P71 Ref.2960 - Repositorio Universidad Técnica de Ambato

UNIVERSIDAD TECNICA DE AMBATO
FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS
EL ESTUDIO DE LOS MÉTODOS DE EXTRACCIÓN CON EL
MICROORGANISMO Trichoderma viride
EN LA GENERACIÓN DE
LACTONA (6 PENTIL α PIRONA)
Proyecto de investigación previo a la obtención del título de Ingeniería en
Alimentos.
AUTOR: Andrea Verónica Delgado Ramos.
TUTOR: César German.
Ambato, 2006
INDICE
Carátula
i
Índice
ii
Introducción
v
CAPITULO I
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1.1. Contextualización
1
1.1.1. Análisis macro
1
1.1.2. Análisis meso
2
1.1.3. Análisis micro
2
1.2. Análisis crítico
3
1.3. Árbol de problemas
4
1.4. Prognosis
4
1.5. Formulación
5
1.6. Preguntas directrices
5
1.7. Delimitación del problema
5
1.8. Justificación
6
1.9. Objetivos
7
ii
CAPITULO II
MARCO TEORICO
2.1. Antecedentes investigativos
8
2.2. Fundamentación filosófica
8
2.3. Diagrama de Flujo
10
2.3.1. Categorías fundamentales
10
2.4. Hipótesis
12
2.5. Señalamiento de variables de la hipótesis
12
2.6. Glosario de Términos
12
CAPITULO III
METODOLOGÍA
3.1. Enfoque
14
3.2. Modalidad básica de la investigación
14
3.3. Tipos de investigación
15
3.4. Población y muestra
15
3.5. Operacionalización de variables
16
3.5.1. Variables Independientes
16
3.5.2. Variable Dependiente
16
3.6. Recolección de Información
17
3.7. Procesamiento de Datos
17
iii
CAPITULO IV
MARCO ADMINISTRATIVO
4.1. Recursos
18
4.1.1. Institucionales
18
4.1.2. Humanos
18
4.1.3. Materiales
18
4.1.4. Económicos
19
4.2. Cronograma
20
4.3. Bibliografía
20
iv
INTRODUCCIÓN
El impacto económico de la biotecnología aplicada a la producción de
aromas para el uso en alimentos, se ha incrementado en forma muy
importante en años recientes. Es sin duda una de las áreas de mayor
desarrollo en el presente y futuro cercano. A partir de los años 70 el uso de
aditivos en la industria se ha intensificado significativamente en nuestro
país. Se ha seguido los lineamientos establecidos por los países
industrializados quienes con el uso de estos productos, han buscado una
homogeneidad en la calidad de las diferentes materias primas.
(www.ub.es/depnutricioibromatologia.htm)
La evolución de los diferentes métodos de producción, en la actualidad
tiende mucho hacia el campo de la biotecnología de aromas, es decir, hacia
la producción de compuestos específicos en lugar de utilizar mezclas
complejas.
En el capitulo uno, se analiza el problema de la investigación, donde se ha
definido básicamente el motivo del estudio para extraer la 6 pentil α
pirona del microorganismo Trichoderma viride.
En el capítulo dos, se presenta la fundamentación filosófica que sustenta el
estudio de esta investigación, en esta parte del perfil se presenta el
procedimiento a aplicar tanto para la inoculación del microorganismo y
las hipótesis ha ser analizadas si son factibles de comprobación, y los
respectivos niveles de cada variable a ser tomadas en cuenta.
En el capítulo tres de metodología, se analiza de que manera y que medios
se va a utilizar para este tipo de investigación, además se plantean el
v
procedimiento que se va ha realizar con los datos obtenidos en la fase
investigativa.
En el capítulo cuatro, se describe el marco administrativo de este proyecto,
es decir,
se detalla todo los medios necesarios para cumplir con la
factibilidad de esta investigación, además en esta parte encontramos la
bibliografía recopilada y la información complementaria que nos llevaran
a cumplir con los objetivos planteados.
vi
CAPITULO I
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1.1.
CONTEXTUALIZACIÓN
Los aromas y fragancias usados en las industrias de alimentos, cosméticos
y de detergentes son productos de gran significado comercial.
La 6 - pentil - α - pirona (6PP), es una lactona que posee un aroma
característico a coco. Es considerada un agente saborizante no tóxico, la
principal aplicación es como aditivo en bebidas, yogures, panadería y
confitería.
El uso comercial se ha limitado debido a los bajos rendimientos de
producción alcanzados hasta el momento. (www.pncta.com.mx)
1.1.1. ANÁLISIS MACRO
Las especias han sido definidas como cualquier producto de origen
vegetal, esencialmente aromático, usado en el arte culinario, en la
producción industrial de alimentos. De manera general, cuando el
producto vegetal aromático, fragante, saporífero, usado en comidas y
bebidas, es de origen tropical, es considerado una especia. (CALVO, M.
(1991)).
El mercado mundial para la importación de especias es considerable, y se
evalúa en algo más de USD 2.300 millones (www.rincondelvago.com).
1
Actualmente, la mayoría de países producen suficiente especias para el
surtido de sus propios mercados y las que importan lo hacen
principalmente de Singapur, Hong Kong, Madagascar, Tanzania o
Indonesia. (www.fao.org)
En los últimos años la producción se ha extendido a países como Italia,
Polonia, Checoslovaquia y algunas zonas en Norte América. Otras
significativas áreas de producción son Yugoslavia, Alemania, Bulgaria y
Hungría. China y Corea son los dos mayores productores de especias en
Asia. (www.wikipedia.com)
1.1.2. ANALISIS MESO
En Latinoamérica el país con mayor producción de especias es Argentina,
la cual aporta el 0,25% del total elaborado. (www.wikipedia.com)
1.1.3. ANALISIS MICRO
El Ecuador siendo un país sub desarrollado se encuentra afectado por los
problemas nutriciones al igual que otros países del tercer mundo.
En nuestro país la investigación sobre bacterias productoras de aditivos es
muy baja y de igual manera la extracción de aromas por este tipo de
tecnología, ya que no existen empresas dedicadas a la obtención de dicho
aditivo. Ecuador ofrece perspectivas favorables, sin embargo de momento
no hay interés por parte de organizaciones comerciales, por lo que es
dudoso que organizaciones internaciones dedicadas a este tipo de
investigación pueda realizar inversiones en nuestro país. La extracción de
aromas a partir de cultivos de bacterias, en el país es una de las
2
actividades que no se toma en cuenta dentro del sector alimenticio como
aditivo en la mayoría de productos consumidos.
En Ecuador la producción de aditivos naturales a nivel industrial, no es
explotada, ya que la mayoría de las empresas que proveen de estos
aditivos a las industrias ecuatorianas la importan, y muy pocas son las
excepciones que buscan un producto natural, como mejorador de las
calidades organolépticas de los productos alimenticios.
1.2.
ANÁLISIS CRÍTICO
Como se observa existe una gran producción de especies las cuales son
utilizadas para dar sabor, olor y color a los productos alimenticios
elaborados.
Existen muchas razones por las que se optó por investigar y desarrollar el
tema propuesto para convertirlo en un instrumento de consulta, en vista
de que los sistemas de dos fases acuosas han sido utilizados para la
recuperación de productos proteicos a partir de suspensiones biológicas.
En el área de fermentación extractiva (o recuperación in situ) existen
también ciertos intentos reportados para la recuperación del mismo tipo
de productos. Sin embargo, no existen reportes que discutan el uso de esta
tecnología en cultivos con hongos y más aun, para la recuperación de
aromas producidos por este tipo de cultivos filamentosos. El uso comercial
se ha limitado debido a los bajos rendimientos de producción alcanzados
hasta el momento.
3
1.3.
ARBOL DE PROBLEMAS
GRAFICO 1: El Árbol de Problemas
ELABORACIÓN: Andrea Delgado
1.4.
PROGNOSIS
En caso de no ejecutar el presente trabajo se estará delimitando el campo
de estudio de generación de aromas a partir de microorganismos.
Este producto es muy requerido para la elaboración de alimentos como
bebidas, panadería y confitería.
Se puede considerar que al tratarse de producto de origen vegetal y no
químico, se ofertaría una demanda considerable, como lo es actualmente,
en productos naturales.
4
1.5.
FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
EL ESTUDIO DE LOS MÉTODOS DE EXTRACCIÓN CON EL
MICROORGANISMO Trichoderma viride
EN LA GENERACIÓN DE
LACTONA (6 PENTIL α PIRONA)
1.6.
PREGUNTAS DIRECTRICES
œ ¿Cuál microorganismo utilizar para la obtención de aroma?
œ ¿Determinar el proceso para obtener el aroma a coco?
œ ¿Establecer el rendimiento de la extracción?
œ ¿Cuáles serían las aplicaciones de este tipo de aromas?
1.7.
DELIMITACIÓN DEL PROBLEMA
CAMPO:
Alimentario
AREA:
Biotecnología
ASPECTO:
Tecnología de Aditivos
TEMA:
El estudio de los métodos de extracción con el
microorganismo Trichoderma viride en la generación
de lactona (6 pentil α pirona)
5
PROBLEMA:
El sistema de fermentación en sistemas de dos fases
acuosas, para la obtención de aroma a coco.
1.8.
JUSTIFICACIÓN
El uso de la técnica no convencional de extracción que explota los sistemas
de dos fases acuosas presenta una alternativa tecnológica para la
recuperación de aromas de fermentación miceliares (hongos) que evita los
problemas de toxicidad presentes en ciertos sistemas de fermentación. En
particular, se quiere demostrar el potencial técnico de recuperar 6-pentilα-pirona producido por Trichoderma viride como una alternativa a los
sistemas de extracción evaluados y reportados hasta el momento. El uso
de esta técnica de extracción potencialmente puede reducir los problemas
de toxicidad presentes en ciertos sistemas de fermentación. La aplicación
de sistemas de dos fases acuosas para la recuperación de aromas (6-pentilα-pirona) fue por primera vez reportada a la comunidad científica.
(www.rincondelvago.com)
La 6-pentil-α-pirona es una molécula cuyo uso como aromatizante en la
industria alimentaria se ha limitado por los bajos rendimientos de
producción. (www.pncta.com.mx)
En el presente trabajo se utilizará extracto de papa y glucosa como fuente
de carbono que, se ha demostrado estimula la biosíntesis de la molécula.
Adicionalmente se consideró que el aceite en el medio de cultivo
permitiría eliminar los efectos de toxicidad de la molécula hacia el
microorganismo, fungiendo como solvente extrayente del aroma.
(www.pncta.com.mx)
6
La
incorporación
de
aditivos
ha
aportado
enormes
ventajas,
particularmente en el terreno económico. El avance en el conocimiento de
los aromas y los sabores de los alimentos ha permitido la creación de
nuevos productos. Las proporciones de sustitutos a incorporar en los
alimentos son una función directa de la calidad y variedad de los aditivos
disponibles, en esto radica la importancia de los aromas, saborizantes y
potenciadores de sabor.
1.9.
OBJETIVOS
1.9.1. OBJETIVO GENERAL
Estudiar los métodos de extracción con el microorganismo Trichoderma
viride en la generación de lactona (6 – pentil - α - pirona).
1.9.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS
œ Usar el microorganismo Trichoderma viride
en la obtención de
aroma a coco.
œ Conocer el proceso de extracción por fases acuosas.
œ Determinar el rendimiento de la extracción del aroma a coco (6 –
pentil - α - pirona).
œ Determinar las aplicaciones de aroma de coco en la industria
alimenticia.
7
CAPITULO II
MARCO TEÓRICO
2.1.
ANTECEDENTES INVESTIGATIVOS
De lo revisado en los estudios realizados en la Facultad de Ciencia e
Ingeniería en Alimentos de la Universidad Técnica de Ambato, no se
encontró ninguna investigación similar a la planteada en este perfil, ni
tampoco se encontró libros que detallen expresamente la técnica a utilizar
para la extracción.
2.2.
FUNDAMENTACION FILOSÓFICA
Como antecedente tenemos una investigación realizada en el Centro de
Biotecnología Campus Monterrey – México en el que durante 18 meses se
desarrolló un proyecto sobre la recuperación de aromas producidos por
hongos, en colaboración con el Instituto de Biotecnología de la
Universidad
financiamiento
Nacional
del
Autónoma
Consejo
de
Nacional
México
de
(UNAM)
Ciencia
y
y
con
Tecnología
(CONACYT). (www.rincondelvago.com)
Además existe una investigación en la Universidad Politécnica del
Chimborazo para estudiar el efecto del medio de cultivo en la producción
de aromas frutales por Trichoderma harzianum a partir de aceite de ricino
como sustrato. (www.espoch.edu.ec)
Las lactonas son ésteres cíclicos internos, hidroxiácidos principalmente
gamma y delta. Una lactona interesante es la pentil α alfa pirona que tiene
8
un fuerte olor a coco es posible obtenerlo mediante un cultivo de
Trichoderma viride en medios de cultivo constituidos por extracto de papa y
glucosa. (www.pncta.com.mx). El rendimiento de este proceso es de
aproximadamente 55 g de lactona por litro de medio de cultivo
(www.tansferencia.mty.itesm.mx).
El uso de la técnica no convencional de extracción que explota los sistemas
de dos fases acuosas presenta una alternativa tecnológica para la
recuperación de aromas de fermentación miceliares (hongos) que evita los
problemas de toxicidad presentes en ciertos sistemas de fermentación.
(www.pncta.com.mx)
El procedimiento necesario para la obtención de las condiciones de
operación del proceso de recuperación de 6-pentil-α-pirona involucra,
como primera etapa, evaluar el comportamiento del sistema de
fermentación en los sistemas de dos fases acuosas. La partición del aroma
(6-pentil-α-pirona) y del microorganismo (Trichoderma viride) en los
sistemas
de
dos
fases
acuosas
se
evalúa
utilizando
sistemas
experimentales a nivel laboratorio.
Con el uso de esta metodología es posible evaluar diversas condiciones de
operación para la recuperación de 6-pentil-α-pirona del caldo de
fermentación de Trichoderma viride.
9
2.3.
DIAGRAMA DE FLUJO
Trichoderma viride
RECEPCION
INOCULACIÓN
FERMENTACIÓN
Polietilenglicol
ADICION
AGITACIÓN
CENTRIFUGACIÓN
ANALISIS
PURIFICACIÓN
ALMACENAMIENTO
GRAFICO 2: Diagrama de Flujo
ELABORACIÓN: Andrea Delgado
2.3.1. CATEGORIAS FUNDAMENTALES
œ Recepción: Se recibe el microorganismo, inocuo y en cepa cien por
ciento pura, se mantiene a temperatura de refrigeración para el
posterior uso, adquirido
desde Argentina del Instituto de
Investigaciones Biotecnológicas. (www.iib.unsam.edu.ar)
œ Inoculación: En una cámara de asepsia previa esterilización, con
las condiciones adecuadas, en un cultivo de extracto de papa y
10
glucosa (constituido en un 85% papa y 15% glucosa) como
sustrato, se inocula a una temperatura de 28 ªC, en concentración
de 275 mg por litro de cultivo, no debe existir presencia de luz.
œ Fermentación: Se armaron fermentadores de 2 Lt, en los que se
trabaja por un tiempo de 15 días controlando pH
(5) y
temperatura de 25 ºC.
œ Adición: Se adiciona el poli-etilen-glicol (PEG) de 1.450 daltons a
diferentes concentraciones (5 %, 10 %), además el fosfato en una
concentración de 2%,
œ Agitación: Con agitación mecánica a 25 ºC por 30 minutos para
lograr la disolución de los componentes.
œ Centrifugación: La separación de las fases fue alcanzada por
centrifugación a 150 y 300 rpm por 20 minutos a 25ºC.
œ Análisis: Se toma muestras de las fases para estimar el contenido
de aroma y biomasa en cada una de ellas, utilizando
cromatografía de gases y la técnica de peso seco, respectivamente.
œ Purificación: Para purificar el aroma se van a utilizar dos tipos de
destilación: hidrodestilación y destilación por arrastre de vapor.
œ Almacenamiento: Ya extraída la aroma de cada una de las fases,
se procede a un almacenamiento a refrigeración y en envases
sellados.
11
2.4.
HIPOTESIS
œ Hipótesis Nula: Concentración del polietilenglicol, la velocidad
de la centrifugación y el método de purificación, durante el
proceso de extracción no afectan en el rendimiento de obtención
del producto.
œ Hipótesis Alternativa: Concentración del polietilenglicol, la
velocidad de la centrifugación y el método de purificación,
durante el proceso de extracción afectan en el rendimiento de
obtención del producto.
2.5.
SEÑALAMIENTO DE VARIABLES DE HIPOTESIS
œ Variables Independientes: Concentración del polietilenglicol, la
velocidad de la centrifugación y el método de purificación en el
proceso de extracción de 6-pentil-α-pirona.
œ Variables dependiente: El rendimiento de 6-pentil-α-pirona.
2.6.
GLOSARIO DE TÉRMINOS
œ Aditivos Aromatizantes: Son las sustancias o mezclas de sustancias con
propiedades aromáticas capaces de conferir o reforzar el aroma sabor
de los alimentos. (www.wikipedia.com)
œ Aromatizantes
Naturales:
Aquellos
obtenidos
exclusivamente
mediante métodos físicos, microbiológicos o enzimáticos, a partir de
12
materias primas aromatizante natural. Se entiende por materia prima
aromatizante natural a los productos de origen animal o vegetal
normalmente utilizados en la alimentación humana que contenga
sustancias odoríferas, ya sea en su estado natural o después de un
tratamiento adecuado. Se engloban aquí: aceites esenciales, extractos,
bálsamos y oleorresinas. (www.wikipedia.com).
œ Trichoderma viride: Se trata de un hongo con reproducción asexual.
Englobados en Deuteromycota. Es un productor de antibióticos que
forma colonias y produce pigmentos amarillos. (www.pncta.com.mx).
œ Lactonas: Son responsables de aromas agradables como: fruta, coco,
caramelo, nueces. Los microorganismos pueden sintetizar lactonas
ópticamente activas en el cual se requiere numerosos procesos
sintéticos. Las lactonas son potentes compuestos usados en la industria
aromática, aunque en la actualidad su producción se lleva a cabo por
síntesis químicas, principalmente, pero también existen distintos
procesos de producción de lactonas usando como materia prima
diversas cepas de microorganismos. (www.espoch.edu.ec)
œ 6-pentil-α-pirona: A partir de cultivo de Trichoderma viride en medio de
dextrosa de patata. La síntesis química requiere siete reacciones
consecutivas. (www.espoch.edu.ec).
œ Extracción de productos naturales: Los fluidos supercríticos son una
alternativa a la aplicación de disolventes orgánicos en procesos de
extracción y separación de los principios activos de los materiales
biológicos, pues permiten temperaturas suaves de extracción y la fácil y
total eliminación del disolvente. (www.pncta.com.mx)
13
CAPÍTULO III
MARCO METODOÓGICO O METODOLOGÍA
3.1.
ENFOQUE
Esta investigación es de carácter predominante cuantitativo ya que
obtendremos datos en la realización de este proyecto el cual nos permitirá
mejorar si se desea profundizar o ampliar el tema de estudio.
Los factores a considerarse en este estudio son la concentración del
polietilenglicol, la velocidad de la centrifugación y el método de
purificación durante el proceso de extracción para determinar el
rendimiento de la extracción de 6-pentil-α-pirona por el método de fases
acuosas.
3.2.
MODALIDAD BÁSICA DE LA INVESTIGACIÓN
Esta investigación es bibliográfica – experimental.
La investigación documental según Cazares L. y otros (1982): “Depende
fundamentalmente
de
la
información
que
recoge,
consultas
en
documentos, entendiéndose este termino en sentido amplio, como todo
aquel material de índole permanente, es decir, al que se pueda acudir
como fuente o referencia en cualquier momento o lugar, sin que se altere
su naturaleza o sentido, para que aporte información o rinda cuenta de
una realidad o acontecimiento”. (www.monografias.com)
14
La investigación experimental obtiene la información de la actividad
intencional realizada por el investigador y que se encuentra dirigida a
modificar la realidad con el propósito de crear el fenómeno mismo que se
indaga, y así poder observarlo.
3.3.
TIPOS DE INVESTIGACIÓN
Este trabajo investigativo es de campo, por cuanto se está tratando de
indagar y determinar el mejor tratamiento para la obtención de 6-pentil-αpirona a partir del microorganismo Trichoderma viride. Además también se
lo puede tomar dentro en base a una asociación de variables, pues al tener
diferentes niveles en los tratamientos a aplicar, necesitamos saber cuales
son las variables que intervienen significativamente.
3.4.
POBLACIÓN Y MUESTRA
El diseño experimental que hemos encontrado conveniente es 23 teniendo
en cuenta los siguientes factores y niveles especificados a continuación:
Tabla 1: Descripción de los Factores de Estudio.
Factor A = Concentración
de polietilenglicol
[%]
Factor B =
Velocidad en
Factor C =Método de
centrifuga.
purificación.
[rpm]
ao = 5
bo = 150
a1 = 10
b1 =300
ELABORACIÓN: Andrea Delgado
15
co = Hidrodestilación
c1 = Destilación con
arrastre de vapor
3.5.
OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES
3.5.1. Variable Independiente
TABLA 2: Variables Independientes
Conceptualización Categorización
Generación
Extracción
Purificación
Indicadores
Ítems
Técnicas
Instrumentales
Relación de
Concentración
de
polietilenglicol
Porcentaje
Velocidad de
Revoluciones
Centrifugación
por minuto
%
nutrientes en
cultivo
Mililitros
Destilación
obtenidos
Utilización de
rpm
cronómetros
de precisión
Utilización de
mL
equipos para
destilación.
ELABORACIÓN: Andrea Delgado
3.5.2. Variable Dependiente
TABLA 3: Variable Dependiente
Conceptualización Categorización Indicadores Ítems
Rendimiento del
Producto
Eficiencia.
Líquido
purificado
Capacidad
de equipos.
ELABORACIÓN: Andrea Delgado
16
Técnicas
Instrumentales
Cromatografía
mL
de gases.
Peso en seco.
3.6.
RECOLECCION DE INFORMACIÓN
Se recopilara los datos por réplica en cada tratamiento, y se los almacenará
en Microsoft Word y Microsoft Excel para su respectivo análisis.
TABLA 4: Recolección de Datos
Tratamiento Tratamiento Rendimiento
1
a0b0c0
?
a
a1b0c0
?
b
a0b1c0
?
ab
a1b1c0
?
c
a0b0c1
?
ac
a1b0c1
?
bc
a0b1c1
?
abc
a1b1c1
?
ELABORACIÓN: Andrea Delgado
3.7.
PROCESAMIENTO DE DATOS
Para el procesamiento y análisis de la información obtenida durante la
extracción se usará los programas estadísticos SPSS y Statgraphics.
17
CAPÍTULO IV
MARCO ADMINISTRATIVO
4.1.
RECURSOS
Para alcanzar los objetivos planteados se requiere de los siguientes
recursos:
4.1.1. Institucionales
Para realizar esta investigación requeriremos el apoyo de los laboratorios
de la Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos de la Universidad
Técnica de Ambato.
4.1.2. Humanos
œ Director de Perfil
œ Ayudante de Laboratorio
œ Trabajo Personal
4.1.3. Materiales
œ Cepas de Microorganismo: Trichoderma viride.. Obtenida desde
Argentina del Instituto de Investigaciones Biotecnológicas.
(www.iib.unsam.edu.ar)
œ Medio de Cultivo: Extracto de papa y glucosa
œ Nutrientes: fosfato de amonio y poli-etilen-glicol (1.450 daltons)
œ Balanza
18
œ Bioreactor
œ pHmetro
œ Centrifuga
œ Termómetros
œ Tubos de ensayo
œ Vasos de precipitación
œ Agitador mecánico
œ Cromatógrafo de gases.
œ Equipo de destilación.
4.1.4. Económicos
TABLA 5: Recursos Económicos
Aportado por
#
Rubros
UTA Investigador
$
$
560
1700
1
Personal
2
Bibliografía
50
3
Materia Prima
150
4
Materiales
150
5 Uso de Laboratorios
6
Imprevistos
7
Publicación
100
20
300
Suman
580
Total
2450
3030
ELABORACIÓN: Andrea Delgado
19
4.2.
CRONOGRAMA
TABLA 6: Cronograma
ACTIVIDAD
PRELIMINARES
Revisión Bibliográfica
Pruebas preliminares
Formulación del plan
Aprobación del plan
OPERATIVAS
Evaluación de los Resultados
Revisión del primer borrador
Redacción del proyecto.
Revisión y Corrección del proyecto.
Publicación del Proyecto
ELABORACIÓN: Andrea Delgado
20
1 2 3 4 5 6
4.3.
1.
BIBLIOGRAFÍA
CALVO,
M.
(1991).
“Aditivos
Alimentarios.
Propiedades,
aplicaciones y efectos sobre la salud”. Mira Editores S.A.
2.
www.ub.es/depnutricioibromatologia
3.
www.pncta.com.mx/pages/pncta_investigaciones_95c.asp
4.
www.rincondelvago.com
5.
www.transferencia.mty.itesm.mx/Transferencia44/eli-01.htm
6.
www.espoch.edu.ec/servicios/tricodema/aromasfruatales.html
7.
www.cquick.conacyt.mx/QuickPlace/direccion_de_comunicacion_
social/Main.nsf/h
8.
www.um.es/bbmbi/GruposInvest/Biotecnologia/biot_con.htm
9.
www.fao.org/documents/show_cdr.asp
10.
www.wikipedia.com
11.
www.monografias.com/trabajos7/inci/inci.shtml
12.
www.iib.unsam.edu.ar/IIBINTECH/html/laboratorios/micologia
/cepas.html
13.
www.fao.org/spanish/newsroom/news
21