MINISTERIO DE SALUD INSTITUTO NACIONAL DE SALUD CENTRO DE INFORMACIÓN Y DOCUMENTACIÓN CIENTÍFICA DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 SERIE INFORMES TÉCNICOS Nº2 JUDITH ENIT ROLDAN RODRIGUEZ 2007 DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 ANEXO F Código Concurso (no llenar): FORMATO PARA LA PRESENTACIÓN DE PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN TITULO DE LA INVESTIGACIÓN Distribución geográfica y diversidad de vectores naturales e incriminados en la transmisión de Leishmania y Bartonella en la Provincia de Sánchez Carrión, 2007 -2008 NOMBRES Y APELLIDOS COMPLETOS DE LOS INVESTIGADORES (Mencionar afiliación institucional, dirección, teléfono, fax y correo electrónico de cada uno). 1. Investigador Principal: JUDITH ENIT ROLDAN RODRIGUEZ: Universidad Nacional de Trujillo, Av. Cesar Vallejo Edif. C2-3 Dpto 504, Urb Monserrate, Trujillo, Teléfono: 044287815; O44-9939474 [email protected] 2. ANA MARIA BURGA VEGA: Dirección Regional de Salud La Libertad; 044-425934; Lucio Séneca 468 Urb.La Noria, Trujillo; [email protected]. 3. CARLOS A VERGARA DIAZ: Hospital de La Policía III Región La Libertad ; Av. Micaela Bastidas 583, Dist. El Porvenir, Trujillo; 044-401830; [email protected] 4. MIGUEL CASANOVA VELARDE: Hospital Leoncio Prado de Huamachuco, Província de Sanchez Carrión¸ [email protected] 5. CARLOS PADILLA ROJAS. Laboratorio de Biotecnología y Biología Molecular INS; 014719920 anexo 129. [email protected] - [email protected] INSTITUCIONES QUE PARTICIPARAN EN LA EJECUCIÓN 1. Universidad Nacional de Trujillo. 2. Dirección Regional de Salud . La Libertad 3. Hospital de la Policía III Región La Libertad 4. Instituto Nacional de Salud INVESTIGADOR RESPONSABLE DE LA CORRESPONDENCIA (Nombre, unidad operativa, dirección, teléfono, e-mail). Nombre: JUDITH ENIT ROLDAN RODRIGUEZ Dirección: Av. Cesar Vallejo Edif. C2-3 Dpto 504, Urb Monserrate, Trujillo – La Libertad Teléfono: : 044-287815; O44-9939474 e-mail: [email protected]. / [email protected] 1 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 UNIDAD OPERATIVA EN LA CUAL SE VA A TRABAJAR Hospital Leoncio Prado de Huamachuco Red Sánchez Carrión INDICE 1. Resumen estructurado Pág. 4 2. Marco teórico 5 3. Objetivos de la investigación 7 4. Metodología 8 5. Indicadores para el monitoreo 10 6. Análisis de datos 10 7. Organización y responsabilidades 10 8. Aspectos éticos 11 9. Referencias bibliográficas 13 10. Cronograma de actividades 17 11. Presupuesto 18 2 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 1 RESUMEN ESTRUCTURADO (Máximo 2 páginas): JUSTIFICACION Las enfermedades transmitidas por vectores, actualmente son una grave amenaza para la salud pública, debido a que muchas de ellas son consideradas enfermedades reemergentes, como la bartonelosis; y, otra como la leishmaniosis, continua siendo la segunda causa de enfermedad endémica en nuestro país. Se ha demostrado que es stos problemas de salud coexisten en muchas regiones y afectan a una población importante del Perú, se distribuyen desde los 500 hasta los 3 500 msnm, donde se presentan condiciones ecológicas favorables para el desarrollo del vector con implicancias negativas sobre la economía y desarrollo social de las poblaciones afectadas por estas enfermedades; que en el caso de la bartonelosis, se está extendiendo a otras zonas donde anteriormente no se presentaba; este comportamiento se está dando en los departamentos de la zona norte y nororiental del Perú; además de haberse identificado como principales áreas de riesgo para la transmisión estas enfermedades, a los departamentos de Cajamarca, Amazonas, Piura, La Libertad, Ancash, Lima, Huancavelica y Cusco. El departamento de La Libertad, presenta una meseta andina que asciende hacia el Este en las provincias de Gran Chimú, Otuzco, Julcán y Santiago de Chuco ubicadas en la cuenca hidrográfica del Pacífico; se continúa con las provincias de Sánchez Carrión, Bolivar y Patáz; pertenecientes a la cuenca del Atlántico, formando parte del complejo hidrográfico del Marañón. En la provincia de Sánchez Carrión según informes de la Oficina General de Epidemiología existen reportes mensuales de casos de leishmaniosis cutánea; además de brotes epidémicos de bartonelosis desde el 2003, es así que en estas zonas se dan las condiciones ecológicas, socioeconómicas y culturales propicias para el desarrollo y propagación de bartonelosis y leishmaniosis; especialmente por la debido a la migración de trabajadores mineros enrolados a las diferentes empresas mineras que operan en la zona y que provienen de otras zonas endémicas, constituyéndose en potenciales reservorios de estas enfermedades; y también a población susceptible que invade los ecotopos naturales del vector afectando comunidades completas, principalmente niños, mujeres gestantes y población migrante a éstas áreas donde el vector existe. El conocimiento de la distribución del vector y su incriminación en la transmisión de agentes patógenos de la leishmaniosis y la bartonelosis es necesario para poder establecer áreas de riesgo y contribuir a la prevención y control; por lo que, la presente investigación 3 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 tiene como objetivo conocer la diversidad y distribución geográfica de los vectores incriminados en la infección por Leishmania y Bartonella en la provincia de Sánchez Carrión durante el año 2007-2008. Objetivo: Determinar la distribución geográfica y la diversidad de vectores naturales e incriminados en la transmisión de patógenos de la Leishmaniosis y la Bartonelosis en la Provincia de Sánchez Carrión, La Libertad, durante 2007-2008 Material y Métodos: Área de estudio: Se realizará en las localidades y poblados del ámbito de la provincia de Sánchez Carrión (RED de Salud Sánchez Carrión) hasta los 3 500 msnm Determinación de la distribución geográfica y diversidad: Captura de Vectores: Se realizarán capturas en ambientes intradomiciliarios (dormitorios, cuyeros), peridomiciliarios (corrales de animales domésticos) y extradomiciliarios (cuevas y campo abierto), utilizando trampas de luz tipo CDC (desde las 18:00 hasta las 06:00 h), trampa tipo Shannon (desde las 19:00 hasta las 01:00 h) y captura directa con aspirador manual, linterna de mano y trampas pegantes. La identificación de los flebotominos se realizará utilizando claves dicotómicas y descripciones originales Incriminación de vectorial: a) Infección con leishmania Inoculaciones experimentales: A partir de las glándulas salivales de los flebótomos colectados se realizarán observaciones microscópicas y si existen formas flageladas compatibles con Leishmania se inocularán en animales susceptibles como Mesocricetus auratus Cultivos : El parásito será cultivado en medio BHI y NNN suplementado con sangre de conejo al 10% y 5 florocitocina. A partir de la lesiones del hamster. b) Infección por Bartonella A partir de las glándulas salivales de los especimenes colectados se realizarán exámenes para aislar el ADN de Bartonella que será procesado a través de PCR para determinar la infección por Bartonella. Relevancia: Teniendo en cuenta que la leishmaniosis es la segunda enfermedad endémicas en el país y que la bartonelosis se incrementa en nuevas zonas cada año y que ambas enfermedades son transmitidas por flebótomos los cuales se encuentran ampliamente distribuidos en el país, y que la empresa minera viene expandiéndose en zonas andinas del departamento de La Libertad invadiendo ecótopos naturales de estos vectores poniendo en 4 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 riesgo la salud de los personas que se invaden estas áreas geográficas, precisa conocer la distribución de estos insectos vectores para poder prevenir las enfermedades transmitidas por ellos. Monto total solicitado: 50,000 (cincuenta mil nuevos soles) 2 MARCO TEORICO. (máximo 4 páginas) Dentro de los dípteros, la familia Psychodidae, tiene una distribucion mundial y está representada por seis sub familias, siendo Phlebotominae la que tiene mayor importancia en salud pública pues, algunas especies son vectores de agentes patógenos que ocasionan enfermedades como la enfermedad de Carrión (verruga peruana), leishmaniasis tegumentaria y visceral y arbovirosis, tanto en la población humana y/o animales silvestres domésticos y 1,2,3 , además de ocasionar en el hombre importantes reacciones alérgicas, como consecuencia de las picaduras. La Leishmaniosis tegumentaria humana, enfermedad parasitaria regional, se presenta en el Perú bajo su forma cutánea y cutánea mucosa desde épocas precolombinas, en la vertiente occidental de los Andes y valles interandinos, en focos endémicos, entre niveles altitudinales que van desde los 1 200 a los 3 000 msnm, y en la vertiente oriental andina, desde los 900 msnm, a través de todo el llano amazónico selvático. Su distribución geográfica está determinada por factores ecológicos reguladores de la presencia de los insectos vectores pertenecientes a diferentes especies de Lutzomias (Phlebotomos) Conocidos como "titiras" y la existencia de los todavía no bien conocidos reservorios naturales4,5,6. La Bartonelosis o enfermedad de Carrión es una enfermedad endémica producida por la bacteria Bartonella baciliformis, y se presenta principalmente en valles interandinos ubicados entre 500 y 3200 m.s.n.m de algunas regiones del Perú. Estos valles tienen las condiciones ecológicas propicias para que el vector Lutzomyia verrucarum viva y transmita la enfermedad7,8,9. Además de haberse encontrado a Bartonella baciliformis en el intestino y las partes bucales de Lutzomyia (Phlebotomus)9. Las áreas de riesgo identificadas para la transmisión de la bartonelosis, abarcan los departamentos de Cajamarca, Amazonas, Piura, La Libertad, Ancash, Lima, Huancavelica y Cusco8. En América, aproximadamente 460 especies de flebotomineos han sido reportados, y numerosos géneros y subgéneros de las subtribus Lutzomyiina y Psychodopygina son consideradas como vectores de patógenos de las leishmaniosis tegumentaria y visceral, 5 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 bartonelosis humana y algunas arbovirosis2. En 1912, Townsend inició los estudios de los flebotominos en Perú10,11, seguido por Shannon12, Hertig13, Fairchild14, Herrer15 y otros; sin embargo, Llanos16 fue quien reportó 71 especies. Posteriomente, este número se incrementó a 13119 y en la actualidad se contabiliza 149 especies de flebotominos, de los cuáles algunas especies pertenecientes a los géneros de Helcocyrtomyia y Pifanomyia están relacionadas como transmisores de patógenos de la leishmaniosis tegumentaria17,18 y de la enfermedad de Carrión (verruga peruana) 19,20. En el Perú, hasta el momento se ha descrito 131 especies de Lutzomyia, de las cuales cinco son vectores de leishmaniasis tegumentaria17,18,. Lutzomyia peruensis (Shannon, 1929) es el vector natural de la "uta" en las provincias de Huarochirí, Otuzco y Bolognesi 19,21 . Lutzomyia ayacuchensis (Cáceres & Galati, 1988) es el vector de la leishmaniasis cutánea andina en las provincias de Lucanas y Parinacochas 22 . Lutzomyia verrucarum (Townsend, 1913) es probable vector de leishmaniasis en algunas áreas endémicas de las provincias de Bolognesi y Huarochirí19,23. Lutzomyia tejadai (Galati & Cáceres, 1990) ha sido encontrada infectada naturalmente con Leishmania spp. en las provincias de Ambo y Huánuco. Lutzomyia pescei se correlaciona geográficamente con algunas áreas endémicas de leishmaniasis18. En el valle del Rímac, la leishmaniasis coexiste con la bartonelosis humana y se distribuye desde los 1000 hasta los 3000 msnm. En esta zona se ha identificado tres especies de Lutzomyia, de las cuales Lutzomyia peruensis y L. verrucarum son altamente antropofílicas, mientras que L. noguchi sólo pica a pequeños roedores 23 . En los últimos años, se han presentado 24 numerosos casos de leishmaniasis en el valle . En las diversas provincias del Perú, a los adultos de los flebotominos se les conocen con varios nombres regionales: “titira”, “plumilla”, “angelillos”, “puma”, “rapache”, “jenjen”, “manta blanca”, “capa blanca”, “lalapo”, “wanwa”, “pumamanchachi”, “pumakanikum”, “chuspi”, “quitis” y otros 3,20 La variedad de especies de Lutzomyia es muy grande en las áreas endémicas. En áreas andinas del Perú, la especie predominante es la Lutzomyia peruensis; esta especie se considera como vector en áreas de “uta” junto con Lu. verrucarum y Lu. Ayacuchensis . Estas especies entran a las casas continuamente, usándolas como lugares de alimentación, siendo la sangre humana la más importante para su alimentación al interior de las casas. En los periodos de lluvia (Enero a Marzo) la invasión de los mosquitos en las casas se incrementa. Lu. verrucarum y Lu. peruensis fueron encontradas infectadas con Leishmania. Se sugiere que la conducta del vector (altamente antropofílico y endofílico) permite periodos de contacto 6 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 prolongados entre el hombre y el vector, presentándose así, un alto el riesgo de infección con Leishmania al interior de las casas. Se encontró que Lu. peruensis y Lu. verrucarum demuestran la misma tendencia a través del año, sin embargo Lu. peruensis domina durante los tres meses de estación lluviosa25 ; sin embargo estos patrones están variando, se observa actualmente en la zona de Cusco (provincias altas), que las tasas de migración a la selva de Madre de Dios para realizar trabajos en la extracción de oro esta disminuyendo, probablemente por el cambio en la forma de extracción de este metal, actualmente se utilizan maquinas pesadas como cargadores frontales, donde se necesita menor mano de obra, al ocurrir este cambio en la dinámica de trabajo, la migración esta dirigida a la zona de Quillabamba donde la principal actividad es la recolección de café y cacao. En estas zonas se ven afectados un mayor número de niños y mujeres que también participan de este tipo de actividad extractiva; por lo que en muchas otras zonas de similares condiciones socio geográficas suceden cambios ecológicos e invasión de los habitas naturales del vector lo que induce una mayor dispersión tanto del vector como de los agentes que transmiten. Teniendo en cuenta la gran cantidad de antecedentes de estudio del vector y su asociación en la trasmisión de agentes patógenos en diferentes regiones del Perú y debido a la presencia de flebótomos y enfermedades como la leishmaniosis y la bartonelosis en la en la sierra liberteña y principalmente en la Provincia Sánchez Carrión donde ocurrió los primeros brotes de bartonelosis, y no existiendo estudios sobre la distribución y que especies de vectores se encuentran en estas zonas es que se formulo el presente proyecto que tiene como finalidad determinar la distribución geográfica de los vectores de la leishmaniosis y la bartonelosis y su incriminación vectorial. 3 OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN (Incluir sujetos, tiempo y lugar): Objetivo General: - Determinar la distribución geográfica y la diversidad de vectores naturales e incriminados en la transmisión de patógenos de la Leishmaniosis y la Bartonelosis en la Provincia de Sánchez Carrión, La Libertad, durante 2007-2008 Objetivos Específicos - Determinar las áreas geográficas con presencia del vector en la Provincia Sánchez Carrión, 2007 -2008 - Determinar las especies de flebótomos que se encuentra en la Provincia Sánchez Carrión, durante 2007 -2008 7 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 - Determinar la infección por Leishmania y Bartonella en vectores colectados de la Provincia Sánchez Carrión, 2007 -2008 - Estratificar las áreas con presencia del vector en la Provincia Sánchez Carrión - Determinar la densidad y fluctuación poblacional del vector durante el 2007 -2008 en la Provincia Sánchez Carrión 4 METODOLOGÍA (Máximo 6 páginas) 4.1 TIPO DE ESTUDIO DESCRIPTIVO TRANSVERSAL OBSERVACIONAL 4.2 POBLACION. - El trabajo se realizará en los caseríos y centros poblados de la Provincia Sánchez Carrión que se encuentren entre los 500 a 3500 msnm; para ello se organizará a través de los establecimientos de salud locales y promotores de salud comunales a fin de disponer las áreas de muestreo con una frecuencia de una vez por mes durante el año 2007 -2008 4.3 DISEÑO MUESTRAL. Se inspeccionaran al 30 % de viviendas de cada caserío y/o centro poblado a fin de realizar la búsqueda intra, peri y extradomiciliaria, el tamaño de la muestra ha sido calculada teniendo en cuenta el programa Epinfo vs 6,0; la unidad de muestreo de cada localidad será las viviendas y el tipo de muestreo será el estratificado aleatorio 4.4 CRITERIOS DE INCLUSIÓN Y EXCLUSIÓN Criterios de inclusión: Todas los caseríos y centros poblados que se encuentren entre los 500 a 3 500 msnm Criterios de Exclusión: Todas los caseríos y centros poblados que se encuentren por debajo de los 500msnm y por encima de los 3 500 msnm 4.5 DEFINICIONES OPERACIONALES DE LAS VARIABLES, si su proyecto es de desarrollo tecnológico no corresponde. Variable Definición operacional Distribución de vectores Caserios y centros poblados con presencia de vector de 8 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú Tipo de Categorías Variable Independiente Cuantitativa DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 Leishmania y/oBartonella Incriminación vectorial Flebótomos infectados con Leishmania y/oBartonella Independiente Cuantitativa 4.6 DESCRIPCIÓN DE LA METODOLOGIA PROPUESTA. Ámbito de estudio: Se realizará en las localidades y centros poblados del ámbito de la provincia de Sánchez Carrión hasta los 3 500 msnm.: Sanagorán, Marcabal, Huamachuco, Curgos, Chugay, Sarín, Sartimbamba y Cochorco Determinación de la distribución geográfica y diversidad: CAPTURA DE FLEBOTOMINOS: Se realizarán capturas en ambientes: intradomiciliarios (dormitorios, cuyeros), peridomiciliarios (corrales de animales domésticos) y extradomiciliarios (cuevas y campo abierto). Para ello se utilizarán trampas de luz tipo CDC (desde las 18:00 hasta las 06:00 h), trampa tipo Shannon (desde las 19:00 hasta las 01:00 h), captura directa con aspirador manual, linterna de mano y trampas pegantes. En el peridomicilio, las trampas de luz se colocaran a 15 cm del suelo, colgadas de las vigas de la vivienda; y finalmente, en el extradomicilio, las trampas de luz serán colgadas en los árboles, a 50 cm del suelo. TRANSPORTE, MONTAJE E IDENTIFICACION DE FLEBOTOMOS Todos los flebotominos capturados vivo serán transportados en conteniendo frascos de transporte yeso de París al 10% hasta el laboratorio a fin de ser examinados y determinar la positividad o negatividad a Leishmania; los capturados muertos serán clocados en viales de 2 mL conteniendo alcohol 70%, ambos grupos serán separados por día, ambientes y tipo de colecta. El proceso de montaje entre lámina y laminilla y la idenficación taxonómica se realizo teniendo presente los trabajos de Galati26,27. Incriminación de vectorial: a) Infección con leishmania Inoculaciones experimentales: A partir de las glándulas salivales de los flebótomos colectados vivos se realizarán observaciones microscópicas y si existen formas flageladas compatibles con Leishmania se inocularán en animales susceptibles como Mesocricetus auratus 9 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 Cultivos : A partir de Hámster se aislará el parásito, que será cultivado en medio bifásico BHI y NNN suplementado con sangre de conejo al 10%. Para su posterior identificación y caracterización molecular b) Infección por Bartonella A partir de especimenes colectados se realizarán exámenes mediante PCR para determinar la infección por Bartonella. PCR para detección de Bartonella Se purificara ADN total a partir de una alícuota del triturado del moquito, para ello se añadirá a la muestra soluciones que contengan duodecil sulfato de sodio para lisar las células, posteriormente mediante 400 mg de Proteinasa K y se incubará las muestras a 65°C durante 2 a 4 horas. Luego, se añadirá Chelex al 10% para purificar las impurezas remanentes, esta preparación se incubará a 100 oC por 5 minutos, se centrifugara a 12 000 rpm durante 5 minutos y se separará se sobrenadante. El ADN purificado será almacenado a -20°C hasta su uso. Las reacciones de PCR serán diseñadas a un volumen final de 25 mL. Estas reacciones serán realizadas en tubos polipropileno de 0.2 mL de pared delgada y en un termociclador modelo 9700 (Perkin Elmer Inc). Las mezclas de reacción contendrán solución adecuada para la reacción de amplificación, enzima Amplitaq Gold ADN Polimerasa, oligonucleótidos específicos para el género Bartonella BhCS.781p y BhCS.1137n (Padilla et al 1998, Normam et al, 1995), MgCl2 y desoxinucleótidos trifosfato (dNTPs). Se utilizará agua bidestilada para PCR, libre de ADNsa y ARNsa (Sigma Inc.). Los productos de amplificación serán resueltos mediante electroforesis en geles de 1.5% agarosa, a 75 V por 45 minutos en buffer TAE 1X, posteriormente los geles serán incubados en una solución de 5 ugr/ml de bromuro de etidio por 5 minutos, visualizados en una cámara de luz ultravioleta y fotografiados utilizando una cámara POLAROID. 5. INDICADORES PARA EL MONITOREO. - Número de localidades inspeccionadas - Número de inspecciones por localidad - Número de trampas colocadas - Numero de flebótomos colectados - Número de cultivos obtenidos a partir de los vectores colectados - Número de muestras procesadas por PCR 6 ANÁLISIS DE LOS DATOS (Mencionar las variables dependientes e independientes, las pruebas estadísticas a utilizar, y el software) 10 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 Los datos serán presentados en porcentajes de distribución e infección y serán sometidos a la prueba estadística de X2 para determinar la asociacoión que existe entre las especies de flebótomos y la infección por algún agente patógeno como leishmania y /o Bartonella 7 ORGANIZACIÓN Y RESPONSABILIDADES (Establecer las responsabilidades en la investigación de cada investigador, personal e instituciones participantes) Participante Responsabilidad JUDITH ROLDAN RODRIGUEZ - CAPTURA DE FLEBOTOMINOS: - TRANSPORTE, MONTAJE E IDENTIFICACION DE FLEBOTOMOS - INOCULACIONES EXPERIMENTALES - CULTIVOS ANA MARIA BURGA VEGA - COORDINACION DE ACTIVIDADES DE CAMPO - CAPTURA DE FLEBOTOMINOS: - ANALISIS EPIDEMIOLOGICO CARLOS A - CAPTURA DE FLEBOTOMINOS: VERGARA DIAZ: - TRANSPORTE, MONTAJE E IDENTIFICACION DE FLEBOTOMOS - CULTIVOS MIGUEL CASANOVA - COORDINACION DE ACTIVIDADES DE CAMPO - CAPTURA DE FLEBOTOMINOS VELARDE - ESTRATIFICACION DE CASOS AUTOCTONOS DE LA INFECCION HUMANA POR LEISHMANIA Y BARTONELLA CARLOS PADILLA - ANALISIS MOLECULAR MEDIANTE PCR DE LOS VECTORES Y SU INFECCION ROJAS 8. ASPECTOS ÉTICOS A. PARTICIPACIÓN DE SERES HUMANOS. El estudio NO involucra la participación (o inclusión de muestras) de seres humanos (Si marca esta respuesta, entonces no es necesario una constancia de aprobación del CEI). El estudio involucra la participación de seres humanos: (Si marca esta respuesta, es necesario la revisión y aprobación del CEI). 11 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú X DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 B. PROCESO DEL CONSENTIMIENTO INFORMADO El estudio no requiere consentimiento informado El estudio requiere del consentimiento informado de los participantes X Describir y justificar el tipo de consentimiento informado que se empleará (verbal o escrito). Si usted no utilizará un consentimiento informado durante el estudio, explique el motivo. El consentimiento informado a utilizarse será de tipo verbal que será con la finalidad de pedir permiso para ingresar a su vivienda a fin de colocar la trampa de muestro Si usted utilizará un consentimiento informado durante el estudio, explique: ¿Quién estará a cargo de su obtención?¿las personas encargadas de la obtención del consentimiento informado serán previamente capacitadas, cómo?. La solicitud de permiso estará a cargo de cualquier miembro del grupo investigador previamente capacitado para tal fin Nota: Recuerde adjuntar el documento de consentimiento informado a utilizarse en el estudio (como Anexos del Protocolo). Asegúrese que el consentimiento tenga el número de versión y la fecha. C. RECLUTAMIENTO DE LOS PARTICIPANTES Describa las medidas que serán tomadas para evitar la discriminación de participantes. En el caso de que algún grupo de participantes sea discriminado (gestantes, niños, estratos socio-económicos, etc.). Explique y justifique los motivos de esta discriminación. Se les explicará en una reunión previa con la población a través de sus promotores de salud el objetivo del trabajo y la metodología del muestreo Describa las medidas que serán tomadas para evitar la coacción de los participantes al momento del reclutamiento y/o al momento de dar el consentimiento informado. En caso de que el jefe de la familia o responsable de la vivienda no desee participar no se le obligará se continuará con la siguiente vivienda, haciéndole saber en todo momento la importancia del trabajo. D. CONSECUENCIAS DE LA PARTICIPACIÓN EN EL ESTUDIO BENEFICIOS: Conocimiento de la presencia del vector en sus caserios y posibles estrategias para la prevención y control DAÑOS POTENCIALES: Ninguno de importancia, se podría considerar potencial invasión de privacidad al revisar su vivienda y estilo de vida sin consecuencia alguna por ser confidencial la información. 12 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 NIVEL / CALIDAD DE ATENCIÓN Y TRATAMIENTO: La captura de los vectores será realizado por investigadores que utilizarán técnicas estandarizadas en nuestro país. ALTERNATIVAS: la alternativa es no participar en el estudio para los que no deseen. E. PAGO A LOS PARTICIPANTES Especifique si existirá algún tipo de pago o compensación económica, las cantidades promedio y la forma como será realizado. No se realizará ningún pago a cambio de su participación ¿Los sujetos de investigación deberán pagar alguno de los procedimientos usados en el estudio? Sí / No Si su respuesta fue afirmativa, explique cuáles y por qué? No F. CONFIDENCIALIDAD DE LA INFORMACIÓN OBTENIDA Describa las medidas que serán tomadas para proteger la confidencialidad de la información (¿Cómo serán almacenados y protegidos los documentos y resultados?, ¿Dónde se almacenará esta información?, por cuánto tiempo?, quiénes tendrán acceso a esta información?). Los datos obtenidos serán confidenciales, no se comentarán con los vecinos ni autoridades, solo serán conocidos por los investigadores; los datos de encuestas serán transcritos a sistema informático sin nombre, donde se archivarán definitivamente. G. INFORME DE RESULTADOS DE LAS PRUEBAS A LOS PARTICIPANTES ¿Se informará a los participantes los resultados de sus pruebas (exámenes)? Sí / No. Si la respuesta es afirmativa, especifique la forma cómo se realizará (¿quién lo hará, en cuánto tiempo, se le explicará el resultado?). Si su respuesta es negativa, especifique las razones. Los resultados de los análisis serán informados únicamente a los participantes por parte del investigador principal, luego de procesados y registrados, explicándoles el significado de tales resultados y como influye en su salud. Estos informes se realizaran mensualmente en forma oral. H. INFORME AL PÚBLICO 13 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 ¿Será la información de este estudio accesible públicamente al final del mismo? Sí / No Si su respuesta es afirmativa, por favor detalle la forma cómo será publicada. Si su respuesta es negativa, explique los motivos. Señale si existe alguna restricción. La información de este estudio será accesible al publico luego de finalizar y contar con la autorización de la Dirección de Salud y la Universidad. La difusión pública se efectuará mediante publicación de resultados en revistas científicas, presentación en congresos. I. OTROS ASPECTOS ÉTICOS RELEVANTES Explique brevemente la forma de monitoreo, manejo y informe de los probables efectos adversos que pudieran presentarse durante el estudio. Respeto a su ideología religiosa, teniendo en cuenta que el 30% de los pobladores guardan el sábado, las visitas serán programadas fuera de esas fechas. 9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Forattini OP. Entomologia médica. IV. Psychodidae. Phlebotominae. Leishmanioses. Bartonelose. Ed. Edgard Blücher Ltda. São Paulo; 1973. 2. Young DG, Duncan MA. Guide to the identification and geographic distribution of Lutzomyia sand flies in Mexico, the West Indies, Central and South America ( Diptera: Psychodidae). Mem Amer Entomol Inst 1994; 54: 1-881. 3. Cáceres A, Quate L, Galati E, Baht H. Flebotominos (diptera: psychodidae) de san pedro, distrito Kosñipata, paucartambo - cusco, y nuevos reportes para el Perú. Rev Med Exp 2001; 18 (1-2) 4. Young GD, Arias J. Flebótomos: vectores de leishmaniasis en las Américas. Washington DC: OPS; 1992. Cuaderno Técnico 33: 1-28. 5. Cáceres GA, Galati BAE, Pinto J, Paredes R, Reátegui R, Pérez J, et al. Psychodidae (Diptera) del Perú I: Phlebotominae en Huánuco, Pasco y Cusco, su relación con la enfermedad de Carrión y la leishmaniosis. Rev Per Biol 2000; 7:27-43. 6. Llanos ZB. Flebótomos de la selva peruana (Diptera:Psychodidae). Rev Per Entomol 1973; 6: 29-49. 7. Saettone L. Verruga peruana. Dermatología Peruana 2004; vol 14: No 2 . 8. Maguiña C. Bartonellosis humana en el Perú – estudio de 145 casos de Bartonellosis en el Hospital Nacional Cayetano Heredia. (Tesis doctoral). Lima: Universidad Peruana Cayetano Heredia; 1993. 14 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 9. Kettle DS. Medical and veterinary entomology. Cambrige: Ed. CAB International; 1995 10. Townsend CHT. Preliminary caracterization of the vector of verruga Phlebotomus verrucarum sp. Nov Inst Menst 1913; 1: 107-9. 11. Townsend CHT. The transmission of verruga by Phlebotomus. J Amer Med Ass 1913; 61: 1717-8. 12. Shannon RC. Entomological investigations in connection with Carrion’s disease. Amer J Hyg 1929a; 10: 78-87. 13. Hertig M. Phlebotomus and Carrion’s disease. Amer J Trop Med 1942; 22 (suppl.): 1-81. 14. Fairchild GB, Hertig M. Notes on the Phlebotomus of Panama. XIII. The Vexator Group, with descriptions of new species from Panama and California. Ann Entomol Soc AMER 1957; 50: 325-34. 15. Herrer A. Estudios sobre leishmaniasis tegumentaria en el Perú. VI. Relación entre leishmaniasis tegumentaria y Phlebotomus. Rev Med Exp (Lima) 1949 -1951; 8: 11937. 16. Llanos ZB. Los Flebotomos del Perú y su distribución geográfica (Diptera: Psychodidae, Phlebotominae). Rev Per Entomol 1981; 24: 183-4. 17. Cáceres GA, Galati BEA, Pinto J, Paredes R, Reátegui R,Pérez J, et al. Psychodidae (Diptera) del Perú I: Phebotominae en Huánuco, Pasco y Cusco, su relación con la enfermedad de Carrión y la leishmaniasis tegumentaria. Rev Per Biol 2000; 7: 27-43. 18. Cáceres GA. Especies de Lutzomyia (Diptera: Psychodidae, Phlebotominae) vectores de la “uta” en el Perú. Rev Per Entomol 1995; 38: 23-6. 19. Pérez J, Ogusuku E, Inga R, López M, Paz L, Nieto E, et al. Natural Leishmania infection of Lutzomyia sp. in Peru. Trans R Soc Trop Med Hyg 1994; 88: 161-4. 20. Cáceres GA. Distribución geográfica de Lutzomyia verrucarum (Townsend, 1913) (Diptera: Psychodidae, Phlebotominae), vector de la bartonellosis humana en el Perú. Rev Inst Med Trop São Paulo 1993; 35: 485-90. 21. Herrer A. Lutzomyia peruensis (Shannon, 1929) posible vector natural de la "uta" (leishmaniasis tegumentaria). Rev Inst Med Trop Sao Paulo 1982; 24: 178-82. 22. Cáceres A, Villaseca P, Inga R, López M, Arévalo J, Llanos-Cuentas A. Lutzomyia ayacuchensis (Diptera: Psychodidae, Phlebotominae) probable vector de la leishmaniasis cutánea andina (uta) en Lucanas y Parinacochas (Ayacucho, Perú). V Congreso Panamericano Infectología, Lima 1991; p. 22Perú. Resúmenes de 15 VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 Trabajos Científicos, X Congreso Latinoamericano de Microbiología. Trujillo 1987; 9: 187. 23. Pérez J, Villaseca P, Cáceres A, López M, Zolessi A, Campos M, et al. Leishmania (Viannia) peruviana isolated from the sandfly Lutzomyia peruensis (Diptera: Psychodidae) and a sentinel hamster in the Huayllacallan Valley, Ancash, Peru. Trans Roy Soc Trop Med Hyg 1991; 85: 60. 24. Méndez R, Medina V, Moscoso M. Epidemiología de la leishmaniasis en la Sub-Región de Salud IV, Lima Este. V congreso peruano de enfermedades infecciosas y tropicales 1997; 6(2): 25. VILLASECA, P, PADILLA, C, VENTURA, G et al. Importancia de la Lutzomyia peruensis en la transmisión de la Enfermedad de Carrión en el Valle Sagrado de los Incas, Urubamba-Cusco,Perú. Rev. perú. med. exp. salud publica, 1999, vol.16, no.1-2, p.28-30. 26. Galati BAE. Sistemática dos Phlebotominae (Diptera, Psychodidae) das Américas. (Tese de Doutoramento). Sao Paulo: Faculdade de Saúde Pública, Universidade de Sao Paulo; 1990. p. 275. 27. Galati BAE. Phylogenetic systematics of Phlebotominae (Diptera, Psychodidade) with emphasis on American Groups. Bol Dir Malariol y San Amb 1995; 35 (Supp.1): 13342. 10. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES ACTIVIDAD/MES 1 Coordinación y capacitación al x personal se Salud de la Red Sánchez Carrión que apoyará en la captura de flebótomos Salida para la captura de los flebótomos a las diferentes centros poblados y localidades de la provincia Sánchez Carrión Montaje e identificación de Flebótomos Preparación de medios de cultivo y 16 2 3 4 5 x 6 7 8 9 10 11 x x x x VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú x x x x x x x x x x x x x x x x x x 12 DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA Y DIVERSIDAD DE VECTORES NATURALES E INCRIMINADOS EN LA TRANSMISIÓN DE LEISHMANIA Y BARTONELLA EN LA PROVINCIA DE SÁNCHEZ CARRIÓN, 2007 -2008 cultivos Determinación de cultivos positivos a Leishmania Realización de la PCR Elaboración de informes parciales Elaboración de informe final 17 x x x x VI CONCURSO NACIONAL PARA PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Instituto Nacional de Salud – Proyecto Vigía (MINSA/USAID) Lima, Perú x x x x x x x x x x x RUBRO/MES INSUMOS DE LABORATORIO Y MATERIAL DE CAPTURA MATERIAL DE ESCRITORIO VIATICOS (PARTIDA 20) Coordinación: 2 personas /2 días (incluye terrapuerto) en Red Sánchez Carrión Capacitación: 4 personas/ 4 días en red Sánchez Carrión (capacitadores) Salida Captura flebotomos : 3 investigadores/3 días/10 veces Capacitación: 20 personas a capacitar de los E.S. de la Red Sánchez Carrión MOVILIDAD LOCAL (PARTIDA 20) Investigadores 2 personas: 2personas/15dias/ 20soles durante12 meses Personal apoyo para captura: 10 personas / 2 día / 10 mes PASAJES (PARTIDA 32) Coordinación: 2 personas/1 viaje Capacitación: 4 personas/ 1 viaje Captura de flebotomos: 3investigadores/ 10 viajes ALIMENTACION (PARTIDA 39) Capacitación: Refrigerio y almuerzo 25 personas/ / 1 d SERVICIOS (PARTIDA 39) MATERIAL BIOLOGICO (CONEJOS, HAMSTER Y RATONES) ALIMENTO PARA ANIMALES Fotocopias, revelados e impresiones TOTAL 1 18600 2 4890 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 TOTAL 23490 2000 2000 460 460 1760 1760 990 990 990 990 990 990 990 990 990 990 2200 2200 300 300 300 300 300 300 300 300 300 300 300 0 3300 400 400 400 400 400 400 400 400 400 3600 120 0 80 160 1200 80 160 120 120 120 120 120 120 120 120 120 250 250 300 250 250 21860 550 250 250 9050 9900 1810 4060 2060 1810 1810 1810 1810 1810 300 2110 500 550 50000