Prácticas fisiología sangre y sistema inmunitario.

Prácticas fisiología sangre y sistema
inmunitario.
Práctica 1: extracción de sangre
Material









Jeringuilla
Agujas endovenosas
Tubos de vacío o Vacutainer
Algodón
Cinta elástica
Gasas
Contenedor para residuos biológicos
Alcohol etílico 70%
Guantes
Método
1. Colocar al paciente sentado, poner su brazo encima de la mesa
2. Localizar la vena para la extracción. Si no se localiza a simple vista, se puede palpar
para asegurar donde vamos a pinchar.
3. Colocamos la cinta elástica de manera que apriete el brazo y podamos quitarla bien al
finalizar la extracción
4. Una vez nos aseguremos de haber localizado la vena, desinfectamos la zona con el
alcohol y esperamos que se seque la zona antes de pinchar.
5. Introducimos la aguja con el bisel hacia arriba con un ángulo de 45º de inclinación
aproximadamente.
6.Una vez dentro, sabremos que estamos en la vena cuando veamos un reflujo en la
aguja, extraemos la sangre lentamente teniendo el cuenta el flujo para no colapsar ni
lesionar la vena
7. Cuando hayamos extraído la cantidad de sangre que nos interesa, quitar el compresor
del brazo y, posteriormente, sacar la aguja.
8. Finalmente pedimos al paciente que presione la herida con un algodón y flexione el
brazo para evitar que salgan hematomas. 9. Introducir la sangre en los tubos de análisis,
dependiendo de cuál sea la petición de pruebas que nos haya solicitado el médico.
10. Recoger el material utilizado y depositarlo en el contenedor correspondiente
Práctica 2: Obtención del frotis sanguíneo:
Material










Lanceta
Dos portaobjetos
Un cubreobjetos
Una cubeta el portaobjetos
Microscopio
Guantes
Tinción con colorante Giemsa
Alcohol metílico absoluto (sin acetona)
Tampón de PBS
Agua destilada
Procedimiento:
1 .Limpiar el dedo con una gasa mojada en alcohol etílico 70%
2. Realizar la punción con la lanceta en la yema del dedo (a ser posible en un lateral)
3. Limpiar el dedo, colocar una tirita y tirar en el contenedor correspondiente el material
utilizado.
4. Colocamos la gota obtenida de la punción encima del portaobjetos.
5. En el otro portaobjetos haremos el frotis: colocaremos un portaobjetos a unos 45o y
lo deslizaremos suavemente sobre la gota de sangre.
6. Tenemos que obtener un frotis donde visualicemos la cabeza, el cuerpo y la cola.
7. Dejamos secar el frotis unos minutos.
8. Fijamos el frotis en el alcohol metílico durante 3 minutos.
9. Para teñirlo lo sumergiremos en una solución de Giemsa/tampón PBS (1volumen
colorante/9 volúmenes de PBS) durante 10 minutos.
10. Pasado el tiempo, lavamos el frotis con abundante agua destilada.
11. Colocaremos el cubreobjetos en el cuerpo del frotis, donde mejor lo observaremos,
12. Colocamos el frotis bajo el microscopio y observamos.
Práctica 3: Recuento leucocitario
.
Materiales:








Lanceta.
Micropipetas
Un cubreobjetos.
Tubos Eppendorf.
Cámara cuentaglóbulos o de Neubauer.
Líquido de dilución o líquido de Türck.
Microscopio
Guantes
Método
1. Limpiaremos la zona donde realizaremos la punción con una gasa empapada en
alcohol 70%
2. Realizamos la punción con la lanceta en la yema del dedo (a ser posible en un
lateral).
3. Cogemos 5 µL de sangre con la pipeta y la introducimos en un Eppendorf.
4. Limpiamos el dedo y colocaremos si es necesario una tirita. Recogemos el material
utilizado y lo tiramos en el contenedor correspondiente
5. Se aspira el líquido de solución hasta 10µL y se ponen dentro del Eppendorf usado.
6. Aspiraremos la mezcla del tubo con la micropipeta y lo colocaremos encima de la
cámara de Neubauer.
7. Colocaremos un cubreobjetos encima.
8. Colocamos la camara de Newbawer bajo el microscopio y hacemos el recuento
leucocitario con un aumento de x40
Recuento:
-Debemos localizar un cuadrado con 16 cuadrados pequeños en la esquina superior
izquierda.
-Cuando tengamos el número de leucocitos en un cuadrado aplicaremos la siguiente
fórmula:
(Número de leucos x 4 x 20 x 10)/4
Cuando tenemos el recuento de leucocitos totales por 1ml de sangre valoramos si está
entre los valores normales (5000-10000).
Mi recuento leucocitario da un resultado de: 6700, por tanto está entre los valores
normales.
Práctica 4: Visualización del frotis sanguíneo
Material:



Frotis sanguçineo
Aceite de inmersión
Microscopio de inmersión
Método
Aplicamos gotas de aceite de inmersión al frotis sanguíneo de la pràctica anterior
Colocamos el portaobjetos en el microscopio de inmersión y visualizaremos los
elementos celulares (4000 aumentos)
Práctica 5: Hematocrito
Material








Jeringas y agujas endovenosas.
Tubos de vacío o Vacutainer
algodón
Alcohol etílico 70 %
cinta elástica
Toalla
Contenedor para residuos Biológicos
Guantes





Oxalato sódico
Centrífuga de alta velocidad (8000-12000 rpm)
Plastilina
Tubos capilares de 75 mm de largo y 2mm de diámetro interior y heparina
desecada
Lector de hematocrito
Métodos:
1.Extracción de sangre venosa.
2.Abrir el tubo que contiene la sangre obtenida e introducir una punta del capilar.
3.Inclinar el capilar e ir moviendolo hasta llenarlo.
4.Tapar el extremo del capilar con el dedo
5. Clavamos el capilar en plastilina para tapar el otro extremo.
6.Colocaremos el tubo en la centrifugadora unos 5 min.
6.Calcular el hematocrito con el resultado obtenido en el capilar:
-Medimos con una regla la parte del tubo ocupada por el plasma (y) y lo mismo con la
porción corpuscular (x).
-Se calcula el hematocrito mediante una regla de tres: (y•100)/x
-Los valores normales se encuentran entre 40 y 50 (varía un poco según el sexo.)
Práctica 6: Velocidad de Sedimentación globular
Materiales





Sangre total
Solución anticoagulante: citrato trisódico (109mmol/L)
Pipeta de eritrosedimentación (pipeta de Westergreen)
Soporte que inmovilice la pipeta en posición vertical
Cronómetro
Método
1.Extracción de sangre.
2.Colocación en un soporte vertical
3.Dejamos la sangre una hora para hacer una primera observación de VSG y esperamos
otra hora para hacer una segunda medición.
3.La sedimentación globular consta de tres etapas:
- hemaglutinación: se forman pilas de monedas
-sedimentación de los hematíes en el fondo del tubo
-acúmulo de los hematíes.
5.Se diferenciaran los hematíes del plasma.
Valores normales
Niños <15mm
Hombres <14mm
Mujeres <20mm
Causas más frecuentes de los valores elevados de VSG:
1.Causas fisiológicas: embarazo,envejecimiento, crecimiento normal...
2.Causas patológicas: anemias internas, IAM (infarto agudo de miocardio),
insuficienciarenal, neoplasias, tumores, gammapatías monoclonales, enfermedades
inflamatorias cómo la arteritis de Horton (su prueba de diagnóstico es la VSG).
Práctica 7: Fisiología de la hemostasia
Material:





Plasma pobre en plaquetas a partir de sangre recogida en citrato sódico 0.1
mol/L en proporción 1 volumen de citrato 9 volúmenes de sangre
Suspensión de tromboplastina hística
Aparato de incubación clot 1 A
Imán activador del coágulo
Pocillos especiales para colocar muestra en incubación
Método
1.
2.
3.
4.
Extracción de sangre con anticoagulante citrato
Centrifugación durante diez minutos para evitar la coagulación
Se pipetea la fase con fibrina sin hematíes y plaquetas
Se incuba la muestra hasta 37ºC
5. Se añade tromboplastina y se calcula el tiempo de coagulación
6. Finalmente se interpretan los datos teniendo en cuenta que los calores normales
osculan entre 12 y 14.
Práctica 8: Determinación del grupo sanguíneo:
Materiales:







Jeringa con EDTA (material de extracción venosa)
Tres portaobjetos (A, B, D)
Pipeta
Punta de p1000
Anticuerpo A
Anticuerpo B
Anticuerpo Rh
Método:
1. Se realiza una extracción venosa
2. Ponemos una gota de anticuerpo A en el porta rotulado con la A, Otra gota de
anticuerpo B en el porta B, una gota de anticuerpo Rh+ en el porta D.
3. Con la pipeta ponemos una gota de sangre (con cuidado de no tocar la punta de
la pipeta con el anticuerpo del porta) y removemos con las puntas p1000.
4. Interpretamos los datos según la aglutinación de la sangre de los portas:
-
Aglutina A, aglutina B aglutina D  AB+
Aglutina A, aglutina B, no aglutina D  ABAglutina A, no aglutina B, aglutina D A+
Aglutina A, no aglutina B, no aglutina D  ANo aglutina A, aglutina B, aglutina D  B+
No aglutina A, aglutina B, no aglutina D  BNo aglutina A, no aglutina B, Aglutina D  0+
No aglutina A, no aglutina B, no aglutina D  0-
Mi resultado fue: Grupo sanguíneo 0+