Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos
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Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Fernando Lafont Déniz La acreditación en laboratorios agroalimentarios Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Acreditación de laboratorios (ISO/IEC 17025:2005) Reconocimiento formal por parte de una entidad autorizada, de la competencia técnica de un Laboratorio para la realización de una actividad determinada, perfectamente definida. Anexo Técnico (Alcance de acreditación) Documento donde aparecen definidas las actividades (en el caso de laboratorios de ensayo, los análisis) que están cubiertos por la acreditación concedida. La acreditación en laboratorios agroalimentarios Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios REQUISITOS DE GESTION (Apdo. 4) Organización Control de trabajos no conformes Sistema de gestión Mejora Control de documentos Acciones correctivas Revisión de pedidos, ofertas y contratos Acciones preventivas Subcontratación Control de registros Compras de servicios y suministros Auditorias internas Servicios al cliente Revisión por la dirección Quejas La acreditación en laboratorios agroalimentarios Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios REQUISITOS TECNICOS (Apdo. 5) Generalidades Personal Instalaciones y condiciones ambientales Métodos de ensayo y de calibración y validación de los métodos Equipos Trazabilidad de las medidas Muestreo Manipulación de los ítems de ensayo Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayo Informe de resultados La acreditación en laboratorios agroalimentarios Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Personal (Apdo. 5.2) COMPETENCIA TECNICA Personal Equipamiento Métodos La acreditación en laboratorios agroalimentarios Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios •Equipos alta complejidad: CG/MS, HPLC/MS, ICP/MS, IRMS, MS alta resolución… •Métodos análisis complejos: dilución isotópica, adición standard, multirresiduos gran número de analitos (>200)… PERSONAL ALTAMENTE CUALIFICADO •Integraciones anómalas (analitos con varios picos, baja relación S/R,…) •Identificaciones espectrales no adecuadas •Desarrollo de métodos “defectuosos” (fragmentaciones iones en MS/MS, método cromatográfico…) •Preparación de muestra y disoluciones no adecuadas (manipulación...) Personal Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios METODOS DE ENSAYO Y VALIDACION (Apdo. 5.4) Métodos Tipos Características Normalizados - Método Oficial (BOE…) - Método normalizado (AENOR…) - Método publicado por organizaciones de prestigio (AOAC, COI, EPA…) - Método desarrollado por el LE - Procedimiento normalizado modificado poca o nula revisión documental Internos poca validación* Revisión documental Validación La acreditación en laboratorios agroalimentarios Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Métodos Internos Guías funcionamiento métodos etc… Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Características Generales Métodos Análisis Cromatográficos HPLC HPLC CG Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Manipulación de muestra Reglamento CE 401/2006. Métodos muestreo micotoxinas en alimentos Directiva CE 63/2002. Métodos muestreo pesticidas en alimentos Etc… Reglamento CE 396/2005. Partes a analizar pesticidas en alimentos y piensos. Reglamento CE 1883/2006. Dioxinas y PCBs en alimentos Etc… Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Manipulación de muestra Identificación mediante una referencia única Muestra mínima Preparación de la misma previo al análisis (homogeneización, trituración, liofilización, refrigeración, adición agentes estabilizantes…) •Tiempo máximo de conservación previo al análisis y posterior al mismo (especialmente analitos poco estables ó volátiles). MUESTRA REPRESENTATIVA Matriz (composicional, degradación) Analitos (degradación, pérdida) Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Analitos standard Patrones puros/disoluciones certificadas: Pureza (certificada) Definir condiciones de almacenamiento adecuadas (temperatura, exposición a la luz, recipiente…) Peso mínimo (10 mg aprox.) Equipos calibrados Caducidad Disoluciones patrones: •Uso disolvente adecuado (precipitación, volatilidad, reactividad…) •Corrección pureza •Identificación adecuada •Condiciones de almacenamiento •Comparación disoluciones nuevas con antiguas (<10%) •Empleo disoluciones diferente “procedencia” •Caducidad Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Métodos de extracción Bibliografía Pesticidas: acetato etilo, método Luke, QuEChERS (ENE-EN 15662:2009)… Micotoxinas (agua/acetonitrilo,…) Pesticidas, PAHs en aguas (SPE, ELL…) Inyección directa (pesticidas aguas…) Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Inyección directa Análisis de matrices líquidas por inyección directa (aguas) o tras dilución (vinos, aguas residuales…) •Pesticidas en aguas por HPLC/MS •Acrilamida en agua por HPLC/MS Rapidez, sencillez, menor costo •Ocratoxina y aminas biógenas en vinos Herbicidas (triazinas, fenoxiácidos..) agua consumo Inyección 25 µ L, HPLC/MS(MRM) Dimetoato Fluroxipir Simazina Diuron Fosmet Linuron Terbutilazina Tebuconazol Diflufenican Oxifluorfen Acrilamida en agua consumo Inyección 25 µ L, HPLC/MS(Trap) 0.10 µ g/L acrilamida 0.025 µg/L Ocratoxina A en vino Inyección 10 µ L, HPLC/MS(MRM) 0.25 µ g/L OTA 402/167 Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Inyección directa Aminas biógenas en vino (dilución 1/100 en fase móvil) 0.2 mg/L aminas (0.002 mg/L) Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Efecto matriz •Acetato etilo: 94% Matriz lechuga fortificada con 125 pesticidas por CG/MS (0.02 mg/kg) •Luke: 96% •QuEChERS: 98% •Luke/GPC: 100% Acetato etilo Luke Luke/GPC QuEChERs con PSA QuEChERs sin PSA Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Velocidad de adquisición Definición pico cromatográfico ≥ 10 puntos 0.4 seg/scan 0.2 seg/scan o A o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o o oooooo oo ooo o o o ooooooo 3 seg (15 puntos) B 3 seg (8 puntos) Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Velocidad de adquisición iones en MS Multirresiduos fitohormonas en vegetales por HPLC/MS: auxinas, giberellinas y citoquininas Ac Giberéllico RSD Areas (n=5) = 9.5% Velocidad de adquisición 8 0. an sc g/ se 2 0. an sc g/ se RSD Areas (n=5) = 2.1% Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Velocidad de Adquisición iones en MS Equipos actuales MS: Elevadas velocidades de adquisición de iones (<5 mseg/transición MRM) Eliminación segmentos adquisición Métodos de adquisición de iones inteligentes… Métodos más rápidos Mayor número analitos Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Relación S/R •Selección de señales cromatográficas que garanticen una adecuada relación S/R al Límite de Cuantificación (LC) Prometrina en lechuga por LC/MS Concentración RSD (n=5) S/R 0.002 33.5 3 0.005 16.0 7 0.01 8.5 18 0.05 5.6 >100 0.10 5.0 >500 0.25 3.1 >1000 0.002 ppm 0.005 ppm 0.01 ppm 0.05 ppm 0.10 ppm 0.25 ppm Señal ) Ruido Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Relación S/R LD = 3 S SEÑAL (S) S/R = 3 LOQ = 5 S RUIDO (R) S: desviación standard blanco S/R > 5 S/R =2 ut Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Métodos de detección El método debe garantizar los siguientes aspectos (validación): Sensibilidad suficiente Selectividad adecuada Métodos de confirmación residuos veterinarios (Decisión CE 657/2002) Métodos válidos (reglamentados) Residuos veterinarios Dioxinas/PCBs (HRMS), resolución≥10000 Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Métodos de detección Relación tipos iones MS y puntos de identificación en residuos veterinarios Ejemplos de cálculo puntos identificación con diferentes técnicas Sustancias Grupo A (prohibidas) ≥4 puntos Sustancias Grupo B ≥3 puntos Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Métodos de detección • • Espectrometría de Masas (requisitos de identificación dependen de la forma de adquisición/especificaciones técnicas de los equipos). Detectores universales/selectivos de Cromatografía: a menudo se requiere confirmación con la misma técnica (columna diferente), o con otro detector. Requisitos de identificación por MS para pesticidas (Guía SANCO/2009) Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Identificación MS •Trabajar con Ion Ratios, preferentemente •Tolerancias máximas establecidas (idénticas para pesticidas y residuos veterinarios) •Iones de mayor masa ≈ más selectivos •Iones isotópicos (clusters Cl y Br) Br Br2 Br3 Cl ClBr ClBr2 ClBr3 Cl2 Cl2Br Cl2Br2 Cl2Br3 Cl3 Cl3Br Cl3Br2 Cl3Br3 Tolerancias Ion Ratios Intensidad relativa EI/CG/MS CI/CG/MS, CG/MSn, LC/MS, LC/MSn >50% ±10% ±20% 20-50% ±15% ±25% 10-20% ±20% ±30% <10% ±50% ±50% ¡¡¡ MUY IMPORTANTE CRITERIO ANALISTA !!! Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Identificación/cuantificación cromatográfica Fase móvil tR ≥ 2 t0 (frente cromatográfico ≈ interferencias) Forma de picos adecuada: compuestos muy polares en HPLC (eluyen al inicio) y CG (forman colas por ACN adsorción sobre grupos silanoles, baja volatilidad…) Area cromatográfica (preferentemente) Metamidofos por HPLC/MS Establecer criterios tR: ≤0.5% CG y ≤2.5% HPLC S/R señal cuantificación ≥ 6/10 Preferentemente, intensidad iones >10% del ión más intenso (cuantificación) ACN Metomilo por HPLC/MS S/R iones cualificación (MS) ≥ 3 Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Iones cualificación Micotoxinas en alimento infantil por LC/MS (fortificación 0.1-100 microg/kg) Micotoxina Deoxinilvalenol 1 Deoxinilvalenol 2 Aflatoxina B2 1 Aflatoxina G2 1 Zearalenona 1 Aflatoxina B2 2 Aflatoxina G2 2 Aflatoxina B1 1 Aflatoxina G1 1 Ocratoxina A 1 Aflatoxina B1 2 Aflatoxina G1 2 Ocratoxina A 2 Zearalenona 2 Concentración (µ µg/Kg) RT (min) 79.4 81.2 0.11 0.12 0.10 0.09 0.10 0.10 0.09 0.10 0.21 0.18 5.0 4.8 1.00 1.00 4.82 4.82 4.74 4.74 4.62 4.62 4.41 4.41 5.82 5.82 5.89 5.89 Deoxinilvalenol 1 Deoxinilvalenol 2 Aflatoxina B1 1 Aflatoxina B1 2 Aflatoxina B2 1 Aflatoxina B2 2 Aflatoxina G1 1 Aflatoxina G1 2 Aflatoxina G2 1 Aflatoxina G2 2 Ocratoxina A 1 Ocratoxina A 2 Zearalenona 1 Zearalenona 2 Ion Ratio/ Teórico Ratio OK 1.03 (0.92) 0.78 (0.74) 1.00 (1.12) 1.06 (0.98) 0.49 (0.56) 1.28 (1.46) 0.91 (0.93) Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Iones cualificación Análisis de opiáceos (morfina, codeina, tebaina y derivados) en semilla adormidera para alimentación por HPLC/MS Grasa: 25-50% Morfina Fit<500 Identificación Codeina Fit<700 Codeina m/z 165 MORFINA m/z 214 Ion Ratio= 0.13 (0.10-0.20) Ion Ratio= 0.20 (0.05-0.15) CODEINA TEBAÍNA Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Identificación de analitos Asignación adecuada de analitos •Formados por más de un componente (cipermetrinas, deltametrina, fluvalinato, spinosad…) •Espectros muy similares o idénticos (acrinatrina y λ-cihalotrina, …) Cipermetrinas Acrinatrin Fluvalinato 42.50 43.00 43.50 44.00 44.50 45.00 λ-Cihalotrina Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Calibración de analitos Recta de calibrado: Relación de la respuesta del detector con la concentración Aceptable 1 punto (señal ±50%), 2 puntos (rango lineal detector , FRalto/FRbajo<120%, Calto/Cbajo<4) Preferible ajuste lineal para ≥3 niveles (dilución de extracto) Trabajar con al menos dos criterios de linealidad (r2, RSD residuales, coeficiente linealidad…) Frecuencia: por tanda o control de calibración (<30% a LCL ó <20% por encima LCL) LCL≤LOQ Calibración en matriz: en aquéllos casos donde la matriz afecte a la respuesta de analitos Criterios linealidad: Coef. Corr. >0.99 RSDr <20% Deoxinivalenol 25-1250 ppb Aflatoxina B1 0.1- 5 ppb Aflatoxina B2 0.1-5 ppb Aflatoxina G1 0.1-5 ppb Aflatoxina G2 0.1-5 ppb Ocratoxina A 0.1-5 ppb Zearalenona 2.5-125 ppb Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Detección iones por Alta Resolución/MS Detección masa exacta de iones: desviación mDa/ppm Alta selectividad en confirmación Cromatogramas iones masa exacta “muy limpios” No es necesario realización MS/MS, otros iones confirmación… Simplicidad de preparación métodos Analizadores masas Alta Resolución: MAGNETICOS TOF ORBITRAP TRAMPAS LINEALES Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Detección iones por Alta Resolución/MS Peso monoisotópico: es el masa del ión formado a partir de los elementos monoisotópicos. Son las masas de los iones que obtenemos en MS En la Tabla Periódica, lo que se proporciona es el peso atómico promedio del elemento, tomando en cuenta las proporciones de sus isótopos en la naturaleza. 100% 90% PM promedio = 299.7597 PM Monoisotópico = 299.0825 Abundancia relativa 80% Compuesto C16H14ClN3O: 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% 299.0825 300.0856 301.0801 302.0828 m/z Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Detección iones por Alta Resolución/MS ESI - Flufenoxurón en naranja (0.01 ppm). m/z=487.029 ESI+ Cromatogramas HPLC/ESI (fullscan) extracto naranja Fortificación 0.01 ppm (250 pesticidas) Azinfos metil en naranja (0.01 ppm) m/z=318.013 Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios VALIDACION PROCEDIMIENTOS DE ENSAYO Objetivos Demostrar robustez método: evaluación de la recuperación media y reproducibilidad del método Pequeños ajustes en método en el tiempo no afectan al funcionamiento Demostrar su aplicabilidad a matrices de la misma categoría Determinar los valores de aceptabilidad (por ejemplo, recuperación) en análisis de rutina Recopilar información para determinar la incertidumbre del método Resultado Información suficiente que pruebe, para el alcance fijado (ANALITOS, CONCENTRACIONES, MATRICES), que el método es: ESPECIFICO, SENSIBLE, VERAZ y PRECISO = EXACTITUD Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Validación procedimientos de ensayo ¿Que procedimientos hay que validar? Procedimientos no normalizados Procedimientos normalizados utilizados fuera de su alcance previsto Ampliaciones o modificaciones de métodos normalizados: en función de la modificación realizada, el Laboratorio debe tener competencia suficiente para evaluar que parámetros hay que revalidar. Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Validación procedimientos de ensayo VERIFICACION DE PROCEDIMIENTOS NORMALIZADOS COMPROBACIÓN que los parámetros de funcionamiento establecidos para dicho procedimiento, pueden ser alcanzados por el Laboratorio utilizando sus medios específicos: equipos, personal, ambientales… PRECISION, VERACIDAD, LOQ, LINEALIDAD Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Validación procedimientos de ensayo VALIDACION PROCEDIMIENTOS INTERNOS El grado de validación y parámetros a evaluar dependen de cada método Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Validación procedimientos de ensayo Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Errores de medición Error de medición: diferencia entre el resultado de una medición y el valor de referencia Error aleatorio: componente del error de medición que, en mediciones repetidas, varía de forma impredecible Error sistemático: componente del error de medición que, en mediciones repetidas, permanece constante o varía de forma predecible Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Errores de medición Requisito A Requisito B Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Parámetros en la Validación Grado de concordancia entre el promedio de un número de resultados y el valor de referencia Grado de concordancia entre resultados obtenidos en mediciones repetidas de un mismo objeto o de objetos similares, bajo condiciones específicas Capacidad de un método para cuantificar exactamente un analito en presencia de interferencias Intervalo de concentraciones de analito en el cual puede considerarse el método validado Capacidad de un método analítico de producir resultados que sean directamente o por medio de una transformación matemática definida, proporcionales a la concentración de analito en la muestra Menor concentración de analito en una muestra de ensayo que puede ser confiablemente distinguida del blanco). LD=3 Sblanco Menor concentración de analito en una muestra de ensayo que puede ser determinada con un aceptable nivel de incertidumbre. LOQ=10 Sblanco Capacidad del método de mantenerse sin cambios ante pequeñas variaciones en los parámetros del método. Medida de su confiabilidad durante su uso rutinario Parámetro asociado con el resultado de una medición, que caracteriza la dispersión de los valores que podrían se razonablemente atribuidos al mesurando. Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Veracidad ¿Cómo se evalúa? Análisis varias veces de un Material Referencia Certificado (MRC) Matriz blanca fortificada dentro del rango del méttodo 120 Clorpirifos en aceite Recuperación (%) 110 100 90 80 70 60 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Selectividad Capacidad de un método para cuantificar exactamente un analito en presencia de interferencias Interferencias: especie química que causa errores sistemáticos en la determinación de un analito: Interferencias que den señales y/o respuestas que no se distingan de las del analito Interferencias que afecten a la señal del analito (efecto matriz) EVALUACION Blanco de reactivos Blanco de matriz Adición de cantidades conocidas de analito sobre blanco de matriz Estudio con potenciales interferencias Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Validación de procedimientos de ensayo Procedimiento de Validación. Procedimiento que recoge la estrategia a seguir para realizar las validaciones de matrices y analitos, y se definen los criterios (resultados a alcanzar) Criterios de validación de pesticidas (Guía SANCO 2009) Parámetro Linealidad Que/Como Con rectas calibrado Criterio Residuales ≤20% LOQ Nivel más bajo que cumplen los criterios de exactitud y precisión ≤LMR Especificidad Blancos y muestras de control ≤30% LOQ Exactitud Recuperación media en muestras adicionadas o materiales referencia Precisión (RSDr) Obtenida en cada nivel de concentración ≤20% Precisión (RSDR) Reproducibilidad intralaboratorio (QC) ≤20% 70-120% Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Criterios de Validación Criterios de validación de residuos veterinarios (Decisión 657) Parámetro Que/Como Criterio Con rectas calibrado (al menos 5 niveles) Linealidad Residuales ≤20% Ccα α Límite de decisión 3 veces S/R 20 blancos ISO 11843 (valor crítico variable estado neto) Ccβ β Capacidad de detección 3 veces S/R 20 blancos ISO 11843 (valor mínimo detectable variable estado neto) Especificidad Blancos y muestras de control ≤30% LOQ Recuperación media en muestras adicionadas o materiales referencia Criterio depende concentración -50% a +20%, ≤1 µg/kg -30% a +10%, 1-10 µg/kg -20% a +10%, ≥10 µg/kg Precisión (RSDr) Obtenida en cada nivel de concentración Horwitz CV = 2 (1– 0,5 log C) Precisión (RSDR) Reproducibilidad intralaboratorio (QC) Exactitud Horwitz Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Resultados de Validación N1 Recuperación Criterios (%) Rec 1 (%) Rec 2 (%) Rec 3 (%) Rec media (%) Cumple Repetibilidad Criterios (%) Repetibilidad (RSD%) Cumple a-ENDOSULFAN 0.01 70-120 101 86 93 93 si 20 8 si a-HCH 0.01 70-120 85 90 99 91 si 20 11 si ALDRIN 0.01 70-120 67 78 78 74 si 20 9 si PLAGUICIDA AZOXISTROBIN 0.01 70-120 90 87 90 89 si 20 1 si b-ENDOSULFAN 0.01 70-120 94 99 101 98 si 20 4 si b-HCH 0.01 70-120 90 99 102 97 si 20 6 si BIFENTRIN 0.01 70-120 97 106 104 102 si 20 8 si BROMOPROPILATO 0.01 70-120 84 86 si 20 3 si BUPIRIMATO 0.01 70-120 105 96 95 99 si 20 5 si CAPTAN 0.01 70-120 95 113 106 105 si 20 9 si CIPERMETRINA 0.01 70-120 91 94 103 96 si 20 8 si CLORFENVINFOS 0.01 70-120 90 98 94 94 si 20 4 si CLORPROFAM 0.01 70-120 73 77 75 75 si 20 2 si Recuperación (%) Concentración 89 86 Repetibilidad (CV %) Reproducibilidad (CV %) Incertidumbre relativa (%) mg/Kg Lechuga Limón Uva Lechuga Tomate Lechuga Tomate Limón Uva Lechuga Tomate Limón Uva ≤ 0.01 79 - 109 77 - 106 74 - 110 71 – 106 1 - 11 1 - 11 2 - 13 2 – 11 1 - 19 4 - 16 2 - 16 3 – 18 6 - 37 12 - 34 9 - 39 14 – 38 0.01 – 0.1 75 - 112 73 - 113 72 - 106 73 – 107 1 - 14 0 - 13 1 - 15 0- 8 1 - 17 1 - 21 1 - 19 2 – 18 6 - 34 8 - 33 8 - 37 9 – 34 ≥ 0.1 77 - 104 72 - 99 72 - 96 73 - 98 0- 8 0- 6 1 - 10 1- 6 1 - 15 2 - 19 2 - 20 2 - 17 7 - 35 8 - 31 10 - 34 8 - 37 Tomate Limón Uva Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Informe de validación Documento interno que debe contener la siguiente información (trazabilidad): Objetivo y alcance (matrices, concentraciones) Instrumentación y materiales utilizados Personal involucrado Protocolo de validación Resultados y conclusiones Procedimiento de ensayo Firma de responsables Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Alcance de Acreditación Ensayos para los que se define un alcance de acreditación cerrado (matriz/analito) Ensayos con alcances de acreditación genéricos (requieren un nivel de competencia técnica y de gestión añadidas): Nota Técnica 19: Rige criterios de acreditación para categoría de ensayo genérica de plaguicidas en alimentos •Lista Pública de Ensayos (LPE) •Definición de familias de matrices (generalmente de acuerdo a las establecidos en Anexo 1 SANCO) •Matrices validadas y matrices comprobadas (LOQ) Nota Técnica 18: Rige categorías de ensayo más genéricas •Lista Ensayos Bajo Acreditación (LEBA): engloba todas las familias de productos y productos en concreto, así como familias de parámetros y parámetros en concreto acreditados. Ejemplo: •Categoría de Ensayo: Contaminantes orgánicos en alimentos: -Parámetros: PAHs (…), PCBs (….), melamina, acrilamida -Familias de productos: productos de la pesca (…), alimentos infantiles (…), carnes (…), cereales (…), aceites y grasas (...). Métodos de ensayo y validación Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD ¿Cómo sabemos que hemos realizado un buen trabajo en el Lab? ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS ENSAYOS Benzo(a)pireno en pescado Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayos Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD Aseguramiento de la calidad: plan global de gestión que garantiza la integridad de los resultados “el sistema” Materiales de referencia Intercambio de muestras Ejercicios de intercomparación Muestras dobles Muestras ciegas… Control de calidad: Conjunto de ensayos analíticos que se realizan para asegurar la calidad/validez de los resultados de cada análisis “la herramienta” Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayos Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Aseguramiento de la Calidad No existe un criterio general/hoja de ruta que indique como llevar a cabo el aseguramiento de la calidad INTERNO EXTERNO Periódicos / en cada tanda Más esporádicos Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayos Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Control de Calidad Interno Actividades a realizar: Calibración/verificación (según criterios y frecuencia establecida) Control de blancos (contaminaciones): señal<1/3 LOQ Ensayos de recuperación rutinarios (preferentemente LOQ) y/o MRC. Se puede establecer un plan de rotación en el caso de ensayos con múltiples analitos (pesticidas). Criterios: X ± 2RSD (60-140%) Muestras dobles y ciegas (establecer criterios) Terbutilazina por CG/MS Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayos Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Expresión resultados La expresión de resultados debe hacerse de acuerdo a la reglamentación En determinados casos, es obligatorio corregir el resultado con la recuperación ó expresar ésta: residuos veterinarios, micotoxinas… Utilizar las unidades y número de cifras significativas adecuadas. En muestras realizadas por duplicado, establecer criterio para la expresión del mismo y su aceptación. Expresión de la Incertidumbre expandida (nivel de confianza del 95%) en los casos que lo requiera. La expresión de incertidumbre debe ser coherente con la de los resultados Informes de resultados Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Expresión incertidumbre INCERTIDUMBRE: Parámetro asociado al resultado de una medida, que caracteriza la dispersión de los valores atribuidos al mesurando EXPRESION DE UN RESULTADO ANALITICO Valor Sin evaluar U Evaluación U Concentración INFORME DE ENSAYO Resultado= Valor ± incertidumbre Informes de resultados Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Expresión incertidumbre Con una incertidumbre expandida del 50%, un resultados será violativo cuando X> 2LMR Resultados con incertidumbre del 50% (95%) mg/kg Resultado violativo Resultado no violativo 1.0 mg/kg 0.6 mg/kg LMR=0.4 mg/kg Informes de resultados Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Definición de residuos Fumonisinas: B1 + B2 Aflatoxinas totales: B1+B2+G1+G2 Dioxinas: EQT PCDD/F-OMS Pesticidas: según definición de residuo Informes de resultados Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios Expresión resultados residuos suma Informes de resultados Cumplimiento de requisitos té técnicos de acreditació acreditación en ensayos agroalimentarios
