estudio de proteínas - IES Pedro de Tolosa

PRÁCTICA DE LABORATORIO: ESTUDIO DE PROTEÍNAS: REACCIÓN DE BIURET Y XANTOPROTEICA
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ESTUDIO DE PROTEÍNAS
OBJETIVOS
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Conocer una técnica básica de análisis bioquímico para la identificación de proteínas.
Experimentar la desnaturalización de proteínas.
MATERIAL
- Gradilla.
- Rejilla de amianto.
- Cuentagotas.
- CuSO4 al 1%.
- Tubos de ensayo.
- Mecheros o placas eléctricas.
- Agua.
- HNO3 al 20%.
- Pipetas.
- Vasos de precipitados.
- NaOH al 20%.
- NH3 al 25%.
- Pipeteadores.
- *Disolución de albúmina comercial al 2%. - Varilla de vidrio.
* En lugar de albúmina comercial puede utilizarse clara de huevo:
1º. Se bate suavemente la clara de un huevo durante 2 ó 3 minutos.
2º. Se le añade 5 veces su volumen de agua.
3º. Se filtra la mezcla y se recoge el líquido resultante (disolución de albúmina).
1. REACCIÓN DE BIURET
FUNDAMENTO TEÓRICO
La reacción de biuret es un método colorimétrico (ensayo cualitativo) que permite detectar
la presencia de péptidos de más de dos aminoácidos y proteínas. Los dipéptidos y los
aminoácidos, a excepción de histidina, serina y treonina, no dan positiva esta reacción, porque
hace falta un mínimo de dos enlaces peptídicos para que ocurra. Se utiliza para determinar la
presencia de proteínas en líquidos biológicos como el suero sanguíneo y la sangre, aunque no en
la orina, porque la urea interfiere la reacción.
Esta prueba se basa en la reacción que se produce entre los nitrógenos de los grupos animo
que participan en los enlaces peptídicos y los iones cúprico (Cu2+) del CuSO4, lo que da lugar a
la formación de un compuesto, llamado biuret, cuyo color oscila entre azul, violeta y rosa,
dependiendo de la naturaleza de la proteína detectada.
PROCEDIMIENTO
1.
Vierte 1,5 ml de disolución de albúmina en un tubo de ensayo. Utiliza una pipeta graduada.
2.
Añade al tubo de ensayo 0,5 ml de NaOH (crea un medio básico, para que pueda actuar el
Cu) y 4 ó 5 gotas de CuSO4.
3.
Agita el tubo de ensayo hasta obtener una mezcla homogénea.
 ACTIVIDADES
1.
Dibuja el tubo de ensayo e indica, sobre el dibujo, cuál su contenido.
2.
¿Qué color adquiere el líquido al añadir las 4 gotas de CuSO 4?
3.
¿Qué conclusión extraes sobre el tipo de biomolécula que es la albúmina?
4.
¿Cómo podrías comprobar que el cambio de color se debe a la presencia de albúmina y no a
las propiedades de las disoluciones utilizadas? Diseña el experimento.
PRÁCTICA DE LABORATORIO: ESTUDIO DE PROTEÍNAS: REACCIÓN DE BIURET Y XANTOPROTEICA
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2. REACCIÓN XANTOPROTEICA
FUNDAMENTO TEÓRICO
Se llama conformación a la forma tridimensional que adopta una proteína en el espacio en
su estado nativo. El estado nativo está definido por las condiciones celulares, fundamentalmente
el pH y la Tª. Una proteína sometida a valores de pH o Tª fuera de unos intervalos de
estabilidad limitados, experimentará la pérdida de su conformación, sin que lleguen a
alterarse los enlaces peptídicos, y, derivado de ello, perderá su actividad biológica. Este
desplegamiento de la cadena, sin alteración de la secuencia de aminoácidos, se denomina
desnaturalización.
La desnaturalización provoca, generalmente, una disminución de la solubilidad de las
proteínas, que pueden precipitar, ésto es, las proteínas se coagulan (solidifican) o aparecen
grumos en la disolución. Ello se debe a la pérdida de su estructura globular, que pasa a
filamentosa, de manera que quedan expuestos al agua tanto los residuos polares (hidrófilos) como
los apolares (hidrófobos), responsables de la pérdida de solubilidad.
Los factores que provocan la desnaturalización pueden ser físicos (variaciones de Tª o
presión) o químicos (cambios de pH, presencia de iones, urea, etc.).
Si los cambios ambientales son poco intensos o de corta duración, la desnaturalización es
temporal y reversible y, una vez que se recuperan las condiciones iniciales, la proteína vuelve a
plegarse hasta alcanzar la conformación nativa. Pero si los cambios ambientales son intensos o
de larga duración, la desnaturalización es permanente e irreversible, de forma que la proteína
no recupera su conformación nativa ni sus propiedades biológicas.
En la reacción xantoproteica, el HNO3 reacciona con el radical fenilo de los aminoácidos
que lo contienen, radical que se transforma en hidroxi-benceno, que da el color amarillo
característico de esta reacción, de ahí su nombre, reacción xantoproteica.
PROCEDIMIENTO Y ACTIVIDADES
1.
Vierte 1 ml de disolución de albúmina en un tubo de ensayo. Utiliza una pipeta graduada.
2.
Añade al tubo de ensayo 1 ml de HNO3, que crea un medio ácido.
 ACTIVIDAD 1. Dibuja el tubo de ensayo e indica cuál es su contenido.
2. ¿Qué color adquiere la disolución al verter el HNO 3?
3. Compara los cambios que se producen en la consistencia de la disolución
desde que viertes el HNO3 hasta pasados 2 minutos y anótalos. ¿A qué es
debido? Explica lo que le ha ocurrido a la albúmina.
3.
Calienta suavemente el tubo de ensayo al baño María durante 3 minutos, sin que hierva la
disolución, agitándolo con una varilla de vidrio.
 ACTIVIDAD 4. ¿Qué color adquiere la disolución al calentarla suavemente?
5. ¿Se produce algún cambio en la consistencia de la disolución al calentarla? Si se produce alguno, indícalo. ¿A qué crees que se debe?
4.
Deja enfriar el tubo de ensayo. Cuando esté frío, deja resbalar por sus paredes 10 gotas
de NH3, que crea un medio básico. Agita el tubo de ensayo hasta que se mezclen ambos
líquidos.
 ACTIVIDAD 6. ¿Qué color adquiere ahora la disolución?