11.- Conclusiones y observaciones de la muestra de - (GEP

11.- Muestra Forense M 6
Página 1 de 4
11.- Conclusiones y observaciones de la Muestra M 6 (muestra de cabello)
11.1.- ¿Podría el cabello recogido (M 6) pertenecer al donante de la muestra de referencia
M 4?
Precinto
4592
4595
4601
4602
4605
4606
4610
4614
4615
4617
4618
4619
4620
4621
4626
4630
4635
4636
M4
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
NO
SÍ
NO
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
Precinto
4638
4640
4641
4643
4644
4645
4649
4650
4651
4652
4653
4654
5980
507731
507738
507739
507740
M4
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
SÍ
Inconcluyente
Inconcluyente
SÍ
11.2.- Conclusiones y observaciones muestra M 6
Precinto
Respuesta
4592 La muestra M6 presenta un haplotipo de ADN mitocondrial HVI-HVII idéntico al que presenta la muestra M4,
no pudiéndose excluir a M4 como posible donante de la muestra M6.
4595 Este resultado es compatible con la hipótesis de que la muestra M6 pertenezca al donante de la muestra
M4.
4595 Los haplotipos de ADN mitocondrial obtenidos a partir de las muestras M4 y M5 son idénticos.
4601 Los haplotipos de las regiones HVI y HVII del ADN mitocondrial de las muestras M4 (sangre) y M6 (cabello)
coinciden casi completamente, excepto por la presencia de una heteroplasmia observada en la muestra M6:
215 A/G, siendo A la base presente en la secuencia de referencia (CRS) y G una mutación reportada en
varias bases de datos. La secuencia de la región HVIII de ambas muestras presenta mitotipos idénticos (522d
y 523d), lo que confirma la identidad entre ambas muestras.
Según Grzybowsky (2000), un evento de heteroplasmia es la presencia de dos o más tipos de moléculas
dentro de la población de ADN mitocondrial de un mismo individuo. Este autor reporta niveles
extremadamente altos de microheterogeneidad en la secuencia del ADN mitocondrial no sólo entre
diferentes tejidos de una misma persona (sangre y cabello) sino también dentro del mismo tejido (entre
cabellos del mismo individuo). Estos resultados, conjuntamente con las observaciones de otros autores,
demuestran que la presencia de heteroplasmias en el ADN mitocondrial es mucho más frecuente en
cabellos que en otros tejidos. Con base en este argumento se concluye que la la muestra M6 (cabellos)
podría pertenecer al donante de la muestra de sangre M4.
4602 De acuerdo a los resultados obtenidos y a las reglas de herencia existe la posibilidad de que el cabello M6
pertenezca al donante de la muestra M4 o a cualquier miembro de su linea materna.
4604 No se proceso la muestra M6
4605 Se ha realizado el análisis de STR autosómicos y STR'y para la muestra M6 (resultados en el apartado 7). En
base a los resultados de estos análisis se excluye que M6 pertenezca al donante M4 en base al resultado
obtenido para los 13 marcadores STR autosómicos analizados (todos salvo TPOX para los que M4 y M4 son
iguales y FGA, para el que no se ha obtenido amplificado en M6) y para 9 de los 16 marcadores STR'Y
analizados (DYS389 I, DYS389 II, DYS458, DYS385, DYS439, DYS635, Y GATA H4, DYS437, DYS448)
Ejercicio GEP-ISFG 2007
INTCFM
11.- Muestra Forense M 6
Página 2 de 4
4606 M6 puede pertenecer a M4 si consideramos que las diferencias entre ambos haplotipos (215R,16148Y) se
deben a heteroplasmia. Existen varias razones para considerar esto:
- es un pelo, tejido en el que la heteroplasmia es más frecuente (Tully et al. 2004)
- en ambas posiciones existe doble nucleótido, tanto en la cadena forward como en la reverse
- ambas heteroplasmias están descritas en la literatura (Tully et al. 2004; Santos et al. 2005).
la posición 16148 ha sido descrita como hipermutable (Tully et al. 2004).
Existen dos hipótesis alternativas a la heteroplasmia para explicar el perfil de M6: contaminación de
laboratorio y mezcla anterior al análisis. La primera puede descartarse, pues ninguna de las mutaciones de
M6 están presentes en el personal de laboratorio, además, los controles de extracción y de amplificación no
produjeron resultado positivo. Si M6 fuera una mezcla, uno de sus componentes contendría un perfil
idéntico al de M4, mientras que el otro u otros presentaría todas las mutaciones de M4 además de 215G y
16148T. Los haplotipos de M4 y M6 no están presentes en las bases de datos de mtDNA consultadas: EMPOP
y mtDNA population database (FBI), indicando su baja frecuencia en la población mundial, por lo tanto,
resulta improbable que ambos perfiles se encuentren en una misma mezcla.
M4 y M6 pertenecen al haplogrupo A, característico de asiáticos y americanos nativos.
Puesto
que la muestra M6 era un cabello sin raíz (bulbo) solo ha sido posible analizar el ADN mitocondrial
4614
de esta muestra.
Los haplotipos obtenidos para las muestras M4 y M6 son completamente coincidentes, ya que presentan
idénticas secuencias en los casi 800 nucleótidos secuenciados. Estos resultados son compatibles con que las
muestras M4 y M6 pertenezcan al mismo individuo o a individuos emparentados por vía materna.
Se ha comparado el haplotipo obtenido en el estudio de las regiones hipervariables HVI y HVII con la Base
de Datos Poblacional de ADN mitocondrial del FBI (Departamento de Justicia de los Estados Unidos), sin
encontrase ninguna coincidencia sobre un total de 5.934 haplotipos de diferentes poblaciones.
Estos datos nos permiten inferir que la frecuencia estimada del haplotipo que comparten las muestras M4 y
M6, utilizando el método de Balding y Nichols, es del 0,00033%.
4617 O doador da amostra M4 possui o mesmo haplótipo de mtDNA que o doador da amostra M6, e portanto eles
podem compartilhar a mesma linha matrilinear.
4618 As amostras M4 e M6 foram analisadas por sequenciamento das regiões hipervariáveis HVI e HVII do mtDNA,
demonstrando que ambas apresentam um mesmo haplótipo. Este resultado não exclui que os doadores
compartilhem a mesma linhagem matrilínea, bem como que a amostra M6 tenha sido produzida pelo doador
da amostra M4.
4619 1.-El haplotipo de ADNmt que aparece en la muestra M6 coincide con el que aparece en la muestra M4 por
lo que no se puede descartar que provenga del mismo individuo (o de un familiar suyo por vía materna).
4620 Atendiendo a los resultados genéticos obtenidos (ADN mitocondrial) se llevan a cabo las siguientes
conclusiones:
CONCLUSIONES
1.- El haplotipo de ADNmt obtenido en la muestra M6 coincide con el obtenido en la muestra de referencia
M4,
2.- No es posible descartar que el cabello recogido (M6) pertenezca al donante de la muestra de referencia
M4 o a un familiar suyo por vía materna
3.- Consultada una base de datos de perfiles de ADN mitocondrial con distintas poblaciones (con un total de
4839 haplotipos), se observa que el haplotipo de la muestra M6 tiene una frecuencia de 0,000386.
OBSERVACIONES
1.- Para los cálculos de frecuencia del haplotipo se ha utilizado el método de Balding y Nichols (Forensic
Sci. Inter. 1994) al no encontrarse representado el haplotipo en la base de datos consultada.
2.- Considerando una razón de probabilidad LR= 1/Probabilidad de coincidencia, esto correspondería a un
valor de uno cada 2588 individuos
4621 Basados en el análisis de los resultados de la secuenciación de la región HVI del ADN mitocondrial no puede
excluirse al individuo al que pertenece la muestra "M4" como donante del pelo "M6". La secuencia obtenida
de "M4" y "M6" no se halló en la base de datos forense del FBI sobre un total de 4839 presentes en dicha
base de datos.
4626 El pelo M6 presenta la misma secuencia de ADNmt (HV1 y HV2) que el individuo M4.
4630 Os perfis de mtDNA obtidos a partir de M6 e M4 são equivalentes, pelo que não permitem excluir como
dador de M6, o indivíduo dador de M4.
Nota: tal como mencionado nas "Observaciones y conclusiones de ADN mitocondrial" em "Resultados", foram
obtidos perfis de mtDNA concordantes entre os dois cabelos correspondentes a M6, com a excepção de uma
posição heteroplásmica (215 R) observada em um dos cabelos. Este tipo de observação é comum neste
Ejercicio GEP-ISFG 2007
INTCFM
11.- Muestra Forense M 6
Página 3 de 4
género de material biológico, pelo que não deve ser considerada como factor discriminatório entre os dois
perfis de mtDNA obtidos a partir dos dois cabelos.
4635 En base a los análisis de ADN mitocondrial:
La muestra de cabello M6, no se puede excluir de la relación existente vía materna con el donante de la
muestra de referencia M4.
Entre
las muestras M4 Y M6 se ha establecido la identidad deL haplotipo del ADN mitocondrial.
4640
Este resultado podría indicar que la muestra M4 Y M6 pertenecen al mismo individuo o a otro individuo con
relación de parentesco vía materna.
4641 1. De acuerdo con los resultados obtenidos en las regiones HV1 y HV2 del ADN mitocondrial no se excluye
que el pelo M6 pueda provenir del individuo donante de M 4 (o de cualquier familiar que comparta la vía
materna).
2. El haplotipo obtenido en el pelo M 6 no se ha observado ninguna vez en una muestra general de 4527
individuos de la EMPOP Database (1:4528= 0,022%).
4642 A partir de la muestra M6 no se han obtenido resultados evaluables a través de la amplificación del D-Loop
mitocondrial.
4643 Tras el estudio de ADN mitocondrial, no se excluye que la muestra M-6 (cabellos) puedan pertenecer a M-4.
Cotejada la secuencia de ADN mitocondrial con la base de datos del Instituto de Medicina Legal de la
Universidad de Insbruck (Austria), que en el momento de la consulta disponía de 4.527 secuencias, no se
encontró ninguna que coincidiera con la citada.
4644 Salvo en la posición 199, se ha detectado coincidencia de haplotipos de ADN mitocondrial (HV1 y HV2),
entre la muestra M6 y el donante de M4, por lo que no puede descartarse que el cabello M6 pertenezca al
donante de M4 (admitiendo la existencia de heteroplasmia de secuencia en la posición 199 en este
individuo) o que pertenezca a un individuo relacionado con él por vía materna (admitiendo la existencia de
heteroplasmia o de una mutación en la posición 199).
4645 Las muestras M4 y M6 presentan el mismo haplotipo de ADN mitocondrial, por lo que no podemos excluir
que M6 pertenezca al donante de M4 o, al menos, que los donantes de las muestras M4 y M6 pertenezcan a
la misma línea materna. Según la base de datos de ADN mitocondral del FBI, utilizando la corrección de
Balding & Nichols, se obtiene un LR de 553. Es decir, que la hipótesis de que M4 y M6 pertenezcan a la
misma línea materna es 553 veces más probable a que pertenezcan a línea maternas diferentes.
4649 ADN mitocondrial
El perfil genético de la muestra M6 es compatible con el perfil genético de la muestra M4
4650 En el análisis de las regiones hipervariables, HVI y HVII, del ADN mitocondrial de las muestras M4 y M6, se
observa un haplotipo idéntico para ambas, por lo que podrían pertenecer al mismo individuo o a individuos
con algún tipo de filiación materna.
En la secuencia de HVI del ADN mitocondrial de M6 encontramos una banda inespecífica (visible en los geles
que se adjuntan) que dio problemas en un fragmento de la secuencia con el primer L15997; este fragmento
es perfectamente analizable en la lectura reverse con H16401.
Igualmente, la secuencia de HVII de esta misma muestra da problemas de lectura con el primer H408, que
se resuelven en la lectura con el primer L048.
4652 La análisis del ADN mitocondrial no permite excluir la muestra M6 (cabello) de pertenecer al donante de la
muestra M4 (supuesto agresor).
4653 M4 y M6 comparten la misma secuencia de ADN mitocondrial (HV1 y HV2). El haplotipo hallado tiene una
frecuencia de :0/4839 en la base de datos de FBI y 0/4527 en EMPOP.
4654 El ADN mitocondrial del cabello (muestra M6) y la muestra de referencia M4 coinciden.
Por lo tanto, la muestra de cabello podría pertenecer al donante de la muestra de referencia M4
1.
5980 Se extrajo ADN de las dos muestras de cabello clasificadas como M6.
2. El análisis de las regiones HVR1 y HVR2 del ADN mitocondrial de ambos cabellos mostró idéntico
haplotipo.
3. Las secuencias HVR1 y HVR2 de M6 son iguales a las secuencias de la muestra de referencia M4.
4. El valor LR, basado en el cálculo de frecuencias de Balding y Nichols (Tully et al., Forensic Sci. Int.
124(2001):83-91) es de 2337,5 para la población de referencia utilizada (4673 individuos caucasoides,
asiáticos, amerindios e hispanos recogidos en la base de datos del FBI).
5. La probabilidad de que una persona elegida al azar de una población, en la que no está el sospechoso
M4, muestre el haplotipo de ADN mitocondrial obtenido en la muestra de cabello M6 es 1 entre 2337,5.
6. El análisis de 8 marcadores de ADN autosómico nuclear (Minifiler AB) mostró el mismo perfil genético en
la muestra de cabello M6 que en la muestra de referencia M4.
7. El cálculo del coeficiente LR basado en estos marcadores, ha proporcionado un valor de
212.187.737.744,7340.
8. En consecuencia, la probabilidad de que una persona elegida al azar de una población, en la que no está
el supuesto agresor del que procede la muestra de referencia M4, tenga el perfil genético de la muestra M6
es 1 entre 212.187.737.744,7340.
507731 El haplotipo mitocondrial evidenciado en M6 COINCIDE con el evidenciado en M4, por lo que no se puede
Ejercicio GEP-ISFG 2007
INTCFM
11.- Muestra Forense M 6
Página 4 de 4
descartar que ambas muestras procedan del mismo individuo o de dos individuos relacionados por vía
materna.
El haplogrupo más probable al que pertenece este haplotipo es el HG-A4. Tras la búsqueda de dicho
haplotipo (D-loop completo) en la base de datos EMPOP (n = 5173), no se ha encontrado ningún haplotipo
idéntico, ni con 1 o 2 diferencias. Dada la escasa cantidad de haplotipos del este asiático en EMPOP se ha
realizado otra búsqueda en la base de datos Mitosearch del FBI, tanto buscando D-Loop completo como sólo
HVS1 y HVS2. Tampoco se han encontrado secuencias idénticas, ni con 1 o 2 diferencias en esta base de
datos.
507738 En el estudio de los segmentos hipervariables HVI y HVII del ADN mitocondrial, observamos que las muestras
M6 y M4 presentan el mismo haplotipo de ADN mitocondrial (las mismas variaciones en su secuencia
respecto a CRS), por lo tanto no se puede descartar que la muestra M6 pertenezca al individuo donante de
la muestra de referencia M4 o a otro individuo que pertenezca a la misma línea materna.
507739 CONCLUSIONES:
El haplotipo mitocondrial obtenido de la muestra de cabello reseñada como M6 difiere en una sola posición
con el haplotipo obtenido de la muestra reseñada como M4, proveniente del supuesto agresor. En casos
como éste, donde la muestra cuestionada y la de referencia difieren en un solo nucleótido, se recomienda
obtener y procesar muestras de referencia adicionales para estudiar el fenómeno de heteroplasmia. En este
caso particular sería útil analizar algunos cabellos del supuesto agresor ya que en este tipo de muestras la
heteroplasmia es común y además la muestra cuestionada es también un cabello. Si después de realizar
estudios para detectar heteroplasmia aún se mantiene la diferencia en una sola posición el resultado es
inconcluso.
507740 Não foi possível obter resultados através da análise do DNA mitocondrial, pelo que nada se pode concluir
relativamente à amostra M6 (cabelos).
Ejercicio GEP-ISFG 2007
INTCFM