Alnus glutinosa Gaertn

Crioconservación de embriones somáticos de Alnus glutinosa (L.)
Gaertn
M.C. San José1, M.T. Martínez1, S. Valladares2, M.J. Cernadas1, R. Montenegro1, E.
Corredoira1
1
Instituto de Investigaciones Agrobiológicas de Galicia. CSIC. Avda de Vigo s/n,
15705 Santiago de Compostela
2
BIOMIVA, Ctra M-501, vía de servicio de Vilaviciosa de Odón a Boadilla del Monte,
Vilaviciosa de Odón, 28670 Madrid
La embriogénesis somática (ES) es actualmente uno de los principales métodos
biotecnológicos para la propagación en masa de material vegetal y con un gran
potencial en los programas de mejora genética. La combinación de la ES con la
crioconservación de los cultivos embriogénicos puede evitar los efectos perjudiciales
que se producirían durante el mantenimiento de los cultivos, como la contaminación,
variación somaclonal o pérdida de la competencia embriogénica. El uso integrado de la
embriogénesis somática y la crioconservación permitirá el almacenamiento a largo
plazo y la recuperación de los clones obtenidos.
Grupos de embriones somáticos de Alnus glutinosa (2-5 mm) mantenidos en cultivo
mediante embriogénesis secundaria fueron precultivados durante 3 días en medio MS
con los macronutrientes reducidos a la mitad (MS1/2; Murashige y Skoog 1962)
suplementado con 0.3 M de sacarosa y posteriormente tratados con una mezcla de 2M
de glicerol y 0.4 M de sacarosa durante 20 minutos a temperatura ambiente. Los
embriones somáticos fueron entonces deshidratados con la solución de vitrificación
PVS2 (Sakai et al. 1990) durante distintos periodos de tiempo (0-90 min), obteniendo
los mejores resultados cuando el PVS2 fue aplicado durante 60 min a 0ºC. Después del
tratamiento con PVS2 los embriones fueron directamente introducidos en los tanques
con nitrógeno líquido a -196ºC durante al menos 2 horas, descongelados en un baño de
agua a 40ºC durante 2 minutos y transferidos a MS1/2 con 0.1 mgl-1 benciladenina. Los
cultivos se mantuvieron en oscuridad durante una semana y posteriormente fueron
transferidos a una cámara de crecimiento con fotoperiodo de 16h/8h. Los porcentajes
de supervivencia obtenidos mediante esta técnica superan el 90% y no se observaron
modificaciones en las plantas desarrolladas a partir de los embriones somáticos
crioconservados.
Murashige T, Skoog F (1962) Physiol. Plant. 15: 473
Sakai et al. (1990) Plant Cell Rep. 9: 30