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Leptospirosis en bovinos
Aclaración: el enfoque de este resumen se basa en la experiencia personal del autor en
diferentes casos confirmados con aislamiento y tipificación de leptospiras en rodeos de
cría, tambos y sistemas de engorde a corral (feed lots). En todos los casos se aisló el
serovar pomona y por lo tanto las descripciones de presentaciones clínicas y metodología
diagnóstica deben ser interpretados en este contexto.Solamente en un caso se aisló una
cepa cuya tipificación parcial indica que pertenece al serogrupo Sejroe y cuya tipificación
final deberá ser efectuada en un Laboratorio de Referencia del exterior.
Presentaciones clínicas en un rodeo:
Qué nos hace sospechar de leptospirosis en un rodeo bovino?
La presentación de:
Tormenta de abortos: en los casos en que me ha tocado participar los abortos se dieron
en forma de tormenta y en el último tercio de la gestación.
Muerte perinatal: en uno de los casos además de abortos se verificaron muertes
perinatales.
Muerte en etapas de recría y engorde: en 3 casos, uno en la recría 1 de un tambo y 2
en feed lots se observó muerte de animales de hasta 170 Kg de peso.
Observaciones durante la necropsia
El diagnóstico del aborto bovino constituye uno de los mayores desafíos para el
profesional de campo y el laboratorio. Existen agentes bacterianos, virales, protozoarios,
hongos e innumerables causas no infecciosas capaces de provocar abortos. También
capaces de matar animales en etapas de recría o engorde. Por ello, considerar como
sospechoso:
Retención de placenta en una gran cantidad de animales que sufrieron aborto.
Hemoglobinuria en animales en etapa de recría y engorde.
Toma de muestras en caso de abortos
Feto y placenta: provenientes de abortos recientes, manipulados con precaución
(guantes), correctamente refrigerados y remitidos al laboratorio, permitirán confirmar (o
descartar que también es importante) la presencia de algunos de los agentes que pueden
producir abortos. Pero no es la muestra de elección para Leptospira.
Suero: siempre es útil para orientar sobre qué agentes infecciosos circulan en el rodeo,
pero si es la “única” muestra suele aportar más a la confusión que a la confirmación de un
diagnóstico de leptospirosis.
Orina de la madre: tomar una muestra de orina extraída preferiblemente mediante
aplicación de furosemida, diluirla en medio de transporte provisto por el laboratorio y
remitirla refrigerada, es el camino más corto para aislar Leptospira y confirmar el
diagnóstico. Lo ideal es tomar muestras de orina de varios animales que sufrieron aborto,
seleccionando aquellos que no hayan recibido tratamiento antibiótico (por la retención de
placenta). Estas son las muestras ideales para confirmar un aborto por Leptospira.
Toma de muestras en caso de muertes
En caso de muerte de animales, las muestras de elección son:
Riñón, envuelto en su cápsula y refrigerado.
Orina, extraída con jeringa y aguja estéril por punción vesical, diluída en medio de
transporte y refrigerada.
El laboratorio especializado: técnicas diagnósticas
Serología: microaglutinación (MAT)
La serología constituye una herramienta orientativa pero no confirmatoria para un
diagnóstico de leptospirosis en bovinos. Mucho se ha escrito sobre la necesidad de
obtener muestras pareadas tomadas con 15 días de diferencia, para evaluar
seroconversión. Esto en la práctica no siempre funciona, debido a que cuando aparece el
aborto la seroconversión muchas veces ya se produjo y en el caso de muertes el
veterinario no llega a tomar una segunda muestra. Esto aplica para otras técnicas
serológicas como ELISA.
Observación directa en campo oscuro
En muchos casos la observación directa de una muestra de orina en microscopio de
campo oscuro nos permite obtener un diagnóstico positivo en cuestión de minutos.
Se requiere paciencia, un buen equipo óptico y experiencia en la observación para
discriminar leptospiras de otros microorganismos y artefactos de técnica. Por supuesto
depende de la carga de leptospiras que contenga la muestra, pero es muy útil cuando se
detecta una muestra positiva, porque permite poner todo el esmero en el cultivo e
inoculación de hámsteres en esa muestra para obtener un aislamiento exitoso.
Inmunofluorescencia directa a partir de orina e improntas de órganos
Es otra herramienta muy útil cuando se cuenta con un equipo y reactivos de buena
calidad, que permite confirmar un diagnóstico en muy pocas horas. También la
sensibilidad depende de la carga de microorganismos que contenga la muestra.
Cultivo: medios semisólidos y líquidos, métodos para inhibir contaminantes
El cultivo de Leptospiras requiere de medios específicos y un laboratorista entrenado. El
primer obstáculo radica en eliminar los contaminantes que siempre acompañan a las
muestras obtenidas en el campo.
Para ello se utiliza la filtración selectiva por 0,45 u, agentes inhibidotes como el 5fluoruracilo y la ejecución de siembras con diluciones.
Con respecto a los medios, la combinación de Fletcher (semisólido) y EMJH líquido ha
respondido muy bien para aislamiento de pomona, pero no tan bien para el aislamiento de
Sejroe.
La metodología es laboriosa, insume mucho material y lleva tiempo (2 semanas hasta 6
meses). No debe esperarse un aislamiento exitoso sembrando una única muestra en un
solo tubo de medio, se trataría de una casualidad.
Inoculación experimental
La inoculación experimental es una herramienta clave (quizá la más valiosa) para el
aislamiento de cepas patógenas para el hámster, que es el modelo más utilizado. En todos
los aislamientos efectuados de pomona el hámster resultó 100 % efectivo. El animal actúa
como un filtro biológico, ya que su sistema inmune elimina la flora saprófita que
acompaña la muestra, y favorece la multiplicación de Leptospira a partir de pequeños
inóculos que pueden pasar inadvertidos a la observación directa y a la
inmunofluorescencia, además de tardar mucho tiempo para desarrollar en cultivo.
Cuando los animales presentan síntomas y mueren entre los días 5 y 9 post inoculación
del material sospechoso, seguramente tenemos un caso de leptospirosis. Con material de
necropsia de estos animales se confirma rápidamente el diagnóstico y se obtiene el
aislamiento.
Sin embargo, en un único aislamiento de una cepa perteneciente al serogrupo Sejroe (no
patógeno en este modelo), la inoculación experimental no resultó satisfactoria, ya que las
leptospiras no solo no mataron a los animales, sino que no llegaron a colonizar sus
riñones.
Interpretación de resultados
Serología: situación en los rodeos bovinos en nuestro País
Muchas muestras que se remiten para diagnóstico de causal de aborto son solamente
sueros de animales afectados. Es muy común entonces encontrarnos con un panorama
confuso, con presencia de anticuerpos contra varias enfermedades capaces de producir
aborto (ejemplo: IBR, DVB y neospora), entre ellos anticuerpos anti leptospira, que en
muchos casos reaccionan contra más de un serovar. La presencia de anticuerpos frente a
pomona en la mayoría de los sueros proveniente de animales afectados debe alertarnos
sobre un posible caso de leptospirosis. Por el contrario, es muy común encontrar
anticuerpos frente a wolffi, los cuales hasta hace poco eran subestimados pero cuya
importancia deberá ser reconsiderada.
Examen directo: si no observamos leptospiras en la observación directa no podemos decir
que la misma sea negativa. Pero si uno encuentra leptospiras con morfología y motilidead
características, es importante porque rápidamente permite tomar decisiones.
Inmunofluorescencia: es más sensible que la observación directa y debe interpretarse la
muestra negativa de manera similar.
Cultivo: es clave para aislar y poder tipificar el serovar actuante. Debe intentarse en todos
los casos sospechosos, junto con otras técnicas que permitan obtener un diagnóstico
precoz como la inmunofluorescencia, para poder tomar decisiones que minimicen las
pérdidas económicas durante un brote.
Inoculación experimental: debe complementarse junto con el cultivo y en muchas
oportunidades es el hámster infectado el que permite efectuar el aislamiento.
Importancia del aislamiento y la tipificación
El aislamiento de leptospiras es el único método que permite tipificar la cepa y conservarla
con todos sus atributos de virulencia originales. Esto es clave para conocer qué serovares
predominan en diferentes regiones y si se preservan adecuadamente (virulencia y
antigenicidad) disponer de cepas para la elaboración de vacunas eficaces
Algunos mitos sobre leptospirosis
Serología y serovar actuante
No siempre la serología indica el serovar actuante y menos en los casos en que los sueros
presentan coaglutininas para varios serovares.
Leptospirosis y agua
Nadie puede negar que la presencia de agua estancada y barro favorecen la multiplicación
y transmisión de las leptospiras. Pero existe una tendencia a que si no hay presencia de
agua en los potreros, no considerar la posibilidad de que la enfermedad se presente.
Tenemos aislamientos de un feed lot ubicado en el límite con la Pampa, con suelos
arenosos y en plena sequía.
Tiempos para efectuar una siembra para aislamiento
Siempre es recomendable tomar las muestras y que éstas lleguen (refrigeradas)
rápidamente al laboratorio. Pero esto no quita que no debamos intentar el aislamiento en
muestras que tienen 3 0 4 días de obtenidas. Tenemos aislamientos de orina que estuvo 4
días antes de poder ser inoculada en hámsteres y sembrada.
La leptospirosis en feed lot: una real amenaza.
Tenemos 2 aislamientos de feed lots con elevada mortandad de animales de más de 160
kg, en ambos casos no vacunados. Las pérdidas económicas pueden ser importantes, por
lo que la vacunación está ampliamente justificada.
Medidas de control frente a un brote de Leptospirosis bovina
Antibióticos de elección
Tuvimos buenos resultados utilizando penicilina estreptomicina en plena tormenta de
abortos.
También en un feed lot suministrando oxitetraciclina en la ración y tratando a los animales
con sintomatología por vía inyectable.
Avances en la elaboración de vacunas.
Este trabajo de aislamiento y tipificación ha permitido disponer de cepas virulentas para
utilizar como desafío en las pruebas de potencia. Se demostró que las vacunas no
protegían frente a estos aislamientos. Se seleccionó una cepa virulenta altamente
inmunogénica y se la incluyó en las vacunas. La cepa fue cedida a SENASA para la
implementación del test de potencia y se habilitó su entrega al resto de los laboratorios
elaboradores de vacuna para que la puedan incluir en sus formulaciones.
Se comprobó la eficacia de las nuevas vacunas a nivel experimental en modelo hámster y
a campo.
Todo colega interesado en el tema puede contactarse con el autor escribiendo a
[email protected]