura que esta cumpliendo con el criterio de aceptación. Validación de método analítico por TOC • Considerar que la cantidad de residuo es mucho mayor a 500 ppb de carbono (limite farmacopeico) • La adecuabilidad del sistema indicada en la farmacopea no es la adecuada para confirmar un desempeño adecuado, la verificación debe realizarse un nivel cercano al limite de aceptación de residuo, se recomienda realizar una verificación al inicio y otra al final de la corrida. Adecuabilidad • Permite confirmar que el método se esta desempeñando adecuadamente, es una herramienta de diagnostico. • Criterio de aceptación • No menor a 85% y no mayor al 115 % de la respuesta teorica Especificidad Es la habilidad del método analítico para determinar con certeza el analito, en presencia de sustancias que pueden encontrarse en la muestra. Realizar por triplicado, realizar con detector de arreglo de diodos. No deber haber interferencia de: • • • • • • • Solventes de muestreo/solventes de análisis (se utiliza blanco) Los extractables del hisopo Del detergente De los excipientes De los productos de degradación De un blanco de muestreo (superficie) Muestra de producto con detergente (interacción) Estabilidad del residuo • Objetivo: determinar si el residuo se mantiene estable desde el proceso de limpieza hasta su tratamiento analítico. • Procedimiento: simular por triplicado a nivel de laboratorio el proceso de lavado del equipo. • Criterio de aceptación: la respuesta analítica de residuo no debe disminuir de manera importante. Determinación concentración del 100% LAAR • Se requiere conocer: • El límite de aceptación del residuo (LAR) • La superficie a muestrear • Volumen para extraer el residuo del hisopo o el volumen para muestreo por enjuague. Linealidad del sistema • • • Determinar el rango de concentraciones en que la respuesta es proporcional a la concentración. Se efectúa a partir de diluciones de una solución stock Numero de niveles recomendados: mínimo 5, cada uno por triplicado. Recomendación A partir de 10 % hasta 200 % Los rangos siempre deben considerar resultados de aceptación y rechazo del producto. Inyección caótico para retar el equipo Evaluación de la linealidad del sistema • • • • • El 100 %, es la concentración equivalente al LAAR Construir el diagrama de dispersión Graficar la línea de mejor ajuste para la relación concentración vs. Respuesta analítica. Incluir la ecuación y el valor de r2 Criterios de aceptación: r2≥98 IC (b1)= no incluye cero Precisión • Es una medida del grado de concordancia entre una serie de medidas de múltiples muestreos de la misma muestra homogénea bajo las condiciones descritas. • Se realiza por sextuplicado con el 100 % de LAAR • Criterio de aceptación CIPAM: CV≤2 para métodos fisicoquímicos • Valores mayores de CV deben ser justificados. Eficiencia del recobro (Linealidad del método, Exactitud) • Es la concordancia entre un valor obtenido experimentalmente y el valor de referencia, se expresa como el porciento de recobro obtenido del análisis de muestras a las que se les ha adicionado cantidades conocidas de activo. • Metodología: un mínimo de 3 determinaciones a cada nivel. • Métodos para contenido de residuo: 50, 100 y 200 % • Métodos para limite de residuo: 50, 100 y 150% Eficiencia del recobro • • • • • • • Criterio de aceptación Construir la grafica de cantidad adicionada vs cantidad recuperada IC (b1)= no incluye cero CV y/x no debe ser mayor a 3% si la concentración del LAAR es en mg/mL 8% si la concentración del LAAR es en mg/mL 20% si la concentración del LAAR es en ng/mL Precisión intermedia • • • • • • Se determina adicionando la cantidad que corresponde al limite al elemento de muestreo, por triplicado en dos días diferentes y realizado por dos analistas. n=12 Criterio de aceptación CV de los resultados de ambos analistas, no debe ser mayor a 3% si la concentración del LAAR es en mg/mL 8% si la concentración del LAAR es en mg/mL 20% si la concentración del LAAR es en ng/mL Precisión vs Exactitud Estabilidad de la muestra • • • • Se determina adicionando la cantidad que corresponde al LAAR, por triplicado determinando la concentración del analito al terminar de preparar la muestra T-0, y a otros tiempos dependiendo de las necesidades 8, 24, 48 y/o 72 horas Criterio de aceptación CIPAM: |d| ≤ 2.0% |d| = diferencia entre el promedio de las muestras a la concentración inicial y el promedio de las muestras al tiempo evaluado. Estabilidad de la muestra en superficie de acero inoxidable • Algunos compuestos pueden descomponerse con el tiempo al estar en contacto con la superficie a limpiar. • Procedimiento: cargar un numero suficiente de placas a muestrear con la cantidad limite del residuo y recobrar al tiempo cero y a los tiempos requeridos según el tiempo de respuesta para el muestreo. Estabilidad del residuo en material de muestreo antes de procesar la muestra • En ocasiones no es posible analizar la muestra el mismo día que se muestrea por lo que es necesario demostrar que mantiene la cantidad de residuo en el material de muestreo, después del tiempo de espera antes de ser analizado. • 1. preparar el numero de materiales de muestreo adicionados de la cantidad limite de residuo • 2. analizar 3 muestras tiempo cero • 3. analizar 3 muestras a cada uno de los tiempos a por ejemplo: 24, 48 y 72 h Tolerancia • • • • • • Grado de reproducibilidad de los resultados obtenidos del análisis de la misma muestra bajo una variedad de condiciones de prueba como: Diferentes laboratorios Diferentes analistas Diferentes instrumentos Diferentes lotes de reactivos Diferentes días de análisis. Robustez • • • • • Medida de la capacidad del método de permanecer sin afectación bajo pequeñas pero deliberadas variaciones en los parámetros del método, lo cual proporciona una indicación de su confiabilidad durante su uso normal. Condiciones cromatográficas Composición de la fase móvil, solvente de la muestra (pH) Columna analítica (diferentes lotes, tiempo de uso de la columna y marca) Procedimiento de preparación de la muestra (tiempo de agitación, diferentes tipos de filtros) Robustez o Tolerancia • • • Analizar 3 muestras en las condiciones del método y las mismas muestras en la condición a ensayar Criterio de aceptación CV≤ de acuerdo a la cantidad de impurezas a determinar * En cromatografía se debe evaluar el efecto de cambio sobre: • Forma de los picos, rango de los tiempos de retención y resolución Limite de detección y cuantificación • • • • • Se determina para: Métodos para impurezas: sustancias relacionadas o productos de degradación. Determinación de trazas de activo, detergente o algún otro contaminante. LD= es la concentración mas baja del analito que puede ser detectada por el método a un nivel de confianza especifico. LC= es el nivel mas bajo en el cual el desempeño es aceptable para una aplicación típica. Gracias por su atención.
