universitat de valencia

UNIVERSITAT DE VALENCIA
Fa c u l t a d
Es t u d i o
mutantes
de
C iencias
bioquímico
que
de
afectan
B
las
a
la
iológicas
interacciones
síntesis
de
entre
pteridinas
Y XANTOMATINA EN D r OSOPHILA MELANQGASTER
TESIS DOC TORAL
FR AN CI SC O
J.
SILVA MORENO
/
UMI Number: U607634
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Disscrrlation Püblish<¡ng
UMI U607634
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789 East Eisenhower Parkway
P.O. Box 1346
Ann Arbor, MI 48106-1346
José
Luis
Ménsua
Departamento
Fernández»
de G e n é t i c a
Biológicas
de
CERTIFICO:
Que
la U n i v e r s i t a t
Francisco
en Ciencias
mi
las
interacciones
a
el
para
optar
ción
vigente»
Burjassot
ochenta
conste»
expido
a cuatro
y seis.
el
de
bioquímico
mutantes
y
me?!£mc>9 ¿aster" ,
de Doctor
en c u m p l i m i e n t o
d e m il
de
que
de p t e r i d i n a s
siguiente
bajo
Investigación
la U n i v e r s i t a t
de Junio
licenciado
ha realizado
"Estudio
entre
grado
por
de C i e n c i a s
Moreno»
en D ro s og h ll a
al
Biológicas
así
título:
la s í n t e s i s
xantomatina
que
la M e m o r i a
lleva
del
de Valéncia»
José Silva
que
y director
la F a c u l t a d
Biológicas»
dirección
afectan
Y para
de
Catedrático
de
en C i e n c i a s
de
Valéncia.
la
legisla­
certificado
novecientos
en
AGRADECIMIENTOS
Deseo
José Luis
Genética
de
expresar
Ménsua
de
y por
realización
Al
Teresa
por
sus
comentario
durante
y
Dr.
iniciado
tesis
por
K.
su
r ed
des i n t e r e s a d a .
Dr.
de
Universitat
investigación
de
la
durante
la
Bel
y
M*
favorable
al
Yolanda
problemas
que
surgieron
trabajo.
s o b r e el
po r
las
problema
del
interesantes
efecto
de
Genética
por
la s í n t e s i s d e p t e r i d i n a s .
los m i e m b r o s
ocasiones
la
siempre
Jacobson
la m u t a c i ó n
las m u c h a s
los
de e s t e
que m a n t u v i m o s
todos
Departamento
ayuda prestados
actitud
de
discusiones
A
y
en
M~ D o l o r e s R e a l ,
Bruce
sobre
del
al
doctoral.
discusión
la r e a l i z a c i ó n
Al
Director
consejos
Juan Ferré,
Calatayud
agradecimiento
de Cienci a s Bio ló gi c as ,
haberme
de esta
Dr.
más sincero
Fernández,
la F a c u l t a d
Valéncia,
Genética,
mi.
en
las
del
Departamento
que
me
de
han p r e s t a d o
su a y u d a
A mis padres,
a Francesc y
a Enriqueta.
INDICE
Páginas
INDICE
1.
Introducción
1
1.1. Pigmentos oculares...............................
3
1.2.
Biosíntesis de omocromos .......................
7
1.3.
Biosíntesis de pteridinas ........................
9
1.4.
Función de losomocromos y p t e r i d i n a s ..........
1.5.
Mutantes de color de ojos de
15
D.melanogaster.... 17
1.6. Interacciones entre las rutas de síntesis de
1.7.
2.
las pteridinas y la x a n t o m a t i n a ................
24
Importancia clínica de las pteridinas .........
27
Material y Métodos
30
2.1.
Cultivo de Drosophila
.......................
31
2.2.
Organismo biológico .............................
32
2.3.
Síntesis de dobles mutantes ....................
36
2.4.
Experimentos con medio suplementado ...........
42
2.5. Detección y cuantificación de pteridinas,
pigmento marrón y otros metabolitos relacio­
nados .............................................
2.6.
42
Medición de la actividad GTP ciclohidrolasa .... 66
2.7. Ensayo de las actividades enzimáticas biopterina sintasa y dihidrobiopterín oxidasa
3.
....
Resultados
76
78
3.1. Síntesis de cepas dobles mutantes de color
de ojos ...........................................
3.2.
79
Descripción de las manchas cromatográficas .... 93
3.3. Detección de quinoleinas en las cepas dobles
mutantes
......................................... 105
3.4. Cuantificación de pteridinas en dobles mutan
tes de D. melanogaster ..........................110
3.5. Estudio de la interacción producida por el
mutante red ...................................... 140
Discusión
.
(Conclusiones
Bibliografía
I N T R O D U C C
I OIM
DrosgB.hí.L§
perteneciente
vulgarmente
organismo
el
(2§Llanogaster
al
como
mosca
pueden
lóbulo
óptico.
La
u
o t ro »
que
las
aparato
pigmentarias:
primarias
(dos
las s e c u n d a r i a s
retinulares
membrana
basal
omatidio)
se
las
de
pigmentos
células»
no
se
sino
que
esféricas
Las
con
pteridinas
pigmentarios
diferente»
y
encuentran
en dos
y
los
al
y
más
y
-
vez»
aparato
luz
de
que
y»
p or
que
células
no
tres
entran
tipos
y básales.
de
Las
dióptrico;
las c é l u l a s
extienden
hasta
la
básales
(nueve
p or
las
interior
de
la r e t i n a .
en Drosophila
las
pteridinas.
citoplasma
en u n a s
gránulos
Estos
de
las
estructuras
en g r á n u l o s
también
de c é l u l a s
dos
pigmentarios.
están contenidas
tipos
2
la
rodean a
distribuyen»
tres
a su
el
aparato
l i b r e s e n el
se
-
luz
contienen
los o m o c r o m o s
de
de
se
denominadas
y
de
rodeado
hallan depositados
diferentes
un c o n j u n t o
fotorreceptoras
omatidio)
la p a r t e
membrana
y
Existen
rodean
l os o m o c r o m o s
se
la r e t i n a
lado
secundarias
retina;
de este
en eléctricos.
omatidios.
pigmentarias
tipos de p i gm entos:
o
rayos
primarias
en
un
halla
los
p or
la
sitúan
Las células
se
omatidio)
(nueve
por
es conocido
ojos
la p e r c e p c i ó n d e
primarias»
por
y a
po r
luminosos
los
los
insecto
los o m a t i d i o s »
retinulares
en
En
formada
En
de
absorben
perpendicularmente
células
está
dióptrico
que
un
dos estructuras:
dos partes»
los e s t í m u l o s
pigmentarias
vinagre.
retina
células
convierten
El
del
se e n c a r g a
es
los D í p t e r o s y q u e
omatidios.
diferenciarse
dióptrico
de
diferenciarse
unas 8 00 f a c e t a s
pueden
Orden
M e ig e n
de forma
pigmentarias.
Las
células
(gránulos
de
contienen
1967).
•según el
pigmento
que
( Fuge,
de
tal
de
pigmentos
forma
que
únicamente
a p artir de
los
interrumpida.
que
diferente
del
contienen
del a p a r a t o
de
lo s
gránulos
de
pigmentos,
la s í n t e s i s
aunque
tipos
la s í n t e s i s
de
gránulos
de e s t r u c t u r a s
sin ningún
los
a partir
los q u e
de
Estos
Fuge,
ejemplo,
las v e s í c u l a s
la a p a r i e n c i a
la m e m b r a n a
por
se f o r m a n
1966;
también
se p r o d u c e n
formación
gránulos
presentan
es
solamente
secundarias
( Sh ou p,
Así,
i n d e p e n d i e n t e de
esté
por
gránulos
mientras
La
las
gránulos
omocromos
liso,
contienen
que
contienen.
19 67 ).
es
pigmentarios
contenido
formadas
interior.
Pigmentos oculares
Los
pigmentos
Q Ds i ^n g ga st e r
de
que
lo h a c e n
de
estos
contienen
pigmentarios
1.1.
de
primarias
mientras
tipos
endoplásmico
pteridinas
Golgi
dos
formación
gránulos
ireti cu lo
omocromos,
los
La
pigmentarias
pertenecen
los o m o c r o m o s
Becker
omocromos.
omatinas
o al
(19^5)
Los
los o m o c r o m o s
contenían
el
fue
peso
polimerización).
grupo
grupo
primero
molecular)
de
los
ojos
su e s t r u c t u r a
seg ú n su
en
en
de Dros og h il a
química
al
grupo
las p te ri d in as .
el
Linzen
basada
al
según
de
dividió
(baj o
pertenecían
presentes
(1 967)
en utilizar
peso
y
molecular
ominas
propuso
criterios
las o m a t i n a s
una
en dos
( a l to
3
-
término
tipos:
grado
estructurales• Según
aquellos
de
s u b d i v i s i ó n de
compuestos
l-2-pirimidino-3H-fenoxazina,
-
el
y al
de
él,
que
las
ominas
l os
que
producían»
3-hidroxiquinurenina
era un p i g m e n t o
fuertes
se
de
"pigmento
color
separaba
hidroxiquinona
Los
y
su
omocromos
son
de
omatinas.
túbulos
de
s e ha e n c o n t r a d o
la o m i n a
el
al
túbulos
todo
(Wessing
En
los o j o s
el
cuerpo»
que
tienen
1).
La mayor
ta nt o»
hay
los
como
no
acumularse
y Bonse,
grupo
amplia
básico
otro
pigmentos
las
del
mutante
red
tipo
de
el
anillo
como
son
color:
Los
pigmentos
drosopterina
isómeros
fracción
amarillos
de
e"
(la m á s
seis
abundante),
sustancias
la
la a u r o d r o s o p t e r i n a , la
(Schwinck
más
y
Mancini,
abundantes
i s o s e p i a p t e r i n a . Hay,
sin
de
son
embargo,
-A-
de
como
Sin
que
Este
en
compuestos
(figura
y,
por
embargo»
rojos»
en sus moléculas.
menos»
rojo
los p i g m e n t o s
de p t e r i d i n a
al
así
pigmentos.
dos
p or ,
color
incoloros
"drosopteri ñ a s " » son sustancias
compuesto
omocromo,
de p t e r i d i n a
genéricamente
anillos
de
de
grupo
representación
el
presentan
amarillos.
l os o j o s
la
produce
parte de estos compuestos
q u e si
una
y
d e DrgsgghjL.la m ^ i ^ n o g a s t e r ,
hay una
y
1966).
pueden considerarse
algunos
en
al
Malpighi
tubules
los
condiciones
xantomatina
ambos
Malpighian
c ua l
en
sustancia
azufre.
la
pertenecientes
A»
que
presentes
dihidroxantomatina,
los
última
ácida,
3-hidroxiquinurenina
0 § I § D ° 9 §iiter
En
Esta
rojo-ladrillo
en
únicos
hidrólisis
IV".
que contiene un átomo
dos
DrgsgQh¿l_a
tras
rojos
y
llamados
presentan
grupo
está
distintas:
la
i s o d r o s o p t e r i n a , lo s d o s
neodrosopterina
19 73 ).
la
Los
"la
pigmentos
sepiapterina
varias
y
y
la
sustancias
que
PTERINA
PTTER IDI NA
HN
HIN
K N
H,2
ISOXANTOPTERI NA
DI Hl IDROPTERI NA
S
ch
2-o
y
O
II
P=o
O O
ü—11—CH
OH
DIHIDR ONEOPTERINA“PPP
6-PIRUVOILTETRAHIDROPTERI NA
Figura 1.- Estructuras químicas de las pteridinas.
o o
HN
CH-
HN
H
TETRAHid r o b i o p t e r i
BIOPTERINA
na
SEP IAPTERI NA
6 - A C E T I L D I H I D R O H O M O P T E R I NA
N.
CH
HN
HN
D R O S O P T E R I NA
Figura 1 (continuación)
*NH'
presentan
color
y
apenas
se
varios
mutantes
fluorescencia
detectan
de
corresponden
a
Ferré
( 1986).
et
al,.
La
Este
la c e p a
color
parte
de
0£¿anogaster
n o m b r e se u t i l i z a
en
S y un grupo
anillo
SI
acumulan en
Estas
sustancias
y SS
descritas
pteridinas
también
o xo
aunque
se
p or
encontradas
en
denominarse
pterinas.
denominar
a aquellos
de p t e r i d i n a p r e s e n t a
esclarecimiento
omocromos
estuvo
trabajos
en
en
en p o s i c i ó n
genoma
genética
establecer
imterrumpían
a
un
grupo
(figura
U
Butenandt
La
la
en
amino
1).
del
la
del
ésta
ruta
a ¿ . (19^0»
c as i
a
los
y Ephrussi
de d i s c o s
pigmento
de
los
primeros
(1936)»
imaginales
pudiendo
vermilion
secuencia
de
mutaciones
metabolismo»
síntesis»
y
en
del
así
cinnabar
reacciones
que
marrón.
Los
a
que denominaron
lo s
identificados
metabolitos
posteriormente
p or
19^9).
de s í n t e s i s
actualidad
síntesis
correlacionaron
v -" y c n + , f u e r o n
et
Beadle
trasplantes
de
de
ligado
mutaciones
la s í n t e s i s
intermediarios
sustancias
de
las
un paso
ruta
bioquímica.
alteraciones
que
la
comienzos
me!§nggaster»
con
conducía
de
sus
sus experiencias
Dnosog h¿l _a
en
ojos.
qu e»
B i o s í n t e s i s de om o c r o m o s
El
can
las
y
salvaje»
actualmente para
cuyo
l.S.
de
pueden
compuestos
posición
tipo
las m a n c h a s n° 8 » SO»
mayor
D E 2§OEhila
en
amarilla
de
la x a n t o m a t i n a
completamente
-
7
-
( f i g u r a S)
dilucidada
está
(Phillips
y
TRIPTOFANO
J’
N-FORMILQUINURENINA
i2
QUINURENINA
AC.
^
NH,
I 2
CH-COOH
OH
3-HIDROXIQUINURENINA
-- ►
AC. X A N T U R E N I C O
J
COOH
I
ch-nh2
C OO H
CH 2
I
COOH
o=c
NH
de:
XANTOMATINA
DIHIDROXANTOMATINA
Figura 2.- Ruta de biosíntesis del pigmento marrón
Los enzimas que corresponden a cada paso son:(l) triptófano
oxigenasa,
(2) quinurenina formamidasa,
hidroxilasa y (4) fenoxacinona sintasa.
(3) quinurenina
Forrest,
1980;
Ferré
et
al,.*
las r e a c c i o n e s
laterales
También,
dudas
hay
fenoxacinona
muy
fácil
actividad
de
sintasa,
y,
que
Sin
sido
embargo,
a ningún
que
de
aclaradas.
exista
se h a o b s e r v a d o
no
algunas
totalmente
realmente
espontanea
además,
enzimática
han
ya que
la o x i d a c i ó n
xantomatina
no
1985).
la
enzima
i_n yi^tro e s
de 3- h i d r o x i q u i n u r e n i n a
se
ha
podido
gen
concreto.
atribuir
a
esta
1.3. B i o s í n t e s i s de p t e r i d i n a s
Los
trabajos
realizados
permitieron
establecer
enzimáticos
de
puede
una
basada
embargo,
esta
existiendo
todavía
figura
mayor
la b i o s í n t e s i s
observarse
pteridinas
la
ruta
en
ruta
la
parte
de
sido
controversia
década
los
pasos
En
la f i g u r a
biosíntesis
conocimientos
ha
última
de
de pter id in as .
global
los
no
en
las
actuales.
totalmente
sobre
de
3
Sin
clarificada
ciertos
pasos
(ver
4).
La
caso,
ruta
de
de b i o s í n t e s i s
un
tronco
parece
común
inicial,
producen
varias
ramificaciones
finales
a
isoxantopterina,
la
tetrahidrobiopterina
El
precursor
sustancia
por
transformada
primera
y
de
acción
constar,
que
a partir
conducen
las
cualquier
del
como
cual
se
productos
drosopterinas,
la
la b i o p t e r i n a .
las
de
pteridinas
la
enzima GTP
en 7 , B - d i h i d r o n e o p t e r i n a
pteridina
en
sintetizada
-
en
9
-
la
es
el
Esta
ciclohidrolasa
trifosfato
ruta
GTP.
( B u rg
que
y
es
es
la
Brown,
GTP
1
l2
h2ntp
PH/jPTE ^
3
SP
h2pte
I
I
PTE
ADHP
DPS
J*
A
v
h2bp
Hi)BP
i'
BP
IXP
Figura 3.- Ruta de biosíntesis de las pteridinas
Las líneas discontinuas indican aquellos pasos en los que se desconoce
si actúa una o varias enzimas. Abreviaturas usadas : GTP (guanosina
trifosfato), H^NTP (dihidroneopterina trifosfato), PH^PTE (piruvoiltetrahidropterina), H^PTE (dihidropterina), PTE (pterina), IXP
(isoxantopterina), ADHP (acetildihidrohomopterina), DPS (drosopterinas),
SP (sepiapterina), H^BP (dihidrobiopterina), H^BP (tetrahidrobiopterina)
y BP (biopterina). 1=GTP ciclohidrolasa, 2=sepiapterina sintasa A o
piruvoiltetrahidropterina sintasa, 3=sepiapterina sintasa B, 4=biopterina
sintasa, 5=dihidrofolato reductasa, 6=dihidropterín oxidasa y 7=xantín
deshidrogenasa.
En z i m a
A
PI RUVOIL-H/.PTER INA
BP
En z . B
BP
LACTOIL-Hy.PTER INA
S I NT.
SINT,
- H/.-BIOPTERINA
O-
SEP IAPTERI NA
B)
h 2n e o p t e r i n a
6
BP
-(P)3
-PIRUVOIL-H^PTERINA
HfjPTER INA -2
S I NT .
BP
S INTASA
HfjBIOPTERINA
Figura 4.- Ruta de síntesis "de novo" de la tetrahidrobiopterina
A) Switchenko et al.
(1984). B) Smith y Nichol
(1984),
1968;
Fan
et
paso
en
este
compuesto
la r u t a
necesarios
y
X al
no
enzimáticos
El
la s e p i a p t e r i n a
ser
es
la b i o p t e r i n a
(Matsubara
et
al..,
se r
reducido
reductasa
biopterina
medio
y Brown,
vez,
1979;
capaz
presentado
menor
La
esta
K m que
de
Unnasch
de
por
Fan
(Taira,
la e n z i m a
y Brown,
transformar
última
un
producida
se
acción
del
enzima
xantín
1956).
Esta
enzima
puede
otras
sustancias
no
al..,
se f o r ma
denominado
p or
u
Esta
tiempo
(Unnasch
en
la
oxidado
a
oxidasa
(Fan
a
su
en pterina,
de
recambio
y
Brown,
y una
19 8S ).
isoxantopterina
(Forrest
utilizar
pterídinicas
de
e n z i m a es,
deshidrogenasa
también
compuesto
acción
dihidropterina
transforma
la
reductasa
Este
1 96 1 b)
mayor
tras
labilidad.
dihidropterín
la
1975;
a dihidrobiopterina
1 9 79 ) .
1 98 B) .
por
compuesto
o sepiapterina
y Brown,
la d i h i d r o b i o p t e r i n a
pterina
et
que
son
catalizados
su e x t r e m a d a
sintasa
siguiente
transformación
( Fan
A fue
El
t r a n s f o r m a c i ó n de
a tetrahidrobiopterina
dihidrofolato
por
esta
metabolizada
de
1966;
la
compuesto
identificado
19 76 ).
sucesivas
sintasa
acción
puede
en
sintasa A y B
19 79).
La s e p i a p t e r i n a
por
consiste
en s e p i a p t e r i n a . Para
sepiapterina
poder
Fan y Brown»
de síntesis
Brown,
a cción de
1976;
dos pasos
las e n z i m a s
Krivi
al.. ,
como
como
la
et
por
al..,
sustrato
xantina
y
la
hipoxantina.
Los pasos
todavía
no
han
que
sido
dihidroneopterina
conducen
a
la
presentan
más
caracterizados
trifosfato
síntesis
de
-
dudas
y
los e n z i m a s
para
s o n el
los q u e
de
a
dihidropterina
y
las
d r o s o p t e r iñ a s .
Y i m et
12
-
la
los q u e
al..
(1 9 B 1 ) c a r a c t e r i z a r o n
lateral
de
la
Observaciones
inducen
a
síntesis
los
neopterina
posteriores
pensar
dihidropterina
compuesto
una enzima
no
X.
Los
enzimáticos
Wilson
existencia
un
cantidades
de
en
ser
implicados
y
Jacobson
compuesto
la m u t a c i ó n
uno
Wiederrecht
de
que
al.
(19B1)
han
diazepine
(PDA).
propuesto
para
esta
6- a c e t i l d i h i d r o h o m o p t e r i n a .
drosopterinas
parece
la e s t r u c t u r a
química
Esta
ruta
ha
que
tejidos
de
mamíferos,
dihidrofolato
planteó
directamente
de
existir
la
dihidrobiopterina.
el
de
detectaron
la
en
grandes
(Hnr 3 ),
y
que
las d r o s o p t e r i n a s .
identificaron
como
9H-pirimido
¿t-5b
3H,
J a c o b s o n et
otro
sino
biosíntesis
acumula
de
la
caracterizados
( 1 97 7b )
el
al,.
(1982)
nombre
precursor
de
la d i h i d r o p t e r i n a , e n b a s e
sin embargo,
Nichol
la
reductasa
a
la
lo
El
et
puesta
de
las
a
al..
en entredicho
(19B3)
tetrahidrobiopterina
presencia
que podía
en
se
de
las d r o s o p t e r i n a s .
sido,
descubrimiento
en
sido
sustancia
sería
de
t ra s el
sintetizada
han
Posteriormente,
de ojos
necesitaría esta
Henna-recessive3
2 - a m i no-^t-oxo- 6 - a c e t i 1 - 7 ,8 -d ih idro
1»*+
color
directo
que
los d o s p r e c u r s o r e s
et
cadena
trifosfato
necesarios
Tampoco
la
dihidropterina.
de
precursor
neopterina
pasos
drosopterinas.
parecía
la
son desconocidos.
pasos
mutantes
el
es
eliminaba
produciendo
con
que
que
de
un
inhibidor
(m e t o t r e x a t o ).
una
ruta
Por
"de n o v o "
tetrahidrobiopterina,
Estudios
posteriores
-
13
-
d e que,
podía
de
sin
ser
la e n z i m a
dicha
que
en
razón
se
conduciría
pasar
p or
permitieron
la
la
identificación
del
compuesto
6 - p i r u v o i 1t e t r a h i d r o p t e r i n a
(Switchenko
trabajo
estos
realizado
sustancialmente
ruta
de
po r
los c o n o c i m i e n t o s
síntesis
autores»
la
de
las
ruta
tetrahidrobiopterina
sepiapterina»
partir
del
sintasa.
esta
de
sino
La
función
reacción
y no
sepiapterina.
enzima
reacción
al
trabajar
sepiapterina.
transformarse
en
la p r o d u c c i ó n
de
presencia
del
con
estos
hasta
la
era
compuesto
en
intermediario
a partir
producto
de
autores
Sin embargo»
no
la e n z i m a
propusieron
sintasa
de
A
formado
solo
el
por
-
síntesis.
1
¿ + -
cual
a
puede
rendimiento
en
no
en
aumenta
B sino
que
q u e el
camino
disminuye»
¿n y ¿ v o
por
l a ‘b i o p t e r i n a
p i r u v o i 1t e t r a h i d r o p t e r i n a
jm yi_vq d e e s t a
la
a cción de
redenominaron
y
en
oxidaba
exclusivamente
(qu e
sintasa)
el
la
compuesto
l a ct o i 1 t e t r a h i d r o p t e r i n a
sintasa.
la
el
se
tetrahidrobiopterina
a
biopterina
función
producto
tetrahidrobiopterina
)» siendo
la
oxidantes
la
i.n vi.vo s e r í a
transformaba
q u e el
de
por
de d i h i d r o b i o p t e r i n a
B que
estos
directamente
esta enzima
cuestionaron
la
síntesis
l a c t o i 1- t e t r a h i d r o p t e r i n a »
p i r u v o i 1t e t r a h i d r o p t e r i n a
h
sobre
la e n z i m a
El
alteró
pasar
de
t e t r a h i d r o b i o p t e r i na p a s a b a
sepiapterina
(figura
de
198^).
según
la
medio
sintasa
también
a
X
condiciones
El
A sí»
sintetizarse
por
alt
tenían
podía
demostrando
biopterina
lo q u e
necesitaba
A su vez»
enzimática
la e n z i m a
no
la s í n t e s i s
X en sepiapterina»
se
pteridinas.
principal
sepiapterina
que
conducía
compuesto
et
como
investigadores
que
que
X
el
la
como
sintasa
único
Smith
y
Nichol
(1984)
llegaron
a
conclusiones
i
similares»
aunque
mamíferos.
A sí »
trifosfato
y
la
a
los
segundo
a
trabajando
que entre
la
con
que
El
denominaron
primero
te jidos de
dihidroneopterina
tetrahidrobiopterina
( f i g u r a 4).
correspondería
el
idénticas»
encontraron
intermediarios
H ^ - p ter i n a - 2
no
de
había
dos
H<«.-pter ina-1
ellos
parece
que
la p i r u v o i 1 t e t r a h i d r o p t e r i n a » m i e n t r a s
sería
una
tetrahidropterina
l ac to i 1 t e t r a h i d r o p t e r ina e n c o n t r a d a
por
y
que
distinta
de
la
Switchenko
et
al_.
funciones para
los
<1984).
1.4. F u n c i ó n d e los o m o c r o m o s y p t e r i d i n a s
Linzen
(1967)
propuso
omocromos:
pigmentos
donadores
y aceptores
Respecto
impedirían
permitiendo
que
el
a
mutantes
oculares
función
de
mayor
sin
ningún
o pteridinas)
( B urn et
al..»
razón
p a r a el
en
la no
de
visual.
de
una
los o m o c r o m o s
como
de deshecho.
pigmentos»
lateral
exhiben
toxicidad
los e x c e s o s
organismo»
omocromos.
y productos
como
tipo
funcionales»
entre
parece
que
los o m a t i d i o s »
Se ha p o d i d o
observar
pigmento
los o j o s
menor
en
agudeza
visual
1968) .
La función
se basa
luz
agudeza
(omocromos
et
auténticamente
de e l e c t r o n e s
su
paso
una
tres posib le s
Estas
de
de
estas
triptófano»
son
que
productos
sustancias.
sí
m e t a b o 1 izados
sustancias
-
podrían
15
-
de d e s h e c h o
Por
resultarían
y
esta
tóxicos
transformados
considerarse
en
como
productos
de
excrección
a
largo
la
vida
organismo
de
observación
baja
que
toxicidad
dieta
de
confirma
que
la c e p a
vermilion
q u e no
ve d i s m i n u i d a
del
( L i nz e n»
un exceso
salvaje»
puede
de que se a c u m u l e n
esta fu nción de
produce
tipo
pesar
fuertemente
su
triptófano
mientras
metabolizar
el
19 67 ).
los o m o c r o m o s
de
que
lo
Otra
es
en
la c e p a
triptófano
viabilidad
a
la
la
mutante
a omocromos
(vease resu lt a do s»
p a g . 153).
El
estado
llevado
estas
a
varios
sustancias
células.
Bückman
periodos
menor
de
el
pigmentos
observó»
se
aceptor
función
de
de
Una
ser
así
ocurre
cofactores
muy
que
tener
como
de
las
sólo
en
función
número
éstos»
a
exceso
de f u n c i o n e s
pueden
la
y
como
compuesto
considera que ciertas
pteridinas
cantidad
de
e n el
de
las
estar
organismo
las
p u eden ser
pteridinas
pirimidinas.
los c u e r p o s
puede
de
luz
actuar
un
potencialmente
función
que
del
como
con
mayor
frente
excrección
excrección
almacenamiento
igual
(1966)
en gr a n
fisiológicamente»
como
al
protección
Harmsen
productos
casos»
p r e s e n t a n un
Así»
de que
la r e s p i r a c i ó n
sin embargo»
ha
de electrones.
deshecho
acumulan
en
omocromos
la h i p ó t e s i s
la x a n t o m a t i n a p o d í a
de
de
(nitrógeno).
de
(1965)
pteridinas
productos
los
intervenir
de
los
a considerar
puedan
los o m o c r o m o s .
como
que
autores
anoxia
papel
Las
que
de o x i d a c i ó n variab le de
grasos
de
acompañada
En
activas
algunos
mariposas»
por
la d e u n
reversible.
impo r ta nt e de al gu na s p t e r i d i n a s
en c i e r t a s
reacciones
-
la
16
-
enzimáticas.
es
la
Kaufman
(196 3)
descubrió
que
la t e t r a h i d r o b i o p t e r i n a
la
h i d r o x i 1a c i ó n
necesario
para
tirosina.
Posteriormente
enzimáticas
en
pteridínico
(Rembold
La
en
las
amplia
tejidos
hipótesis
que
y organismos
sobre
otras
fotosíntesis,
etc.).
necesita
Drgsoghi.l.a
debe
pigmentos
que
a
una
funciones
el
aceptor
primer
oculares
Aunque
detectado
color
variación
son
los
bastante
acompañado
por
una alteración
pigmentos
oculares.
descritos
de
las d o s
ahora
como
Tomando
cuales
de
de
lugar
a muchas
energía
conocen
los o j o s .
sobre
habitual
de
la
de
la
Esta
que
de
los
que
las d o s
este
70
alteración
normales
en
una de
mas
de
los
se ha
rutas
efecto
de
vaya
la o t r a
ruta
de
en c u e n t a
esta
consideración»
han sido
estructurales
rutas
de
se
mutantes
específico
sustancias
Drgsophila melanggaster
y pteridinas).
es
cofactor
(efectores
de
(omocromos
un efec to
a ver
estas
las c a n t i d a d e s
varios
a
reacciones
u otro
en
síntesis,
vamos
otras
ha dado
posibles
al
cofactor
fenilalanina
éste
diferentes»
mel.anggaster
afectan
el
1972).
M u t a n t e s de c ol or de o j o s de
mutaciones
se
se
d i s t r i b u c i ó n que p r e s e n t a n
celular,
En
la
se han d e t e c t a d o
y Gyure,
proliferación
1.5.
de
era
o
los g e n e s
reguladores
síntesis
de color
para
de
de ojo s
los e n z i m a s
síntesis.
A ) Ru ta_de _ s¿ ntes¿s_de_.lgs_gmgcrgmgs
Los
primeros
genes
estructurales
-
17
-
que
se
descubrieron
fueron
vermilion
y
enzimas
triptófano
oxigenasa
y
quinurenina
al
Estos
loci
a
tipo
la e n z i m a
bastante
quinurenina
afectada
El
la
enzima
cardinal
durante
y
el
pigmento
existe
sobre
ya q u e
aunque
actividad
de
vermilion
de
y
y
(Howells
1967a),
mutantes
la e n z i m a »
planteadas
dos
( 19 7B ).
tipos
la
que sólo
una
un m u t a n t e
de s í n t e s i s
sintasa.
que
presentan
a l .,
cantidades
La
como
18
que
viera
mutantes»
controversia
el
hace
de
que
dudar
si
gen estructural»
el
primero
ésta
se
ha
defectos
-
doble
disminuidas
en
en omocromos
-
rara
3-hidroxiquinurenina
1977).
detectado
cuyos
la
actividad
dos
de e s t a e n z i m a
también
que
por
está catalizado
Hay
acumulan
i.n y ¿ v o
proponer
de
marrón.
la r u t a
deficientes
cinnabar,
se h a n
que bloqueen
bloquearan
producir
puede considerarse
ha
no
Sullivan
les h i z o
a
pigmento
et
y
que e x i s t í a n
que
fenoxacinona
se
mutantes
Esto
podría
la f u n c i ó n
de ellos
estos
las
196£)
D¿ m e l a n o g a s t e r » codificadas
se d e b ía
de
desarrollo
alguno
otros
loci
paso
de
hipótesis
la de M o o r e
en
karmoisin,
marrón
varias
encontraron
formamidasa
último
las
mutantes
la s í n t e s i s
Forrest,
quinurenina formamidasa
diferentes.
mu tación en ambos
y
Kaufman,
D r o s o p h i_l_a (nelanggaster
formamidasa
de
1959;
(Ghosh
De
investigadores
existencia
por
de
atractiva
enzimáticos
codificaban
salvaje.
enzimático.
quinurenina
( Ba gl i on i ,
p a t r ó n de p t e r id in a s
mutantes
este paso
resulta
El
del
Respecto
encontrado
Estos genes
hidroxilasa
respectivamente.
es s i m i la r
cinnabar.
como»
una baja
observado
por
en
ejemplo»
enzimáticos
están
claramente
esta
ruta
caracterizados
de
□tro
síntesis
que
parece
3-hidroxiquinurenina
y
y triptófano
3-hidroxiquinurenina
baja
de
la e n z i m a
el
de
no
quinurenina
que parece
mecanismo
estar
transporte
los t ú b u l o s
de Malpi g hi
(Howells
al..,
et
anteriores
de
específicamente
la
mutante
y
acumula
normales
Forrest,
1980 ).
de
Esta
es d e b i d a
a una
actividad
hidroxilasa
( Gh os h
y Forrest,
relacionada
con un defecto
o acumulación
y en
no
cantidades
(Phillips
de
sino
Este
presenta
falta
1967a),
afectar
o m o c r o m o s es scarlet.
quinurenina
dos enzimas
síntesis.
mutante
de
en o t ra s
los o j o s ,
de
quinurenina
durante
el
en
en
desarrollo
1977).
B ) R u t a _ d e _ s í n t e s i_s_de_l.as_ELt er i.d ¿ ñ a s
La
detección
de
esta r u t a de s í n t e s i s
ha d e b i d o
un único
al
a
de
la
t a nt o,
poseía
tienen
del
primer
enzimático
fue
los
esta
mutante
rosy
más
ruta
que
e
difícil.
muchos
(Forrest
ni
et
a i .,
este
de Yen y G l a s s m a n
-
19
-
se
que p r o d u c e
asi
como
genes
organismo
y,
función provocarían
detección.
1 9 56 ) .
con un d e f e c t o
Este mutante
actividad
La d e m o s t r a c i ó n
para
Esto
estos
e n el
relacionarse
presentaba
(XDH).
de
i mp e d i r í a n su
que pudo
codifican
de síntesis,
afectan a esta
gen estructural
estudios
mucho
f u n c i ó n vital
individuo,
xantín deshidrogenasa
con
en
que
estructurales
efectos pleiotrópicos
una
isoxantopterina,
r o s y e r a el
siendo
probablemente
mutaciones
letalidad
El
gónico
que
estructurales
por
está
los d i f e r e n t e s
defecto
hecho
los g e n e s
la e n z i m a
d e q u e el
enzima
(1965)
de
fue
no
locus
obtenida
y Gelbart
et
al..
(1 97 4 ).
Posteriormente
parecen
controlar
mutaciones
actividad
XDH
contrario,
llevado
Según
la p r i m e r a ,
la e n z i m a
XDH,
cofactor
el
fisiológicamente
contiene
molibdeno
lateral
en
posición
de
este cofactor
parece
oxidasa
Bogaart
l.xd
oxidasa.
Esto
se
una
actividad
cofactor
sólo
en
normal
cofactor.
que
activo
una
al
aldehido
de
Este cofactor
cadena
Los efectos
hecho
la a c c i ó n
a
podría
enzimas,
Este
han
de que
de
varias
oxidasa
encontrado
presentan
la
de m o l i b d en o.
de moli bd e no .
algunas
(1981)
apenas
debería
cofactor
(PO),
por
(AO),
etc.).
Bernini
y
del
oxidasa
mal.,
sería
1980).
deben
para
la
su función.
presenta
se
la
para
propondría
mal. no
al..,
con
procesamiento
1981) .
que
del
sobre
e n el
Finnerty,
necesario
y
ci.n
normales
mutante
mutantes
mutante
hipótesis
( J o h n s o n et
ser
(SO),
mutantes
enzima
y
6
estos
(piridoxal
sulfito
el
y una pterina
pleiotrópicos
enzimas
en
(Warner
El
dos hipótesis
la s e g u n d a
presente
Las
£ 0 %.
relacionados
1981).
g e n mal. a c t u a r í a
mientras
que
no p r e s e n t a n
imprescindible
cantidades
a plantear
(ci.n)
del
estar
sería
y Finnerty,
genes
deshidrogenasa.
de a lr e d e d o r
que
otros
low x a n t h i n d e h y d r o g e n a s e
parecen
presenta
ha
mutante
l.xd
(Warner
Esto,
el
el
actividad
cin y
xantín
(mal.) y c i n n a m o n
de un c o f a c t o r
actividad
el
un
genes
descubierto
la a c t i v i d a d
mientras
(¿.lid) p r e s e n t a
síntesis
han
marron-like
XDH,
Los
se
hecho
explicarse
cofactor
mientras
-20-
actividad
necesidad
El
que
por
p or
sulfito
p a r t e de
d e q u e ma!l
ser
la XDH,
la
posea
la p r e s e n c i a
podría
que para
los
del
funcional
AO
y
PO
no
sería
activo.
Existen
la e n z i m a
varios matantes que
GTP
observaron
alteraban
ciclohidrolasa
que
presentando
s a l v a j e en
mutantes
enzima
una
(1983)
no
presentar
realizaron
un
de color
estructural
para
y
presentó
una
relación
f u e el
probablemente
como
podrían
el
segunda
sepiapterina
sintasa).
produzcan
purple
el
8 V»
sintasa
Bolo
una
y Brown»
A
disminución
de
19 79 ).
existencia
de
alelos
la del
Y i m et
Mackay
la
entre
la
de encontrar
que
varios
el
tanto»
este
la
enzima
rose»
el
gen
mutantes
que
la a c t i v i d a d
gen sería
GTPCH.
raspberry
de
los
único
Por
Otros
o prune
enzimática.
síntesis
es
la
piruvoi 1t e t r a h i d r o p t e r i n a
la
un
locus cuyas
actividad.
tienen actividades
t i po
salvaje
al.
(1977)
de u na r e l a c i ó n
la
todos
y
ruta
para
y O ’D o n n e l l
casi
de su a c t i v i d a d
(o
de
estos
génica
tubules»
se ha d e s c u b i e r t o
(p.r) c u y o s
y 30%
para
reguladores
enzima
Sin embargo»
De ellos»
la d o s i s
Punch.
Malpighian
t i po
con
Encontraron
entre
al
proporcional
intento
(gn)
desarrollo»
respecto
génica.
la e n z i m a .
locus
como
relación
en un
estructural
red
actuar
La
de
el
de
(1978)
y prune
genes estructurales
estudio
la e n z i m a .
y Howells
durante
en pupas.
dosis
de ojos
la a c t i v i d a d
genes
la
amplio
alteraban
enzimática
una
la a c t i v i d a d
(ras)
disminuida
y aumentada
enzimática
mutantes
la e n z i m a
podían considerarse
al
actividad
de
a
Evans
raspberry
actividad
adultos
no
( G TP C H) .
las m u t a c i o n e s
la a c t i v i d a d
afectan
entre
-SI-
( Yim et
número
Este
locus es
del
enzima
entre
al..»
1977) ;
Krivi
demostraron
el
mutaciones
también
de copias
la
d e e r -*-
y
la a c t i v i d a d
locus
es el
No
enzimática,
gen
se c o n o c e n
enzimas
de
mutación
en
que
en
los q u e
estos
Esto
dicho
los
ser
algún
que
el
a
(el)
en
control
de
que producen
la t r a n s f o r m a c i ó n
e n a c e t i 1 d ih i d r o h o m o p ter i na
aJL . ,
1983;
presenta,
embargo,
c i c l o h i d r o 1a s a
1983),
lo
estructural
Por
el
las
en
contrario,
otras
enzimas
actividad.
Esto
estructural
para
síntesis
de
embargo,
datos
dosis
génica,
hace
mutante
de
de
al^.,
al
no
de
sepia
que
ser
síntesis
de
de
estar
las e n z i m a s
de
Ferré
mutante
la
clot
enzima
GTP
y
O ’D o n n e l l ,
no
sea un g en
acetildihidrohomopterina.
no
afecta
las q u e
a
ninguna
se ha
probablemente
que
No
de
medido
s e a el
conducen
entre actividad
todavía
19 77 b;
El
(Mackay
las e n z i m a s
-SE-
a no
parecen
que probablemente
la r e l a c i ó n
estar
(se)
198^).
ó-aceti I d i h i d r o h o m o p t e r i n a .
de
tanto,
p i r u v o i 1t e t r a h i d r o p t e r i n a
la r u t a p a r a
pensar
alguna
la
que
de d r o s o p t e r i n a s .
actividad
biosíntesis
el
visualmente
actividad
disminuida
hace pensar
la
et
una
ligeramente
que
por
o j o;
(Ulilson y J a c o b s o n ,
Wiederrecht
sin
produciría
color
al
a
a que una
rojos,
sepia
la
de
no
sobre
y
que conducen
en parte,
las c a n t i d a d e s
clot
las
los p i g m e n t o s
efecto
involucrados
et
de
d a n el
otro
codifican
enzimas
desapercibidos
afectara
mutantes
debido,
cantidades
pasarían
que
de s ín t e s i s
estas
este
enzima.
genes
la r u t a
de
las
produjeran
Los
para
mayor itariamente
mutantes
pteridinas
de
puede
alguna
variaciones
lo q u e p r e s u m i b l e m e n t e
todavía
las r a m a s
la b i o p t e r i n a .
son
estructural
p or
existen,
su
gen
a
la
sin
enzimática
bien caracterizadas
y
estas
enz i m a s .
Los
pterina
último
p or
pasos
no
e n z i m á t i c o s que c o n d u c e n
han
paso
sido
d e d i h i d r o p t e r i na
la e n z i m a
( 1962)
propuso
< l_¿x)
podía
actuar
se
basó
en
isoxantopterina
testículos
mutante
que
Ü x
se
et
a¿.
(1986)
los
loci
actuando
alguno
la
el
efecto
ruta
de
como
bordeaux
Para
pterina
e
en
los
del
doble
posteriores
algún
paso
de
la p o s i b i l i d a
(bo)
y dark
pasos
que
la p t e r i n a .
hay
Su hipótesis
las p t e r i d i n a s
(los n i v e l e s
de p i g m e n t o
de p t e r i n a e
al
t ip o
(dke)
entre
de estos
similares
que
o reguladores
los m u t a n t e s
son
de
eye
de
bajas cantidades
isoxantopterina que
se b a s a
loci
salvaje)
la
sobre
marrón
y en
y
las
presentan
mutantes.
Otro
de alg un a
el
en
genes estructurales
los
específico
sus metabolitos
dichos
estudios
han planteado
p i r u v o i 1 t e t r a h i d r o p t e r i na y
en
de
de pterina
mutante
el
19 82).
la p t e r i n a .
mutante
cantidad
dicho
y Brown»
cantidades
han realizado
localizar
como
puedan estar
en
No
excepto
isoxanthopterin
a
este
de
está catalizado
little
anterior
presentaba
baja
que
(Unnasch
mutante
pequeñas
la
síntesis
concreto.
Ferré
tanto
las
en
ryE lix.
enzimático
a pterina
en un paso
que
y»
pudieran
q u e el
la
caracterizados»
dihidropterín oxidasa
Hubby
esto
todavía
a
locus
enzima
locus H e n na
que este
que
de
(Hn).
gen podría
también podría
la r u t a
Wilson
estar
s er
de s í n t e s i s
y Jacobson
actuando
-23-
en
el
de
gen estructural
las p t e r i d i n a s
( 197 7b)
el
paso
es
propusieron
enzimático
entre
la
6— ac e t i l d i h i d r o h o m o p t e r i n a
basándose
para
sustancia
que
t o ta l
parece
ello
presenta
ausencia
de
sugerir
enzimáticos
en
actuando
entre
(Ferré
et
la c a n t i d a d
dihidropterina
,
etc.)
de
podrían
cantidad
como
uno
la c a s i
de
mutante
los
pasos
y el
aumento
una co n se c ue nc i a
de
pteridinas
de
j u nt o
las
la
de
la
la f a l t a
la
d r o s o p t e r i n a s ).
existencia
la
la
con
(s e p i a p t e r i n a ,
por
y
explicándose
p i r u v o i 1t e t r a h i d r o p t e r í n a ,
ésta
la p r i m e r a
en dicho
1 9 83 ) ,
(precursor,
explicarse
de
metabolizar
1.6.
otras
en
de d r o s o p t e r i n a s
6-acetildihidrohomopterina,
acúmulos
de
la p i r u v o i 1 t e t r a h i d r o p t e r i n a
6-acetildihidrohomopterina
de
acumulación
m u t a n t e H n 1^3 . S i n e m b a r g o ,
estaría
que hay
r e d u c c i ó n de
el
gran
las d r o s o p t e r i n a s ,
isoxantopterina y pterina
que
dihidropterina
la
y
Los
biopterina,
de una mayor
al
no
poderse
a dihidropterina.
Interacciones
entre
las
rutas
de
síntesis
d e las
p t e r i d i n a s y la x a n t o m a t i n a
E n el
número
apartado
de m u t a n t e s
específica
oculares.
conocidos
a
El
tipos
de color
una
de
resto
presenta
simultáneamente
a
anterior
de ojos
las d o s
de
se
los
la
la s í n t e s i s
rutas
ha
que
descrito
afectan
de s í n t e s i s
mutantes
de
de
forma
de pigmentos
color
característica
de
y/o
de
acumulación
un pe q u e ñ o
de
ojos
afectar
los
dos
de pigmentos.
Se
han
propuesto
muchas
-E¿+-
hipótesis
encaminadas
a
explicar
porqué
alteraciones
Los
en dos
trabajos
erróneas
de
de
acumularan
en
un d e f e c t o
interacciones
enzimáticos.
de
en
El
t a nt o ,
que Bhosh
conducir
xantomatina.
Sullivan
que
un
t o ta l
pteridinas,
de
rango
ausencia
de
hasta
pteridinas
ninguna
(Ghosh
hipótesis
metabolito
de
a una
et
y
en
la r u t a
Forrest,
de
tipo
o
el
de s í n t e s i s
-
de
la
de
las
han encontrado*
white
presentan
a
pesar
de
que va d e s d e
en algunas
salvaje.
enzima
activado
1 96 7 b ) .
pa r a su
la s í n t e s i s
superiores,
inverso,
25
ciertas
propusieran
de
hidroxilasa
que
inhibido
-
que
de p t e r i d i n a s
el
estas
inhibidores
síntesis
(197 3)
alelos
valores
sentido
de
a
in c lu id a en e s t e
inhibición
al.
también,
ser
de
estar
la r u t a
dicha
1956 ).
(1 96 7 a)
los q u e p r e s e n t a
pudiera
o
se
afectara
y Forrest
la c a n t i d a d
Se ha pr op u es to ,
oxigenasa
tenía
quinurenina
en
por
pteridínico
los d i f e r e n t e s
normales
presentar
en
y,
de e xp l i c a r
cofactores
podía
rutas
pigmentos
cofactor
hidroxilasa
un de fecto
las d o s
(Kühn*
tratado
a
hipótesis
lo s g r á n u l o s
q ue se
un
en
pigmentarios
de
conducir
las
ambos
tipos de p i g m e n t o s
conocimiento
hizo
común
que
la f o r m a c i ó n d e
podría
niveles
o
términos
puede
proponían
gránulos
necesitaban
sin embargo,
la
clásicos
1952)*
ambos
la q u i n u r e n i n a
la
genético
más recientes han
funcionamiento,
pteridinas
de s í n t e s i s .independ ie n t e s .
más
en
hidroxilasas
Por
rutas
los m i s m o s
Hipótesis
caso.
defecto
( Nol te ,
la a c u m u l a c i ó n d e
que
solo
que h u b i e r a un s u s tr at o
síntesis
razón*
un
No
se
triptófano
por
algunas
ha p r o p u e s t o
es decir,
que algún
xantomatina
inhiba
una enzima
de
la s í n t e s i s
S u l l i v a n et
al.
explicar
fenotipos
color
b a s a d a e n el
pigmentos
de
si
el
sus
es
sus
en
de
respectivos
tipos
precursores
pigmentos.
que son
tanto
incapaces
en
los
y Sullivan,
de
túbulos
19 75 ) .
su d e s a r r o l l o ,
actividad
que
del
al,.
a pesar
enzima
No
se h a n
este
t ip o
precursores
(1979)
diferencia
de
no
explicarse
común
-E6-
tipos
de
varios
de
la
mutantes
intracelularmente,
los o j o s
también
(Sullivan
demostraron
niveles
normales
durante
de
la
hidroxilasa.
se
claras
que demuestren
produce
las p t e r i d i n a s .
sin embargo,
normal)
En
experiencias
3- h i d r o x i q u i n u r e n i n a
evidencias
de
en
para
1 97 5).
de a m b o s
que hay
(1977)
transporte
individuo
varias
mutantes
precursores
como
de p r e s e n t a r
la b i o s í n t e s i s
detectaron,
del
al..
quinurenina
de
en
Por
podrían
Los
podrían
de
una
desarrollo.
de ojos.
quinurenina
acumulan
encontrado
el
y
transporte
a cabo
los
Malpighi
H o w e l l s et
que varios mutantes
de
descubrir
acumular
de
durante
de
está
la s í n t e s i s
transporte
precursores)
sobre
han permitido
para
tuviera puntos
llevaron
estudios
hipótesis
(Sullivan y Sullivan,
(o p r o b a b l e s
Los
xantomatina
se
Esta
un
de color
una h i p ó t e s i s más
la g r a n v a r i e d a d
de p i g m e n t o s
transporte
base a esta h i p ó t e s i s
con precursores
que»
sistema
mutantes
en ambos
mecanismo
de
necesario
este
de
conocidos.
precursores
a fenotipos
deficientes
la e x i s t e n c i a
de ojos
oculares»
defectos
conducir
han propuesto
descubrimiento
acumulación
tanto,
pteridinas.
(197*0
plausible para
de
de
que
no e r a n
algunos
capaces
también
Sullivan
mutantes
de
con
et
(a
absorber
ciertas
purinas
túbulos
de
( g u a ni n a»
Malpighi.
probable
como
incapaces
de obtener
en
de
l os o j o s
Malpighi.
necesite
algún
síntesis
de
mutantes
sean
1.7.
a partir
del
No
tipo
de
para
salvaje,
a pesar
del
marcado
radiactivamente
ni
evidencias
de
fueron
d e GTP,
marcada
en sus
claras
túbulos
de
que se
precursores
hecho
algunas
los
p a r e c í a la m a s
embargo,
apreciables
de ab so r be r
lo s ú l t i m o s
el
normal
años
pequeñas
pteridinas.
Desde
fólico
riboflavina
y
la
se ha
crecimiento
hace tiempo
y
como
sus
enfermedad
pteridina
es
al..,1979;
Curtius
consiste
en
la
de
la
de que a l g u n o s
purinas.
un
defecto
La
et
organismo
y algunos
producida
del
a c u m u l a c i ó n de
una
son
tipos
de
-E7-
por un
La
ácido
son
factores
suelen
provocar
defecto
en
responsable
tirosona
fenilalanina
de
de
(N i e d e r w i e s e r
f e n i l c e t o n u r ia
enzima
serie
del
ti po s de anemia.
atípica"
fenilalanina
que
humano
de a l g u n o s
vitaminas. Ambas
a,l. , 1 979).
provoca
manifiesto
deficiencias
defecto
la
de
s e c o n o c e la f u n c i ó n
"fenilcetonuria
t r a n s f o r m a c i ó n de
hidroxilasa).
del
cantidades
t r a n s t o r n o s de c r e c i m i e n t o
Otra
puesto
funcionamiento
necesarias
este
Sin
transporte
las p t e r i d i n a s ,
incapaces
GTP .
t ip o
p or t a nt o ,
riboflav in a ) en
guanina
de g u a n i n a
individuo
hay,
la
del
cantidades
y
I m p o r t a n c i a c l í n i c a de las p t e r i d i n a s
En
de
ellos,
precursora
radiactivamente,
ni
De
xantina
una
et
clásica
de
la
(f e n i 1a l a n i n a
producida
transtornos
en
por
el
organismo
de
presentan
esta enfermedad
puede
fácilmente
ser
dieta baja
La
los c u a l e s el
a
dieta
para varias
baja
está
los n i ñ o s q u e
al
Este
retraso
paciente
p or
hidroxilasas
(Brenneman
(Jequir
incluidos
neurotransmisores
organismo»
que
y
de
Las
1969).
las r u t a s
a q uí
una
más graves
o
cofactor
necesario
la
y
la
de
la
la
la t r i p t ó f a n o
enzimas
de
varios
funcionamiento
fenilcetonuria
los
son
tirosina
Los dos últimos
normal
de
parcial
conocidas
1963)»
p a r a el
que
tipo
t o t al
1964)
unos
los p a c i e n t e s
biosintéticas
que
por
Este
más
Kaufman»
necesarios
presente síntomas
e s el
(Kaufman»
et al.»
en
responder
la a u s e n c i a
hidroxi l a sas,
hidroxilasa
hidroxilasa
no
caracteriza
fenilalanina.
causado
enzimas
se
y p or
en
fenilalanina
del
de
importante.
suministrando
tetrahidrobiopterina»
están
más
atípica
más extremos
fenilcetonuria
la
evitado
fenilcetonuria
mucho
de
e s el
mental
en f e ni l a l a n i n a .
síntomas
una
retraso
atípica
fenilcetonuria
clásica.
El
tratamiento
a t í p i c a ha
consistido
tetrahidrobiopterina
sus
el
precursores
t i po
de
descubierto
síntesis
de
(Niederwieser
(Niederwieser
dada
su
al.»
al..»
1 98 E) ,
en
con fenilcetonuria
el
inestabilidad»
Estos últimos
de
en v a r i o s de
pteridinas
et
et
o»
metabólica
defectos
las
pacientes
habitualmente
másestables.
lesión
de
los
etc.
“88-
la
de
de alguno
de
variaban
paciente.
los e n z i m a s
como
1984)»
cada
suministro
GTP
de
según
Se h a n
la r u t a
de
ciclohidrolasa
d ih i d r o p t e r í n
reductasa
Se ha podida
enfermedades»
pteridinas
de
se p r o d u c e
en sangre
tumores
ellos
observar
individuos
sanos»
biopterina.
se
cancerosos
Estas
también
y transtornos
Nichol
et
a l .,
neurológicos
que
en un 7 0 %
estar
aumentada
de
aumentado
los
asociadas
-£9-
ellos
el
de
de
tipos
a
lo e s t á
de
lo s
la
cociente
en pacientes
con
19 80).
niveles
de
a defectos
psiquiátricos
19 85).
frente
embargo»
al..,
en
y
niveles
encontrado
sin
alteraciones
l os
varios
que en un E E %
( R o k o s et
se han e n c o n t r a d o
de
tipos
con
encuentra
suele
a varios
En pacientes
ha
general»
neopterina/biopterina
procesos
se
mientras
En
asociada
una alteración
y orina.
cancerígenos
la n e o p t e r i n a
que,
pteridinas
inmunológicos
(ver
revisión
de
M ATERIAL
Y
METODOS
2.1. Cultivo de Drosophila
Se
cuales
m a íz ,
utilizaron
se c o l o c a b a n
azúcar,
cultivos
3 0 mi
de
vidrio
de c o m i d a
levadura y
antifúngicos
Los
botellas
a ga r ,
(p - o x i b e n z o a t o
a
150 mi, ,en las
compuesta
la
que
de meti lo
fueron mantenidos
de
en una
por
se
y ácido
cámara
harina
le
de
añadían
propiónico).
termorregulada
a 25-0.
Cuando
el
mantenimiento,
comida
objetivo
de
las m o s c a s
fresca
con
una
iba
a
los c u l t i v o s
eran
era
transpasadas
periodicidad
de
simplemente
a una
su
botella
de
aproximadamente
un
mes.
Cuando
moscas
de
se
las c e p a s
huevos
en
etílico
y ácido
superficie,
por
botella,
en
los
un
eran
con
realizar
de m a n t e n i m i e n t o
vidrio
de
acético.
cultivos.
viales
se
En
el
tamaño
enzima,
de
las
radicaba
moscas
experimento,
colocadas
no
a razón
hubiera
solo
a
a g a r,
depositados
experimentos
contenían
solo
de
contenía
y sembrados
de ut il iz a r
experimentos
que
de que
t i po
eran
huevos,
algunos
sembraron
La n e c e s i d a d
nuestros
Los
objetivo
viales mas pequeños que
estos
reloj
recogidos
el
algún
poner
alcohol
sobre
de
esta
100 h u e v o s
competencia
se u t i l i z a r o n
10 mi
de comida.
En
70 moscas.
cultivos
e n el
sobre
etc.
-31-
sin
competencia
fuerte efecto
la c a n t i d a d
que
en
tiene
de pigmen to s ,
2.2. Organismo biológico
El
ser
vivo
empleado
en
estos
Drosoghi. 1.a Q)9 l § D ° 9 sJster c o n o c i d o
del
vinagre.
la
cepa
se
9
R
se ha
de
vulgarmente
a
partir
en
trabajado»
1925.
excepto
de
ojos
estando
entre paréntesis
localización
en
cariotipo
(cm,
brown
(bw,
1:18.9),
2:57.5),
<9d.9>
carnation
claret
(ca,
1 :5 . 4 ) ,
1:0.3),
garnet
2:104.5)»
dark
(g,
2:55),
lightoid
1:23),
palé
1 :0 .8 ),
purple
(Brm E b ) ,
purpleoid
raspberry
3:53.6),
1 :7 .5 ),
(se,
roses
safranin
3:35),
(sf,
2:71.5),
sunburst
mayor
(kar,
(snb,
parte
de
y Grell
(196B).
bordeaux
3:75.7),
(ry,
scarlet
3:34
ó 47),
la
cepas
(bg,
(en,
(dor,
li gh t
(¿t,
(Üx,
prune
(gn,
( g r cí>) , p u r p l e mS2fc>
(PyE »
3:52),
(st,
2:97),
las q u e
(red,
ruby
3:44),
vermilion
con
su
(Hnr 3 , sinónimo
3:48),
Punch’
5
rosy
a
carmine
orange
3:51.7),
(g,
y
chocolate
Malpighian tubules
-32-
y
isoxanthopterin
p i nk
(gd, 2 : 1 0 6 . 4 ) ,
(L§s >
B r c<t
deep
purple^**
red
los m u t a n t e s
(el., 2 : 1 6 . 5 ) ,
little
2:54.5),
(cd,
recessive3
2:65.2),
1:32.8),
3:26),
La
(gr,
salvajes
su a b r e v i a t u r a
2: 73 ) ,
karmoisin
(gg,
se u t i l i z ó
alelos
la e s p e c i e :
clot
Henna
(l.td, 2 : 5 6 ) ,
mosca
1 :6 2 . 5 ) , c i n n a b a r
(dke,
1:44.4),
ocelli
de
(car>
eye
s e d :se p iao id , 3 : 2 3 . 0 ) ,
los
cardinal
3:100.7),
la
moscas
Todos
ha sido
utilizados se describen
continuación»
1:12.5),
de
d e s c r i t o s en Li n d s l e y
color
el
como
para este o r g a n i s m o
(E E. U U. )
encuentran
Los mutantes
normal
fundada
en O r e g o n
los q u e
gj-msf»
cepa
Oregon
capturadas
con
Como
experimentos
(y,
se
(rb,
sepia
1:33 ).
trabajó
fueron
conseguidas
de
laboratorios. Algunas
mutante
de c o l o r
de c o l o r
de
sintetizadas
de
ojos
la
recuperada
en
en nu estro
cepa
parte,
el
aproximadamente
estándar
ellas
que
fueron
en
de
background
genético
la m i t a d
los g e n e s
de
al
además
(no
conseguidas
de
fueron
las c e p a s
de color
los d a b l e s
mutantes
por
forma,
Oregon
se
incorporar
de
del
otras
cruzadas
la F s . De e s t a
de otros
morfológicas
fueron
mientras
la s í n t e s i s
Hx)
la c e p a
R y
redujo,
las c e p a s
tomada
como
( O r e g o n R).
A continuación,
en
llevaban,
1a b o r a t o r i o .T o d a s
para
la m u t a c i ó n
mutantes
mutaciones
de
extranjeros,
de
cepas
otras
varias
utilizadas
(excepto
de e s t a s
d e oj os ,
ojos),
laboratorios
colecciones
este
trabajo,
se e n u m e r a n
su
todas
procedencia
y
las c e p a s
las
utilizadas
mutaciones
que
por taban :
bo:
Bowling
Green,
bw:
Bowling
Green
ca:
Pasadena,
USA
Bowling
Green
car :
cd:
cd
Bowling
e:
Green
USA
(19B2)
(1981)
(1980)
(1980)
(1980)
Sintetizada
para
este
trabajo
(1981)
(e = e b o n y , 3 : 70 . 7)
cd
tx:
Sintetizada
para
este
trabajo
(1981)
( t x ~t a xi ,
3 :9 1 )
cho
se:
Bowling
cl_: B o w l i n g
Ed
dEL012
Green
Green
el :
(1980)
(sc=scute,
1: 0.0 )
(1982)
Bowling
Green
~33~
(1981)
(e d = e c h i no id , 2 :1 1 ;
d g c,ja= d u m p y - o b 1 iq u e > 2 :1 3)
cm:
Bowling
Green
(1980)
cm c t & : P a s a d e n a
en:
Bowling
dke
c:
g:
Hn r 3 : Bowling
tío’"3
L¿!
(1980)
Green
Green
Amhrest,
(c t ^ c u t - 6 , 1 :2 0 .0 )
(1980)
Green
Bowling
Bowling
g sd:
Green
Bowling
QiB/do.r:
(1981)
(c-curved>
(1980)
(B = B a r ,
2:75.5)
1:57)
(1980)
USA
(1981)
Green
(s d = s c a l l o p e d * 1 : 5 1. 5)
(1980)
Sintetizada
para
este
trabajo
(1981)
(ri=radius
(1981)
(b=black>
i n c o m p 1e t u s , 3 : 47 )
k ar
cu:
lix:
!t:
Utah,
USA
Alberta»
¿td:
¿td
Pasadena
Bowling
b:
(cu=curled>
3:50.0)
(1980)
Cañada
Green
(1981)
(1980)
Sintetizada
para
este
trabajo
2:48.5)
g:
Pasadena
(1980)
gd:
Pasadena
gn:
Bowling
se
gn:
y gn:
b
Green
Austin,
Pasadena
E 9._vg:
gr:
(1980)
Pasadena
Pasadena
gr:
(1980)
USA
(1981)
(1981)
(sc*scute,
(y=yellow,
(1981)
1:0. 0)
1:0.0)
(y g = v e s t ig ial » 2 : 6 7 )
(19B0)
Sintetizada
para
este
trabajo
(1981)
(b=black,
2:48.5)
gr
vg:
Sintetizada
para
—34—
este
trabajo
(19B1)
( v g = v e s t i g i a l , 2:67)
en
Q r c<t/gr'Tl£:to:
Ga k
Ridge»
USA
(1984)
(cn=cinnabar,
2:57.5)
cd
B L c ^ / 2 L m S b se:
se=sepia,
r a s:
rb:
Bowling
Múltiple;
Davis»
USA
Pasadena
Dd. Lb:
red:
(1984)
(c n = c i n n a b a r » 2 : 5 7 . 5 ;
3:26)
P u E /S[jlj.Cyl:
Second
üa k R i d g e
Green
Cy^Curly
(1980)
<SM1¡
Inversión
(2LR)
2:6.1)
(1980)
(1980)
Bowling
Bowling
Green
Green
(1981)
(1980)
ri.: S i n t e t i z a d a p a r a
incompletus,
(n d - n o t c h o i d , 1:3.0)
este
trabajo
(1981)
(ri.=radius
3:47)
ss:
Sintetizada
para
este
trabajo
(1981)
(s s = s p i n e l e s s » 3 : 5 8 . 5 )
rss : Pasadena
(1980)
h rsB : Sintetizada
para
este
trabajo
(1981)
(h= h a i r y »
3 :2 6 .5 )
r s a ri:
Sintetizada
incompletus»
3:47)
ry:
Pasadena
(1981)
se:
Requena»
España
para
este
trabajo
(1981)
<rí=
radius
<cg=clipped»
3:45.3;
(1980)
s e h:
Pasadena
(1980)
(h=hairy»
3:26.5)
b sf:
Pasadena
(1980)
( b =b l a c k ,
2:48.5)
snb:
Pasadena
(1980)
st:
Bowling
Green
cp
st
Jerusalén»
th:
(1981)
I sr a el
-35-
(1981)
t h = t h r e a d , 3:^+3.E)
v:
Pasadena
S.3.
S í n t e s i s de d o b l e s m u t a n t e s
Los
cruce
(1979)
de
dobles
mutantes
fueron
las c e p a s d e m u t a n t e s
apartado
anterior.
mutaciones
se
dependiendo
mutaciones
de
simples
Individuos
obtuvieron
que
en
se
obtenidos
en
la
el
descritas
portadores
FE
tratara
localizadas
a partir
o
de
mismo
de
F3
un
o
del
en
las
el
dos
del
cruce»
cruce
entre
en
distinto
cromosoma.
La
detección
la d e s c e n d e n c i a
formas,
fuera
de
de
estos
dependiendo
distinto
métodos
los
individuos
cruces
de que
o
igual
utilizados
fueron
el
al
fue
dobles
realizada
fenotipo
de
mutantes
del
de
doble
los m u t a n t e s
en
varias
mutante
simples.
Los
los s i g u i e n t e s :
A ) Mutantes_situados_en_distintgs_crgmgsomas
A-l )
Fenotipo
visualmente
doble
del
mutante
fenotipo
a(mutante
de
simple),
doble
los m u t a n t e s
podía
de color
del
por
de
tanto
mutante
simples
separarse
distinguible
(interacción).
El
fijándose
el
en
o jo s.
b(mutante
simple),
-36-
abídoble
mutante)
a/a ; b"*"/b'
A-2)
mutantes
a “‘Va'4' ; b/b
*
I
I
Fi
a^/a
Fe
1/16 a / a
Fenotipo
simples
; b""Vb
del
; b /b
doble
(epistasia).
mutante
de a l e l i sm o
hipostático.
(a»
a/a
de
individuos
individuos
a/a
; b “"/-
< 1/2 ó
de
J
x
t od os )
epistático
c o n el
y
mutante
gen hipostático).
a-/-
; b""/-
3/16
a * / -
; b/ b
3/16
a/a
; b'V-
Ind i v i d u o s
1 /1 6
a/a
; b /b
selecc ionados
parejas
seleccionados
b/b
los
3 métodos:
fenotipo
b,
de
a ’V a " - ; b /b
x
9/16
de
descendientes
gen epistático;
; b"*"/b*
Formación
sus
a u no
Se p u e d e n usar
A - 2 1 ) S e l e c c i ó n de p a r e j as
pruebas
igual
y
de
fenotipo
"a"
con
cruzamiento prueba
los
por
; a ' V a ”"
a^/a"*" ; b/b
a/a
I
a^/a"- ; b"*"/b
-37-
; b/b
<t o d o s )
x
1
a"Va
a^/a"^
; b /b
; b/b
A-22)
mutantes
Uso
de
hipostático.
de m a r c a d o r e s
color
(a,
gen epistático;
(mutaciones morfológicas»
mutante
a^/a"*
J
Fa
1/16 f e n o t i p o
I
y
"ay"
; b y /b y .
la f r e c u e n c i a
; b y /b
de o j o s )
Frecuencia
menor
de r e c o m b i n a c i ó n
de
entre
"y")
Formación
de
de h e m b r a s
A - 23)
de
(machos
partir
su
de
epistático
el
y
de
al
posteriormente
"ay"
de
vírgenes),
individuos
doble mutante.
de
doble mutante.(a,
gen
fenotipo
obteniendo
de
pruebas
-30-
y cruzamiento
"b".
individuos
hembras
descendencia
genotipo
fenotipo
la F x c o n m a c h o s
correspondiente
realizaban
confirmar
parejas
Selección
hipostático
se
x
no d e c o l o r
a/a"*" ; b y/b"" y""
de
los
gen hipostático).
Fi
a/ a
al
a
de o jo s )
; b"*" y""/b"" y""
1 /Í6 » d e p e n d i e n d o
prueba
b,
y, z
probable
ligados
especialmente
( m u t a c i o n e s d e c o l or
(genotipo
e
ojos»
a ,b
a/a
"b"
de
morfológicos
a
fenotipo
En este caso
alelismo
para
epistático).
a/a ; b"*"/b""
Fi
x
a’Va"* ; b/b
i
I
J
a/a"*" ; b / b ‘
Fe
3/16
a*/-
; b/ b
a"*"/- ; b / b
a/a
; b/ b
A - 3 ) Fenotipos
los m u t a n t e s
a, b
del
simples
"a"
(fenotipo
(fenotipo
doble
de color
= fenotipo
con
a/ a
"b"
la d e s c e n d e n c i a
; b^'/b^
Fi
Fe
individuos
A - 3 E)
cada
u no
de
de
y de cad a
uno de
visualmente.
= fenotipo
"ab"
individuos mutantes
de pr ue b es
x
a^/a*1" ; b/b
1
I
; b*V-
a""/-
7/16
retrocruzamiento
doble mutante
de
y
alelismo.
a"*"/a ; b ^ / b
9/16
Selección
"a")
d e ojo s)
A - 31 > R e c o g i d a d e p a r e j a s d e
realización
"b")
"b")
mutante
indistinguibles
(mutaciones
Fenotipo
(fenotipo
de
de
"fenotipo
parejas
los
las c e p a s
Uso
de dos
los
mutantes
mutante"
de
fenotipomutante
i n d i v i d u o s d e su d e s c e n d e n c i a
"a"
y
por
y "b".
marcadoresmorfológicos
a c r u za r .
-39-
ligados
a
a y/a
a,b
(mutaciones
de c o l or
y,z
(mutaciones
morfológicas,
y
; b + z'Vb"" z**
x
de o j os )
a^ y^/a"*" y"1" ; b z/b
1
1
Fi
a y/a"“ y ”" ; b z/b"* z
Fa
1 /1 6
"fenotipo
(fenotipo
Selección
de
retrocruzamiento
i n d i v i du os de
probable
los
z
ay/ay bz/bz)
de
individuos
las c e p a s
de ojos)
y z"
parejas
de
no d e c o l o r
"a"
fenotipo
mutante
y
de su d e s c e n d e n c i a
p or
y "b".
B ) Mutantes_situadgs_en_eI_rnismo_crgmosgma
Se
A).
Hay
utilizan
que
marcadores
encuentran
los m i s m o s m é t o d o s q u e e n el
resaltar,
son
sin
útiles
situados
x
Fi
1
i
a y
b^/a^
los d o s g e n e s
a"-
Los
individuos
los m u t a n t e s
y * ~
b/
a'*~
cuando
se
mutantes:
y * -
b
y"*" b
F e S e l e c c i ó n de
(Genotipo
que
fundamentalmente
entre
a y b"*"/a y b"“
embargo,
apartado
individuos fenotipo
probable
de
"a y b""/a
fenotipo
-
40
-
a
y*~
y"
"a y"" b -*-"
b")
llevarán
un
cromosoma
y
"b"»
con
a no
los d o s g e n e s m u t a n t e s
ser
su d e s c e n d e n c i a
que
bien
que
o
bien
se
de
método
la F e > q u e
machos
de
descendencia
mutante
serían
portador
de
individuos
dobles
s er
de
una
mutantes
que
a
dobles
que
de
genes
si
ha.y
parejas
Los
su
o
i nd i v i d u o s de
presentaran
fenotipo
cruzando
por
estos
individuos
su fe n o t i p o
detectados
Fs
x
1
I
podrían
pruebas
(algunos
ab^/ab""
x
i
a^b/a^b
100 */. f e n o t i p o
normal
a"* b/a*^ b
a b^/a^ b
Selección
de
"fenotipo
"a"
serán de g e n o t i p o
ab^/a b
a^b/a^b
I
normal
1/2 f e n o t i p o
-¿+1-
a b^/a
x
1/2 f e n o t i p o
"b"
la
recombinante
descendencia
de
por
alelismo.
Fi
y
virgenes
mutaciones»
mutantes;
en
hembras
un c r o m o s o m a
dependiendo
visualmente
a b “*“/a b -1"
En
mutantes»
hacer
las
mutante.
portadores
2
recombinación.
cruzar
de
cruce
obtendríamos
separados
era
cepa
este
los
"a"
de alelismo.
utilizado
otra
de ojos
visualmente»
recurrirá
presentaran
la
doble
individuos
distinguirse
posteriormente pruebas
Otro
habido
ya a p a r e c e r á n
podrán
interacción»
haya
de color
b)
(ab/a"*b)
de
2.*f. E x p e r i m e n t o s c o n medio s u p l e mentado
Se
primero
usaron
dos
lo e s t a b a
diluyendo
esta
destilada.
cantidades
tipos
con
s u s t a n c i a en un p e q u e ñ o
ó
1
2
de 3 - h i d r o x i q u i n u r e n i n a
removiendo
hasta
uniforme
del
añadido
tubos
medio
se o b t u v o
la c a n t i d a d
y 0 .¿f g r a m o s )
2.5.
contenían
con
mi
10
de
conseguir
en
la
mezclando
agua
equivalentes
comida
una
a
fueron
recién
distribución
comida.
El
directamente
d e s e a d a de L - t r i p t ó f a n o
10 mi
Detección y
solución
de
mg
hecha»
de
volumen
esta
a tubos que
tipo
y se o bt u v o
de
añadidos
líquido
s u p 1e m e n t a d o s . El
3-hidroxiquinurenina»
Volúmenes
de
de m e d i o s
<0.1»
segundo
en
los
0.2»
0.3
de c omi da .
cu a n t i f i c a c i ó n
de p t e r i d i n a s »
pigmento
m a r r ó n y o t r o s m e t a b o l i t o s r elacionados
£ E 2 ÍDéí o 9 E é í í é _ e D _ £ a g a _ f .ina
Este
método
c u a n t i f i c a e iones de
usaban
de
placas
celulosa
poner
s id o
el
más
las p t e r i d i n a s .
utilizado
En
este
m i c r o c r i s t a l i n a de 0 . 2 5 m m d e
una
solvente
los p u n t o s d e
cromatografía
2
-
se
capa
espesor.
Tras
toque de
amónico
las
una
la s p l a c a s »
bidimensional» usando
i s o p r o p a n o 1/ a c e t a t o
- ¿ +
en
método
d e c r o m a t o g r a f í a de 20 x 20 c m c o n
los e x t r a c t o s en
se r e a l i z a b a
primer
ha
2%
como
( 1 : 1 )»
y
como
segando
solvente cloruro
d e s a r r o 11 a b a n
lo q u e
el
durante
frente
3 h o r a s e n el
del
solvente
longitud
de
la
solvente»
con
lo q u e el
del
desarrollo
dejaban
secar
p l a ca »
durante
estos
oscura
en c o n d i c i o n e s
previamente
agua
toda
procesos
consistía
de
mayoría
(MAA).
de
los
luz r o j a
del
existir
se a c u m u l a
grandes
en
cantidades
homogeneizado
y del
con
las q u e
sustancias
se
vez
en
acoplado
ácido
mosca»
y
10
acético/
en
la
de edad.
se de b e
mayor
que
a 4000
La
a que
parte
de
se a ñ a d e n
se
de
presenta
los m a c h o s .
x G durante
de
10
en
Este
E min.,
microlitros
las c r o m a t o g r a f í a s .
cromatogramas
un
de
los
isoxantopterina) que apenas
mientras
eran cuantificadas
llevaba
obtener
de m a c h o s
se obtení an m u e s t r a s
l os
se
al, . » 1983).
utilizados
la
los t e s t í c u l o s
realizaban
las p l a c a s
cabezas
los c u e r p o s
era centrifugado
sobrenadante
Una
que
las c a b e z a s ,
Después
tenían 9 dias
acumulan
(la
el 9 0%.
con un escalpelo»
individuos
una pteridina
la
segundo
de m e t a n o l /
donde
60*/. d e
el
80 cabezas
Los
que
en
para
mi
se
el
a cabo en una camara
O.S
es e n e s t e
al
con
t e nu e.
cuerpo
experimentos
mientras
primer solvente»
( F e r r é et
llevaron
predominantemente
pteridinas,
se
los s o l v e n t e s
razó n de em plear
l u ga r
placas
minutos
utilizado
separadas
(4:1:5)
50
la n o c h e
se
Las
alcanzaba
en h o mogeneizar
de m a c h o s en
3%.
frente alcanzaba
procedimiento
extractos
cuerpos
y
d e c a d a u no de
Todos
El
amónico
en
un
accesorio
-43-
estaban
secos,
l as
espectrofluorímetro
para
poder
medir
directamente
sobre
las
cuantificación
se
de m e d i c i ó n d e
cada
fluorescencia
disponer
la
el
placa
de
fluorescente
que
era
método
del
área
Los
respecto
a
utilizado
esta
la
para
para
la
es
la
número
y
el
se
máximo
de
realizaba
al
coordenadas.
po r e s o
s o b r e el
cantidad
de
de
no s o lo
por
mover
La ú n i c a
su e m i s i ó n
(ADHP)
se r e c u r r i ó
a
cromatograma
de
ya
la
como
sustancia
que
cuantificaciones
relativos
salvaje
p o r q u e es
la
suficiente
el
su
individuo
se
se
entre
de
de
calibrados
que
emisión
las
con
los
de
las
(Oregon R ) .
l in e a l
Estos
entre
más
(blanco)
que
pequeños
inconveniente
fluorescente
la c a p a d e c e l u l o s a
-44-
de
la r e l a c i ó n
cabezas.
p r e s e n t a b a n el
la
sencilla»
comparación
la c e p a e s t á n d a r
comprobó
bajo
más
Hemos
los e f e c t o s
y f l u o r e s c e n c i a no e r a
muy
R).
normal.
realizaron
con
se
(porcentajes)
(üregon
interpretación de
l i n e a l i'dad
la
estas
valores
tipo
calibrados
cociente
sustancia
de
forma
de c a b e z a s
un
la m a n c h a
sustancias
intervalos de
q u e el
de
forma
De est a
número
1)»
cuantificar
fluorescencia,
que presenta
Con estos
de
podía
cepa
mutantes
diferentes
las c o n d i c i o n e s
la 6 - a c e t i 1 - d i h i d r o h o m o p t e r i na
forma
porque
valores
(Tabla
Esta búsqueda
ejes
resultados
en
cepas
en
La
extracto.
expresan
sino
se
de d e t e c c i ó n
llevaba cada
cromatograma.
de unos m a n do s que p e r m i t í a n
dos
no
no p r e s e n t a b a
medición
sustancia
la m a n c h a .
los
sustancia que
del
realizaba buscando»
accesorio
en
manchas
de
de
la
era muy
Tabla 1.- Condiciones usadas para la medición de la fluorescencia de las manchas del cromatograma
Las rendijas de excitación.y emisión fueron variadas ligeramente en las últimas medi­
ciones para compensar la pérdida de intensidad de la lámpara de xenón del espectrofluorímetro.
(*) la medición se hizo por barrido de la superficie de la mancha.
Long. de onda
de excitación
(nm)
Long. de onda
de emisión
(nm)
468
568
10
8
5 X 5
—
468
550
10
5
5 X 5
—
Aurodrosopterina
468
550
10
10
2 X 2
—
Isoxantopteriña
350
408
10
8
5 X 5
—
Sepiapterina
420
512
10
10
5 X 5
43
366
438
10
10
5 X 5
39
Acido xanturénico
354
448
10
10
5 X 5
39
Drosopterina*
468
550
5
5
5 X 5
—
Acetildihidrohomopterina*
469
512
10
20
5 X 5
—
Sustancia
Neodrosopterina
Drosopterina
Rendijas
Excit.
Emis.
(n m )
(n m )
Ventana
accesorio TLC
(mm)
Filtro
Isodrosopterina
Dihidrobiopterina
Pterina
Biopterina
b a j o,
con
lo c u a l
capa
de
celulosa
obtenido.
cada
Además,
sustancia
resultaba
en
el
dicho
al
la
al
las
casi
concentración
ser
medida
intervalo
trabajar
más
en
la
fuera
aunque
en
además,
de
se
Por
una
de
en
las
en
además,
cuantificaban,
la
situara
dentro
del
razones,
se optó
por
no f u e r a
pendiente
evitar
de
sustancias
cada
una
a una
alta
la c u r v a
5 a
que
lo s u f i c i e n t e m e n t e
estas
ejemplo
de
una
alta p ar a
las f i g u r a s
trabaja
dentro
produjeran
la f l u o r e s c e n c i a c o n d u j e r a n
Un
un extracto
cromatogramas
se
que
de
mutantes,
la c u r v a d e c o n c e n t r a c i ó n
casos,
la
resultado
cayera
se
de
cantidad
hacer
ellas
fuera
en ellos
la c o n c e n t r a c i ó n .
observarse
que
todas
linealidad.
en estos
para cada
que
y que,
al
en cuenta,
obtener
que
lo s u f i c i e n t e m e n t e
errores
t e n er
que
intervalos
grandes,
intentó,
en
de
conseguir
cuantificar
imposible
en
mucho
grosor
los d i s t i n t o s
sustancias
emisión fluorescente
para
a
Había que
varias
resultaba
difícil
el
a Qri.ori. ia
presentaban
sustancia
en
afectar
desconocer
que
intervalo.
errores
podían
enormemente
que
ser
pequeños
10.
lineal.
de
pequeños
a grandes errores
obtenidas
cuantificadas
vienen
Se
la c u r v a
que
las c u r v a s
Los
mucho
intervalos
puede
en
los
determinados
por
flechas.
Un p r o b l e m a
consistía
en q u e
un e x t r a c t o
tiempo,
adicional
de
debido
que s u r g í a
los v a l o r e s o b t e n i d o s
la
misma
a
que
concentración
la
bombilla
-¿+6-
con
en
estas
la m e d i c i ó n
disminuían
de
curvas
xenón
con
de
el
del
—r40
-r—
80
N s DE C A B E Z A S
Figura 5.- Curva de concentración de la neodrosopterina (NDP) y
la drosopterina (DP) realizadas con la cepa Oregon R.
Las flechas indican el intervalo de la curva en el
que se trabajó.
40
80
N : DE C A B E Z A S
Figura 6 . - Curvas de concentración de la isodrosopterina (IDP) y
la aurodrosopterina (ADP) realizadas con la cepa Or-R.
Las flechas indican el intervalo de la curva en el
que se trabajó.
FLUORESCENCIA
SP
40
80
N : DE C A B E Z A S
Figura 7 . - Curvas de concentración de la sepiapterina (SP) y la
biopterina (BP) realizadas en la cepa Oregon R.
Las flechas indican el intervalo de la curva en el
que setrabajó.
FLUORESCENCIA
PTE
40
80
N : DE C A B E Z A S
Figura 8 . - Curvas de concentración de la pterina (PTE, • ) y la
dihidrobiopterina (í^BP, *) realizadas con la cepa
Oregon R.
Las flechas indican el intervalo de las curvas en el
que se trabajó.
AREA
( imn
150-
100 -
50-
40
80
N ? DE C A B E Z A S
Figura 9 . - Curva de concentración de la acetildihidrohomopterina
(ADHP) realizada con la cepa Henna recessive-3.
La flecha indica el intervalo de la curva en el que
se trabajó.
80-
40*
8
4
N : DE C U E R P O S
Figura 1 0 . - Curva de concentración de la isoxantopterina (IXP)
realizada con extractos de cuerpos de la cepa Or-R.
La flecha indica el intervalo de la curva en el que
se trabajó.
espectrofluorímetro
Para
concreto
poder
con
utilizaran
otros
de
el
medición
comparar
factores
disminución
mediante
uso
de
butadieno,
para
y
rodamina
B.
A partir
el
nuevo
A
se
lo
largo
el
exactitud
de
volvía
Lo
de l
método
de
métodos más
las c o n d i c i o n e s
azulada
fueron
el
se
de 3 m e s e s
otro
de
para
amarilla
fluorescencia
a realizar
la
tetrafenil
de f l u o r e s c e n c i a
tiempo
se
detectada
estándares
de
en
roja
el
la
realizaron
como
máximo.
calibrado
y se
cuantificados posteriormente
período
que
los
con
cuerpos
otro,
que
se
realizó
i nt e n t a b a n ,
resultados
por
y,
un
lado,
p or
este
sufrió
aumentar
otro,
la
conseguir
rápidos.
primero
p or
en
de cu a n t i f i c a c i ó n de p t e r i d i n a s
que
se
homogeneizados diferentes
por
se b a s a b a n
estas correcciones
los m u t a n t e s
cambios
evitar,
que
después»
calibrado.
trabajo,
varios
caso
semanas
en
Estos
sustancias
intervalo
d e a q uí
comparaban
estándares
sustancias
en un m o m e n to
fluorescente
fluorescencia
En c u a l q u i e r
de un
varias
intensidad
manchas.
para
obtenidos
corrección
de
las
de
ovaleno,
de
intensidad.
valores
medidos
la
sustancias
dentro
iba p e r d i e n d o
un
lado,
afectaran
para poder
i s o x a n t o p t e r i n a , ya
que
al
hizo
los c u e r p o s
y
las s u s t a n c i a s
desarrollo
cuantificar
que
fue
de
separar
en
la s c a b e z a s
para
presentes
los c r o m a t o g r a m a s
con mayor
exactitud
esta s u s t an c ia se s i t u a b a
-53-
en
en
los
y,
la
el
cromatograma
Por
esta
exceso
en
razón»
un punto
en
cercano
aquellos
El
mutantes
cabeza
método
en
utilizado
consistió
0.2
centrifugado»
mi
de
para
MAA,
se s a c a b a n
cromatograma.
cromatograma
Tras d e s a r r o l l a r s e
isoxantopterina
presentes
y
En
disposición
final
consistía
de
parte
en
el
el
no
se
de
las
método
la s
11
manchas
trabajaba
Por
que
los c r o m a t o g r a m a s
por
la
este
observarse
en
se
la
un cromat o gr a ma
intentó
se medía
de
la m a n c h a ,
las
área
de
la
el
zona
al
de
tamaño
máxima
rest o de e ll a
e n el
que producían manchas
de
la s v e n t a n a s
inferior
variaciones
-54-
solucionar
la f l u o r e s c e n c i a
e ra s i e m p r e
a u n q u e se b u s c a b a
t a nt o ,
pero
anterior.
cuando
fluorescente
cromatograma
dimensión,
puede
la
pteridinas
afectada
los c r o m a t o g r a m a s , el
Así,
solvente»
El
del
de cabezas.
otras
cuerpo.
su
derecha
izquierda
primer
veía
figura
inferior
extracto
segunda
tras
sin
sobrenadante»
inferior
de
la
10 c u e r p o s
del
la p a r t e
c a n t i d a d e n el
q ue,
en
la m a n c h a .
la
los p r o b l e m a s
las q u e s e
era medido.
de
de
en
cada mancha
emisión
cuantificación
10 m i c r o l i t r o s
separaba
la
s e g ú n el
□tro
de
se
posteriormente»
la p l a c a e n
ya
desarrollo.
realizado
un
isoxantopterina
la
se de po s it ab a
desarrollado
isoxantopterina
con
En
se
en baja
l u e go
que presentaban
en h o m o g e n e i z a r
los c u a l e s e r a n d e p o s i t a d o s e n
era
la s e p i a p t e r i n a .
distorsionada.
isoxantopterina
mismo
de
de s e p i a p t e r i n a » la m a n c h a d e
presentaba
del
al
con
no
desarrollo
mayor
o
Figura 11.- Disposición final de las manchas en un cromatograma
hecho con extractos de cabezas (bidimensional) y
cuerpos (unidimensional).
menor
extensión,
cantidad
de
provocaban
sustancia
Debido
de
f l u o r e s c e n t e de
los p a r á m e t r o s
Esto
barridos
celulosa
área
obtener
obtenidos
recortaban
el
en dichas
áreas
Aunque
anterior,
mutante
se
el
drosopterina
la
presentaban una
manchas
se s i g u i e r o n
emisión fluorescente
calculó
la
en cada
celulosa)
calcularon
sustancia
impresora
se
base
la
e m i s i ó n de
la
l ín ea
calculando
curva
en
permitía
tip o
de
fluorescente.
A partir
cuantificar
sustancias
figura
El
resto
mediante
de
de
de
un
p or
la
12)
que
de
las
de
este momento,
se
(emisión fluorescente
de
de
condiciones
la p l a c a d o n d e
Este blanco
era
el
como
que
máximo
medición
-56-
relativa
precisión
sustancia.Estos
la
pesaje
lo q u e s e o p t ó
á re a.
a partir
blanco
cada
p or
(ver
cuantificando
el
para
a aquellas
aunque,
el
salvaje.
una mayor
necesario
las m i s m a s
de un punto
mediante
la c a n t i d a d
individuo
Los
a continuación
de p r e c i s i ó n .
de mayor
mediante
fluorescente,
mancha,
para
mancha.
la
sepiapterina
placa
cada
de
solo
mancha
de
así
papel
considerablemente,
y
combinando
el
tiempo
este método
barridos
exacto.
calcular
este método
hacer
más
la
al
por
emisión
resultado
bajo
frente
optó
y área
condiciones,
podía
la m i s m a
distinta
las m a n c h a s ,
en u na b a lanza
aumentó
restringir
se
con
un
como
comprendida
cada sustancia
el
en
tomando
los r e c o r t a b l e s
estas
a esto,
de c o n c e n t r a c i ó n
permitía
manchas
tuvieran
fluorescente.
la e m i s i ó n
que
blancos
de
la
emisión
de m e d i c i ó n
no
existía
luego
se
de
la
ninguna
restado
del
150-
100 -
50-
10
20
300-
200-
100 -
40
80
Fiigura 12.- Curvas de concentración de la drosopterina (DP) y
la sepiapterina (SP) obtenidas mediante barrido de
fluorescencia de la mancha.
En ordenadas se representa la superficie
abcisas el n 9 de cabezas del extracto.
(mm2 ) y en
valor
de c a d a
no e s t a b a
grosor
mancha»
afectado
de
la
diferencias
La
capa
en
que
utilizados
la q u e
no p r e s e n t a
en
dicha
presentaba
que
no
un
muy
esta f l uorescencia
oxidación
esta
de
que
de
las
f 1u o r e s c e n c i a
intervalo
de
utilizando
fluorescencia
sin
los
largo,
m a s el
afectada
área
varios
más
si
la
solventes,
cromatogramas
en
la
se p o d í a d et e c t a r
una
pero
puede
La
s er
r a z ó n de
debida
dentro
barrido
de
la m a n c h a ) .
que
que producen
de
esta
de
a
fluorescente.
ambientales
cuantificamos
a
fluorescente,
reacción desconocida
similares
-58-
sobre
forma
otros
la A D H P u n a s u s t a n c i a
condiciones
ha
algún método
positivo,
en
de
se
por
de
sustancia
a alguna
método
ya
esta sustancia.
se c o n o c e ,
son
una
superficie
Como
resultado
a l t a de
o
la
sustancia
secar
tiempo,
el
la
la A D H P a u n a
de agua,
a partir
Aceptando
el
los s o l v e n t e s
intentamos buscar
tiempo
no
es
la s u p e r f i c i e
verse
fluorescencia
dejando
en
placa.
puede
probar,
durante
la p é r d i d a
en
conllevaban
(ADHP)
determinar
la
cuantificar
sustancia
fluorescencia
en
razón»
Tras
oscuridad
que
c r o m a t o g r á f i c o . Su m étodo
en
mancha
precisa.
produzca
las c u a l e s
apartados anteriores»
permitiera
descubrimos
método
se e x t en dí a
Por
un dato
variaciones
fluorescencia
consistía
de una
factores.
una
obtenía
pequeñas
de celulosa»
en nuestro
mencionado
que
las
que se
la e m i s i ó n f l u o r e s c e n t e .
cuantificación
la p l a c a
por
lo
6-aceti Id ih i d r o h o m o p t e r i n a
sustancia
sobre
con
( que
Ver
un co rt o
sustancia
incluye
la
figura
13.
150
E
E
<
LD
100 -
40
80
Ni DE C A B E Z A S
Figura 1 3 . - Curva de concentración de la acetildihidrohomopterina
obtenida mediante barrido de fluorescencia.
Se utilizaron extractos de la cepa Henna recessive-3.
La flecha indica el intervalo de la curva en el que
se trabajó.
Las
condiciones
excitación
que se
n m y de e m i s i ó n
h a b ía n estado
1 semana.
los c a s o s
pequeño
cepa
^68
medían
durante
de m e d i c i ó n f u e r o n :
en
que
tipo
salvaje
En a l g u n o s
de
todas
solvente
amónico
en e x t r a c t o s
red > red
de
cromatogramas
oscura
únicamente
intervalo
los q u e
En
de
mutantes
no
al
los
era
en
tiempo
como
la
la
experimentos
de
la b i o p t e r i n a
unidimensional
(**5 m i n u t o s ) .
3*/»
cuando se c u a n t i f i c ó
moscas
recién
necesaria
se u t i l iz ó
triptófano»
cromatografía
utilizado
de
onda
la c á m a r a
las p t e r i d i n a s »
la d i e t a c o n
por
cloruro
un
las c e p a s
experimentos en
fue c u a n t i f i c a d
también
ta nt o
unidimensional.
suplementación
f ue
de
de
( O r e g o n R).
la c u a n t i f i c a c i ó n d e
cromatografía
en
Los
fue utilizado
dentro
se c u a n t i f i c a b a n
5 1 S nm.
secándose
Este método
los
longitud
nacidas
Este
e n el
método
la b i o p t e r i n a
de
las c e p a s
en
y Dr—R .
C u a n t if i c a c ió n_de_i_sgxant o p t e r i n a
E n el
apartado
cuantificación
p t e r i d i n a s por
hemos
anterior
conjunta
sensible
y
un
preciso
isoxantopterina.
mayor itariamente
mientras que
de
cromatografía
desarrollado
la c a n t i d a d
los m é t o d o s
isoxantopterina
en capa fina.
que r e s u l t a
para
la
testículos
q u e se d e t e c t a
“
60
-
otras
bastante
cuantificación
sustancia
los
y
se
de
de
Posteriormente
método
Esta
en
se d e s c r i b e n
más
de
acumula
los
en cabezas
machos»
es m u y
b a ja .
Por
otro
presentes
lado,
en
los
comparativamente
intentamos
en
Tras
las o t r a s
detectado
nm
el
Oregon R
Los
machos
El
método
e n E mi
se
de
midió
(longitud
emisión
comparamos
apenas
a 408
resultados
como
las o t r a s
la f i g u r a
al
o tr o
método
cual
lado»
y
de
nm;
de
tenían
se utilizó
no
se
le h a
se u t i l i z a r o n
hembras,
pues
isoxantopterina,
del
obtenidos
se
resto
pero
de
observan
las
en
la
los v a l o r e s d e m a c h o s
y hembras
que
del
resto
de
las
Sin
embargo,
si
el
máximo
los v a l o r e s
el
los c u e r p o s »
poseen
efecto
del
3%.
de
de machos y h e m b r a s de m a r r o n - 1 i k e
los d e O r e g o n R p o d e m o s
de
en
similares
aprecia
es
que s o b r e
c u e r p o s de machos
Comparando
se
pteridinas
presentes
cantidades
pteridinas.
17.). E n
de
razón»
isoxantopterina
los e x t r a c t a s »
y
baja»
esta
cabeza.
de
mutante marron-like,
últimas
E.
efecto
i s o x a n t o p t e r i n a . Por
presentan
efecto
Po r
de
E cuerpos
350
el
pteridinas
comparativamente
tabla
cantidad
centrifugar
a
calcular
testigo
estas
bastante
isoxantopterina.
la
pteridinas
d e e m i s i ó n y e x c i t a c i ó n 5 n m) .
Para
como
es
en un e s p e c t r o f l u o r ¿ m e t r o
de e x c i t a c i ó n
rendijas
de o t r as
c u e r p o s de machos s i n
fluorescencia
onda
con
la d e
en h o m o g en ei z ar
agua destilada.
su
a
cantidad
cuerpos
determinar
directamente
consistió
la
afirmar
con
seguridad
p t e r i d i n a s es d e s p r e c i a b l e
14 p u e d e o b s e r v a r s e
curva de c o n ce n tr ac i ón .
-61-
la
que
el
( me n or
del
linealidad
de
la
FLUORESCENCIA
30-
100
50
o/o O R E G O N
R
Figura 14.-Curva de concentración de la isoxantopterina obtenida
mediante el método de cuantificación en cubeta.
Tabla 5.— Cuantificación de isoxantopterina en cubeta
Cepa
%_üregcm_R
Fluorescencia
57.5 + 2.0
100.0
hembras
1.8 + 0.1
3.2
machos
0.6 + 0.0
1.0
hembras
0.6 + 0.0
1.0
machos
Or-R
m al
<
C u a n t ifi.caci.ó n_.de!. p i g m e n t o _ m a r r ó n
En
el
experimento
ciclohidrolasa
suplementada
cantidad
detectar
de
la c e p a
cuantificación
de
en
red,
había
cuya
con 3-hidroxiquinurenina»
relativa
cual
de
había
de
pigmento
sido
dieta
se
la G T P
sido
cuantificó
m a r r ó n como
la a s i m i l a c i ó n p o r
método
la
para
l as m o s c a s
de
3-hidroxiquinurenina.
El
a¿.
el
método
(1985)»
número
parejas
de
de
al
utilizado
c ual
por
para
basado
le i n t r o d u j o
m o s c a s utilizado.
moscas
repeticiones
se
está
cada
c e pa .
-63—
una
en
el d e R e al
modificación
Se e m p l e a r o n
solamente
cuantificación» haciendo
en
10
2
et
D e t ec c i.ó n _ d e _ m e tabg21tgs_de_.l a _ r y ta_ de_5_ín t e s i,s _ d el.
e I g m e n t g _ f n a r r ó n _ e g r _ c r o m a t g g r a f ía _ e n _ e a g e l
En
la
los e x p e r i m e n t o s
biosíntesis
del
de c r o m a t o g r a f í a
Ikemoto
x g
marrón
papel.
en
de
El
de
0 . 3 mi
el
papel
posteriormente
(4:1:1)
gramos)
(2 m i n u t o s ) *
hoja
e n el
4-nitralina
1-2
dias
de m e t a n o l .
de
Tras
n°
1*
solución
técnica
basado
y m e d ia .
Después
pulverizados
fueron
de
en
en agua).
Tras
observados
a
Otro
el
la
de
obtuvo
empleado
1975).
cromatogramas
36%
y
5 mi
de
mi
de
37.5
con 0.5
agregando
de sodio
*
de
unidimensionales
-64-
a
(20%
fueron
la a m b i e n t a l .
el
de
0.5
4-dimeti laminobenzaldehído-ácido
C1H
en frío
Ehrlich
( pa ra
La s ol uc i ón de p u l v e r i z a c i ó n
mezclando
de
( Mer ck ,
cromatogramas
fue
los
fenoles
de a ce tato
los
sobre
una solu ci ón
para
ultravioleta y a
método
(Mer ck ,
de
a
acético/agua
(5% e n a g u a ) *
solución
secado
luz
centrifugar
aplicado
(0.5% e n C 1 H 2N)
de sodio
fueron
de secados*
con
(tamponada)
nitrito
15 mi
edad
s o l v e n t e butano 1/ácido
diazodada
continuación
de
de
desarrollándose
La s o l u c i ó n fue o b t en id a m ez c l a n d o
aminas)
la
está
sobrenadante fue
s o l u c i ó n d e 4 - n i t r a n i 1 ina
mi
se uti li zó
método
Whatman
durante una hora
cromatogramas
1975).
en
(0*1
homogeneizadas
una
pigmento
de m e t a b o l i t o s
(1981).
Pupas
15600
de d et e c c i ó n
gr.
acético
metanol).
con
en 50
se
de
mi
( 1 2. 5
Se
realizaron
los
solventes
n-butano1/ácido
acético/agua
i s o p r o p a n o 1/ a c e t a t o
desarrollo
f u e r on de 2
respectivamente.
en
el
fueron
y
con 45
vez,
1-2 d ia s d e
centrifugación
en
los
fueron pulverizados
con
secar
a
en una
4 horas
su
estufa
minutos»
en
0.2
en
mi
de
extracto,
y se
se
aplicaron
los c r o m a t o g r a m a s
y
tras
su s e c a d o ,
la s o l u c i ó n d e E h r l i c h y
durante
de
consistió
d el
solventes
tiempos
mencionados
edad
luego,
y
cromatografías
sobrenadante
de cromatografía;
colocados
Los
empleado
3 0 m i c r o l i t r o s del
papel
(1:1).
solventes
método
40 pupa s de
la
a
los
El
Tras
recogieron
horas
con
anteriormente.
homogeneizar
2%
Se hicieron,
bidimensionales
metanol.
amónico
(4:1 si)
dejados
15 m i n u t o s .
ifieación_de_3z hidroxiguinurenina
El
Ryall
método
procedimiento
y Howells
de
homogenizadas
2
en
otra
de 0.4
agua
se
dias
los
x g durante
muestras
de
el
1.2 mi
continuación,
15600
mi
( 1974),
cual
es una
de d e t e c c i ó n de o - a m i n o f e n o l e s
Pupas
a
usado está b a s a d o
absorbancia
e da d
de ác id o
mi.
Una
añadieron
fue medida
fueron
Del
como b l a n c o ,
400
-65-
Inagami
nm,
de
del
( 1 95 4 ).
gramos)
fueron
al
10%;
centrifugados
(a la q u e
0 . 4 mi de 0 . 1 %
a
modificación
s o b r e n a d a n t e se
de e l l a s
sirvió
(0.1
método
tricloroacético
extractos
15 m i n u t o s .
destilada)
le
de
de
e n el
tomaron
se añ ad i ó
mientras
nitrito
a
sódico.
cuatro minutos
a
0.4
la
La
después
de
la a d i c i ó n
la c u r v a
del
NalMDa .En
la f i g u r a
15 p u e d e
observarse
d e c o n c e n t r a c i ó n p a r a Q r — R.
Cuantificación_de_drgsogterinas
Las
d r o s o p t e r i n a s se c u a n t i f i c a r o n
en c r o m a t o g r a f í a
método
descrito
fina.
Sin
necesaria
en
capa
e n el
embargo»
más
de
celulosa»
según
a p a r t a d o de c r o m a t o g r a f í a
en
que
d r o s o p ter i n a s , se
fina
individualmente
algunos c a so s
la
medición
utilizó
el
en
en
los q u e
conjunta
método
de
Real
el
capa
no e r a
de
las
et
al_.
( 1985).
Diez
cabezas
seccionadas
s i t u a d a s en
22
horas
(5
de
machos
longitudinalmente
1 mi
(bajo
este periodo,
de alcohol
y
por
etílico
5
la
de
hembras)
mitad
acidificado
fueron
durante
condiciones
de o s c u r i d a d
a 25°C).
la s o l u c i ó n fue
centrifugada
a
la a b s o r b a n c i a
medida
determinaciones
por
a
cepa
480
nm.
(ver f i g u r a
Se
15600
hicieron
2
Tras
x g y
ó
3
16).
2.6 Medición de la actividad GTP ciclohidrolasa
Separación
del.
enzima
de
l_qs
compuestos
Í I o p r e s c e n t e s _ d e _ b a ¿g_pesg_mgl.ecu.lar
Para
conseguir
la
separación
-66-
de
la s p r o t e i n a s
de
<
5 o 500-
z
<
ffl
cr
O
(/)
00
<
0.250-
50
150
100
PESO
P U P A S («9)
Figura 15.- Cuantificación de 3-hidroxiquinurenina.
Curva de concentración de Oregon R.
Figura 16.-Curva de concentración de las drosopterinas, medidas
según el método de Real et al. (1985).
los c o m p u e s t o s
se p r o b a r o n
2)
2 métodos:
separación
El
gran
fluorescentes
p or
primer
cantidad
de
reproducibles.
de
sephadex
1) u t i l i z a c i ó n
necesitar
fue desca r ta do
activo
los e x t r a c t o s y
segundo
x 3 cm.
fácilmente
de
de bajo
molecular,
p er o
original
recurrió
al
método
utiliza
pequeñas
de c en t r í f u g a .
5.5
x
sobre
1 cm
un
sobre
(1 00 0
de
tubo
la
de Neal
toda
la
resultados
con una
columna
las p r o t e i n a s
los c o m p u e s t o s
fluorescentes
presentaba
el
Florini
defecto
Para
G-25,
y,
tr as
el
acopladas
las c u a l e s
de que
evitarlo
(1 97 3) ,
ensayos utilizamos
centrífuga
una
Con este méto d o
y
nuestros
y
se
c ua l
a tubos
columnas
de
eran colocadas
poner
las
columna,
se c e n t r i f u g a b a
a bajas
comprobar
la
de
muestras
revoluciones
x g ).
Para
las p t e r i d i n a s ,
suero
se p r o b ó
quedaba muy diluida.
sephadex
de
eliminar
obtener
columnas de sephadex
En
al
para
no
método
se s e p a r a b a n
la m u e s t r a
activo
método
de 50
peso
de c a r b ó n
G-25.
carbón
El
p t e r i d i ñ a s )*
c r o m a t o g r a f í a en S e p h a d e x
de
fluorescencia
(principalmente
bovina
se
como
separación
realizó
una
prueba
pteridinas.
97*/.
de
la
p r o t e i n a se r e c o b r a
0.5
mi
de
la
pteridinas,
los 2 . 5
En
la f i g u r a
solución
1 . 5 mi
por
con
proteina y sepiapterina
como
continuación,
la s p r o t e i n a s
el
de
agua
de
contrario
mi.
69
-
t r as h a c e r
albúmina
0.5
en
de
y f o r m i l p t e r i na
17 p u e d e o b s e r v a r s e
de
-
albúmina
de
pasar
y
el
primero
añadir,
0.5
sol o s e e l u í a n
como
mi.
a partir
a
Las
de
PROTEINA
ELUIDAC/.)
100 —
50—
0.5
1
1.5
2
2.5
V OL U M E N (mi)
Figura 17.- Separación de pteridinas y albúmina de suero bovino
en columnas de Sephadex G-25 según el método de
Neal y Florini (1973).
La flecha indica el momento a partir del cual c o ­
mienzan a eluirse las pteridinas.
Las
proteinas
pruebas
se
de D r o s o p h i l a
separación
del
clara que
con
molecular
mucho
la a c t i v i d a d
mientras
que
G TP
albúmina,
ya
a
los e x t r a c t o s
su
vez,
ciclohidrolasa
q ue
la p r i m e r a
En este caso
enzimática
que en
con
demostraban,
enzima
m a yo r .
hicieron
era
la
aún más
tiene un peso
alrededor
se o b t e n í a e n
que
de
d el
75%
los p r i m e r o
los s i g u i e n t e s se r e c u p e r a b a
de
0 . 4 mi,
casi
el
25%
restante.
E n s a y o _ e n z i.mát ¿co
Se r e c o g i e r o n
emergencia
del
moscas adultas
adulto.
-20 °C y m a n t e n i d a s
a
dos
semanas
se e m p l e a r o n
hembras),
una
E DTA,
2 mM
que
fueron
minutos.
Para
el
de
fueron
sobrenadante
se
era
aplicado
a
la
misma
recogió
y
solución
a 1 000
x g durante
0 . 4 mi
de
2
la s o l u c i ó n
el
ensayo
enzimático
<30
de machos y 30
0.1
M
cloruro
extractos
libres
de
de
Neal
mi
y se r e p e t í a
-71 -
10 m M
Los
durante
2
pteridinas,
se
( 19 7 3) .
el
Del
cual
(equilibradas
Tras
se v o l v í a
de
de
sódico.
de e x t r a c t o c r u d o ,
h o m o g e n i z a d o ).
minutos,
g
y Florini
de s e p h a d e x
mi
<pH=8.5),
x
q u e el
a
inferiores
15600
las c o l u m n a s
congeladas
tiempo
a
0.4
la
de
M Tris C1H
centrifugados
procedimiento
desde
h o m o g e n e i z a d a s en 0. 6
0.1
sódica
obtener
Para
mosca
contenía
azida
fueron
por e s p a c i o s
vabezas
extractos
utilizó
así
las c u a l e s
solución
Estas moscas
a n t e s d e su uso.
60
de 0 - 8 h o r a s
en
centrifugar
a añadir
otros
la c e n t r i f u g a c i ó n .
De
esta
forma»
las
dos
c a si
Las
Brown
GTP
con
0 . 2 mM.
(0.E
lo
a 42 "C en
reacción
se
c o n 2 mi
ensayo
de C1H
fluorescente
( 1 gr
agua)
0.1
fue
de
de
ascórbico
N.
La
midiendo
iodo
emisión
cantidad
El
sin
M.
en
para
actividad
de
su
10 nm.
de
mi
de
Una
forma
que
extractos
fue
enzima
y
del
un
en
poco
100
mi
se o b t e n í a
mucho
la
más
eliminar
el
de ácido
llevada
a pH
determinada
de
medición
de e x c i t a c i ó n
a 370
de e x c i t a c i ó n
de e n z i m a f u e d e f i n i d a
-72-
medio
espectrofluorímetro
rendijas
q u e e ra c a p a z
La
s o l u c i ó n de
0 . 0 5 mi
fue
nm
hora.
era
Para
se a ñ a d i ó
l o n g i t u d de o n d a
unidad
una
potásico
condiciones
45 4
eran
muy
MPF-44B.
a
1
era
en
emisión
de e n s a y o
que
fluorescencia
fueron:
la f r a c c i ó n
una concentración
la s o l u c i ó n
Las
y
enzimático
De e s t a
los
Fan
de r e a c c i ó n
reducida.
ú l ti m o,
fueron
y
la a c i d i f i c a c i ó n
reaccionar
Por
a
durante
compuesto
forma
(1977)
tubos
i o d ur o
15 m i n u t o s .
la
al..
los
0.1
y 2 gr de
enzimático
obtenía
producto
con
0 . 4 M.
utilizadas
se
oscuridad
de T r i s
Perkin-Elmer
nm y de
recogía
y usadas
fue a ña d id o
trifosfato)
iod o
que
0.1
1 mi
la
trifosfato,
fluorescente
exceso
que
oxidado
durante
neopterina
mi)
detenía mediante
(d i h i d r o n e o p t e r i n a
8 con
el
A continuación,
incubados
de
para
p a r c i a l m e n t e d e F u k u s h i m a et
de
se
éstas eran co m b i n a d a s
condiciones
cromatográfica
iodo
enzima buscado
enzimáticos.
( 19 76 ) .
final
100*/. del
fracciones;
los e n s a y o s
tomadas
el
de producir
como
y
la
1 n m o 1 de
dihidroneopterina
Para
producto
al
no
trifosfato
determinar
oxidado
de
existir
solución
proceso
la
adición
oxidación,
lado,
sometidas
se d e t e r m i n ó
esto,
de
y,
de
en
se
utiliza
fosfato,
la
partiendo
una
que po se í an
gráfica
la
analizadas,
tipo
en
Estas
los e n s a y o s
coeficiente
de
trifosfato
(5.1
solución.
Tras
de c o n c e n t r a c i ó n con esta cepa.
actividad
utilizado
( G r e g o n R),
en cada
enzimática
-73-
con
Se
poder
de
sobre
se
la
siendo
Para
porcentajes
una curva
otro
la
enzimática,
de
la
de
18).
actividad
de c a b e z a s
salvaje
se
(exceptuando
las m u e s t r a s ,
(figura
cepas
de
cual
los v a l o r e s d e f l u o r e s c e n c i a
diferentes
unidades
la
muestras
dihidroneopterina
los v a l o r e s de a c t i v i d a d
número
de
una
p r o d u c i d a tras
del
la c o n c e n t r a c i ó n d e
la c e p a
obtener
en
en
transformar
el
d e la
en
protocolo
absorbancia
nanomoles
representados
un
e n el e s p e c t r o f l u o r í m e t r o . P or
se r e l a c i o n a r o n
cantidad
fosfato,
al m i s m o
que
la
inicial
m M - 1 ), s e c a l c u l ó
la
tiene
p a r e c i d o al
consistió
La n eo p te ri n a
extinción molar
a
de diferentes c o n c e n t r a c i o n e s .
fue medida
solución
sustancia
muy
del
se recurrió,
comercialmente,
m o l ar
seguido
de GTP)
enzimáticos.
1 nmol
trifosfato.
muestras
fueron
de
trifosfato
Esta
de d i h i d r o n e o p t e r i n a
extrajeron
muestras
fosfato.
de reacción.
fluorescente
sustancia
de e x t i nc i ón
dihidroneopterina
El
val or
la n e o p t e r i n a
ésta
dihidroneopterina
coeficiente
el
en 6 0 m i n u t o s
las
la
realizó
compararon
extracto
obtenidas
con
las
en
los
FLUORESCENCIA
120 -
60-
4
8
NANOMOLES
NP-P
Figura 18.-Curva de concentración de la neopterina fosfato
ENZIMATICA
ACTIVIDAD
5-
50
100
N2 DE C A B E Z A S
Figura 19 . - Curva de concentración de la actividad de la
enzima GTP ciclohidrolasa.
ensayos.
La
existencia
gráfica
de una
comportamiento
Weisberg
y
que para
el
mucho
2.7.
más
obtenida
ligera
de
(figura
cooperatividad
la e n z i m a ha s i do
O'Donnell
(19B6)
t ampón fosfato»
19)
positiva.
detectado
e n el
mostró
Este
también
tampón Tris»
la c o o p e r a t i v i d a d
la
p or
mientras
positiva
es
a l ta .
Ensayo
de
las
actividades
enzimáticas biopterina
si n t a s a y d i h i d r o p t e r í n ox idasa
El
método
Jacobson
(19 85 ).
hembras)
del
utilizado
entre
adulto»
congelador
a
-20®C
centrifugados
fin
en
el
desde
habían
Los
columnas
apartado
machos
y
y
100
la e m e r g e n c i a
mantenidas
extractos
separar
del
de
Ferré
en
en
1.5 mi
obtenidos
el
de
fueron
x g d u r a n t e 30 m i n u t o s .
de
mi
sido
de
homogenizadas
fluorescentes
a l i q u o t a s de 0.4
pequeñas
horas de edad
M.
a 43700
el
compuestos
(100
fueron
0.1
e n el
moscas
cuales
tampón fosfato
Con
Doscientas
36 y 48
las
está basado
de
las
proteínas
bajo
peso
sobrenadante
fueron
sephadex
dedicado
G- 25 »
al
tal
ensayo
de
como
de
los
molecular»
pasadas
se
por
describe
la a c t i v i d a d
GTP
ciclohidrolasa.
Para
llevar
biopterina
sintasa
0.015 mM en
un
el
de
ensayo
a
cabo
se añadió
volumen
f i n al
actividad
el
ensayo
NADPH 2
de
mM
1.5 mi»
de
la a c t i v i d a d
y
sepiapterina
mientras
dihidropterín oxidasa
-76-
que para
se
añadió
únicamente
extractos
horas
el
fueron
a 3 7 ° C,
un c a r t u c h o
retenida
eluida
e n el
en
E mi
extractos
sin
( W at er s) .
cartucho
siendo,
en
sustrato,
hervir
el
extracto
c o n el
sustrato
valores
equivalentes.
durante
el
los
Sep-Pak
en
de
de
un
y emisión
t r as
de
nm y
sintasa
los e n s a y o s
cual
era
añadido
de S e p - P a k
e
Para
de
de
quedaba
con
a g u a,
incubar
por
La
sin
fue determinada
los e n s a y o s
cartucho
(longitud
y
la
de
de onda
de
rendijas
de
dihidropterín
entre
los
l os q u e q u e d a b a n
NADPH.
restando
enzimáticos
e n z i m á t i c o s c o n N A D PH .
-77-
se midió
diferencia
iniciales
en
m e t a b o 1 izados
a 5 E 0 nm,
la
dieron
calculadas
actividad
po r
en
posteriormente
e l u i d a del
emisión
antes
o t ro ,
Ambos blancos
fueron
los
de r e acción
cuantificarlos,
lOnm).
ensayos
momentos
sepiapterina
enzimáticos
de
y,
incubarlo
reacción.
de
en
condiciones
enzimáticas
de s e p i a p t e r i n a
sepiapterina
la d e
la
determinada
los e n s a y o s
biopterina
a través
ambos
lado,
espectrofluorímetro
excitación
nanomoles
un
la s e p i a p t e r i n a
a 4E0
fue
el
nanomoles
excitación
oxidasa
E
lavado
para
las m i s m a s
enzimático
reacción.
fluorescencia
tras un
por
cartucho
actividades
la
durante
La s e p i a p t e r i n a
utilizados
por
a
pasar
Estos
de metanol.
de p a s a r l o
base
oscuridad
se h i c i e r o n
consistieron,
el
(sepiapterina).
la
Sep-Pak
proteicos
Las
en
lo cual
blancos
enzimáticos
de r e a c c i ó n
incubados
tras
de
Los
pero
sustrato
La
actividad
los n a n o m o l e s
sin NADPH
de
RESULTADOS
23.1. S í n t e s i s de c e p a s d o b l e s mutan t e s de c o l o r de o jos
Utilizando
03jos d e s c r i t a s
ssintet i z a r o n
dde c o l o r
p^ara
de
las
en
el
o j os .
de m u ta nt es
apartado
doscientas
Una
los e s t u d i o s
A
cepas
de
del
se
mnutantes
sintetizadas»
indicando
I-Hay
hacer
la m a y o r
iindica»
en
muchas
r re c i é n
nacidas
aidquieren
con
Los
t;ipos d e
ma ar r ón
cepas»
la e d a d
(a d ).
p or
la m e z c l a
marrón
dirosopteri ñ a s , que
la
ccolor
este
e?l c o l o r
del
ojo.
t ipo
Este
m a os c as d e
la c e p a
piigmentos
(amarillos)»
orjos,
o¡jos d e
según
color
e;ste c o l o r
la
según
pero
de ojos
varía
dicha
ojos
y
cuales
al
r a z ó n se
moscas
las m o s c a s
adultas
-79—
po r
un
tres
color
de ox i dación;
solo
las
la s e p i a p t e r i n a
la e d a d
poseen
tipos
de u n a s
en negro
y
el
oscurecen
fácilmente
un
tipo
de color
recién nacidas
convertirse
están
jóvenes p roducen
con
cabo
con
en
puede observarse
moscas
pero
J
rojo;
presentan dos
Las
hasta
dobles
observado.
presenta
que en moscas
l as
amarillo»
fue utilizada
observados
su e s t a d o
color
cambio
e d ad .
que
de pigmentos
cn_se»
oscurece,
colores
mutantes
los c o l o r e s p r o d u c i d o s
presentan
amarillos»
que
se
ojos
P or
de
y métodos»
cepas
de
color
color
xantomatina,
rojizo»
color
color
de
de
o itros p i g m e n t o s
amarillo;
el
el
tipos
el
de
pteridinas.
las
las c ep as .
tanto
como
cepas
todas
de color
dobles
pa trón de
q u e el
de
(rn)
pigmentos:
o
de
parte
diferentes
ccompuestos
citan
la s a l v e d a d
en
cepas
s e l e c c i ó n de e s t a s
cuantitativos
lia e d a d
material
t r einta y ocho
continuación
que
simples
en
de
de
presentan
pocas
horas
en moscas
de
varios dias de edad.
Las
■(forma
cepas
que,
primero
rmutante e n
después
otro
Has
de
el
cepas
Has
el
uno
alfabético,
dke,
l
t
,
e n el
y,
de
p or
que para
itd,
cd,
y/, p a r a
el
cromosoma
ras,
y y.
Algunas
de
gjenes m u t a n t e s
fueron
aibrevi a t u r a s
En
X:
después
parte
dde c a d a
dd en t ro
cepa ,
de
la
se cita
t a b la ,
la
e n el
la
de
situadas
e n el
cepas
sería:
sf;
que
bw,
para
d o r , g,
el
se p u e d e
-8 0 -
sn b
y st;
a
ED»
los d o s
morfológicas
síntesis.
entre
Las
paréntesis
de ojos.
se ha d e t e r m i n a d o
localización más
y
tercer
IA ><>
junto
su
el., en,
el
r s e , r y , se,
la d e s c r i p c i ó n del
tabla
después
orden
de m u t a c i o n e s
las de c o l o r
Para
último
el
aparecen
estas
y por
seguido
facilitar
mutaciones
y
Dentro
son portadoras,
para
final
y
X
X).
c h o , cm,
d e o jo s ,
de
cromosoma
cromosoma
ha
red,
b o , car,
de
pjatrón de pteri di na s .
al
Pu ^
tercero,
cromosoma,
cromosoma
gr,
las c e p a s
de estas
e ?stos p a t r o n e s ,
se
H n r 3 , k a r , g,
utilizadas
una
segundo
de
de un gen
el
tercero,
las del
segundo
go,
en
mutaciones
grupos
de color
iinmediatamente
dos
último,
el
gd ,
o e n el
las del
estos
ca,
q^ue
cromosoma
(primero
cromosoma:
rb
cromosoma
las
ordenadas
las c e p a s p o r t a d o r a s
llevan un gen mutante
tercero
cada
sido
otro
llevan
cromosoma
del
dan
han
y
segunda
que
matantes
se
segundo
las q u e
en
mismo
de do b le s
número
sencilla
color
de
localizar.
la
el
de
de ojo s
cepa,
Cegas
&Qr^ad^ras_de_un_gen_mutant e__en_e l__segundg_crgmgsgma
y _ o t r o__en_e ¿ _ t ere e r g
bw
ca --
a m a r i l l e n t o parduzco,más
Tabla
b w cd
10,
n°
blanco
ligeramente
hasta
marrón
muy claro
bw
HnrEÍ
e p i s t á t i c o bw.
bw
kar
--
b w p --bw
red
(ri)
b w r s s ---
(rn).
(rn). S e o s c u r e c e
algo»
(a d ). T a b l a
n°
10»
12.
(rn).
parduzco
marrón
10,
sucio
marrón claro
amarillento
Tabla
quebw
1.
---
(cu)
claro
(rn).
amarillento,
con una
zona
incolora.
6.
amarillento
parduzco
(rn).
Marrón
más
anaranjado
(a d ) .
bw
ry ---
epistático
bw.
b w s e ---
epistático
bw.
bw
--
snb
edad
b w st
el
c a
el
cd
amarillento claro
a naranja
---
epistático
---
el
Hn^3
el
kar
(rn). O s c u r e c e
nunca oscuro
con
la
(ad).
blanco.
naranja
oscuras
el
parduzco,
sucio
tipo
Tabla
ca
(rn).
7,
n Ci 11.
Oscurece a tonalidades
muy
(a d ).
(ri)
(cu)
ca.
algo
---
granate
con o c e l o s
se.
Tabla
7,
con ocelos blancos
(rn).
Epistático
blancos
el
p -----e p i s t á t i c o
el
red
(ri) ,
menos
g.
oscuro
oscuro
que
n ° 7.
(a d ).
Tabla
t ipo
7,
n®
red.
-81 -
12.
T a b l a 7,
n** 8 y t a b l a
11,
n~
a.
el
r s e ----
epistático r s = . Tabla
el
se
e d , d p c,a)
el
snb
el
s t ------ n a r a n j a
en ca
(h,
----
---
e n H n ’"3
a se
en rss
se
8,
Tabla
naranja
en snb
---
n°
8,
Oscurece
con
la
e d ad , s i n
n 0 8.
(rn).
Oscurece
r o jo y a l g o
con
la
edad
de pi g me n t o
al
marrón
17.
como
en,
pero
Tabla
11,
n 0 4.
con
6,
mayor
n°
claro.
marrón
T a b 1 a 8,
claro
n°
naranja,
---
(rn).
pigmento
rojo.
amarillo.
en
n° 6.
(rn).
sucio
muy
rojizo
pigmento
ry
claro
el
<a d ). T a b l a
en red
se. T a b l a 7,
O s c u r e c e a t ip o el. (a d ) .
(a d ). T a b l a
naranja
aumentar
en
(rn).
naranja
e n p ---
epistático
n° 26.
epistático s n b .
naranja
llegar
6»
con menor
p o r ce nt aj e de
porcentaje
de
rojo que
de
15.
Tabla
8,
n°
amarillento
1.
(rn).
Epistático
se
(a d ).
11.
naranja
traslúcido
(rn). Se
enrojece
un poco
(ad ) .
dke ca
<c)
Tabla
d k e cd
--9,
algo
más oscuro
naranja
bastante
(a d ). T a b l a
dke
HnT3
r i )
dke
kar
dke
p
(c,
(c)
(a d ).
n 0 15.
(c)
(c,
q u e ca (rn). O s c u r e c e
cu)
---
---
algo
t i po
9,
n°
epistático
rojizo
más
ca,
sucio
(rn).
Oscurece
16.
H n T'3 . T a b l a
anaranjado
parduzco
-82-
(rn).
q u e g (rn).
9,
n°
3.
Oscurece
Oscurece
(ad).
(ad).
Tabla 9, n° 17.
dke red
(c»
r i ) ----
dke
(c)
---
rse
granate
(ad) . T a b l a
dke
se
dke
snb
---
(c)
st
(c)
lt cd --lt
kar
rojizo
----
lt st
más
ltd
---
n ° 28.
cd
(tx»
ltd
ltd
kar
claro
naranja
casi
----
brillo
p
naranja
---
---
rsH
9,
n°
21.
rojizo
yp a r d o q u e
s nb
(rn).
ocular.
claro.
1
T a b l a 8,
brillante
H n 1"38
n°
10.
t.
con
zona
l.td o cd.
acaramelado»
hasta
con
n a r a n ja algo
incolora.
Tabla
algo
zona
9,
Tabla
n ° 6.
parduzco
incolora
(rn).
(a d ) . T a b l a
Tabla
claro
---
con
con
zona
con
de rojo
6»
sucio
(rn).
Granate
con
(a d ).
naranja
proporción
ltd
que
epistático
cierto
(ad).
Oscurece
19.
(cu)
r ed
(rn).
l t .
o beige.
claro
marrón brillante
ltd
más
con mancha
anaranjado
---
n°
Tabla
amarillento
b )
Oscurece
6,
se.
epistático
naranja
6,
ltd H n r 3
que r s s
n 0 6.
amarillento.
marrón
marrón
ltd c a
11»
(a d ).
lt s e -----
Tabla
n c> 17.
algo
naranja
---
más oscuro
epistático
---
(cu)
lt r e d
9,
(c)
Oscurece
dke
e p i s t á t i c o red.
naranja
claro
incolora
incolora
ligera
q u e de
n® 84 y
zona
Oscurece
(a d ). T a b l a
zona
amarillo
(rn).
incolora»
(rn).
Rojizo
tabla
11»
(rn).
M a r r ó n m uy claro»
-83-
6»
a
n ” 7.
mayor
oscuro
n° 7.
con algo
des n a r a n j a
y zona
incolora
ltd r>y ---
naranja
ltd s e
amarillento
ltd
---
smb
Marrón
ltd
stt
brillante
con
diistinguir.
---
pd
kar-
pd
p
(cu)
---
pd s t
po
st
('vg )
pr
ca
---
8 »
n
pr cd
°
pr p
((b»
naranja
más
(rn).
(ad).
st »
sucio
tal
pero
(rn).
vez a lg o
oscuro
difícil
de
Oscurece
(a d ) .
más anaranjado.
q u e E.r_st.
st.
n°
traslúcido
cercano
a ca
(rn).
Tabla
r i )
h)
(rn).
granate.
naranja
tipo
g.
T a b l a 8»
ca.
Tabla
rojizo
(a d ) .
8»
red.
---
epistático
ca si
epistático
Tabla
snb.
n a r a nj a claro.
-8¿t-
n 0 6.
Tabla
epistático
y rojizo.
((b)
Naranja
18.
epistático
osciuro
s t
incolora
(ad).
naranja muy difuminado»
<(cu)
pr
pr
algo
epistático
<b»
((b )
snb
zona
3 1 .
pr r ed
pr
s e (a d ).
g.
snb»
(b > )
rsE
que
rojizo
epistático
Tablla 9,
kar
incolora
Oscurece
rss .
----
pr H n 1""3
con
a
n r-' 13.
epistático
naranja
n° 3.
ca.
naranja
epistático
pd s n b
brillante
zona
6»
n a r a n j a (rn).
pd r s s
pr
Tabla
6,
(rn). O s c u r e c e
anaranjado
epistático
pd cd
sucio
claro
más
Tabla
amarillento.
naranja
-----
pd c a
claro
(ad).
9,
n0
19.
n° 32.
11»
n ° 9.
rsH t
aunque
algo
más
P u e cd
(Cy,
e)
--
Pu*2 kar
(Cy,
c u )
P u EÍ r s e
(Cy,
h )
P u E se
Pü e
(Cy,
8,
n°
st
(Cy)
h)
n a r an ja claro.
naranja
epistático
--
más
claro
----
que
n a r a n j a claro.
ca
(b)
epistático
sf
cd
(b)
calabaza
sf
kar
(b,
(b)
rsa .
se,
parduzco
oscuro.
Tabla
9.
sf
sf p
rojizo.
cu)
----
--
Tabla
9,
n°
7.
ca.
(rn).
naranja
sucio.
e p i s t á t i c o p.
Tabla
8,
n”
19.
sf
rsg
(b)
epistático
rs*2, l i g e r a m e n t e m á s
sf
smb
(b)
epistático
snb.
sf
red
(b,
sf
se
(b,
sf
st
(b)
ss)
h)
epistático
---- m á s o s c u r o
naranja
oscuro.
sf.
que
sf.
amarillento.
T a b l a 8,
n r-' SO.
Qsgas_gortadoras_de_un_gen_mutante_en_§l_crgmgsgma_X_y_otro
§!ID_§!Í_2K _°_íiI_3®E _ c r g m g s g m a
bo s e
c ar
epistático
bu*»
marrón
t iipo ca
car
c ar
cm
---
9„
n°
dkke
se.
claro
amarillento
(rn).
Rojizo
parduzco
<ad ) .
naranja
claro
(rn).
algo
más
Rojo
algo o sc u r o
(ad).
Tabla
8.
(c)
---
muucho,
pero
manteniendo
rcojizo
(a d ) . T a b l a
8,
n°
oscuro
siempre
l¿t.
-85-
que
un
c ar
(rn).
claro
Oscurece
componente
9
c ar
ltd --a l go
naranja
más
claro
parduzco
con
con
z ona
zona
incolora
c ar
ca ---
naranja
claro
parduzco
car
cd
naranja
claro
(rn).
---
incoloraa
(rn).
Rojo.
(rn).
Naranja
(<a d ). T a b l a
6,
n°
Rojjo
oscuro
(ad).
Rojjo
oscuro
tipo
Rojjo
oscuro
(a d ).
c¿
(ad).
ca r
kar
car
p ---el
---
(cu)
naranja
naranja claro
brillo
y un
alto
parduzco
parduzco
r s E ---
naranja
parduzco
ca r
s n b
naranja
claro
cho
bw
(se)
--- e p i s t á t i c o
c ho
el
(se,
e d , d p c,e)
Tabla
ch o
en
(se)
cho
dke
9,
7,
--
(se,
n°
lt
(se)
--
c ho
ltd
(se)
---
cho
pd
(se)
--
c ho
pr
c ho
Pue
cho
sf
parduzco
cho.
Qscuurece manteniendo
de r o j o
Rojo
osccuro
(rn).
Tabla
o sc u r o ,
(a d ).
Roojo
10,
(ad).
o s c u r o (a d )
.
nn° 7.
a l go
más
claro que
n° 9.
---
claro
oscuro,
(rn). N a r a n j a s
mucho
rojizo
más clarro
(ad).
q u e cho.
Tabla
9.
cho
(rn).
(rn).
muy
naranja
c)
(rn).
porcentaje
ca r
se.
(rn).
naranja
naranja
pardo
Oscurece
(se,
(Cy,
(se,
b)
---
se)
b)
sucio.
oscuro
a granate
marrón
---
---
claro
con
zona
inccolora.
con baja p r op o ar ci ón
oscuro
oscura
epistático
parduzcco
(rn).
de
naranja
(ad).
Oscuurece
(a d ).
cho.
epistático
cho
(individduos
claro
c ho
(rn).
viables pero
e s t é r i 1 e s ).
cho
cd
(se)
--
más
que
(ad) .
-8 6 -
(Oscurece
a
cho
ch o
HrT'3
cho
kar
(se,
((se,
r i )
ma rr ón oscuro
c u )
calabaza
tipo
sucio
c ho.
o marrón
(rn).
Oscurece
(ad ) ..
c ho
p
(ssc)
más
granaate
cho
red
anaranjada
que
g
(rn).
Oscurece
a
(a d ).
((se,
ri)
----
oscuros
tipo
cho
o red.
Tabla
11,
n°
5.
cho
rss
((se)
---
marrón
ch o
s nb
((se)
---
algo
cho
st
naranja
--
pardo
amarillento
c1 arco
(ad ) .
c m el
----
cm en
rojizo
----
cm dke
algo
naranja
B , n 0* 16
más
l t
naranja
cm
ltd
naranja
Naramja
claro
pr
naranja,
oscuro
cm c a----cm cd
(rn).
Tabla
(rn).
Rojo
7,
n°
algo
Naranja
parduzco
10.
oscuro
(a d ). T a b l a
anaranjado
más
8,
n°
claro
muy
que
(rn).
Oscurece
a
15.
que
1,t .
c l ar o ,
parduzco
cm
con zonaincolora
(rn).
(ad ) .
menos
rojizo
q u e c m (rn).
Rojizo.
Rojo
(ad ) .
c m P u F” (C " y )
(b))
claro
oscuro.
claro
cm
c m sf
amarillento.
<a d ) . T a b l a
---
q u e snb.
.
---
(c = )
g ra n aa t e
cm p
más parduzco
(ssc)
c m bw
cm
c l ar o .
epistático
epistático
cm
naranja parduzco
-- n a r a n j a r o j i z o
naranja
claro
cm.
(rn).
(rñ).
claro
Oscurece
(rn).
parduzco.
-87-
Rojo
algo
(a d ).
algo
oscuro
(a d ).
cm reed
---
epistático
c m r 5 J>s
cm
r
naranja
naranja
y
c m s e 1 ---
c as i
---
c m sntb
cm.
Tabla
parduzco.
naranja
claro
con
se.
parduzco
dor
biw
blanco
dor
ccd
amarillo
limón.
dor
c m
amarillo
limón.
dor
kear
d or
1+td
ligero
Oscurece
menos claro
ligeramente
marrón amarillento
(rn).
algo
<ad).
tinte marrón.
amarillento
blanco
g b w -----
n 0 3.
parduzco.
epistático
'(cu)
11»
que dqr_cn.
sucio.
claro
( más
amarillento
yc l a r o
qiue tbw) .
g el
'(sd j» d p ” 62» e d ) --tabla
7,
g e n ---n^
g dke
g
l t d
z
)
más
(Cy/)
(b)
g ca ---g cd
más
----
claro
6,
n°
que
T a b l a 6»
anaranjado
casi
6»
n°
10 y
r o j i z o <a d ).T a b l a
naranja
(cui).
naranja
g
(rn).
l.t. T a b l a 6»
Rojizo.
6»
Rojizo
n0 5.
n** 1.
q u e g.
Pua .
g.
claro parduzco.
i n a r a n j a c l a r o (rn).
naranja
que
10.
epistático
epistático
g H n r'3
g kar
Naranja
anaranjado
(a d ) . T a b l a
blanco.
g p r
g sf
c l a r o (rn).
más
algo
g Pua
Tabla
13.
naranja
oscuro
l t
el..
14t .
(c
g
n°
epistático
parduzco
parduzco
Rojizo
claro
(rn).
-8 8 -
(a d ).
(a d ) . O s c u r e c e
Parduzco
(a d ) .
rojizo
(a d ).
g p ----- n a r a n j a p a r d u z c o .
g r s £*í
naranja
65 » n°
g se
'(h)
parduzco
---
naranja
pn b w i
(y,
7,
rojo
(y,
c )
pn
---
naranja
n°
(a d ).
Tabla
6 , n°
9.
bw.
rojizo
algo
traslúcido
p n dkfe
p n po
Tabla
oscuro
(rn).
Oscurece
n0 ^ .
naranja
p r r o p o r c i ó n de
p n pr (y,
amarillento.
e d , d p ° e ) ---
(¿ad ) . T a b l a
6„
(ad).
parduzco.
epistático
ltd
algo
n a r a n j a p a r d u z c o (r n ). O s c u r e c e
g st ----- n a r a n j a c l a r o
pn en
Oscurece
6.
g snb) ---
p n el
<rn).
(rn).
Naranja
(a d ) . T a b l a 9,
oscuros
claro
n°
t i po p n . T a b l a
con
una gran
con
alta
1S.
9,
n 0 S.
zona
incolora.
Tabla
16.
vg)
(y,
rojizo
oscuro.
v g ) --- r o j i z o
T a b l a 9,
bastante
n 0 ¿f.
claros
(rn). O s c u r e c e
(a d ) .
pn ca
---
más b r i l l a n t e
que
p n cd
---
naranja claro
p a r d u z c o (rn). N a r a n j a
pn H n r3
(y,
pn
(cu)
kar
recién
p n p ---pn red
ri)
---
p n se
y conzona incolora
e p i s t á t i c o pn.
naranja
algo
Tabla
sucio
B,
(rn).
rojizo
(ad).
n ° S.
(más c l a r o
cuando
es
cantidad
de
nacido),
naranja tirando
(y»
ss)
amarillo
pn r s B
----
ca
---
y algo
a pn.
marrón
de
<y,
h)
---
(se,
h)
--- a l g o
ro jo .
rojizo
claro»
Tabla
con
11,
poca
n° 8 .
brillante.
más claro
-89-
que
se.
Tabla
8,
n 0 4.
pn
snb
---
pn s t
menos
claro
naranja
claro
ras
b w ---
epistático
ras
el
similar
ras
e n
---
ras
lt ---
ras
ltd
17.
ras
pr
(v g )
ras
ca
-----
9,
algo
naranja
n°
conzona
7,
incolora
n° 3.
(rn).
parduzco.
claro
c asi
oscuro. Tabla
13.
con
zona
epistático
naranja parduzco
brillo
cd
aunque más
amarillento
naranja
---
i n co l o r a .
bw.
(a d ). T a b l a
n°
ras
c on z ona
a ras»
naranja
Naranja
q u e g n_ ca .
incolora
ras.
Tabla
brillante
(rn).
9,
n°
Tabla
6,
10.
(rn).
Marrón
sin
(ad ) .
---
naranja
brillante
ras
H n 1^3
(ri)
ras
kar
(cu)
Naranja
claro
(a d ). T a b l a
con
zona
9,
n° 5.
epistático
---
ras.
naranja
c o n mayor
i n c o l o r a (rn).
T a b l a 8»
claro
proporción
con
de
Marrón
n ° 3.
zona
rojo
incolora
que
(rn).
de amari ll o
(ad) .
r a s p ---
marrón
ras
r s a ----
ra s
se
ras
snb
(h)
rb b w ---(ad).
rb e n
e p i s t á t i c o ras.
----
----
anaranjado.
más claro
q u e se.
naranja claro
c o n z on a
amarillento parduzco
Tabla
10,
naranja
rb
dke
(c)
----
rb
ltd
---
blanco.
Tabla
B>
n ° 5.
incolora.
(rn).
Marrón
rojizo
n°8.
claro
(rn).
e p i s t á t i c o rb.
Tabla
6,
naranja rojizo
T a b l a 6,
n° 8.
-9 0 -
n°
11.
(a d ) .
claro
rb
pd
rb
pr
---
más
claro
---
(b)
oscuro
que r b .
más
anaranjado
<a d ). T a b l a
más
6,
rb
Pu22
rb
sf
(b)
similar
rb
ca
---
naranja parduzco
rb
cd
(tx)
rb
H n r3
rb
kar
--(cu)
s u c io
rb
p ---
rb
red
n°
---
rb
s e ---
rb
snb
rb
st
naranja
---
claro
(rn).
Ro jo ,
parduzco
(rn).
Oscurece
rojizo
epistáticp
a lg o
T a b l a 6,
r b . Tabla
naranja amarillento
(a d ).
(a d ).
oscuro
(rn).
Naranja
n°
B.
6,
n° S 3
y
tabla
Tabla
10,
11,
parduzco.
s i m i l a r a se.
naranja parduzco.
---
naranja acaramelado.
blanco,
v el
---
anaranjado
n°
(c)
tinte
t ip o
rojo mate
naranja mate
de rojo.
Tabla
v pd
---
rojizo
v pr
---
naranja
(Cy)
(b)
con
algo
ca
rosado.
(rn).
O s c u r e c e a c¿
n 0 9.
(a d ). T a b l a
1.
lt ---
v sf
a cm
rb.
c l a ro .
parduzco.
---
v Pu^
que
naranja
v bw
v
similar
algo
10.
rss
v dke
Rojizo
(a d ).
(ri)
rb
7,
(rn).
a rb.
naranja
naranja
rb
n" SO.
anaranjado
---
q ue
---
---
B,
algo
c on mayor
n°
naranja
naranja
Tabla
porcentaje
8,
( b a s t a n t e s i m i l a r a y).
(rn).
claro.
claro
(rn).
-91-
n°
IB.
de a m a ri l lo
13.
anaranjado
claro
anaranjado.
que
v c a ---
naranja
v H n r'3
claro.
naranja
claro
a lg o
sucio
<rn).
Epistático
H n ra
(ad) .
v p --v red
---
n°
v s nb
naranja.
naranja
claro
con
z ona o c u l a r
incolora.
Tabla
11?
11.
---
n a r a n j a claro.
QsQ§s__por t adg ra s_ de _d os __ ge ne s _r n ut a nt e s_ _ en _e ¿ _2 ct_cro(rigsoma
b w pr
---
más
bw en
---
blanco. Tabla
bw
1t d
el
e n
el
ltd
el
pr
blanco.
naranja
---
---
granate
rojo
Tabla
e n pd ---
dke
---
ltd
ltd pd
9?
(rn).
n°
15.
.
c¿
(ad).
Tabla
7?
n c' 2.
n° 25.
T a b l a 7?
n 0 5.
a l g o a n a r a n j a d o (rn).
Oscurece
(a d ) .
l^t.
parduzco.
naranja claro
---
6?
n^
3.
Epistático
oscuro.
mate
n°
10?
Tabla
n a r a n j a algo
(c)
---
n°
q ue bw. T a b l a 10?
10?
Tabla
rojizo.
en d k e
e n pr
amarillento
(rn).
Tabla
9? n 0
1.
rojizos.
naranja.
T a b l a 6?
n° 21.
Q ® E § s _ g g r t a d g r a s _ _ d e _ d g s _ g e n e s _ m u t a n t e s _ _ e n _ e il _ 3 “ i::_ c r g m g s g m a
cd
r ed
se H n 1"3
---
algo
más
c l a r o q u e red.
epistático
se.
Tabla
-9 2 -
T a b l a 11?
8?
n° 7.
n^
1.
bo
lix
---
epistático
bo . T a b l a B,
n 0 23.
Q^Bñs_ggrtadgras_de_dgs_genes_mutantes_en_ei_crgmgsgma_X
g v --lix
naranja
se
claro.
epistático
lix d k e
pn ras
se.
T a b l a 9,
(c)
---
epistático
(se)
---
similar
dke.
n 0 20.
T a b l a 8>
a g n y a ras.
n° 2¿t.
Tabla
9,
n°
11.
3.2. D e s c r i p c i ó n de las m a n c h a s c r o m a t o g r á f i c a s
Uno
estudio
color
del
de
este
de
los o b j e t i v o s
patrón
ojos
manchas
figura
se
de p t e r i d i n a s
las
pteridinas
por
aurodrosopterina»
menor
que
parte
fueron
estudiadas
e
(1977a)
y Ferré
al.
mutantes
de
a cabo
separadas
sobre
como
su f l u o r e s c e n c i a
(ver
mas
mutante
importantes
isodrosopterina,
a c e t i 1d i h i d r o h o m o p t e r i n a »
isoxantopterina
y pterina)
y
o ausen ci a de o t r a s p t e r i d i n a s
de
aparecían
c r o m a t o g r a m a s . Una
et
el
aparecían
las p t e r i d i n a s
sepiapterina *
presencia
importancia
sido
llevar
cuales
drosopterina>
di h i d r obiopterina* biopterina,
la
los
ha
d e p t e r i d i n a s de c a d a c e p a
cuantificando
<n e o d r o s o p t e r i n a »
en
fueron
s u s R f s y por
Los patrones
obtuvieron
detectando
en cepas d o b l e s
t e r . Para
bidimensionales
reconocibles
20).
tesis doctoral
d e Drgsoghi.l.a
estudiof
cromatogramas
de esta
eventualmente
importante
(1986)
(ver
-93-
l os
estas
pteridinas
por
Wilson
y Jacobson
tablas
3 y 4).
identificadas
de
en
Figura 20.- Cromatogramas en capa fina de extractos de D.
melanogaster, tal como se ven al irradiarlos con
luz ultravioleta de 365 nm.
Primer solvente:
Segundo solvente:
isopropanol/2% acetato amónico
(1:1).
3% c-loruro amónico.
Las sustancias a las que corresponden los números con los que
se identifican lan manchas pueden observarse en las tablas 3
4. Las manchas n 2 4, 8, 15,
29 y 30 son comentadas en el apar
tado de resultados.
(A) Cromatograma con las manchas más frecuentes que aparecen
en las cepas mutantes.
26
\ '
Figura 20 (continuación)
(B) Cromatograma con las manchas que aparecen ocasionalmente
en las cepas mutantes.
Tabla 3,- Descripción de las manchas cromatográficas según Wilson y Jacobson
(1977a)
Mancha n 2
Fluorescencia
Color
Nombre
1
roja
rojo
neodrosopterina
2
rojo-naranja
rojo-naranja
drosopterina
3
rojo-naranja
rojo-naranja
isodrosopterina
4
rojo-naranja
rojo-naranja
aurodrosopterinas
7
púrpura
incolora
isoxantopterina
9
amarilla
amarillo
deoxisepiapterina
10
amarilla
amarillo
sepiapterina
14
azul
incolora
pterina
16
azul
incolora
biopterina•
17
azul clara
incolora
ácido xanturénico
26
amari11o-naranja
amarillo-naranja
3-hidroxiquinurenina
Tabla 4.- Descripción de las manchas cromatográficas según Ferré (1985)
Mancha n g
Fluorescencia
Color
Sustancia
5
roja
rojo
desconocida
6
roja
rojo
desconocida
8
amarilla
amarillo
dihidroformilpterina
11
marrón-verdosa
marrón
12
quencher
marrón
acetildihidrohomopterina
*
desconocida
13
azul
incolora
dihidrobiopterina
15
azul
incolora
neopterina
18
verde
amarillo
ácido dihidropterín carboxílico
19
azul
incolora
ácido pterín carboxílico
20
amarilla
amarillo
desconocida
21
amarilla
amarillo
22
amarilla
amarillo
acetildihidropterina
*
desconocida
23
naranja
naranja
riboflavina
24
azul
incolora
desconocida
25
azul
incolora
propionilpterina
27
azul clara
incolora
ácido quinurénico
28
azul clara
incolora
glucósido del ácido xanturénico
*
*
*
*
Las manchas 5 y 6 son probablemente productos de degradación;', de las drosopterinas. La mancha n s12 parece un producto de degradación de la n sll. Las manchas
24 y 25, por su posición, parecen ser productos de oxidación de la mancha 22
y la deoxisepiapterina producidos durante el periodo de secado entre los
solventes. La mancha n 222 es el primer compuesto que se acumula en los ojos
durante el desarrollo del insecto (Morcillo y Ménsua, 1983).
Dada
trabajo»
la
hemos
pteridinas
intentado
cepas
la
de
a
con
en cepas
un
aquellas
normales
desarrollo
números
en este
trabajo,
q u e se
tenía
podemos
estudio
o
en est e
sobre
ausencia
estas
en
su r e l a c i ó n
observar
cromatograma
en cepas
manchas
del
que
con
las
con
la
que
manchas
aparecen
sólo
más
(A),
y a
ocasionalmente
o en a l g ú n e s t a d i o
habitualmente
descritas
se ha a m p l i a d o
las m a n c h a s
Ferré
las
dibujos,
y mutantes
mutantes
que
dos
normales
utilizado
mientras
p or
analizadas
y estableciendo
E9 y 30 han sido
sobre
anteriormente
el
presencia
y algunas
distinto
manchas
la
EO
frecuentes encontradas
otro,
cepas
las p t e r i d i n a s .
figura
corresponden
de
ampliar
mutantes
de síntesis
En
cantidad
detectando
diferentes
ruta
gran
n ú m e r o s 4»
po r
Las
primera
la
8 y
<B).
de
v ez
información
15
descritas
( 19840.
Manehas_crornatggráf¿cas_descr¿tas_anter¿ormente
La m a n c h a
formada
por
biopterina.
de
la
n°
la
i d e n t i f i c a d a p or
mezcla
de
La b i o p t e r i n a
dihidrobiopterina
solvente,
presentando
dihidrobiopterina
biopterina
e n el
ocasionalmente
(luz
15 f u e
roja
tenue)
el
segundo.
cuando
se
durante
compuestos
se producía
durante
por
en
los
dicha
primer
Esta
secado
—9 8 -
al
el
razón
(1984)
secado
Rf
y
de
los
primer
de
el
de
se p r o d u c e
las c o n d i c i o n e s
y
una parte
del
el
solvente
como
neopterina
oxidarse
degradación
descuidan
el
Ferré
la
la
sólo
luminosas
cromatogramas.
Extremando
se o b s e r v a
las c o n d i c i o n e s p a r a e v i t a r
q u e e n el
dobles
mutantes
Rf del
segundo
estas
degradaciones»
m u tante purple y en v ar i a s
aparece
esta mancha»
solvente
biopterina
(ver
neopterina,
sustancia
es
figura
aunque
ligeramente
de sus cepas
en e s t e
inferior
E O ). E s t e R f c o i n c i d e
que
ha
hallada
la
anteriormente
en
sustancia
en
mutante purple podría explicarse
mutante
dihidroneopterina
(ver
figura
podría
3).
trifosfato
La
Para
de
formada
por
primero
se ut il iz ó
mancha
que
neopterina»
el
fuera
que
de
trifosfato
ijn
tener
entre
acumulada
yi,vg o por
las
h a b i t u a l m e n t e , con
en mayor
(presenta
la
apareciendo
la
segunda
consistió
esta
proporción.
B L cít/B E m S b
se,
en
la cua l
acumulación
de
neopterina.
De e s t a
más
Se
-99-
15)
si
producida
la m i s m a
una
utilizó
e n y s e no
cromatograma
El
otro
mutante
q u e el
era
si
posición.
cepa
extremo
la
por
pero
hipótesis.
sustancia
los g e n e s
El
en
E n el
n°
forma»
diferente»
en u t i l i z a r
p ur p l e mucho
si
la m a n c h a
biopterina
en una p o s i c i ó n
lo q u e
mayor itariamente
hicieron dos experimentos.
a
confirmó
un alelo
estaba
los s o l v e n t e s .
seguiría
realizado
se a c u m u l a r í a
se
debida
experimento
llevara
al
p i r u v o i 1tetrahidropterina
esta mancha
la c e p a p.r_cd
orden
fuera neopterina,
experimento
esta
enzimático
en n e o p t e ri na b i en
degradación aparecería
El
y
de
extracción.
confirmar
invirtiendo
presencia
paso
dihidroneopterina
transformarse
condiciones
el
la
de
et
dicho
La
de
c o n el
( K a to h
bloqueado
19B0).
el
al
Drosophila
el
al,.»
s i do
caso
usado
neopterina,
la
cepa
afectan
en
a
la
encontrado
en
esta cepa
puede
15 p r e s e n t a b a
encontrada
En
también
observarse
una extensión
e n el
el
que
(1984)
por
la
mancha
como
racémicas
ocurre
con
La
se
mancha
purple
compuesto
las
Rokos
de
resto
formas
de
una
de
de
manchas
dos
manchas
por
compuesta
de
la
podrían
al
misma
se r
igual
dos
que
en
EO
ojos»
siendo
de que
la c e p a e n
en cantidad
que
en
única
(A)
la
ruta
de
la
puede
de
ruta
observarse
de
la
purple
la
fiLc<fZ B L m e b
mayor
que en
síntesis
de
trifosfato
por
la
la
es un
que
mancha
pero
que
en
sido
Trabajando
(
con
las
que
a
sólo
las d o s
las
po r
se
se
de
La
por
se
formas
extractos
los c r o m a t o g r a m a s , se p u d o
-1 0 0 -
descrita
los c r o m a t o g r a m a s
correspondía
en
la s e p a r a c i ó n
aurodrosopterina.
dos sustancias había
( 1975)»
de
mucho
varias
la d i h i d r o f o r m i l p t e r i n a
y en c o n d i c i o n e s
resolución
de
la c e p a
la d i h i d r o n e o p t e r i n a
racémicas
estas
los c r o m a t o g r a m a s
las p t e r i d i n a s .
aurodrosopterina.
concentrados,
mayor
dos
distinta
y Pfleiderer
observaba
hecho
a partir
la f i g u r a
existencia
El
de
sugiere
lateral
dos
la
observarse
parcialmente
la d i h i d r o f o r m i l p t e r i n a »
se p r o d u c e
s i n t e t i z a n el
En
E l , puede
identificada
de
de c o l o r
nos
que
ruta
la f i g u r a
Estas
a
purple.
8,
esta sustancia
pteridinas»
una
superior
n° 8 a p a r e c e
la a c u m u l a .
acumule
cepa
y fluorescencia
número
la a u r o d r o s o p t e r i n a .
mutantes
que más
de
La m a n c h a
dihid r o f o r m i l p t e r i n a » está
y color.
formas
El.
de
n°
7-8»
la f i g u r a
simple
superposición
fluorescencia
cepas
mutante
cromatograma
la
Ferré
en
obtenía
detectar
más
una
la
IFigur a 2 1 .-
C r o m a t o g r a m a de la c e p a pr
C4
/p r
m 2b
se en
presencia
de
se o b s e r v a
en
Ferré
mancha
por
n°
las d o s
la f i g u r a
et
a¿.
18 e n
sus
sustancias,
Rfs
(1986)
describieron
cromatogramas
del
18 c o n
las d r o s o p t e r i ñ a s
de
se
presenta
cepas mutantes
la c u a l
puede
Se
ha
las
pteridinas
alguna
esta
de
en
esta
sustancia,
en
gran
sólo
estar
acumuladas
síntesis
la P H U P T E
de
mayor
esta
de
et
el
varias
(1986)
y
con
el
clot,
en
de
la d e t e c c i ó n
se d e b e r í a
de
de
a que
intermediario
la r u t a
la
en otra s
de síntesis,
aparición
seria
debida
de
a
de d eg ra d a c i ó n ,
intermediario
paso
una cadena
propuesto
-IOS-
en
más p r o b a b l e
l at er a l
la d i h i d r o p t e r i n a
han
esta
la
al
las p t e r i d i n a s .
f u e ra un
las p t e r i d i n a s ,
n®
y en o t r as
transformaría
de p r o d u c t o s
de
si
síntesis
el
en
ácido
de d e g r a d a c i ó n
y clot
se
al
dihidropterín
de
hipótesis,
cual
mancha
drosopterinas.
la r u t a
sepia
la
la m a n c h a
la c e p a
ácido
cantidad
el
cantidad
( una p t e r i n a
al_.
en
e n es to s mutantes,
sustancia
tres carbo n os )
Ferré
en
de
salvaje
la s e g u n d a h i p ó t e s i s ,
en
Si
si
posteriormente
formación
muy
tipo
de poseer
la p r i m e r a
los m u t a n t e s
según
como
de
Esta
distinguir
excepto
determinar
Según
situadas
q ue ,
la c e p a
a pesar
p i r u v o i 1t e t r a h i d r o p t e r i n a ,
mientras
sepia.
ú n i c a m e n t e un producto
acumulan
pteridinas
mutante
impide
intermediario
o
ellas.
sustancia
ambos
presencia
solapamiento
d e oj os ,
detectarse
es un
El
en
de color
intentado
carboxílico
la
y fluorescencia parecía corresponder
carboxílico.
sustancia
solapadas
EO.
dihidropterín
l as
aunque muy
la r u t a
sería
que
el
entre
en p o s i c i ó n
(sin c a d e n a
gen
de
6
lateral).
Henna
puede
comtrolar
alguno
presumiblemente
apenas
de
el
aparece
cromatogramas
primero,
de
la
detectar
la p r e s e n c i a
cepas
de
ninguna
de
traza
que
esta
concentración
de
sustancia
por
Se
y
Or^R y
la s u s t a n c i a .
6 veces
y,
pas o»
por
es
más pequeña
por
t an to ,
los c r o m a t o g r a m a s
Se
realizaron
concentrados
Hnr3,
no
con
el
de d e t e c t a r
en
los
detectar
el
metabolito
utilizar
c om o
<6¿t0
detectándose
contrasta
fá ci l
los
contrario,
intentó,
muy
Esto
la q u e
en
el
H n r'3 .
extractos
de
la c a u s a
sustancia en
salvaje
Ü . E mi)
este
isoxantopterina
B P y ADH P.
de
de
ésta
H n 1"3
de e s t a
t i po
mosca/
e
la SP,
c r o m a t o g r a m a s a partir
cabezas
siendo
mutación
acumuladas
las
enzimas
pterina
aparecen
de
los
mutantes
hecho
a
sepia
una
y
cl ot .
Al
no
H n r 23 y Ü r - R
Hnra
y se.
ácido
se o p t ó
Si
la m u t a c i ó n H n ra
presentar
se.
Los
fluorescencia,
lo
por
d i h i d r o p t e r ín
debería
cepa
conseguir
c u al
presencia
impidiera
carboxílico,
una cantidad
resultados
que
(síntesis)
por
la
menor
esta
el
se y
defecto
síntesis
mutante
18.6 + 0 . 5
no v e
genético
que
unidades
para
de
se
del
s e _ H n r"3
la s u s t a n c i a
fueron, en
sustancia
las c e p a s
equivalentes
la
cepa
de
obtenidos
16.9 + 0.5 par a
indica
cepas
en
la
de
se_Hnr 3 ,
reducida
su
Hnr3.
M a r } c h a s _ c r g m a t g g r á f ¿ c a s _ d e s c r i.t a s _ g g r _ g r ¿ m e r a _ v e z
Se
únicamente
han
descubierto
en a l g u n a s
cepas
dos
nuevas manchas
mutantes.
-103-
La m a n c h a
que
aparecen
n ° E 9 se ha
detectado
únicamente
B E c:*'/BEmf2to_ § §
se
observa
una
pequeña
el
solvente
(isopropanol
en
mismo
el
Rf
En
la
la
los c r o m a t o g r a m a s
la
mancha
/ acetato
amónico
solvente
y R f s » esta
de
de
de
t r a z a de f l u o r e s c e n c i a
que
segundo
fluorescencia
oxidado
cromotogramas
( f i g u r a 21).
presenta
mayor
en
n°
sustancia
7-8,dihidroformilpterina,
esta
cepa
e n el
amónico
podría
en
azulada
( 1:1 )) »
E V *
( cl o ru r a
8
cepa
y
3%).
ser
el
es
que
primer
un
Rf
Por
su
producto
decir,
la
formilpter ina.
El
más
que
trata
que
hecho
en
de
un
ésta
de
no
la c e p a
podido
anteriormente
producto
es
haber
la
citada,
de d e g r a d a c i ó n
única
cepa
v ez.
Se
mancha
ha
mutantes
dobles
n c' 30
también
detectado
simples
en
sepia
mutantes
de
y clot,
presenta
los m i s m o s
467
respectivamente)
nm,
dihidropterín
mucho
pero
más
es
bajas.
Esta
presumiblemente
que
el
n°
así
q u e la
se
8,
ya
se a c u m u l a
cromatogramas
de
que
la
apreciables.
como
en
excitación
mancha
de
las c e p a s
n°
cepas
sustancia
y emisión
18
no h a s i d o
producto
primera
algunas
aunque se p r e s e n t a
sustancia
un
confirma
la m a n c h a
la
sustancia
(se_Hnr 3 , v ^ s e ) . Esta
máximos
c a r b o x í 1 i c o ),
esta
h a s i do d e s c r i t a p o r
los
sepia
de
en
d i h i d r o f o r m i l p t e r i na e n c a n t i d a d e s
La
detectar
(400 y
(ácido
en c a n t i d a d e s
identificada,
de d e g r a d a c i ó n
de o t r as
pt er id i ñ a s .
A continuación
en
las q u e
se
han
se c i t a n
aquellas cepas
encontrado
i m p o r t a n c ia .
-104-
estas
dobles
pteridinas
mutantes
de
menor
El
siidio
ácido
dihidropterin carboxílico
encontrado
en
las c e p a s c l _ se »
(mancha
n c< 18)
c n _ s e > B.n_se»v _ s e
ha
y se
Hrir B .
La m a n c h a
crT}_;se,
y_se
La
n':' 3 0 ha s i d o
detectada
en
las c e p a s
el.
se*
y se_Hnr 3 .
neopterina
( m a n c h a n°
c e p as c n _ H n r 3 , g r _ c a ,
r a s _Q r * c l _ g r
La
gr _ c d >
15)
gr
ha s i d o
detectada
en
kar * g r _ r e d * s f _ s t ,
las
gn_.cn,
y c n _ g r ^ ^ / g r mefc,_ s e .
dihidroformilpterina
(mancha
n0
detcectadaen
cantidades
a las d e
la c e p a
normal
em
cn_ry,
gr _cd * g r _ k a r ,
gr _ g * gr
las
cepas
superiores
d k e _ H n r":3, g r _ c a ,
8) ha
red , sf_st, cho_cl, cho_red,
gn
rbi_gr * c l _ g r , s e _ H n r 3 * g n _ r a s
y c n _ g r c<,,/gr'inBb_5e.
La r i b o f l a v i n a
camltidades
(mancha
superiores
a
g r * g n _ s § , E § § _ £ Í > ras_gr *
n° 23)
las del
s id o
ha
sido
individuo
tipo
detectada
en
salvaje
la
en
ce'pa d k e _ H n T~3 .
Por
de?tectada
último,
la
únicamente
en
formilpterina
(mancha
n° 29)
ha sido
la c e p a c n _ g r ^ / g r m B b _ s e .
3.13. D e t e c c i ó n de q u i n o l e i n a s en las c e p a s d o b l e s m u t a n t e s
En
los
cromatogramas
DLí2!E°gbÍlÉ CD§?l.anogaster s e
quinoleinas,
las
fluorescencia
xa m tt ur é ni c o
azul
es el
s u “fiiciente c a n t i d a d
cuales
para
extractos
detectan,
se
clara.
que
de
por
con
ser
— 105-
mayor
algunas
el
frecuencia
c u a n t if i c a d o .
de
presentar
estos metabolitos,
aparece
poder
cabezas
en o c a s i o n e s ,
caracterizan
De
de
Las
ácido
y en
otras
dos
quinoleinas
algunas
cepas
glucósido
del
que
mutantes
ácido
A continuación
en
las c e p a s
fueron
XTCgl
XTC
se
dobles
(ácido
(glucósido
detectan
son
el
ácido
los c r o m a t o g r a m a s
quinurénico
se
detallan
mutantes.
ácido
las q u i n o l e i n a s
el
Las abreviaturas
QC
(áci do
encontradas
utilizadas
quinurénico)
xanturénico).
Cegas
XJC
QC
XJ Cg l
b w ca
7
ND
ND
b w cd
13
ND
ND
bw
r ed
ND
ND
ND
el
ca
ND
ND
ND
el
Hn^3
60
ND
ND
el
p
TR
ND
ND
c 1 r ed
ND
ND
ND
el
rsa
30
ND
ND
el
se
65
ND
ND
e n H n ’"3
ND
TR
ND
en p
ND
ND
ND
en
red
ND
ND
ND
en rse
ND
ND
ND
e n ry
ND
ND
ND
en
ND
ND
ND
d ke ca
ND
ND
ND
d k e cd
70
ND
ND
d k e H n r"3
70
ND
ND
se
y
de
xanturénico.
xanturénico)»
del
en
-106-
y
dke
p
TR
ND
ND
dke
red
15
ND
ND
dke
se
¿♦3
ND
ND
1 1 se
ND
ND
ND
1 td
ca
ND
ND
ND
ltd
cd
ND
ND
ND
ltd
H n ’~3
ND
ND
ND
ltd
kar
ND
ND
ND
ltp p
ND
ND
ND
ltd
re d
ND
ND
ND
ltd
rsa
ND
ND
ND
ltd
st
ND
ND
ND
pr
ca
ND
ND
TR
pr
cd
70
ND
TR
pr
H n ’"3
50
ND
ND
pr
kar
TR
ND
ND
pr
p
ND
ND
ND
pr
re d
16
ND
TR
P u £" se
30
ND
ND
P u E? st
15
ND
TR
sf p
18
ND
ND
s f st
10
ND
TR
car
en
ND
ND
ND
car
dke
30
ND
ND
car
ltd
ND
ND
ND
cho
bw
ND
ND
ND
cho
c1
ND
ND
ND
-107-
c ho
dke
ND
ND
ND
cho
red
ND
ND
ND
cm c 1
ND
ND
ND
cm e n
ND
ND
ND
cm dke
TR
ND
ND
cm red
ND
ND
ND
g el
30
ND
ND
g en
ND
ND
ND
g dke
16
ND
ND
g
11
ND
ND
ND
g
ltd
ND
ND
ND
g rsH
ND
ND
ND
g st
ND
ND
ND
lix d k e
121
ND
ND
lix s e
60
ND
ND
pn c 1
29
ND
ND
p n en
ND
ND
ND
pn dke
58
ND
ND
pn
ND
ND
ND
p n pr
13
ND
ND
p n H n r3
14
ND
ND
p n r ed
ND
ND
ND
p n se
28
ND
ND
ras c 1
31
ND
ND
ras en
ND
ND
ND
ras
10
ND
ND
32
ND
TR
1 td
ltd
r a s pr
-10B-
ras
cd
50
ND
TR
ras
H n 1-3
55
ND
ND
ras
se
37
ND
ND
rb b w
TR
ND
ND
rb
dke
TR
ND
ND
rb
1 td
ND
ND
ND
rb pr
ND
ND
TR
rb p
ND
ND
ND
rb
37
ND
ND
v c1
ND
ND
ND
v dke
ND
ND
ND
v
ND
ND
ND
v red
ND
ND
ND
v se
ND
ND
ND
b w pr
7
ND
ND
c 1 en
ND
ND
ND
el
ltd
ND
ND
ND
el
pr
SE
ND
TR
1 td pd
ND
ND
ND
cd
ND
ND
ND
81
ND
ND
ND
ND
ND
TR
red
lt
red
s e H n ’"3
bo
lix
p n r as
63
-109-
3.4.
Cuantificación
de
pteridinas
en
dobles mutantes de
Qroso p h i l a melanogaster
Se h a n c u a n t i f i c a d o
cepas
de d o b l e s m u t a n t e s
Las
cepas
que son
de
ojos
deben
color
equivalente
a
Cuando
no
esto
sería
el
patrón
mutante,
dos
datos
de
<1*736)
clot,
dobles
los
(ver
Los
diferían
valores
nuestra
cepa
c l ot .
los
valores
mutantes
estas
dos
fueron
sepia,
Estos
de
y de
datos
y
de
para
Para
la c e p a
doble
de
las
esperados
para
basándose
por
por
un
37%
F e r r é et
F e r r é et
de
Si,
-1 1 0 -
p or
al..
DP e
utilizados
no
tenían
en
algunas
(1986).
el
Estos
de BP
una
para
nuestra
cálculo
las c e p a s
ejemplo,
las
valores
IDP p a r a
para
y
lo s
SP y 6 2 0 %
de p t e r i d i n a s en
c lo t .
l os
al..
c u a n t if i c a d a s
mutantes,
de
en
los m u t a n t e s s e p i a
s er
cepas
poder
c ual
las c e p a s u t i l i z a d a s
Tras
una
conocer
los e f e c t o s
estimados
2750%
fueron
esperados
de s e p i a
producido
significativamente,
los d e s c r i t o s
nuevos
mutaciones.
necesitamos
excepto
geográfico.
encontrados
las d o s
ha
de
de
pteridinas
han c a lculado
simples
mutaciones
mutantes.
aditivo
las
de
pteridinas
se
trabajo
en
dos
p a t r o n e s de p t e r i d i n a s
5),
pteridinas
cepa
de
mutantes
tabla
de
genes
un efecto
mutantes
origen
sustancias,
dos
q u e se
interacciones
ya q u e e n e s t e
nroismo
decimos
de
sintetizadas.
un p a t r ó n
las a c c i o n e s de
los
suponiendo
cepas
de o j o s
tener
esperado
mutaciones.
las
el
estas
en una p a rte
homozigóticas para
ocurre»
entre
distinguir
de color
la s u m a d e
interacción
las p t e r i d i n a s
de
de
dobles
mutación
Tabla 5
Cuantificación de xantomatina y pteridinas en mutantes de color de ojos de
Drosophila melanogaster (Ferré et a l . , 1986)
Abreviaturas utilizadas: NDP (neodrosopterina), DP (drosopterina), IDP (isodrosopteriña), ADP (aurodrosopterinas), SP (sepiapterina),ADHP (acetildihidrohomopterina),
IXP (isoxantopterina), PTE (pterina), H 2BP (dihidrobiopterina), BP (biopterina), XTM
(xantomatina), ND (no detectado) y TR (traza).
Cepa
XTM
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
h
Or-R
100
100
100
100
100
ioo
100
100
100
100
100
bo
107
33
46
41
85
160
180
15
49
80
120
bw
71
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ca
30
5
5
7
17
110
90
50
11
47
180
car
60
13
20
18
61
200
200
100
24
100
260
cd
12
85
100
100
100
91
140
78
81
94
93
cho
66
4
4
5
12
110
TR
57
47
130
700
el
160
19
54
47
8
1400
ND
120
530
470
260
cm
43
31
36
32
55
200
120
20
34
67
180
en
4
91
86
89
90
100
84
63
95
80
82
2b p
BP
(cont inuac ión)
Tabla 5
Cepa
XTM
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
h
dke
153
20
51
55
86
130
110
66
38
61
120
g
i
» r3
Hn
68
17
19
19
42
210
160
54
24
53
180
125
9
20
20
ND
460
450
ND
ND
150
440
kar
28
120
110
95
80
120
130
84
72
100
130
lix
102
58
48
56
100
200
150
ND
32
62
110
lt
10
10
9
10
35
120
94
46
13
88
170
ltd
8
43
36
35
63
200
200
33
26
95
170
P
21
18
20
19
43
100
86
59
30
72
180
pd
58
17
19
19
59
120
83
100
29
87
160
pn
81
22
22
32
18
160
87
88
34
95
140
pr
122
45
39
36
20
64
35
87
39
58
110
Pu2
135
49
31
29
24
21
TR
29
53
23
40
ras
96
17
13
15
5
70
TR
110
58
49
100
rb
38
34
25
36
55
160
94
29
37
50
150
2b p
BP
T a b la 5 . -
(c o n tin u a c ió n )
Cepa
XTM
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
h 2b p
BP
red
31
8
5
7
22
100
85
51
40
96
420
43
43
50
44
100
140
130
89
52
91
150
ry
138
21
42
33
61
110
69
ND
200
130
250
se
142
ND
ND
ND
ND
5700
ND
95
1600
1200
920
sf
95
100
89
76
100
61
130
66
120
100
120
snb
16
7
9
12
30
84
91
71
22
73
200
st
2
80
93
88
95
100
120
69
60
96
78
V
3
93
80
79
93
150
110
110
100
100
100
rs
2
Nota.- Los coeficientes de variación de estos valores fueron menores de 15% para la isoxantop
terina, menores del 20% para las drosopterinas y la dihidrobiopterina, y menores del
25% para la sepiapterina, ADHP, PTE y BP.
presenta
la
un 5 0% de una p t e r i d i n a
misma pteridina»
una c a n t i d a d
primer
mutante
mutante
de
del
(0.2).
de
salvaje
(tanto
mismo
tipo
dos mutantes
con
clot
por
mutante
pteridinas
"sepia
pteridinas
Sin
no
Esto
de
la c a n t i d a d
es
difícil
de
de
los m u t a n t e s
según
este
observados
en
método,
en
los
que
en
al
estos
patrones
podido
(ver
Como
tabla
acumulando
uno
límite
doble
estas
de
de
los
en
la
determinado
esta
casos
cantidad
comparamos
los p a t r o n e s
de
5).
de p t e r i d i n a s
compararlos
cuantificaciones.
- 1 1A-
p or
un
con
mutación
para
vendría
disponible.
sepia
resultante
tantos
que
método
La cep a
esperado
de
totalmente
la
síntesis,
equivalente
simples
el
mutante
cantidad.
observados
hemos
nuestras
esta
tipo
t a m b i é n el
interrumpida
menor
en
valores
una
los v a l o r e s
la c e p a
un valor
precursor
presenta
individuo
cuando
mientras
segundo
una
realizamos
a que existiría
calcular,
Basándonos
tener
acumuladas
pteridinas
la del
del
cada
hay que utilizar
obtenidos
los
de
1»
en
sería
directamente
para
ejemplo,
tendría
pteridinas
por
a
rojos,
se deb e
utilizarse
1)
de
la c a n t i d a d
del
embargo»
al
pero
po r
20%
presentar
la
a
de
un
debería
los m u t a n t e s
parcialmente
los v a l o r e s
mutantes.
cantidad
clot"
que
multiplicar
mayor
pteridinas
sólo
de
superior
por
de p i g m e n t o s
(0.5)
uno
uno
Así,
mutante
debería
son superiores
interrumpe
las m i s m a s
Cuando
presenta
multiplicando
uno
método
operación.
varias
la s í n t e s i s
por
pteridina
precaución.
acumula
dos
Este
una
de
obtenida
tanto
las p t e r i d i n a s .
cantidad
la c e p a d o b l e
1 0%
en
y otra
obtenidos,
con
A continuación,
los
se
describen
dobUes
que
los p a t r o n e s
mutantes»
de p t e r i d i n a s
agrupándolos
observados
según
el
tipo
en
de
las c e p a s
interacción
produzcan.
Se h a n
formado
seis
grupos
con
los
dobles
mutantes
analL i z a d o s :
El
grupo
mutaciones
de
I
incluye
g a r n e t , lightoid,
pteridinas
no
caracterizándose
por
clott.
que
grupo
II e s t á
Esta
mutación
afectan
primcipal
El
a
un
pterridinas
III
grupo
del
en
es
o ru by ,
la
los
mayor
p or
las c e p a s
miscelánea
lo
patrones
esperados,
parte
dobles
interacciones
de p teridinas,
de
y cuyos
las
de
las
lo e s p e r a d o .
la c a n t i d a d
una
que contienen
mutantes
de
con mutaciones
siendo
su
efecto
de d ro s o p t e r i n a s .
de c e p a s
esperado.
con patrones
En
este
de
grupo
las
patrón
de
son muy variadas.
IV e s t á
es
formado
similar
i nc ll u ye n a q u e l l a s
cuyo
a
presenta
diferentes
pterridinas
bw,
formado
aumento
interacciones
El
frente
cepas
con
presentar
la s í n t e s i s
grupo
rose5
coinciden
pterridinas d i s m i n u i d a s
El
aquellas
cepas
por
al
y
que
cepas
esperado.
portadoras
patrón de pteridinas
esperado,
las
no
de
En
en
este grupo
la m u t a c i ó n
difiere
se p r e s e n t a n
cuyo
no
cl_, r e d
se
o
significativamente
los g r u p o s
I,
VI
y V,
res pp ec t iv a m e n t e .
En
Es ta as
el
grupo
cepas
auseencia
V se
incluyen
presentan
to ta l
de
como
pteridinas
los d o b l e s
mutantes
característica
consecuencia
la rrmutación bw.
-115-
de
de brown.
principal
la
la p r e s e n c i a
de
E n el
grupo
VI
hemos
incluido
los d o b l e s m u t a n t e s
Se^ !ha h e c h o
un
apartado
especial
con e s t a s
ex<iste
interacción
especial
entre
una
mentaciones
que
Grupo
muitaciones
afectan
X¡
Cepas
garnet,
unta
primer
fuerte
ga.rnet
(g),
se
analiza
dos
de
casos
fenotipo
patrón
lightoid
el
de
mutantes
está
extremos
color
de
(ver
observa
muy
inferior
tabla
6,
con
d rosopterinas, sepiapterina
En
de
la
otras
tabla
cepas
interacciones
las
contienen
las
ruby,
po r
de una
que
y
se a p r e c i a
(rb).
cepa
presenta
dobles
similares,
blanco
trazas
de
una
Los
dos
ambas
con
y con
de
Estos
cantidades
Cuando
portadora
la e s p e r a d a .
sólo
las
cuyos
las m u t a c i o n e s
la c e p a
n c,m 1 y E).
un
algunas
patrones
esperadas
de
de
y biopterina.
6 se p r e s e n t a n
l t d _ r s 82, car__1 t d , g _ l t,
y
los q u e
prácticamente
que presenta
que
los e s p e r a d o s .
entre
a
dado
red
las c e p a s g__itd y r b _ l t d ,
ojos
contrastan
y/o
r o s e 82 ( rs e ) y r u b y
se
son
que
formado
p a t r ó n de p t e r i d i n a s
de p t e r i d i n a s
pteridinas
de
mutaciones
drosopterinas
mutantes
r o s e 82
red.
xantomatina.
coinciden con
(l.td),
de p t e r i d i n a s
mas
no
interacción
estas
cantidad
dobles
grupo
la m u t a c i ó n
la s í n t e s i s d e
lightoid,
paitrones de p t e r i d i n a s
Un
a
cepas,
de
los p a t r o n e s
mutantes
aunque
que
menos
g _ r s s y 1 1 d _g
cantidades
de
todas
las
pteridinas
esperadas.
De
todas
ellas,
la
— 116-
de
pteridinas
también
presentan
extremas.
Las cepas
( n om 3 al
7)
inferiores
biopterina
es
presentan
a
la q u e
la s
se
Tabla 6
Cuantificación de pteridinas en dobles mutantes de color de ojos (I)
2
Cepas dobles mutantes de las mutaciones garnet, lightoid, rose y ruby, cuyos patrones
de pteridinas observados presentan diferencias con los esperados (números pequeños).
Ver tabla
para las abreviaturas.
Cepa
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
H2BP
BP
(1)
g
TR
7
TR
7
ND
7
ND
26
ND
420
ND
320
ND
18
ND
6
ND
50
ND
306
(2)
rb
TR
15
TR
9
TR
13
ND
35
ND
320
ND
188
ND
10
ND
10
ND
48
ND
255
(3)
ltd
rs^
5
18
3
18
3
15
6
63
52
280
TR
260
13
29
ND
14
37
86
101
255
(4)
car
ltd
6
6
3
7
3
6
8
38
100
400
107
400
14
33
ND
6
39
95
201
442
(5)
g
3
2
2
2
2
2
5
15
54
252
TR
150
22
25
TR
3
24
47
125
306
(6)
g rs
6
7
4
10
4
8
10
42
77
294
50
208
26
48
3
12
52
48
205
270
(7)
ltd p
8
8
5
7
3
7
7
27
13
200
16
172
22
19
ND
8
40
68
53
306
(8)
rb p
13
6
5
5
3
7
9
24
70
160
57
81
24
17
TR
11
65
36
220
270
ltd
ltd
lt
2
T a b la
9)
10)
11)
12)
13)
14)
15)
16)
17)
6
(c o n tin u a c ió n )
Cepa
NDP
DP
IDP
AD1
SP
ADHP
IX P
PTE
H2BP
BP
g st
15
10
9
15
116
106
44
ND
66
150
14
18
17
40
210
192
37
14
51
140
5
7
10
7
10
16
69
64
14
4
50
200
3
36
273
176
36
9
32
216
6
11
82
51
2
11
23
187
13
9
20
17
7
47
208
103
19
14
31
180
20
15
18
29
246
114
34
15
79
388
52
40
33
50
240
260
28
19
95
221
21
18
16
24
165
128
32
11
41
237
34
33
31
60
200
240
23
16
91
133
10
7
8
20
103
165
44
17
79
201
15
16
17
38
210
134
34
23
42
148
22
16
15
32
154
158
48
14
71
227
39
43
39
90
140
109
56
49
73
123
16
18
25
11
82
47
59
97
165
8
14
11
114
9
320
174
29
9
90
238
12
8
8
10
29
TR
16
44
44
132
7
5
5
3
140
2
36
15
47
170
g dke
rb dke
ltd kar
ltd st
g en
en rs
2
pn ltd
ras ltd
T a b la 6
(c o n tin u a c ió n )
Cepa
(18) g el
NDP
DP
IDP
AD1
SP
ADHP
IXP
PTE
H2BP
BP
30
29
10
30
ND
2107
ND
109
400
400
264
9
3
2940
ND
65
127
249
468
7
7
7
7
ND
381
193
ND
ND
97
361
ND
920
900
ND
ND
143
748
10
10
9
20
11
24
83
9
16
46
67
15
102
33
25
14
29
165
22
9
108
121
24
14
65
179
7
7
7
20
7
37
240
166
33
8
83
272
5
6
5
33
1
54
2
220
180
17
TR
3
20
2
8
11
54
2
45
306
28
16
15
31
128
130
26
17
75
236
3
1
3
12
160
80
15
15
48
630
15
11
10
34
89
160
17
19
73
188
3
2
2
14
200
170
17
10
91
714
14
8
14
17
21
2335
ND
23
502
275
247
19
16
5
2800
ND
40
138
447
442
15
8
19
19
ND
91
360
585
344
21
21
8
3555
27
1960
ND
107
276
428
390
3
(19) ltd Hnr3
8
4
(20) rb pr
(21) ltd pd
(22) ltd ca
(23) rb red
(24) ltd red
(25) ltd el
,
2
(26) el rs
14
13
emcuentra
c ai n t i d a d
disminuida
de
e ss pe ra da ,
en
biopterina
el
resto
de
menor
es
proporción.
aproximadamente
Así »
la
mientras
mitad
pteridinas presentan valores
la
de
la
mucho
más
disminuidos.
Las
siete
amteriormente
fuiertes.
Sin
pojrtadoras
principio
las
al
menos
del
son
de
(n'"" 8
por
al
disminuidas
biiopterina
que pres e n t a
p t:er i d i ñ a s
de
las c e p a s
1Sí
es
también
caiso
15)
sólo
mi i en tr a s
auimentados
Por
algunas
otras
dobles
presentan
las c e p a s
frente
la
a
valores
Ltd_kar»
pteridinas
rb_|3,
similares
las
excepto
la
patrón
de
El
aunque
encuentran
valores
de
y cn_rsa
esperado,
de
g._dke y
parte
g_cn
al
ti po
g._st,
equivalentes.
se
mutantes
algún
esperado,
l.td_st,
más
mencionadas
mayor
lo
d i f e r e n t e del
presentan
interacciones
las m u t a c i o n e s
que
mencionadas
(nD “
en este
disminuidas,
o
incluso
(biopterina).
último,
no) se c u m p l e
el
en
a l g u n a s de estas cepas
modelo
cuial
la b i o p t e r i n a
po»r
esta
es
y
drrosopteriñas
y
loi e s p e r a d o ,
ras
la b i o p t e r i n a )
está
mutantes
anteriormente,
s e g ú n el
disminuidora.
l_td
la p t e r i n a
mientras
□ tro g r u p o
observado
dobles
la s u s t a n c i a q u e se v e m e n o s
interacción
ceypas p_n_]Ltd
el las
de
las
las c e p a s
presentan
ptseridinas
al
una
ejemplo,
11)
mutantes
presentan
varias
apartado
A sí ,
dobles
que
embargo,
i m t e r a c c ión.
üb)_d ke
son
cepas
que
se
(n°*
16
Este es
y
17)
el
en
caso
de
las
las q u e
las
se e n c u e n t r a n a u m e n t a d a s
el
resto
de
afectada
las p t e r i d i n a s
frente
a
(entre
encuentran disminuidas.
formado
por
-180-
las c e p a s
i t d _ H n r~3 , r b _ g r ,
ltd
de
gd
y Itd_ca
estas
cepas
drosopteri ñas
incluso
a
22).
se
la
encuentran
esté
Los p a t r o n e s
característica
en
aumentadas»
hemos
mutantes
las
en
el
queaunque
es
y rs E produzcan
d i s m i n u i d o r a » ésta
se
ve c o m p e n s a d a
las q u e
producen
II y VI),
difíciles
¿td
la
g»
en
incluido
rb
més
que
disminuido»
ltd»
grupos
pteridinas
de
que
las
cantidades similares
mientras
generalmente
último»
mutaciones
como
de
el
resto
e
de
incluyendo
las
entre
la b i o p t e r i n a .
Por
dobles
19 al
presentan
ligeramente
sustancias
ellas
( n °“
red,
cepa
de
lo
r s 55,
por
pteridinas presentan
patrones
m u t a n t e s de
dobles
clot
mutantes
(n°*
IB y 2 3 al
la
tipo
a
tipo
opuesto
el.
(ver
de p t e r i d i n a s
g _el,
26).
mayor
similares
de
la m u t a c i ó n
las c e p a s
pteridinas
(el.) p u e d e n
En
rb
el
son
red,
caso
parte
de
de
las
los e s p e r a d o s .
tres
grupos,
a el. a f e c t e
específicamente
xantomatina,
a
de
observarse
aparecen
d iv i d i d o s en
la de
y
de
las
m u t a n t e s de c l o t
de
que
otra
cepas
que
interacción
patrones
ejemplo,
valores
§EyB2 _ I I : Dobles
Los
q u e los
interpretar. Son
Itd_cl_ y c l _ r s s
el
p or
I cinco
posible
la
la m u t a c i ó n r ed
con
grupo
en
según que
a
la
las p t e r i d i n a s
las
en
esta
la
cepas
tabla
tabla
la m u t a c i ó n
ruta
o a
de
ambas
dobles
7.
Los
han
que
sido
acompaña
síntesis
rutas
de
la
a
la
vez.
En
la
primera
clase
estarían
-121-
las c e p a s
en
las q u e el
Tabla 7.- Cuantificación de pteridinas en dobles mutantes de color de ojos (II)
Cepas dobles mutantes de clot.
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
(8)
Cepa
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
h
v el
25
20
22
ND
105
450
425
187
30
29
7
2258 .
2100
ND
18
ND
132
530
470
260
35
29
28
TR
1965
ND
75
375
450
251
17
32
33
7
1400
ND
76
504
376
213
9
7
4
TR
106
ND
86
78
85
141
3
5
6
ND
980
ND
132
307
230
260
18
11
535
ND
90
69
238
190
8
10
12
3
4
1
2240
ND
106
180
447
364
61
29
22
326
ND
88
129
117
127
896
ND
104
207
273
286
ND
107
ND
114
807
($)
1382
($)
621
($)
en el
ras el
pn el
ci
pr
el se
eli Hn r
ti
el red
3
2b p
BP
9
14
13
16
2
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
3500
($)
19
31
31
ND
4365
ND
TR
253
450
221
2
7
7
ND
6440
ND
ND
ND
705
1144
23
22
21
17
1420
ND
73
495
680
406
2
3
3
2
1400
ND
61
212
451
1092
T a b la
(9)
7
(continuación)
Cepa
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
h
cho el
12
(10) cm el
(11) el ca
(12) el p
(13) g el
2b p
BP
10
13
21
838
ND
941
413
2
2
1
1540
ND
48
68
323
1
249
611
1820
25
21
32
16
3312
ND
10
138
264
227
6
13
12
4
2800
ND
24
180
315
468
12
18
20
13
3080
ND
62
391
500
421
1
2
3
1
1540
ND
60
58
221
468
9
14
16
14
2016
ND
76
290
450
384
3
7
7
3
1400
ND
71
159
338
468
30
29
30
ND
2107
ND
109
400
400
264
3
7
7
3
29 40
ND
65
127
249
468
($) Comparar el valor observado directamente con los que presentan los mutantes simples
(Tabla 5).
mutante
que
acompaña
de síntesis
El
y
de
cn_cl
ligeras
En
que
síntesis
bastante
las
alteraciones
xantomatina.
enzima
1 978 ),
de
en
de
y
que,
i m po rt a nt es en
la
ruta
mutaciones
la r ut a ,
la G T P
la m u t a c i ó n gr
A
en
1 9 77 b ),
mientras
que
probabilidad
a alguno
de
Las
con clot
caracteriza
E.0 y
gn
y
cepas
por
Las
una
cantidades de
De
mayor
cercanos
a
los d e
la m u t a c i ó n
forma similar,
parte
paso
producen
al
de
la
primer
de
El
la r u t a ,
gen
ADHP
sepia
(Wilson
m u t a c i ó n H n rS a f e c t a
de
(nc'm
3
y
la P H ^ P T E
)
y
con
y
la
resto
de
de
producen
al
patrón de pteridinas
de
d r o s o p t e r i na s
menor
l os de
de
(Evans y Howells,
la
epistasia parcial
cantidad
a
no
afectan
y
m u t a n t e s cuyo
encuentra
que
la r u t a
síntesis
a ¿ . , 1977).
la
ras
q u e el
más
de
los p a s o s e n t r e
mientras
mucho
vez,
segundo
P H í+PTE
las e s p e r a d a s ,
en
de
mutaciones
a ¿ . , 1986).
mutaciones
combinarse
se
et
e n t r e la
un valor
exceptuamos
aquellas
a su
ras
el
(Yim et
Jacobson,
(Ferré
y
y
de d r o s o p t e r i n a s .
ciclohidrolasa
actúa
sintasa
paso
gn
la r u t a
las c e p a s
si
los p a s o s e n z i m á t i c o s
el
HsPTE
esperado»
se h a n s i t u a d o
a
presentan
las c a n t i d a d e s
controla
gran
al
pteridinas
Las
la s e p i a p t e r i n a
Est as dos cepas
clase
a alguno
específicamente
Se h a n a n a l i z a d o
similar
diferencias
de
afecta
la x a n t o m a t i n a .
la s e g u n d a
afectan
cl_
(n 0 ** 1 y 2).
de pteridinas
unas
a
las
las m u t a c i o n e s
son
pteridinas
lo e s p e r a d o ,
las m u t a c i o n e s
similares
a
se
con valores
simples
gn
y ras
el,.
la c e p a cl._gr
las p t e r i d i n a s
-12L-
(n° 5)
cantidades
presenta
inferiores
en
la
a
las
es peradas,
estando
a
éstas
m u t a c i ó n pr
que
diferencia
importante
más ce rc a na s
las d e
d r o s o p t e r i n a s , que
la
cepa
es
llega a
a
las q u e p r e s e n t a
c lo t.
Sin
de
embargo,
el
aumento
la
ser
aproximadamente
la
una
cantidad
el
doble
de
del
esperado.
La
la
cepa
cepa
tot al
sepia.
de
se_cl
sepia,
(n °
siendo
la s í n t e s i s
La
cepa
una c l ar a
de
interacción
la c a n t i d a d
y
por
(n 0
entre
biopterina
son
otro
7),
por
es c u a t r o
las c a n t i d a d e s
inferiores
a las
la p r e s e n c i a
d e u n 253*/. de pterina,
se
en
producir
una
el
simple
mutante
acumula
de
la
sustancia
parece
que
es
Sin
de
utilizada
de
bloqueo
la m u t a c i ó n
presenta
Por
un
lado,
superior
a
y similares
cuando
aunque
al
la
de d i h i d r o b i o p t e r i n a
esta
de
si
a
no
el
q ue es capaz
de
mayor
para
las
aunque
dihidropterina,
la
y
destacar
sustancia
embargo,
sustancia
cantidad
pterina,
veces
T a m b i é n es
H n ’- 3 .
esta
pequeña
precursor
cl ot .
el
contrario,
esperadas
el
m u t a n t e H n r S no
mutante
el
las d o s m u t a c i o n e s .
que p r e s e n t a
detecta
similar
drospterinas que produce
de d r o s o p t e r i n a s
esperada,
un p a t r ó n
en este caso d e t e r m i n a n t e
Hn r3
c . 1
presenta
6 )
parte
la
el
de esta
síntesis
de
drosopteriñas.
En
la
portadoras
síntesis.
tercera
de
Los
caracterizan
superior
a
pteridinas
mutaciones
patrones
por
la
clase
poseer
esperada,
suele
estar
se
que
de
incluyen
afectan
pteridinas
una
cantidad
mientras
aumentado
-125-
que
o
aquellas
a
cepas
las d o s r u t a s
que
de
el
presentan
de
se
d ro sopteri ñas
resto
presentar
de
las
valores
similares
a
Dos
que
los e s p e r a d o s .
cepas
también
(n0 ®
E5
dobles
han
y
sido
£6).
drosopterinas
similar
e n el
pterina.
segunda
La
esperada
de
que está
más
las
q u e el
tipo
r s a en
las
al
esperada
cepas
que produce
anularse
la
de
de
el
que producen
Aunque
presentar
clo t»
con
patrones
tipos
de
a
la
a
dos
destacar
el
lo
¿td
y
opuesto
las c e p a s
cercanos
opuestos
la
observado
mutaciones
lo q u e
de
estas
importante
las
de
la s e p i a p t e r i n a
interacción
es
6
ligera
similar
excepto
de
una
a excepción
esperado.
tipo
tabla
cantidad
m u t a n t e s es p r e c i s a m e n t e
la m u t a c i ó n
dos
lo
la
con
cantidad
t e r c e r a c l as e »
dobles
los
u na
en
una
las p t e r i d i n a s »
las p t e r i d i n a s »
interacción
y cl_rsP podrían
al
a
presenta
de e s t a
de
< l_td_c 1. y c¡._rsE )-j
presenta
contradecir
cepas
c l ot
primera
acumulada
cepas podrian
en
resto
todas
de
cuantificadas, aparecen
La
disminución
mutantes
l.td_cl.
esperado
interacciones
que
presentan.
GrLiQ°_LII: Otras
de p t e r i d i n a s
En
dobles
la
de
han
coinciden
dobles mutantes
con
mutantes
cuya principal
un p a t r ó n
los d a t o s
de p te r i d i n a s
de este
grupo
las m u t a c i o n e s
garnet»
lightoid»
tubules,
de
característica
excluido
Malpighian
cuyos
patrones
los e s p e r a d o s .
t a b l a 8 se p r e s e n t a n
de p r e s e n t a r
Se
no
cepas
ya q u e e s t a s
-1 E 6 -
diferente
las c e p a s
varias
en común
del
son
es
la
esperado.
que son portadoras
r o s e 2 , ruby,
cepas
cepas
clot
y r ed
estudiadas
como
Tabla 8.- Cuantificación de pteridinas en dobles mutantes de color de ojos (III)
Otras cepas dobles mutantes cuyos patrones de pteridinas no coinciden con los
esperados.
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
(8)
Cepa
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
h
en ry
7
9
9
22
ND
300
61
213
36
29
55
183
110
121
19
58
ND
190
104
205
TR
2
5
4
6
ND
165
120
ND
ND
78
171
4
ND
736
392
ND
ND
143
616
13
2
2
ND
104
97
TR
ND
62
94
2
3
3
ND
322
5
ND
ND
74
440
ND
ND
ND
ND
44
142
261
807
ND
ND
ND
342
($)
ND
ND
ND
84
544
1140
868
ND
ND
ND
ND
69
ND
52
53
175
241
ND
ND
ND
ND
1925
ND
105
928
588
620
9
4
4
ND
91
252
5
ND
115
191
4
8
7
ND
294
158
ND
ND
87
484
ND
ND
ND
ND
TR
342
ND
ND
ND
3238
(!)
ND
ND
ND
ND
ND
1130
($)
454
($)
10
8
10
ND
723
438
3
ND
17
18
ND
460
378
ND
ND
253
120
506
8
pn Hnr^
ras Hnr^
pn se
ras se
t i r3
pr Hn
se Hnr^
en Hnr^
.
2b p
BP
361
T a b la
9)
8 (c o n tin u a c ió n )
Cepa
NDP
DP
IDP
AD1
SP
ADHP
IXP
PTE
h
Pu2 se
ND
ND
ND
ND
161
ND
8
123
219
124
ND
ND
ND
ND
578
ND
28
848
276
248
ND
ND
ND
ND
832
ND
44
262
577
205
ND
ND
ND
ND
3300
ND
44
208
1056
($)
ND
ND
ND
ND
2900
ND
53
669
545
322
ND
ND
ND
ND
2750
ND
60
1520
960
508
ND
ND
ND
ND
2765
ND
100
1289
ND
ND
ND
($)
ND
105
1600
403
1200
858
ND
7
3
3
133
40
ND
38
123
7
8
11
33
87
9
180
103
51
13
88
170
5
3
5
5
15
125
21
95
248
10
52
260
139
220
83
10
66
9
61
312
4
6
10
8
6
85
58
5
25
28
188
18
18
47
260
132
13
13
41
216
22
14
31
13
21
111
101
39
79
305
50
120
200
6
28
13
32
54
148
27
16
7
8
15
63
16
102
341
17
39
109
100
83
17
72
37
29
58
148
14
21
41
21
43
38
115
35 .
46
195.
172
121
54
80
73
38
61
163
120
10) lt se
11) en se
12) v se
13) v lt
14) car dke
15) cm dke
16) cm en
28
17) en p
18) v dke
19
2b p
BP
620
Tabla 8 (continuación)
Cepa
(19) sf p
(20) sf st
(21) pr ca
(22) pr p
(23) bo lix
(24) lix dke
2b p
BP
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
h
17
12
11
26
20
110
68
27
41
157
18
18
14
43
61
112
39
36
72
216
13
12
12
23
140
97
66
6
69
200
80
83
67
95
61
156
46
72
96
94
26
12
16
24
28
78
28
24
41
135
2
2
3
3
70
32
44
4
27
198
30
13
14
21
21
59
12
15
14
40
8
8
7
9
64
30
51
12
42
198
23
24
25
67
203
304
ND
10
146
289
19
22
23
85
320
270
ND
16
50
132
32
49
47
82
119
128
9
10
91
180
12
24
31
86
260
165
ND
12
38
132
($) Comparar el valor observado directamente con los que presentan los mutantes simples
(Tabla 5).
casos particulares
La
cepa
en
drosopterinas
simple
ry.
que
muy
(n°
inferior
con
un aumento
interacción
en
el
quedar
que
la
Las
que
dicha causa»
un gran
Cuando
dos
estas
y
patrones
parecidos
a
y es
se
(n0 **
de
solo
caso
ausencia
3
5).
de
las d r o s o p t e r i n a s .
Al
y ras
une
dicho
paso
así
se
la
como
caracterizan
para
por
caso
se»
cuatro
ausencia
i s o x a n t o p ter ina
Esto
de
por
mutaciones
de
son
simples
parece
mutaciones
las c e p a s
l as
las
enzimática
los m u t a n t e s
el
la
de sus p r ec u r s o r e s .
resultantes
de d r o s o p t e r i ñ a s c o i n c i d e n
de p n _s e
la
se combin an con
las
para
En
se
e n el
a
de algunos
H n r a y se.
de
t o ta l
parcial
al
se
pteridinas
parte
se s i t u a r í a
en p t e r i n a .
la a c t i v i d a d
los m u t a n t e s
por
cantidades
acúmulo
alteran
indicar
d e drosopteri ña s p r o d u c i e n d o »
mutaciones
e p i s t a s i a es casi
2)»
y
los q u e p r e s e n t a n
l os d e
epistasia
H n 1-3
síntesis
q ue
podría
acumularía»
transformaría
mutaciones
la
se
la m u t a c i ó n
de s e p i a p t e r i n a ,
los d o s g e n e s
formar
de
de d r o s o p t e r i ñ a s
que
parcialmente
se
interrumpir
el
la s í n t e s i s
para
cantidad
la q u e p r e s e n t a
dihidropterina
bloqueado
dihidropterina
que a
de
una
e n las c a n t i d a d e s
a c e t i 1d i h i d r o h o m o p t e r i na
los
presenta
a
entre
acetildidhidrohomopterina
QD
1)
y a c e t i 1d i h i d r o h o m o p t e r i n a , lo
la
paso
ry
g ru p o s .
Esta disminución
se c o m b i n a
pterina
en o t ro s
gn
la c e p a
la G T P C H ,
mucho
más
pn y
ras
indicar
y
ras. E s t a
B D _ H n rS
ras_Hnr 3 > ras_se
y
cepas mencionadas»
con
las e s p e r a d a s
total),
una
mientras
(n°
pn
las
(en
la
y p t e r i n a e n H n r*3 s e m a n t i e n e
-130-
también en
las c e p a s
La c e pa
p n _ H n r"3 y r a s _ H n r 3 .
Q r _ H n r"3
y BP un e f e ct o
(n 0 6)
similar
de pn y ras
comentados
produce una
gran
doble mutante
mutante
pr
resto
la s
de
varias
al
acumulación
a
de
valores
para
mucho
es
El
los d o b l e s
dos
otras
como
ligeramente
disminuidas
las
o
mutantes
Hnr3
sustancias»
este
a
los
del
p a t r ó n de p t e r i d i n a s
mucho
más
variado»
se
del
y mientras
similares
drosopterinas
ligeramente
SP
mutante
más cercanos
se p r e s e n t a n en c a n t i d a d e s
esperadas»
las s u s t a n c i a s
A u n q u e el
estas
los e s p e r a d o s .
sustancias
de e l l a s
observado
para
anteriormente.
presenta
que
presenta
a
las
encuentran
aumentada
como
la
ADHP.
Finalizando
mutación
H n r3
con
los d o b l e s m u t a n t e s q u e
hemos
situado
c e p a s c n _ H n ra y s e _ H n r3
p at ró n de p t e r i d i n a s
Así »
conducir
BP y A D H P ) .
ausentes,
de
mientras
que
otro
a
P or
como
ausencia
lado,
las
la d e
al
del
disminuidas y esta
un p a t r ó n
hay varias
es
la
típica
lo e s d e
de
sepia,
del
de pterina,
a
pesar
ADHP
-131 —
presenta
un
esperado.
(SP»
que
H a BP»
y
la
están
IXP.
la m u t a c i ó n
la B P
Hr¡r 3 . U n c a s o
de
las
La
sepia,
la m u t a c i ó n H n ^ 3 . P o r
mientras que
mutante
tabla a
de p t e r i d i n a s
la H e BP e s t á n e n c a n t i d a d e s
en
la
disminución
sustancias
drosopterinas,
la s e g u n d a
la S P y
La p r i m e r a
de otras p t e r i d i n a s
las d o s p r i m e r a s
similar
presencia
lado,
en esta
diferente
s e _ H n rB p r e s e n t a
un
las e n c o n t r a d a s
valor
están
a un au m ento
La cep a
complejo.
7 y B).
ligeramente
las d r o s o p t e r i ñ a s
parece
más
(n ° “
también
presentan
que
el
equivalentes
presenta
especial
mutante
es
un
la
H n 1”3 no
presenta
porque
dicha
la b a j a
teóricamente
sustancia
pterina.
muy
sustancia.
posible
debido
cantidad
el
ADHP
para
para
a
durante
que cierto
cepas
dobles mutantes
s on
cepas
SP y B P » se p a r e c e
el
cepas
se
con
la
traduce
y
y
en una
esperado,
total
tanto
se.
En
en y y p a r e c e n
mutación
sepia»
de
otras
entre
producir
una
ligera
q u e e n el
caso
de
H S BP,
q u e e n el c a s o
BP
de v_se,
y
para
ADHP
como
la
se*
en
las
cepas,
las
interacción
la c e p a
y PTE
solo
En
que a sepia,
cepas
últimas
genes
12).
obtenido»
de d r o s o p t e r i n a s
de
oculares.
(n 0 ” 9 al
dos
sea
la m u t a c i ó n
interacción
en estas dos
a
pteridinas
incluyen
y v_se
la
siendo
sustancia
las p t e r i d i n a s
que
a
parece
razón»
estas
disminución
mientras
unirse
los m u t a n t e s P u a y ¿t
la a u s e n c i a
invariable,
mutaciones
a
sintetiza
<3^2%)
de e st a
p a t r ó n de p t e r i d i n a s
más
mantiene
en
tipo
P u E _ s e » ]_t _ s e , c n _ s e
dos primeras»
que
algún
explicada
se m e t a b o l i z a
a esta
sepiapterina u
de e x t r a cc ió n de
que p r e s e n t a n
mientras
porcentaje
de
poder
de pt e r i n a
debida únicamente
sepia y
las
no
ser
que
drosopteriñas,
proceso
□tras
las
al
la c a n t i d a d
la d e g r a d a c i ó n
el
dihidropterina
H n ’"3 ,
formar
ser
también
de
mutante
Sin embargo»
alta
E s ta p r e s e n c i a p u e d e
cn_se
frente
a
se
lo
la H a B P e s t á
disminuida.
El
dificiles
resto
de
de
explicar.
(v_ 1.1 , c a r _ d k e ,
patrones
a
podrían
las d e s c r i t a s
las c e p a s p r e s e n t a p a t r o n e s
cm_dke,
s er
e n el
Por u n
cm
en
lado,
y cn_g
c o n s e c u e n c i a de
grupo
I. E s t a s
-132-
hay una
de
pteridinas
serie
(n®** 13 al
de c e p a s
17))
interacciones
interacciones
cuyos
similares
podrían
equiivaler
a
pteridinas
están
ligeramente
algunos
com
y
casos
sf_st
grainde,
las
disminuidas,
en
cepas
del
la ú l t i m a
mientras
que
a
lo
la BP e s t á
grupo
I. P o r
presentan
la
la
mientras
frente
los q u e
(n0 ** 19 y 20)
en
en
disminuida
algunas
aumque
aquellas
la
SP
y
parte
de
la B P e s t á
las
solo
esperado.
Hay
incluso
aumentada,
como
ocurría
lado,
las c e p a s
interacción
disminución
que
que
otro
una
mayor
equivalente,
de d r o s o p t e r i n a
la
BP
sf_gj
están
es muy
bastante
aumentadas.
Hay,
por
interacciones.
presentan
una
espterada.
Este
otras
23
y
198&),
esperadas,
pteridinas
En
los
que
las c a n t i d a d e s
la
es
que
Cepas
similar
tabla
patrones
9
esta
Las
p r _p
al
se
y ADHP
21
en
solo
y 22)
superior
con un
mutantes
de
PTE
que
e
IXP
cantidades
a
la
descenso
de
dobles
(Ferré
similares
mutantes
( n°~
producen
la S P se e n c u e n t r a
et
una
a¿.,
estando
a
las
disminuida.
cuyop a t r ó n
de
esperado.
presentan
son,
las c e p a s d o b l e s
más o menos,
combinaciones
tabla
( n 0 **
de H a BP y BP a u m e n t a d a s ,
de p t e r i d i n a s
esperados.
ap a r e c e n en
cantidades
W:
y
extrañas
cepas bg_l_i_x y l i x _ d k e
contienen
mientras
que p r e s e n t a n
parece compensarse
las s u s t a n c i a s
Grupo
ca
<SP y B P > . L a s
presentan
de
gnr
cepas
de d r o s o p t e r i n a s
aumento
de
cuatro
cepas
cantidad
2¿t) ,
resto
cuyos
Las
pteridinas
disminución
el
último,
son
de
bastante
-133-
dobles
variadas,
mutantes
similares
mutantes
aunque
a
que
cabe
T a b la
9 .-
C u a n t if ic a c ió n
de p t e r id i n a s
en do b les m utantes de c o lo r de o jo s
(IV )
Cepas dobles mutantes cuyo patrón de pteridinas es similar al esperado.
(1 )
(2 )
(3)
(4)
(5)
(6 )
(7)
(8 )
(9)
Cepa
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
h
en pr
65
49
42
34
23
33
69
50
45
94
41
34
32
18
64
29
55
37
46
90
6
20
16
8
143
67
74
14
78
153
4
11
18
15
208
96
58
13
58
168
5
2
8
8
ND
431
294
ND
ND
123
361
10
11
ND
598
495
ND
ND
92
528
27
15
12
12
41
31
55
24
54
89
10
9
12
4
102
30
77
13
55
154
11
8
8
TR
25
ND
100
85
44
122
14
13
15
5
64
TR
86
47
46
93
30
34
35
33
39
409
9
28
83
118
37
36
35
63
182
280
26
21
89
158
33
23
24
24
12
ND
23
55
16
32
39
29
26
23
21
TR
20
32
22
31
16
9
10
32
165
192
97
16
81
209
12
17
16
55
200
168
63
23
80
213
4
2
2
5
78
10
47
7
61
335
1
2
3
10
143
TR
38
18
79
840
pn
dke
dke
Hnr2
pn prras
lt d
Pu2
cd
cd
st
car en
cho
dke
2
b p
BP
Tabla
9 (continuación)
x u u i a a (X/Uiii<iiiuav/J.uii/
Cepa
10) ras pr
11) pn ras
12) pn en
13) ras en
14) en dke
15) dke ca
16) dke cd
17) dke p
18) pr cd
19) pr kar
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
H QBP
BP
10
4
3
8
63
21
32
69
5
5
2
1
26
8
45
TR
107
23
28
110
16
7
5
TR
100
37
55
87
3
5
3
1
44
4
112
TR
97
20
47
140
25
20
28
17
13
62
23
84
54
118
165
19
28
16
160
73
55
32
76
115
21
9
11
7
4
29
TR
69
52
53
147
15
13
5
70
TR
69
55
39
82
21
67
44
152
74
33
68
145
44
49
123
77
150
18
130
92
42
36
49
98
28
1
6
4
9
161
42
42
18
61
234
3
4
15
143
99
33
4
29
216
14
17
43
31
97
158
140
79
29
62
94
51
55
86
118
154
51
31
57
112
3
6
10
5
10
17
37
139
52
42
14
59
184
4
130
95
39
11
44
216
35
19
21
50
67
26
55
62
39
36
18
20
33
38
58
49
68
32
55
102
78
21
21
16
30
37
42
34
55
67
54
43
34
16
77
46
73
28
58
143
T a b la
9 (c o n tin u a c ió n )
Cepa
(20) lix se
(21) dke se
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
h
2b p
BP
ND
ND
ND
ND
5
659
1089
411
ND
ND
ND
2662
($)
ND
ND
ND
ND
512
744
682
ND
ND
ND
ND
57
735
864
ND
ND
ND
2148
($)
ND
ND
ND
63
608
732
558
($)
($) Comparar el valor observado directamente con los que presentan los mutantes simples (Ta
bla 5).-
destacar
con
la a u s e n c i a
mutaciones
dark
eye,
cn_red,
el
y red
son»
de
es
Hay
cepas
de
interacción
Cepas
Se
analizado
han
bw_red,
detectándose
ca,
en
ellas
algunas pequeñas
de
la r u t a
de
Como
el
resto
de
Grupo_y_I :
mutantes
los p a t r o n e s
cd,
cantidades
los g e n e s
de
cho
en
iguales
a
los
las c a n t i d a d e s
como
para
de
no
se
suponer
la
de b r o w n .
cromatográficos
rb
pteridina,
mutante
y
tabla
de ojos
de
no
(metabolito
10.
b r o w n es e p i s t á t i c o
mutantes
las
únicamente
xanturénico
de color
dobles
de
bw y bw_gr,
la x a n t o m a t i n a ). V er
el
la t a b l a
diferencias
bw,
de ácido
mutantes
Cepas
cn_ry o
las m u t a c i o n e s .
ninguna
se observa,
exactamente
estas
entre
bw
síntesis
y
interacción
se o b s e r v a n e n
importantes
dobles
bw
la c e p a s
una f u e r t e
diferencias
aunque
É?ruQg_V:
que
suponer»
consideran suficientemente
existencia
en
raspberry
t u b ul e s.
ligeras
sustancias,
mutante cinnabar
prune,
lo q u e o c u r r e
de p t e r i d i n a s
lógico
gen
carnation»
en p r o du ce
Malpighian
como
esperados.
algunas
purple,
mutante
Los p atrones
9 no
i n t e r a c c i ó n del
a diferencia
donde
con rosy
como
de
sobre
analizados.
red
Malpighian
tubules.
Cuando
color
se c o m b i n a
de ojos,
el
patrón
la m u t a c i ó n r e d
de
pteridinas
-137—
con otra
de
la
mutación
cepa
de
doble
T a b la 1 0 . -
C u a n t if ic a c ió n de p t e r id i n a s
en d o bles m utantes de c o lo r de o jo s
(V )
Cepas do b les m utantes de brown.
Cepa
(1) bw ca
(2) bw cd
(3) bw en
(4) bw
ltd
(5) bw pr
(6)
(7)
(8)
bw red
cho
bw
rb bw
(9) v bw
XTC
NDP
DP
IDP
ADI
SP
ADHP
IXP
PTE
H 2BP
BP
7
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
13
13
ND
ND
ND
ND
ND
ND
.ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
7
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
4
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
8
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
TR
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
1
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
mutante
es
en base
a
simples
por
patrones
tabla
h a b i t u a l m e n t e d i f e r e n t e del
los
separado.
12 s e p r e s e n t a
patrones
ojos
el
parece
estar
mutación
efecto
a
acompaña
y
pigmentos
o
rojos
que
podemos
esperada,
mientras
cantidad
de
salvaje),
e n el
que
mutaciones
en
las m u t a c i o n e s
la
de
mutante
en
de
rojos
o
los
color
de
se a p r e c i a
la
biopterina)
la p r e s e n c i a
cm_red
doble
de
las
resultan
rb
-1 3 9 -
mutante
si
como
más
mutantes
la
las
que
la
la del
tipo
d e u n 200*/» (en
Estas
interacciones
en c u e n t a
la s í n t e s i s
o
que
en
alrededor
producen
ocurre
mayor
¿+00*/» (de
tenemos
no
evidentes,
los d o b l e s
las c e p a s
y r b _ r ed ) .
la
las s u s t a n c i a s
drosopteriñas
hasta
aunque
drosopterinas
que son
p a r t e de
afectan a
o
incluso,
las
p a s a d e s d e el
red,
lt d
la
(reducción de
la
cepa
biopterina,
sorprendentes
cm,
En
comparamos
las p t e r i d i n a s
que s o n va ri as
o y no
de
producen,
de
biopterina
resultan bastante
se
la m a y o r
cantidad
re d , v_ r ed , l.td_red,
r ed
los
de ojos.
interacciones
observar
una
la
Si
dobles mutantes,
Centrándonos
estas
acumulan
cepas.
y acúmulo
a re d e n
y en
d e r ed.
los p i g m e n t o s
mutante
de s í n t e s i s
cd.
de
p a r c i a l m e n t e por
de color
la r u t a
en,
las
del
inhibido
observarse
los m u t a n t e s s i m p l e s d e
interacciones
que
estas
sus respectivos
mutaciones
afecta
de
de
11 p u e d e n
total
esperar,
de e s t o s m u t a n t e s
los d o b l e s m u t a n t e s
valor
de d r o s o p t e r i n a s
Estas
en
de
pteridinas
la t a b l a
algunas
drástico
cantidad
otras
de
de
de
el
de p t e r i d i n a s
con
q u e el
En
de p t e r i d i n a s
drosopterinas
con
patrones
que cabría
que
las
de p t e r i d i n a s
po r
sí
solas
y
una
disminución
cercano
de
d ro sopteri ñas
algunas
de p t e r i d i n a s
5)
quedado
es
c e p as como»
c asi
indicando
el
las
gn
cantidades
B P , SP y HaBP
red
drosopterinas,
la d e
red,
cantidad
presenta
a pesar
esta
Lac e p a
diferente
de
cl_red
del
esperado
interacción
producido
3.5.
única
al
en
el
produce
cepa
esperado
E s t u d i o de
Los
datos
doble
mutante.
re d
la
cm
(ver
red
ha
cantidad
de
mientras
valores
que
las
lo e s p e r a d o .
La
similares
de
de B P e s s i m i l a r
mutante cho
un patrón
en
el
po r
el
mutante
el
acumula
en
a
gran
red
se
s u m a el
(ver
patrón
grupo
de
muy
a
la
tipo
de
II).
pteridinas
la c e p a d k e _ r e d .
sobre
los d o b l e s m u t a n t e s
anterior
parecen
se o b s e r v a n
entre
color
son
debidas
la
los
pteridinas
probablemente,
mutante clot
que p r e s e n t a un
es
de
que,
que
de
mutación
la c a n t i d a d
el
la c e p a
la
esperada,
interacciones
alguno
de
patrón
la i n t e r a c c i ó n p r o ducida por el m u t a n t e red
apartado
de ojos
el
y gr
también
que
biopterina
c m _ r e d » el
son más bajas de
presenta
que
similar
en el
la
que
de
sustancia.
interacción
La
a
mientras
que
red
es
cho
similar
ejemplo»
e f e c t o de
drosopterinas
de
por
inhibido
cepas
aumento
la c e p a d o b l e m u t a n t e .
mismo
q u e el
prácticamente
En
cepa
un
a e s e £00*/. q u e p r e s e n t a
En
tabla
y
compuestos
a
red
de red
presentados
indicar
y otros
presencia
intermediarios
o
de
que
mutantes
ausencia
la
ruta
la s
de
de
de
Tabla 11.-
Cuantificación de pteridinas en dobles mutantes de color de ojos (VI)
Cepas dobles mutantes de red Malpighian tubules.
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
(8)
(9)
Cepa
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
IXP
PTE
h
cd red
16
7
13
29
132
195
36
55
125
407
5
12
7
22
91
119
40
32
90
391
23
22
21
17
1420
ND
73
495
680
406
2
3
3
2
1400
ND
61
212
451
1092
46
28
27
53
161
254
24
26
104
197
2
2
2
12
200
102
10
14
64
756
63
35
32
82
95
200
30
53
76
210
7
4
6
20
100
71
32
38
77
344
TR
TR
TR
TR
39
33
35
25
61
TR
TR
TR
3
110
TR
29
19
125
320
($)
4
5
6
12
88
84
22
21
71
410
2
3
4
19
130
94
34
15
59
504
11
el red
cm red
en red
cho red
dke red
ltd red
pn red
pr red
2b p
BP
10
34
89
160
17
19
73
188
3
-2
2
14
200
170
17
10
91
714
5
3
2
4
30
TR
50
16
46
178
2
2
2
4
160
74
45
14
91
588
7
5
2
7
19
20
38
22
30
125
4
2
3
4
69
30
44
16
56
462
15
T a b la 11
(c o n tin u a c ió n )
Cepa
(10) rb red
(11) v red
NDP
DP
IDP
ADP
SP
ADHP
28
16
15
31
128
130
3
1
3
12
169
80
17
9
10
42
47
169
7
4
6
20
150
94
IXP
PTE
H 2BP
BP
26
15
17
75
236
15
48
630
23
36
78
183
56
40
96
420
T a b la
1 2 .-
C u a n t if ic a c ió n
la s
c o n ju n ta de la s
d r o s o p te r in a s
en
cepas im ita n te s de re d
Los valores se expresan en porcentajes sobre la
cantidad de drosopterinas de la cepa Oregon-R.
Cepa
red
Drosopterin
8.5 + 0.7
cd red
14.9 + 1.1
en red
42.2 + 0.4
v red
16.0 + 0.3
ltd red
18.0 + 1.0
cm red
24.6 + 2.0
rb red
13.2 + 0.5
el red
24.5 + 0.5
cho red
v en red
1.5 ± 0.1
45.3 ± 2.3
síntesis
del
La
dobles
pigmento
observación
mutantes
marrón.
de
de
red
interacciones
parecen
sobre
po r
t od o ,
drosopterinas
frente
a
( ta bl a
incremento
las c a n t i d a d e s
mutantes
de red,
de
que
específicamente
pteridinas,
esperado
de
las
la m u t a c i ó n
presentan
(teniendo
dos
combinarse
red
red
que
la
los
estas
cantidad
la c a n t i d a d
de
de b i o p t e r i n a
a
a
pteridinas
que
son p o r t a d o r a s
a
mutaciones).
con
de
caracterizándose,
en
se observa
la
en c u en ta
afectan
indica
de e s t a s d o s
un patrón
afectan específicamente
marrón o que
pteridinas
esperados.
que además
afecta
11)
de
bastante complejas
un
l os v a l o r e s
dobles
patrones
y una d i s m i n u c i ó n de
Estudiando
los
los
ruta
de
aquellas
de
s í n t e s i s de
pteridinas
embargo,
los
en
al
los e f e c t o s
mutantes
del
las d o s r u t a s de s í n t e s i s
interacción
las
similar
de
la r u t a d e s í n t e s i s
una
cepas
de una mutación
una a d i t i vi da d
Sin
en
que
pigmento
producen
l as c e p a s
al
dobles
mutantes.
Centrándonos
ruta
de
síntesis
caracterizado,
lightoid
que
presentan
una
mutantes.
Por
esta
en aquellos
del
se p u e d e
impiden
el
sustancia
síntesis
contrario,
al
que
interacción
no
pigmento
marrón,
presenta
a
mutante
red
la del
pigmento
observar
la
clara
mutant e s cuyo
el
poder
una
y algunas
efecto
marrón
sobre
está
los m u t a n t e s
la
bien
cinnabar
y
de 3 - h i d r o x i q u i n u r e n i n a
en
las
cepas
mutante cardinal
transformarla
cantidad
dobles
que acumula
totalmente en
de b i o p t e r i n a
variaciones
en
el
similar
resto
de
las p t e r i d i n a s »
Estos
y no
de
la
similar
si
defecto
enzimático
Para
era
de
la
de
Los
en
mutante
del
que
la
resultados
en
la
cn_red
cercanos
r ed .
v.alores d e
Por
ya
1 igeramente
en
cn_red
Aunque
el
era»
que
patrón
estar
red
de
muy claro
presentaba
superior
a
habría sido
mutante
mutante
y
en
una
la d e
lógico
produce
y»
por
un
t an t o»
a
el
la
cepa
presentara
del
de
red»
de
tabla
Estos
13.
a
las c e p a s
se
red
y
c as i
mientras
que
los v a l o r e s
una
de
la
la
del
extraña
sepiapterina
y el
con
disminuye
aumenta
suplementada» mientras
sin suplementar
en
indican
suplementado
observa
de
esta
red
resultados
la c e p a red»
alcanzar
de
una
con
de d r o s o p t e r i n a s
cantidad
en
patrón
dieta
crece en un medio
l os de
un
realizamos
la
con
contrario»
q u e “ la
de 3 - h i d r o x i q u i n u r e n i n a
obtenidos
llegando
las c e p a s
suplementada
que
metabolito
en
como
falta
suplementación
aumenta
interacción
y
red
al
diferente
la c e p a
valores
biopterina
el
ligeramente
3 — h i d r o x i q u i n u r e n i n a » la c a n t i d a d
hasta
pensar
no p a r e c í a
cepa
solo
la c e p a
presentan
cuando
que
anterior
de que
experiencia
que
a
cambio
e n c u e n t a q u e el
comprobar
tan
se
y sepiapterina.
de 3-hidroxiquinurenina.
pteridinas
red
la
tenemos
la c a u s a
sustancia.
c ua l
a
el
lo
drosopterinas
la s í n t e s i s
llevaron
ausencia
esperar»
a
nos
embargo»
por
drosopterinas
3-hidroxiquinurenina
su
Sin
la r a z ó n
cantidad
red
la
con
pteridinas.
era
t o do
resultados
precisamente»
producía
sobre
cepa
los
red
son similares.
la e x p e r i e n c i a
de s u p l e m e n t a c i ó n
-1A5-
indica que
la
Tabla 13.-
Patrones de pteridinas de las cepas en red y red crecidas en medio normal o en
medio suplementado con 3-hidroxiquinurenina (HQ).
Los valores se expresan en forma de unidades de fluorescencia (4 repeticiones por
cepa), excepto para el compuesto ADHP, para el cual los valores representan el área
2
de la mancha sobre la placa (mm ).
Sustancia
red
NDP
6.8 + 0.9
6.4 + 0.5
26.4 + 1.6
11.7 + 0.7
20.4 + 5.6
14.8 ± 2.4
70.1 + 9.6
31.3 + 3.0
IDP
5.7 ± 0.5
5.8 + 0.4
19.7 + 1.4
9.9 + 1.0
ADP
9.0 ± 0.2
6.9 ± 0.3
22.0 ± 3.8
13.7 ± 1.3
SP
90.4 + 15.9
ADHP
h 2b p
DP
BP
PTE
red (HQ)
en red
en red (HQ)
115.6 ± 5.4
93.5 ± 16.4
143.1 + 9.5
72.3 + 8.1
73.5 ± 9.2
108.0 ± 20.9
86.4 + 7.2
2.8 + 0.2
3.3 ± 0.4
3.5 ± 0.1
3.5 + 0.2
19.3 + 1.8
19.7 ± 0.9
9.1 ± 1.2
17.8 + 1.5
2.2 + 0.4
2.8 ± 0.5
3.1 ± 0.5
2.8 + 0.4
3-hidroxiquinurenina
síntesis de
parece
drosopterinas
que
estos
mutantes
que
mutantes
simples
cantidades
la
cepa
de
pteridinas
los
en
Para
uno
de
una
de
Las
mutantes
actividades
pueden
de c a d a
cepa
puede
(figura
S E).
Sin
dobles
salvaje)
que
afectara
de
la
simples
esperar
a su
enzima
en,
causa
y y cd
en
la
nos
el
De
que
(Mackay
tabla
de
15.
Si
ya q u e
enzimática
-147-
estas
estudiar
s er
red
presenta
y ü'Donnell,
los d o b l e s
se c o m p a r a n
se
negativa
reduce
a
üregon R
muy superior
las
(tipo
a
la
3-hidroxiquinurenina
la m i s m a f o r m a ,
15)
140.
3-hidroxiquinurenina
la c e p a
compuesto
a
presentes
por
encontradas en
c i c 1o h i d r o l a s a de
(tabla
llevó
de
se o p t ó
de
de que
(tabla
enzimática
esta correlación
actividad
las
p a t r ó n de
una bue n a c o r r e l a c i ó n
d e red,
actividad.
GTP
red,
la e n z i m a
enzimáticas
si
a
el
Dr g s g g h i_l_§. m e ^ a n o g a s t e r
de
cepas
presentan
similares
altera
cepas
que
G T P c i c l o h i d r o l a s a , al
observarse
una
ya
dobles mutantes
la s c a n t i d a d e s
mutantes
a aquellas
La c o m p r o b a c i ó n
de
la
biopterina»
vermilion
de pteridinas,
embargo,
presenta
cabría
cepas
observarse
con
de
sobre
de 3 - h i d r o x i q u i n u r e n i n a
disminuida
actividades
cepas
mutantes
la e n z i m a
de
la
red,
o
t a b l a 5).
la
patrón
los m u t a n t e s
1983).
estas
dobles
de l
actividad
mutación
3-hidroxiquinurenina
y en vari as
las a c t i v i d a d e s
de
y biopterina
(ver
detectar
alteraciones
inhibidor
reducidos
cinnabar
las c a n t i d a d e s
red
efecto
están
la
como
salvaje
de
la c e p a
efectos
drosopterinas
tipo
cuantificar
un
y activador
presentan
la p r e s e n c i a
en
tiene
las
las c e p a s
resultaron
actividades
de m u t a n t e s
similares
a
la de
T a b la 14 . -
C u a n t if ic a c ió n
de 3 - h id r o x iq u in u r e n in a
Valores de absorbancia (400 nm) usados para estimar
la cantidad de 3-hidroxiquinurenina.
Cepa
Absorbancia
% Oregon
Oregon R
0.364
100 ± 2
cho red
0.239
66 ± 1
red
0.201
55 ± 8
cd red
0.188
52 ± 1
cm red
0.124
34 ± 5
rb red
0.088
24 ± 1
ltd red
0.035
10 ± 5
v red
0.017
5 ± 3
en red
0.013
4 ± 3
T a b la 1 5 . -
A c tiv id a d e s de l a
enzim a GTP c i c l o h i d r o l a s a .
Una unidad enzimática se define como la cantidad de
enzima que produce un nmol de dihidroneopterina tri
fosfato en una hora de reacción. El n é de r e p e t i d o
nes de cada cepa está entre paréntesis.
Cepa
Unidades enzimáticas
% Oregon R
Oregon R (7)
5.17 + 0.37
100 + 6
cho red
(4)
3.06 + 0.33
66 + 5
red
(6)
3.11 + 0.28
67 + 5
cd red
(4)
3.47 + 0.64
73 + 10
cm red
(5)
4.73 + 0.33
93 + 5
rb red
(4)
7.06 + 0.63
131 + 10
ltd red
(4)
6.45 + 0.69
121 + 11
v red
(6)
4.04 + 0.58
82 + 9
en red
(5)
6.40 + 0.31
120 + 5
pn red
(4)
0.75 + 0.18
25 + 4
pr red
(2)
3.27 + 0.02
72 + 0
v en red (6)
4.43 + 0.30
89 + 4
V
(2)
4.81 + 0.01
95 + 0
en
(2)
4.77 + 0.10
94 + 2
cd
(2)
5.03 + 0.22
98 + 3
E N Z IM .)
0 rb red
ltd red
GTPCH
(A C TIVID A D
en red
O r -R *
5
£
v red
# cd red
red O
0.1
0.2
• cho red
0.3
HQ (A B S O R B A N C IA )
Figura 22.- Correlación entre la actividad enzimática GTP
ciclohidrolasa y la cantidad de 3-hidroxiquinurenina.
la c e p a
Oregon
R,
indicando
3-hidroxiquinurenina
enzimática,
por
y q ue ,
la m u t a c i ó n
afecte
a
red
ellas
ta nt o,
es
la s í n t e s i s
defecto
necesario
sustancia
de pteridinas.
efecto
encontrándose
figura
correlación
22
cepas
La
y v_red.
pues
tener
explicar
dado
una
esta
las s i g u i e n t e s
GTPCH
que
su
más
a realizar
grande
de
en
era
la
la
la e n z i m a
se
1)
vermilion,
inferior
a
e s el
valor
en
la q u e p a r e c e
de
alelo
la cual
acumula
GTPCH.
a
mutante
es c a p a z
de
Son
las
tener
más
la d e c n _ r e d .
la c e p a v _ r e d ,
para
v_red,
p or
de
con
de s i n t e t i z a r
la c e p a
r e s p o n s a b l e de
alguna
vermilion
es s u f i c i e n t e
de
la
3-hidroxiquinurenina
intentamos comprobar
el
a
cantidades
GTPCH similar
v_red
el
excepciones
actividad
ni ve l
la c e p a
hasta
dos
las
la
actividad
d e HQ,
mutación
una
inhibir
y 2)
el
a c c i ó n de
la
la a c t i v i d a d
GTPCH
la e s p e r a d a .
La p r i m e r a
cantidad
se v o l v i ó
la a c t i v i d a d
s e g u n d a es
hipótesis:
cantidad
triptófano
era
y
excepción
que sintetizamos
la a c t i v i d a d
cuanto
entre
(HQ)
pequeña
3-hidroxiquinurenina
con este metabolito
aparecen
3-hidroxiquinurenina
debería
que
menor
inversa
importancia,
la
16).
la
rb_red
de
suplementación
suplementada
(tabla
actividad
para que esta
GTP ciclohidrolasa
cn_red,
esta
de
provocado
actividad
de
ausencia
genético
la
En
el
el
o
afecta
el
cantidad
Para
no
comprobar
una experiencia
GTPCH
p or
la p r e s e n c i a
Para
sobre
cepa
en
que
de
HQ
hipótesis
no r e s u l t a
q ue se c o r r e s p o n d e r í a
-151-
muy plau si b le ,
con
pues
la a c t i v i d a d
la
GTPCH
T a b la 16
Actividad de la enzima GTP ciclohidrolasa en las
cepas en red y red crecidas en medio normal o en
medio suplementado con 1 y 2 mg. de HQ.
La asimilación de HQ fue detectada por la cantidad
de pigmento marrón sintetizada.
La actividad GTPCH fue medida en extractos obteni­
dos con la mitad del ns de moscas habitual.
GTPCH
Cepa
Unid, enzimáticas
Pigmento marrón
Absorbancia
% Or-R
en red
3.11 ± 0.03
0.0068
4.5
en red (HQ-1 mg)
2.36 ± 0.04
0.0155
11.0
en red (HQ-2 mg)
1.78 ± 0.02
0.0415
28.0
red
1.28 ± 0.02
0.0455
31.0
de v _ r e d
sería
del
Intentamos,
sin
sustancia
por
p - n i t r a n i 1 in a
de
u n E-3*/., ya
que
un extracto
de
sobre
una
triptófano
en
seguros que
podría
este
con
lo
verificar
de
triptófano
y
y
a
sin embargo,
el
mayor
17
puede
el
red
defecto
un
fue que
inferior
a
en
de
esta
el
con
estar
organismo
no
de
de
así
la r u t a
su efecto.
de que
suplementar)
una mayor
efecto
al
inconveniente
sin
GTPCH
la d i e t a
cepa
metabólico
si
triptófano
la a c t i v i d a d
perdiéndose
detectaríamos
producía
y
asimilara
(y
con
detectado
del
otras sustancias
testigo
por
era
ser
efecto
Elegimos
que
esta
revelado
obtenido
de s u p l e m e n t a c i ó n
marrón,
t en í a,
como
posible
red.
de
blanco.
drosopterinas
triptófano
sólo
papel
cepa v_red
como
el
experiencia
triptófano
que
traza
resultado
la
R usado
pigmento
tomada
acumulaba
en
la d e O r e g o n R.
alguna
en
El
de
p o r c e n t a j e de H Q p o d í a
Oregon
Esta experiencia
la c e p a
1981).
metabolizado
del
4-0*/.
detectar
presente
la c e p a
el
ser
síntesis
HQ
síntesis
realizamos
un
cromatografía
poder
la
de
embargo,
(Ikemoto,
la c a n t i d a d
Para
orden
ya
de vermilion,
acumulación
sobre
el
de
p a t r ó n de
pter i d i n a s .
En
la
tabla
triptófano
sobre
biopterina en
ligeramente
no
la c e p a
ésta.
otro
cantidades
red.
en
Se midió,
suplementada
P or
y
disminuidas
suplementada.
cepa
las
observarse
la
efecto
cepa
-153-
la a c t i v i d a d
u na
y
ligera
r ed
y
se encuentran
la c e p a s u p l e m e n t a d a
también,
del
drosopterinas
Ambas-sustancias
observándose
lado,
de
el
frente
a
la
G T P C H en
la
disminución
de
suplementada
con
Tabla 17.-
Cuantificación de biopterina, drosopterinas y actividad de la enzima GTP ciclohidrolasa en las cepas v red y red crecidas en medio normal o en medio suplementado con
0.1 y 0.2 gr. de triptófano.
trp-1 suplementación con 0.1 gr. de triptófano y trp-2 suplementación con 0.2 gr.
Biopterina
Cepa
Fluorescencia
Drosopterinas
% Or-R
GTPCH
Absorbancia
% Or-R
Unid, enzimáticas
v red
22.0 + 1.2
258 ± 16
0.127 + 0.002
13
2.46 + 0.04
v red trp-1
21.0 + 2.3
245 + 31
0.121 + 0.004
12.5
2.10 ± 0.24
v red trp-2
19.2 + 0.1
218 + 2
0.095 + 0.004
.10
red
34.0 ± 1.3
450 + 17
0.059 + 0.003
6.5
Or-R (300%)
24.6 ± 0.8
300 + 11
—
—
—
Or-R (100%)
11.5 ± 0.3
100 + 4
—
—
—
—
—
1.28 + 0.02
■
—
—
—
—
Or-R (40%)
—
—
—
—
0.368 + 0.001
40
—
—
Or-R (20%)
—
__
—
—
0.214
20
—
—
triptófano
presentó
una
drástica
disminución
(77. d e s u p e r v i v i e n t e s
c o n 0 . 2 mg d e
de
o más ).
un
07. c o n
observados
donde
0.3
para
la
la
pareció
cepa
fuera
y
red.
Se
cepas
red
no
de
presentaban
una
tabla
El a n á l i s i s
del
897.
máás c e r c a
d el
de
¡con el
valor
de
los v a l o r e s
suplementada
c o n 0 . 3 g»
viabilidad
(377*
cepa p o r ta d or a de
de
que
las m u t a c i o n e s
y»
la a c u m u l a c i ó n d e t r i p t ó f a n o
en
la c a u s a d e q u e s u a c t i v i d a d
la
cepa
este
en
red.
de ojos
fenotipo
cantidad
la a c t i v i d a d
nos
actividad
con
alrededor
La cepa
similar
de
v_cn_red
al
era debido
GTPCH
de
a que
en
ambas
drosopterinas
c as i
12).
de
red
la
de color
que
contrasta
y
menos drástica.
la d e
comprobó
y _e n
de
era
un fenotipo
icdéntica (ver
cepa
una
indicar
distinta
presentaba
de
Esto
triptófano
vermilion
es m u c ho
La s í n t e s i s
la
cepa
disminución
supervivientes)
y
mg
de v i a b i l i d a d
reportó
(tabla
v_red
valor
del
drosopterinas
GTPCH
la s o r p r e s a d e
15)»
que
enzimática
de
encontrar
que se e n c u e n t r a
de c n _ r e d »
encontrado
y que
en
no
la
la
una
mucho
concuerda
cepa
y
en
red .
Como
el
fenotipo
era
sorprendentemente
con
la p o s i b i l i d a d
HQ»
si
fuera
paaso e n z i m á t i c o
ox<igenasa)»
caipaz
de
el
de
de
producir
de
y_red,
la c e p a v _ r e d
producir
un compu es t o
por
pudiera
un
del
la c e p a
aunque
bloqueado
cual
de o j o s d e
diferente
de q u e
capaz
color
el
efecto
-155-
especulamos
no
similar
a algún
al
poseyera
erróneo
gen vermilion
m e t a b o 1izarse
v_cn_red
de
e n el
(triptófano
compuesto
la
HQ.
En
p r e s e n c i a de
con
lo q u e
la m u t a c i ó n en,
la s í n t e s i s
este compuesto
no
se p r o d u c i r í a
de p i g m en to s rojos s e r í a s i milar
a
la
la d e t e c c c i ó n
de
de c n _ r e d .
Utilizamos
aminas.
bw*
Tras
v_red
siendo
una
de
la ú n i c a
enzima
GTP
normal,
el
tipo
experiencia
de
compuesto
presenta
Oregon
de
R,
violeta,
de
red
de
esta
está
ninguna
que
es
Para
inhib i ci ón se recurrió
que
directa
para
Como
¿n
ello
testigo
v¿vo
la a c t i v i d a d
a
la
del
se p r o d u c e
poder
determinar
a
realizar
enzima
cepa
se
indican
sólo
del
la
al
apreciadles.
inferior
inhibición
v
diferencia,
correspondía
interrumpida
presente.
inhibición
las c e p a s
hasta este momento
HQ está
que
de
en c a n t i d a d e s
presentados
sustancia.
ya
los c r o m a t o g r a m a s
que aparecía
y
para
pudimos detectar
H Q , utilizando
esta
Ehrlich
ciclohidrolasa
la m u t a c i ó n
era
de
color
la s í n t e s i s
individuo
c ua l
no
resultados
que cuando
cuando
revelado
mancha
Los
la
método
y v_cn_red
triptófano,
de
el
el
p or
cn_red
utilizó
no se p r o d u c e
una
que
la
en ella
el
no
cepa
ninguna
inhibición.
En
en
la f i g u r a
incubar
23
extractos
concentraciones
se o b se rv a
de
y con
observar,
enzima
G T P C H de O r e g o n R
la HQ.
inhibición
optó
por
Como
de
estos
i,n
la
confirmar
R
la p r e s e n c i a
puede
p or
Oregon
un e x p e r i m e n t o
datos
no
actividad
esta
en
el
se
red
o ausencia
parecían
como
vi.vq
y
había
distintas
d e HQ.
que
eran
inhibición mediante
Como
se
tanto
el
inhibidos
observado
e n z i m át i ca en
-156-
a
indicar
de cn_red
consistente
la c e p a
ninguna
Or-R
la a d i c i ó n
se
de HQ
a una solución de pterina.
Como
solución
se observa en
de p t e r i n a
proporcional
indicaron
23
era
a
que
un
la s u p u e s t a
de
el
fin
ser
Antes
la m e d i c i ó n
que
incubación.
tunas
con
tcepa
t ip o
poseían
resultados
solo
en
que
¡i nc u ba da a 4 2°
a
tenido
obtenidos
El
la cual
probablemente
tu v iera una
no
un ef ec to
de
la m i t a d
sin
esta
que
debidas
los
la
mostraron
éstas
en
inhibición
a
los
ella.
toda
también
se o b s e r v a
la
medirlos
durante
de
de
HQ a
a
( f i g u r a 25)
facilidad
figura
la HQ.
pasó
sino
eran
mayor
a
se a ñ a d i ó
HQ
hecho
la c e p a c n _ r e d ,
en
la
la o t r a m i t a d
se
la
forma
inhibición de
la q u e
y
de
resultados
parte
la
la f l u o r e s c e n c i a
la
salvaje,
» i nd i c ó
con HQ y
diferencias.
¡ p r o d u j e r a n no
en
de
una
realmente
los q u e h a b i a n
Los
parte
si
experiencia
incubados
no
ligeras
debida
de
Estos
probablemente
comprobar
una
fueron
comparándolos
a d i c i ó n de HQ de
inhibición o b s e r v a d a en
debido
de
extractos
extractos
la
la f l u o r e s c e n c i a p o r
se re al iz ó
de
con
24- la f l u o r e s c e n c i a
la c o n c e n t r a c i ó n d e p t e r i n a .
disminución podía
enzima,
decrece
artefacto,
secuestrador
Con
la f i g u r a
que
se
la
i_n
la H Q
de s e c u e s t r a r
la
1f 1 u o r e s c en e ia .
Un
segundo
ppteridinas
tbiopterina
ccon
el
consiste
(ver
hecho
de
de
la
enzima
la r u t a
de
en
tabla
aactividad
de
efecto
el
13).
que
enzima
la
HQ
sobre
aumento
Este
aumento
la H Q p r o d u z c a
GTPCH,
d e s í n t e s i s y,
-157-
de
ya
por
una
que
la
es
la s í n t e s i s
de
cantidad
de
contradictorio
disminución
é st a es
t a n to ,
una
de
la
la p r i m e r a
actividad
FLUORESCENCIA
9 0 -
5 0 -
15
30
45
60
N* DE C A B E Z A S
Figura 23.- Comparación de los ensayos enzimáticos GTPCH
incubados con o sin 3-hidroxiquinurenina.
Les símbolos que corresponden a cada tipo de ensayo
son: en red sin HQ (A), en red con HQ (□), Or-R sin
HQ (A) y Or-R con HQ (■).
<
5
80-
Z
LU
ü
</)
LU
cr
O
D
_J
LL
1/4
1/2
DILUCION
Figura 24.- Efecto de la 3-hidroxiquinurenina sobre la flúores
cencia de una solución de pterina.
Fluorescencia de las soluciones de pterina (•) y
de las soluciones de pterina con HQ
(□).
□
70-
Or-R
□
□
35-
-
f
*
i
30
i
45
<
O 70z
LU
O
■
*
i
60
□
en red
(
/)
LU
cr
O
D
-l
□
LL
□
35-
!
*
1
30
■
*
45
60
N ! DE CABEZAS
Figura 25.- Ensayo enzimático GTPCH.
Fluorescencia de los extractos incubados con HQ
sin HQ
(□)
(■),
y de aquéllos incubados sin HQ, a los que
se añadió esta sustancia inmediatamente antes de su
medición
(*).
menor
conduciría
todas
primer
explicar
luga r,
actividad
to ta l
e n el
se
de
recién
una
de
eran
similares
a
Sin
embargo,
las
como
cabía esperar,
producido
las c a n t i d a d e s
las e n z i m a s
biopterina
estas
mucho
si
actúan
Las
de
medición
ambas
3),
se optó
conjunta
haber
de
sido
sus
y
cn_red
de
por
a
actividades
e d ad .
e r an ,
d í as .
era
de
síntesis
algunas
de
la b i o p t e r i n a
la d i h i d r o p t e r i n
descrito
en
y r ed
alguna
la
estudiar
fueron
la
18).
biopterina
la H Q s o b r e
elegidas
que
(tabla
los n u e v e
de
la
moscas
de b i o p t e r i n a
aumento
de
en
días
la r u t a q u e c o n d u c e
enzimas
al
los 9
en
enzimática).
y Or-R
más baj a s que a
o sepiapterina reductasa
eligieron
a
ya
la s e g u n d a
las c e p a s
absolutas
activador
en
red
para
este
(figura
enzimas.
sintasa
cantidades
y
biopterina
cn_red,
y
(se h a p r o d u c i d o
de activ i da d
la
intentó,
desarrollo,
días
los q u e s e d e t e c t a
un efecto
que
de
se
biopterina
oculares)
pico
obtenidos
de
del
los n u e v e
las c e p a s
detectar
por
a
( m á xi mo
relativos
Para
cantidad
cuantificación
nacidas
valores
la
los p i g m e n t o s
recién nacidas
Be r e a l i z ó
Se
de
contradictorio
mismo mo me n to
media
deposición
moscas
de
disminución
este hecho
comparar
GTPCH
primera
Los
una
las p t e r i d i n a s .
Para
la
a
un mét od o
oxidasa.
para
la
(Ferré y Jacobson,
19 85 ).
En
la t a b l a
enzimática
Y
oxidasa
de
19
se
las c e p a s
presentan
presentan
O r -R ,
cn_red
actividades
inferiores
a
las
de
de
-161-
los d a t o s d e a c t i v i d a d
y red.
la
Q l e B*
Las cepas cn_red
enzima
P°r
dihidropterin
contrario,
los
valores
de a c t i v i d a d
cepas
mutantes
valor
de
no
de
son
la
enzima b i o p t e r i n a
significativamente
la m i s m a e n O r z B-
-162-
sintasa
de
diferentes
las
del
T a b la 1 8 . - C u a n t if ic a c io n
de b i o p t e r in a
en moscas de un d ia
de edad
Cepa
Fluorescencia
% Oregon R
red
4.0 + 0.4
410
en red
1.6 + 0.3
165
Or-R (400%)
3.9 + 0.2
-
Or-R (200%)
1.9 + 0.0
Or-R (100%)
1.2 + 0.0
-
-
Tabla 19.- Actividades enzimáticas biopterina sintasa y dihi^
dropterin oxidasa
Los resultados se expresan en nanomoles de sepia£
terina metabolizados.
Cepa
H^PTE oxidasa
BP sintasa
nmoles
13.31 + 0.37
(% Or-R)
100 + 3
100 + 16
nmoles
10.23 + 0.10
2.07 + 0.92
(% Or-R)
77 + 1
98 + 44
nmoles
9.21 + 0.24
2.48 ± 0.41
(% Or-R)
69 + 2
118 + 19
2.11
0.34
Or-R
red
en red
.
D ISCUS ION
Una
parte
realización
de
sustancialmente
El
método
et
en
métodos
a
para
El
por
método
fluorescente
las m a n c h a s del
primera
consistió
y
en
separar
las c a b e z a s
acumulan
lo h a c e
esta
variación
de
varias
en c a n t i d a d e s
sustancia
isoxantopterina
que
siendo
en
extracta
con
sustancia
por
acetato
amónico
mancha
de
concentración
imismo
(1:1).
IXP
no
por
tiempo,
la
se
De
viera
a
las
la
emisión
este
método
los
en
por
esta
de
y
la q u e
contrario,
que
la
estaba
realizamos
cuantificamos
un
la
cromatogramas
solvente
i s o p r o p a n o 1 /£*/♦
conseguimos
su forma
y,
las o t r a s
una
mayor
cromatogramas
realizados
con
extractos
(eliminar
las
sustancias
afectaban
al
corporales,
por
de
que
que
la
t a nt o ,
su
pteridinas.
Al
resolución
los c r o m a t o g r a m a s .
-165-
el
se
en
forma
afectada
las m o s c a s
Puesto
cuerpos,
ellos
el
los c u e r p o s
cuantificar
obtuvo
de
de
detecta.
la p r e s e n c i a
desarrollo
y
realizando
isoxantopterina
fluorescencia
unidimensionales realizados
separar
diferentes
En cabezas,
Íbamos
mayor itariamente presente
a
los c u e r p o s
se
independiente
en
( 19 77 a)
cromatograma.
En
mayores#
apenas
las p t e r i d i n a s
mediante
en dos extractos
pteridinas,
de
introducida
la s m o s c a s .
la b i b l i o g r a f í a .
Wilson y Jacobson
cuantificación
la
mejorados
bidimensionales,
su
La
en
consistía
cromatogramas
durante
sido
la c u a n t i f i c a c i ó n
posteriormente
de
han
los d e s c r i t o s
los d e s c r i t o s
en
utilizados
trabajo,
respecto
a l . ( 19 8 6) .
pteridinas
los
este
utilizado
está basado
Ferré
de
de
cabezas,
los
al
habitualmente
La s eg unda
la c a n t i d a d
cada
toque
mismo
era
liquido
placas
de
de l
de
método
depositado
puesto
que
la
con
lo
que
a
resultadospodían
v a r i a b a el
área
de
F ue *
por
realización
esta
razón*
de b a r r i d o s
ya
sobre
cuantificación
por
cromatográficas. Aunque
eran
de
muy
necesario
elevado*
con
tiempo
manchas
de s e p i a p t e r i n a
cromatogramas
ruta
Una
la
de
lo
que
mayor
de
variación
se
manchas
las m a n c h a s
de
si
de
en n u m e r o s o s
el
que
para realizar
de
manchas
método
a todas
los
errores
estos barridos
era
la d e s v e n t a j a
de
los
P or
dicha
barridos
a
y d r o s o p t e r i n a * ya que e s t a b a n
tamaño
ademas»
que
aparecían
bastante
solo
nos e n c o n t r a m o s
cada placa.
de
la
trabajos
se c u a n t i f i c a b a
cada mancha*
cuantificar
planteó
cromatográficas *
a aplicar
utilización
y tenían,
de s í n t e s i s
las
medir
diferentes
lo q u e p r e s e n t a b a
para
limitamos
manchas
para
que
muy
m e n o r e s q u e si
fluorescenci a
mucho
del
fluorescencia
probamos
siempre
tiempo
el
(o r e n d i j a )
e n la c a n t i d a d
c r o m a t ográficas* y observamos
razón*
las
por
descrito
sido
c o n q u e el
ser
las
había
obtenidos
igualdad
sobre
que
las m a n c h a s
en
la m a n c h a .
método
requerir
ventana
c r o m a t o g r a f í a , era siempre menor
los
siempre
cromatograma
espectrofluorímetro * utilizada
se m e d i a n *
máximo
s o b r e el
en d is m i n u i r
por c r o m a t o g r a m a . E s t a v a r i a c i ó n
sustancia
el
consistió
0 . 5 m i c r o 1 i t r o s ), m a n t e n i e n d o
muestra
importante*
accesorio
del
(aproximadamente
volumen
muy
que
de
variación
entre
en
importancia
las
los
en
la
las p t e r i d i n a s .
introducida
-166-
en
este método
fue
la d e
restar
de
los
presentaba
máximos
la f l u o r e s c e n c i a q u e
la c e l u l o s a e n c a d a p l a c a .
sustancias
de
fluorescencia
f l u o r e s c e n c i a de
pero
fluorescentes
para
roja
el
o
caso
de
las
amarilla»
la
la c e l u l o s a e r a m u y b a j a y a p e n a s
las s u s t a n c i a s
intensidad
En
de
fluorescencia
fluorescente
proporcionalmente»
de
bastante
alta
la
afectaba»
azulada»
celulosa
frente a
la
era»
las s u s t a n c i a s
que
se c u a n t i f i c a b a n .
La
acetildihidrohomopterina,
cromatogramas
siendo
fue
descubierta
bautizada
como
p or
spot"
la
fluorescencia
presentaba
el
inconveniente
únicamente
por
la s u p e r f i c i e del
( F e r r é et
habían
descrito
cuando
era
pH»
que
al..»
esta
atribuyéndolo
hidratarse
perdían
por
emitida
de
en
área
19 86 ).
la
(1 9 7 7 a ) >
que
ser
medida
s o b r e el
Wilson y Jacobson
se vo l v í a
al
hecho
de
que
su
aromaticidad
y»
(1977a)
fluorescente
alcohólicos
las
de
celulosa»
de s u m a n c h a
en s o l v e n t e s
los
su c a p a c i d a d
p or
tener
sustancia
cromatografiada
mancha
Wilson y Jacobson
"quench
secuestrar
cromatograma
cuya
a
bajo
pteridinas
por
ta nt o »
al
su
f 1u o r e s c e n c i a .
Las
con
pruebas
solventes
fluorescencia
de
los
observar
secar
una
llevadas
alcohólicos
en
la A D H P »
cromatogramas.
que cuando
durante
cierta
a cabo
algún
no
al
fluorescencia
a
las
embargo»
las p l a c a s
en
Ferré
permitieron
menos
Sin
tiempo
p or
et
al..
la d e t e c c i ó n
horas
pudimos
de c r o m a t o g r a f í a e r a n
verde
-167-
oliva
en
podia
de
de se cado
nosostros
la o s c u r i d a d »
(1986)
dejadas
observarse
la m a n c h a *
la c ua l*
tra s r e a l i z a r
51S nm.
Como
controlar»
optó
entre
tiempo.
no
era
de
más
extracto
emisión
la
de
tip o
un e x p e r i m e n t o
de
IXP p o r
indicaron
que
inferior
el
al
el
está
basado
en
Drosophila,
Fukushima
los
dificiles
de
de c u a n t i f i c a c i ó n
sido
dejadas
realizó
por
ca so ,
secar
barrido
al
de
la f l u o r e s c e n c i a
desarrollar
Con este
las
a
otros
efecto
se o b t i e n e un
en
el
c ual
se
y
de
excitación
determinar
el
efecto
que
de
se c o m p a r ó
métodos.
la
la
Los
las o t r a s
de
IXP s e
las
llevó
fluorescencia
y de h e m b r a s
m a r r o n - 1 i k e , al
la
resulta
máximos
de m a c h o s
de
que
método,
la c u a n t i f i c a c i ó n
matante
método
sin realizar
pteridinas,
sus
e n el
un nuevo
que
en
no
resultados
pteridinas
la c e p a
se
le ha
obtenidos
del
extracto
V A .
GTP
en
tipo
sobre
cromatografía,
Para
Se ha d e s a r r o l l a d o
la a c t i v i d a d
po r
cuerpos
y en
eran
isoxantopterina,
todas
sobre
detectado
era
la
fluorescentes.
salvaje
podido
IXP e n b a s e
extractos
este
habían
y preciso.
con
otras pteridinas
a cabo
secado
en cualquier
la s u s t a n c i a
bruto,
se s i t u a b a
m u y a l ta .
de
rápida
cuantifica
que
hemos
de c u a n t i f i c a c i ó n
mucho
emisión»
utilizar
que»
último,
separación
de
c u a n t i f i c a c i ó n se
dado
la s u s t a n c i a
P or
por
placas
La
fluorescencia,
de
espectro
las c o n d i c i o n e s de
se
únicamente
mismo
su
nuevo
ciclohidrolasa
las
et al..
un
técnicas
en
la m e d i c i ó n d e
en Drosophila.
descritas
utilizando
(1977)
método~*para
por
isótopos
a v e s,
-16B-
Este
Fan y Brown
radiactivos
detectando
método
(1976)
y
la a c t i v i d a d
po r
en
base
a
la f l u o r e s c e n c i a
método»
descrito
fluorescente
del
cuantificación
totalmente
de
de
abundantes.
la
cual
grados
las
de
durante
empleada
por
de
la
quedaban
h o r a»
se
et
al,.
oxidado
más fluorescente.
Se
ha
pteridinas
gran
acumulen
se debe
gran número
de
tip o
que
de
misma
para
tipos
los o j o s
de
algunas
produce
por
estar
y Mancini
la
no
el
en muy
(1973)
de p t e r i d i n a s
-169-
hecho
pteridinas
de
por
acumulación
técnica
la
compuesto
número
de
de esta
de que se
pigmento.
parte
de
detectarse
de
otras
en
la
baja cantidad.
observaron
de c o l o r
a ¿f2
las p t e r i d i n a s
en f o r m a
podrían
los
oxidar
un gran
y al
(1973)
incubación
insecto»
en
habitualmente
salvaje»
Schwinck
en es t e
de funciones»
la s í n t e s i s
mutaciones»
pteridinas
extractos
eran muy poco
que
de
esta
e x t r a c t o s de
y Florini
la
de
eliminar
los
la
ya
presencia
a que »
en gran cantidad
ciertas
cinco
la
Tras
formada»
que
e n DrosoE.hi.ia m e i a n o g a s t e r . L a e x i s t e n c i a
un
bloqueo
cepa
descrito
variedad
presentan
El
mucho
en
(1977)
trifosfato
emisión
separadas
utilizó
dihidroneopterina
era
los
d e N e al
molecular.
Fukushima
en
nuevo
método
Para
las p t e r i d i n a s
técnica
la
necesario
lo q u e o c u r r í a
los q u e
peso
una
era
El
como
enzimética.
presentes
proteinas
bajo
utiliza
reacción
correcta
ave s en
Se utilizó
compuestos
de
pteridinas
de r eacción.
trabajo»
la a c t i v i d a d
a diferencia
tejidos
con
este
fuera
las
Drosophila»
en
producto
producto
de
cuantificacíón
del
rojo
la e x i s t e n c i a
de
(d r o s o p t e r i ñ a s ) e n
los
cromatogramas
de
varias
neaidrosop t er i na , la
aurodrosopterina
y
Theobald
estructura
estiereoisómeros
(19'75)
era
un
de
h abíían s i d o
moscas.
drosopterina
de
la
las
a
dros&opteriñas,
utilizamos
(197S3)1
como
y/
la
una
estas
de
a
al
dos
de
la
las c u a l e s
fuerte
dos formas
no
extractos
de
técnica
de
detectar
la
la
no
e
dos formas
podido
racémicas,
debido
como
habiendo
sido
solapamiento
de
SO).
otras
sustancias
que
también observar,
componen
en
las
los s o l v e n t e s
la
neodrosopteri n a ,
por
Schwinck
la
isodrosopterina.
"e"
fue descrita
sustancia
la n e o d r o s o p t e r i n a ).
bidimensional
propanol-2%
solventes
hemos
la
drosopterina
pero
habitualmente,
fracción
cromaatografía
1M
y
formas
se p u e d e n
la
de
autores detectaron
fina,
(figura
las
la p r i m e r a
introducidas
anterioridad
las idos s u s t a n c i a s
d r o s c o p teri na
dos
la
y Pfleiderer
estructuras
cromatogramas
mejoras
capa
Rokos
las
de
Estos mismos
de estas
Respecto
isodrosopterina
parcialmente
en
determinaron
molécula.
cis-trans
en
dete?ctadas con
La
e
la a u r o d r o s o p t e r i n a ,
Con
pressencia
misma
detectadas
isodrosopterina,
(1978)
y aurodrosopterina,
cromna t o g r a f í a
(comeo
Pfleiderer
isómero
racémicas
la
D . m e I a n o g a s t e r : la
ue".
la
isocdrosopterina.
que
la f r a c c i ó n
determinaron
neoídrosopterina
de
drosopterina,
y
de
cepas
similares
acetato
de
Esta
con
fluorescencia
sustancia
pudimos
-170-
(E:l).
detectar
Mancini
y color
rojo
se d e t e c t a b a
los s o l v e n t e s
amónico
y
ácido
acético
Utilizando
esta
en
unos
sustancia,
encontrándonos
con
que,
al
igual
que
a u r o d r o s o p t e r i n a , e s t a b a fo r m a d a por
manchas,
probablemente
utilizados
a
difícil
de di st i n g u i r .
aparece
la q u e
ocupa
ácido
en
cantidades
un
varias
posición
cadenas
forma
el
El
mutantes
al
hecho
pregunta
similar
a
de
3
carbonos
d D 1-3 no
se
detectó
cepa
s e _ H n r*® s e e n c o n t r ó
cepa
se.
controla
Dado
el
HePTE
(Ferré
pueda
ser
síntesis,
por
1.a
que
una
más
formada
lateral
nos
(Br ow n,
llevó
un
no
pterinas
con
col_¿,
donde
es
la
En
mientras
similar
a
las c e p a s
que
la
intermediario
acumulación
de g r a n d e s
-171-
en
de
en
la
la
esta sustancia
esta
de d e g r a d a c i ó n
cantidades
la
la q u e
e n t r e la P H ^ P T E y
parece que
bien un producto
a
una
forma
1971).
enzimático
al.., 1986),
en
de
v i a e n E.
se
cantidad
la s í n t e s i s
la m u t a c i ó n HD*"3 e s > p r o b a b l e m e n t e ,
considerada
sino
que
grandes
tratarse
las
IB)
la d i h i d r o p t e r i n a , d e
la s u s t a n c i a ,
p r im e r paso
et
y
n°
esté
carbono,
en esta
intermediario
6- hidroximeti Idihidropterina
QnzB V
(mancha
cadena
entre
muy
lo q u e e s m u y
acumulan
podía
insectos
lo q u e o c u r r e
producto
una
si
nuestros
interrumpida
único
de
i n t e r m e d i a r i a en
laterales
un
y
de dos
posición
de que esta p t e r i d i n a
f o r m a d a p or
la
que
tener
de dihidropterina
6,
plantearnos
sustancia
cepas
de pteridinas,
anillo
revelar
carboxílico
la
los s o l v e n t e s
la n e o d r o s o p t e r i n a , p o r
dihidropterín
de d r o s o p t e r i n a .
por
para
En
es t a s us t a n c i a se s i t ú a en una
cercana
con
la s u p e r p o s i c i ó n
racémicas.
habitualmente
cromatogramas,
El
formas
ocurría
ruta
de
producido
de p t e r i d i n a s
en
los mutantes se y se_Hnr 3 .
La
compuesto
d ih i d r o f o r m i lp ter i na
( m an c ha
n*3
sin
ruta
síntesis
pteridinas»
por
Ferré
cepa
que
localizar
el
c ual
(1 98 4 ).
El
en
había
sido
análisis
la m a n c h a
n°
8
y,
estaba
a
ligada
estaba
en
Esto
(mancha
era
n c:'
aquellas
15),
cepas
enzima
produce
trifosfato,
dicho
Se
de
e n el
segundo
que
similares
a
carboxílico.
o
un
de
de
la e n z i m a
sintasa
la n e o p t e r i n a
defecto
de
en
de dic ha
en dicha
d i h i d r o n e o p t e r i na
sustancias
a i r e si
solo produ c to s
trifosfato,
descrito
de
mientras
de
i_n vi_yo
para
la
lugar,
preferentemente
que
e n el
de
acumulación
de u n a m u t a c i ó n
estas dos
quedando
su
sepiapterina
acumula
Puesto
que
melanogaster
la s u p e r p o s i c i ó n
que
(o
las
provienen
son p r o d u c t o s
de
de d e g r a d a c i ó n de
producidos
durante
la
las p t e r i d i n a s .
han
f i g u r a 20),
se
otro
de
en pr im e r
la a c t i v i d a d
acumulación
dihidroneopterina
extracción
lugar,
son p o r t a d o r a s
la
por
lo e n c o n t r a d o
c ua l
evidente
real
formada
a
purple).
compuesto,
existencia
la
es
la
que
(mutación
observar,
sintasa
similar
e n D.
es
patrón de p t e r i d i n a s
la d i s m i n u c i ó n d e
algo
enzima
de
del
segundo
piruvoi 1t e t rahidropterina
de
detectado
c n _ g r c:<f/ g r m e b s e n o s p e r m i t i ó
dos s u s t a n c i a s
A).
la
8)
dos
las c u a l e s
solvente
nuevas
la
manchas
(n0 *0 2 9 y 30,
primera corresponde
y fluorescencia
a
la
por
su Rf
formilpterina,
la s e g u n d a p o s e e u n o s m á x i m o s d e f l u o r e s c e n c i a
los
Ambas
degradación.
encontrados
sustancias
E n el
caso
-
para
son,
de
172
el
ácido
dihidropterín
probablemente,
productos
la f o r m i l p t e r i n a , e s t a
-
sería
eel
producto
producido
de
oxidación
durante
el
de
secado
la
entre
dihidroformilpterina
los
dos
solventes
de
c c r o m a t o g r a f ía .
La
cojos
formación
suele
pteridinas
esperar
de c e p as
provocar,
que
si
no
en
algunos
coinciden
se p r o d u j e r a
ciada m u t a c i ó n .
Para
mi utantes h a n s i d o
con dos mutaciones
facilitar
agrupadas
con
adición
base
al
lo
de
la d i s c u s i ó n ,
en
de
casos, p a t r o n e s
exactamente
la s i m p l e
de color
que
cabría
los e f e c t o s
las c e p a s
tipo
de
de
de
dobles
interacción
qtue p r o d u c e n .
Un o
de
los
tipos de
ptroducen
al
OEQsgphüa
Qielanggaster
girupo
I.
Las
combinar
cepas
garnet,
cantidad
pteridinas
mismas
mutaciones
mayor
parte
forma,
las
mutaciones
de
del
tipo
de
suele
se r
aumentada
Por
inferior
mutantes
de
embargo,
la p t e r i d i n a
que
por
se
está
que
se
ojos
en
las c e p a s
del
llevan dos
a
la e s p e r a d a .
interacciones
las
que
llevan
observa
Estas
que
la
De esta
una
de
las
patrones
Generalmente,
de pteridinas
una
con
de ojos.
suelen presentar
menos
de
y rose*2, p r e s e n t a n
lo e s p e r a d o .
cantidades
fuertes
color de
de color
mutantes
anteriormente,
cepas producen
sin
ruby
presentar
dobles
diferentes
de
mutantes que
muy
de
más
representado
lightoid,
resto
citadas
las espe r ad as ;
está
suelen
cepas
pteridinas
mutaciones
dobles
mutaciones
de
interacciones
este
inferiores
a
la b i o p t e r i n a
disminuida,
o
incluso
en a l g u n a s c e p a s .
último,
hay
una
serie
-173-
de cepas
cuyos
patrones
de
pteridinas no
e ll a s ,
siguen
las
la
drosopterinas
aumentadas,
mientras
disminuidas,
incluyendo
están
las c e p a s
que
ras_¿td
y gn
los e s p e r a d o s
epistasia
cercanos
parcial
habitualmente
en
m u t a c i o n e s gn,
Como
de
ocurre
o j o s,
se
y,
p o r las
demostrado
que ¿td y
del
Howells
propuestos
p or
¡podrían a l t e r a r
los
dos
las c e p a s
Si
dobles
a u s e n c i a de
g
grupo
de
como
una consecuencia
(de
precursores
al
en
de
g
los
g,
presentan
d e f e c t o s e n el
(Sullivan
dos
o j os,
color
se
han sido
aquellos que
(pteridinas
de
y
pteridinas
r b _ ¿ t d , c o n c a si
podrían
ha
Sullivan,
precursores
alteración
estarían
las
transporte
y
entre
los p a t r o n e s d e
y
de
genéticos
mutantes
transporte de
¿td
de
rs® y r b , aunque
Estos
la f u e r t e
que
que
tipo
ras
observada
los d e f e c t o s
Sullivan
así,
mutantes
1.t d . E s t e
de
gr.
pigmentosoculares
fuera
pteridinas
¿td,
marrón
sistema de
esto
son
1977).
de
con
los m u t a n t e s
parte de m u t a c i o n e s
presentan
pigmento
están
de e st e grupo,
carácterística
cuales
el
Dentro
medida,
la m a y o r
a¿.,
las p t e r i d i n a s
dobles mutantes
menor
ligeramente
, que p r e s e n t a n p a t r o n e s
una
et
el
de
combinarse
mutaciones
tipos
lomocromos).
al
en
con
resto
estar
los q u e p r e s e n t a n
es
provocados
1975;
a
desconoce
de p r e c u r s o r e s
el
las c e p a s
ras
suelen
y gn_JLtd
más
a
descrita anteriormente. En
la b i o p t e r i n a .
pteridinas
que
pauta
de
total
interpretarse
del
afectando
transporte
estas
dos
mutaciones.
En
las
cepas
dobles
mutantes
-1 7 ^ -
de c l o t
(grupo
II)
se han
detectado
patrones
esperados.
limitan
a
Estos
afecta
mutaciones
dos
cepas
a
que
pteridinas
patrones,
a aquellas
clot
hacer
de
en
afectan
una cierta
cm
c¿»
el
pteridinas
E n el
ca,
no
las q u e
g
y
en
aumentadas
mientras
en
resto
valores
similares.
sido
encontrado
no
lo
consideró
encontró
en
valores
la c e p a
una
la c e p a c l _ c a
por
especial
cierta
cepa
se
Hnr3,
por
Esto
una
en
cabe
BQ_cl,
ras »
gr
cl__red»
cho_cl,
a
patrones
de
cantidades
de
lo
esperado,
predominan
autor
similares
a
los
ya h a b í a
(1961a),
mismo
H n r'3 s i n t e t i z a
casi
Hn*-53,
de p t e r i n a ,
es similar
posible
aunque
también
los n u e s t r o s
ser
cuando
de
las
en
sintetizado
de
totalmente
a
la
e n el
sería
estas
la s í n t e s i s
con
la
que
se
cepas.
i.n yi.vo,
se
mutante
pteridinas
dihidropter i n a ,
-175-
que
a lo q u e o c u r r e
cantidades
algo
en
explicación
de a l g u n a s
grandes
también podría
destinada
las
patrón
las
Taira
la c e p a e l
degradación
presentan
mutante
y
es
cantidad
se detecta.
embargo,
de
el
drosopteriñas
Este
drosopterinas
no
se
que
frente
de
H n ra
produjera
sobre
las p t e r i d i n a s
importante.
Dentro
que p r e s e n t a n
aumento
de
que acompaña
v _ c 1.
Un caso
produce
en
Este
de
se
las c e p a s
las c e p a s
los
están
esperados
las m u t a c i o n e s pn»
el»
d ro so pt e ri ñas
el
estarían
están
g
los
de p t e r i d i n a s
e pi s t a s i a parcial
esperados,
que
no
con
la m u t a c i ó n
síntesis
primero
segundo
el
coinciden
de p t e r i d i n a s .
la
E n el
r a s _ c 1 > c_l_er y c3,_se, e n
de pteridinas.
las q u e
a
no
pteridinas
la s í n t e s i s
subgrupos.
y se p r o d u c e n
de
que
que
Sin
y a q u e el
que
parece
de d r o s op te ri ñ a s ,
pero
en
q ue »
al
menos en
pterina
al
bloquearse
drosopterinas.
ya h a b í a
sido
la c e p a
Esta
se_Hnr 3 , podría
totalmente
presencia
observada
transformarse
la
de p t e r in a
síntesis
en
a n t e r i o r m e n t e por
la c e p a
Wilson
de
s e _ H n r3
y Jacobson
<1 9 7 7 b ).
E n el
grupo
misceláneo
de
III
las
d i f i e r e n de
lo
ningún otro
grupo.
La
que
cepa
las
de
dobles
cepas
esperado,
mutantes
cuyos
y
patrones
que
no
han
de d r o s o p t e r i n a s
que
tipo
interacción
entre
mutaciones,
de
y rosy
(r y ),
por
también
se a c u m u l a n
omocromos
Taira
( 196 1a)
considera
interacción,
para
las
sea
nuestra
cepa
deberse
a una
Hs»PTE se u n e
Un
una
en
las
situadas
que
la
ca
ry,
rosy
parece
inhibición
a
de
se
la
cepa
siendo
ry
del
patrón
que esta
paso
de
a
la
también
autor
presenta
esta
que
indicar
cita
que
la
de pteridinas
de
en
el
que
la
similar,
con
las d r o s o p ter i n a s .
una
interacción
síntesis
de
los o m o c r o m o s ,
a n a l i z a d a sf_st.
t a m b ié n en
-176-
Este
interacción podría
enzimático
formar
el
Este
de d r o s o p t e r i n a s
indicar
la c e p a
presenta
encontrado
ca
El
presenta
ruta
y PTE.
afectan
c a y r y no p a r e c e n
la A D H P p a r a
que
fue
en
en
disminuidas,
c e p a s cn__ry y v _ r y .
significativa.
(sf),
interacción
sido
que
un
pteridinas
las s u s t a n c i a s S P , A D H P
las c a n t i d a d e s
mutante
mutación
safranin
pero
cepas
diferencia
de
están muy
mientras
síntesis
presenta
c n _ r y p r e s e n t a u n p a t r ó n de p t e r i d i n a s
cantidades
de
se
la c e p a
Este
v_sf,
t ip o
es
de
que posee
una cantidad
en
de drosopterinas
tablas
al
haber
m u y baja.
sido
Esta
c e p a no
cuantificadas
aparece
solo
las
d r o s o p ter i n a s .
Dentro
cepas
del
dobles
ras
y por
H n 1"3 .
única
apenas
se situaron»
que
pn»
* presentó
III
mutantes
mutaciones
La
grupo
o pr»
cepa
llevaban
que
viabilidad
tan
pudo
mantenerse
un
En estas
epistasia
parcial
Este
de
tipo
p or
cepas
parte
epistasia
otro
no
una
laboratorio.
también»
por
las
par
generaciones
bastante
se
o
ya que
en
que
el
se o b s e r v a una
las m u t a c i o n e s
p a r e c e ser
la s
su síntesis»
dobles mutantes»
de
lado
un
fue pr_se
tras
de
de
mutaciones
se a n a l i z ó
b aj a»
un grupo
pn,
r a s y pr.
habitual
en est os
mutantes.
Otras
epistasia
los
dos
son
cepas
d r o s o p te ri ñas
dobles
y
ADHP
cepas
y
podrían
interacción
similar
no
lleven
definición
Por
Qr_ca
pteridinas
del
las c e p a s
car
también»
la d e s c r i t a
ninguna
de
cierta
que pasaba con
de
sepia»
por
la m u t a c i ó n
cm
la
dke ,
q u e al
interpretarse
a
igual
una
falta
de
sepia,
se
dobles mutantes.
dke»
de p t e r i d i n a s
esperados,
están
producida
1.1 ,
presentan patrones
aunque
mutantes
i n v a r i a b l e en
Las
presentan»
P u e _ s § y 11 __se, a u n q u e al
anteriores
mantiene
que
en
compararlos
como
en
cm
con
procedentes
las c e p a s
las m u t a c i o n e s
y cn_p
del
de una
grupo
incluidas
los
I»
en
la
grupo
III
grupo.
último»
y
e n el
BE
entre
£»
que
las c e p a s s i t u a d a s
*as
cuales
las
presentan
drosopterinas
-
177
-
en
están
el
un patrón
de
aumentadas
frente
BP y
a
lo e s p e r a d o »
la S P
grupo
mutantes
excesivamente
En
dobles
cuyos
de
el
IV s e h a n
grupo
mutantes
e n el
cuerpo.
V
se
de
toda
una
la
s e ri e de c e p as
pteridinas
l os c r o m a t o g r a m a s
Este
no
difieren
asi
ácido
producto
los d a t o s
de
las c e p a s
mutante provoca
sustancia
e s el
como
presentan
oculares»
La ú n i c a
forma
situado
patrones
de brown.
de p t e r i d i n a s
se
como
los e s p e r a d o s .
t ot al
que
que otras pteridinas
están disminuidas.
E n el
dobles
mientras
como
la d e
la a u s e n c i a
isoxantopterina
que aparece
en ocasiones
xanturénico»
una
lateral
durante
causa
primera
en
quinoleina
la s í n t e s i s
de
x a n t o m a t in a .
Aunque
mutación
se d e s c o n o c e
red
pteridinas,
obtenidos
efecto
si
con
que
las
básico
pteridinas,
la
cepa
del
d o b le de
cantidad
Malpighian
cantidad
la
mutación
por
y
la
red,
deducir»
sobre
el
de
la
presencia,
en
de
la
red»
que
q u e el
de
y ADHP
y una
pterina,
efecto
se
individuos portadores
o
de
presenta
salvaje
mitad
Este
la
de
síntesis
tipo
3-hidroxiquinurenina
-178-
patrón
de b i o p t e r i n a
cepa
la
la q u e
los r e s u l t a d o s
patrón
una cantidad
drosopterinas.
de
de
mutación»
po r
por
al
mutantes
aproximadamente,
i s o x a n t o p t e r i na
afecta
dobles
representado
es decir,
la
de,
incrementado
esta
estaría
tubules
puede
cepas
de
cn_red,
se
la
de
ve
de
alguna
sustancia
sintetizada
s u s t a n c i a se e n c u e n t r a
del
organismo
cercanos
al
aumenta»
mientras
de
disminuye
llegando
que
pterina,
la c e p a
pigmento
la A D H P
efecto
e n D.
la m u t a c i ó n
poseen
la
hasta
superiores
c om o
valores
biopterina
AOOV*.
Otras
isoxantopterina
aproximadamente
disminuye
de
al
la
esta
de d r o s o p t e r i n a s
cantidad
afectadas,
Cuando
sus
hasta valores
y
porcentajes,
similares
a
los
salvaje.
marrón
relegado
ella.
drásticamente»
valores
estaban
t ip o
Este
a
de
la c a n t i d a d
que
mantienen
que
partir
presente
1 0 */*» m i e n t r a s
pteridinas
la
a
de
un
sobre
metabolito
el
pues
a
cepas
los
síntesis
del
parece estar
individuos portadores
m u t a n t e s c o mo
3-hidroxiquinurenina,
pteridinas prácticamente
la
p a t r ó n de pteridinas,
melanggaster
red,
de
en
o
presentan
equivalentes a
y,
que
de
no
patrones
de
la c e p a
tipo
los d e
s a 1va j e .
El
efecto
metabolito
base
a
estas
de
la
patrones
de r ed ,
cepas.
experiencia
y de
Sin
en
mucho
al
diferencias,
en
red
comprobar
in di v i d u o s de est a
de
la
e n el
3-hidroxiquinurenina
a partir
de
la
cantidad
para
la q u e
(no
que
cepa,
cepa
patrón
d e ella,
pteridinas
embargo,
i_n v i v o
cepa
permitieron
la
sintetizado
los
mutantes
de
HQ
patrón
red,
lo
HQ) .
de
cual
pteridinas,
-179-
deducir
con HQ
Los
una
la d i e t a
resultados
de
los
se a c e r c a b a
indicaba
entre
en
dobles
se r e a l i z ó
HQ,
un
presentaban
pteridinas
ingerido
o
cepas
que
se suplementó
que habían
de
las
confirmarlo
sintetiza
el
se p u d o
de
de
(HQ)
que
las c e p a s
las
en
L§?íá y
eran
síntesis
de
debidas
HQ por
este
la q u e
segundo
era
la H Q , o u n a
debe
a que
no
s e ha d i c h o
efecto
sobre
sustancia
podemos
metabolizada
a otros
poseer
totalmente
embargo,
impide
o
sí
que
la m a y o r
la de
la c e p a
red,
inferior.
ambas
Si
indicaría que
no
ha
superior
U n a vez
xantomatina,
se
originan
no
A esto
pueda
ser
s e une ,
el
impidan
sustancias.
cardinal
Sin
<c d ) *
en
que
xantomatina
ú n i c a m e n t e un
en
1E'/. d e
la
parte
descartado,
tenemos
a partir
cantidades
no
cantidad de
es
similares
es
la c e p a
de
cd_red,
ligero
efecto
claramente
lo q u e
la x a n t o m a t i n a .
casi
totalmente,
la HQ,
pero
-1 8 0 -
resto
que en
el
de
D.
v er
lo q u e
de e s t a
drosopterinas
de
al
podemos
d e BP,
sobre
a
pigmento
la r e s p o n s a b l e
la c a n t i d a d
que recurrir
de
la
de HQ si m il ar
p a t r ó n de p t e r i d i n a s
que hay un
por
cantidad
cuantificada,
la x a n t o m a t i n a
drosopterinas
de
transforme
que
el
ligeramente
de
la e x p e r i e n c i a
Qiel.anggaster q u e
una
sido
presentan
contrario,
en
se
organismo
mutación
mientras
sin embargo,
el
que
de ella,
deHQ en o t r a s
presenta
acumulación;
por
el
sintetiza
observamos
cepas
compuesto
salvaje).
cd_red
aunque
p or
de HQ se
(se
La cepa
marrón,
que
t i po
que
D.
la
parte
marrón
del
de
de
q u e el
compuestos.
transformación
disponemos
pigmento
cantidad
este
mutaciones
la
de
la s í n t e s i s d e p t e r i d i n a s
asegurar
ingerida
no
la c a p a c i d a d
sintetizada a partir
s u p l e m e n t a c i ó n , la H Q
por
a
la s e g u n d a .
La r a z ó n por
producía
mayor itariamente
es
indicaría,
la s í n t e s i s
efecto
de
sustancias
la
que
íD^ I^nogaster
poseen
ácido
mucha
xanturénico,
cepa red
parece
y en sus
que
ácido
cepas
de f o r m a
-la o m in a
A-
amplia
el
(Wessing
no
mutantes
mutante,
tipo
conocidas
la o m i n a
La
de
HQ,
omina
al
A está
igual
que
ellas
lleva además
de u n
átomo
esta
sustancia
mutante
red
es
se
por
sobre
varios
específicas
del
formada,
( Li n ze n,
de
tejidos
omocromos,
c om o
medio
triptófano
producido
al
excrección
a
cepas
En este
pero
lo
una de
portador
por
la
que
de Malpighi
referencia
( 1 97 4 ),
ciertas
conducen
en
moléculas
la o b s e r v a c i ó n
cual
-181-
red.
dos
La c a u s a
Linzen
ni
las
identificado,
solo
el
( Li nz e n,
de Malpighi,
por
hay
una
la m u t a c i ó n .
y
utilizar
tiene
de
cepa
los t ú b u l o s
la
de
la
en
cita
detectadas
insectos
la x a n t o m a t i n a ,
no
y del
melanogaster,
no mb re de
1967).
los o m o c r o m o s ,
según
de
túbülos
similar.
autores
En se gu nd o
que a u n q u e
ninguna
los
no
un omocromo
al m e n o s ,
con
acumula
que
Drosophila,
de
.compuesto
fenómeno
los
en
en
desconocida,
bibliografía a un
revisión
ni
ocurría
lo
la
la c e p a r e d
e n D.
excepción
otro
de a z u f r e
en
nunca
la c a u s a
por
en
último,
ordenes
se a cu mula
qu e e s p r e c i s a m e n t e
P or
1966),
varios
a
e s t á el
detecta
importancia.
red.
salvaje,
se
que nunca han sido
de
se ha e n c o n t r a d o
individuo
apenas
l ug ar
la 3 - h i d r o x i q u i n u r e n i n a
y Bonse,
en
primer
mutantes»
excepcional
presencia
1974),
de
sustancias
mutantes
presenta,
En
excesiva
los g l u c ó s i d o s
cepas
que
dobles
tener
xanturénico»
las
importancia.
sustancia
pueda
l u ga r e s t á n
en
menor
la
en
la
su
realizada
lesiones
no
formación
de
metabólica
organismo
en
del
del
las r e s e r v a s
de
proteínas
como
concretamente,
los
(presumiblemente
como
la HQ,
un
siguiente
o
la
Para
actividades
de
de b i o s í n t e s i s
La
de
que
e n el
enzimática
Las
mutantes
excepción
la d e
la
cuando
la
más
experimentales
a
la f o r m a
la
en que
problema decidimos estudiar
las
que
a c t úa n en
el
estudiamos
luga r,
y,
por
recaer
una
la r u t a
cepa
se
la
de
sobre
la r u t a
(1983)
a lt e r a c i ó n de
GTP
primera
una enzima
y O ’D o n n e l l
enzimáticas
obtenidas
correlacionadas
y,
habían
la
actividad
para
las c e p a s
se
v_red
dichas
detectó,
y
fácilmente
cepas.
entre actividad
r ed .
compararan
en
ta nt o,
es
la
desarrollo.
negativa,
2E),
a que
fue
la r e g u l a c i ó n
Mackay
red
s er
la c e p a
cepa
rojo
de
de H Q q u e p r e s e n t a b a n
en
que a u n q u e
mucho
durante
(figura
era
las e n z i m a s q u e
que
mutante
pudieron
observó
puede
p or
correlación
de H Q
surgía
en primer
actividades
cantidades
lesiones
de
síntesis
de s í n t e s i s
fácilmente
detectado
se c o l o r e a n
afectaban
enzima
debido,
lug ar
Drosophila»
las p t e r i d i n a s .
la r u t a
en s eg un do
esta
de
que
el
de
tras
En
o choques osmóticos.
red,
algunas
primera
ciclohidrolasa
enzima
problema
resolver
energía.
de M a l p i g h i
omocromo)
mutación
pteridinas.
a
túbulos
de
irradiación ultravioleta
El
la
fuente
Esta
embargo,
excepción
los p a t r o n e s
presenta
red,
sin
GTPCH
las
Dentro
de
y cantidad
una
clara
también
se
de p t e r i d i n a s ,
una cantidad
la c a n t i d a d
con
de BP
ya
similar
de d r o s o p t e r i n a s
era
baja.
Basándonos
e n el
doble
efecto
-182-
que hemos
descrito
para
el
matante
por
si
misma,
actividad
sería
cepas
r ed,
nos
encontraríamos con que esta
p r o v o c a r í a como
GTPCH
(1207.),
la r e s p o n s a b l e
mutantes.
de
máximo
mientras
presenta
la c e p a
red.
Este
GTPCH,
cepas
ya
la m i s m a
si
Para
confirmar
i.n yi_vq el
GTPCH,
la c a n t i d a d
a
que
disminución
efecto
las
m ás HQ
sobre
que
las c e p a s
la
fueran
y y en,
enzimática
de
de
la
la c o m i d a d e
HQ
que
que
las
sobre
la
la c e p a
esta sustancia,
p or
esta
cn__red
detectándose
conforme
la H Q
disminución
creemos
la m á s p r o b a b l e ,
de
cantidad
la
de
sería
la e n z i m a
transcripcional
o
implicaría
que
directamente
la e n z i m a ,
inhibiendo
la H Q a c t ú a
propio
enzimática
aumentaba
ya
del
que
hipótesis.
debida
producida
La
a
una
por
una
p o s t r a n s c r i p e i o n a l . La s e g u n d a
de
sobre
medición
parece
los c o m p u e s t o s
extrato
la a c t i v i d a d
la c i n é t i c a
de
su actividad.
método
utilizado
de
pueden emitirse dos
inhibición
separados
HQ
cepas
iba d i s m i n u y e n d o
interpretar
que
hipótesis,
en
la p r e s e n t a n .
crecientes
producida
El
de HQ
d e H Q s u p 1e m e n t a d a .
Para
primera,
la
actividad
se s up l e m e n t ó
GTPCH
de
reducido
y c d , que
la a c t i v i d a d
GTPCH
estaría
tienen
con c a n t i d a d e s
de a c t i v i d a d
la a c t i v i d a d
efecto,
Or-R
actividad
que
a
la m u t a c i ó n red,
HQ
presencia
la
d e u n 67*/. q u e
llegar
no p r e s e n t a n
de
cuanto
hasta
de
la
aumento
Esta disminución sería mayor
la c e p a ,
portadoras
ligero
que
la d i s m i n u c i ó n
poseyera
actividad
un
mutación,
crudo
descartar
de b a j o
antes
-1 8 3 -
de
peso
la
actividad
esta
segunda
molecular
de realizar
son
los e n s a y o s
enzimáticos.
Solo
covalentemente
la s
actividad
y»
provocar
en
enzimática
resultados
quedaban
de
" q u e n c h e r " de
la H Q
GTPCH,
GTPCH
separada
Otras
oxidasa y
sería
la
otros
sustratos,
de
de
de
que
que
de
parece
la
indicar
razón,
la
efecto
la s u m a
de est e
del
una
producto
resultados
inhiba
los q u e
los
el
Los
realizar
la
efecto
lo q u e
por
a
la e n z i m a
medición
la
HQ
de
la
pudiera
reacción.
analizadas fueron
sintasa.
también
con
la s í n t e s i s
en
del
comparamos
por
la HQ
de
dicha
producida
dihidropterina
enzima,
HQ,
Por
puede
y
La
que
-18¿+-
primera
la
cada
la
cataliza
aunque
catalizar
las
y
la
de
¿n vitro
y entre
la
sepiapterina
la K m y el
uno
la
reacciones
biopterina,
embargo,
para
la d i h i d r o p t e r í n
en pterina,
(lactoildihidropterina)
la
de
a
experiencia
problema
la
la
métodos
(l a c t o i l p t e r i n a ) . S i n
recambio
junto
directa
una
reacción.
necesario
dihidrobiopterina
sepiapterina
oxidada
la
biopterina
que
el
producida
indicar
enzimas
detectado
entre
en
dos
de
estuviera
inhibición
realizamos
inhibición
producto
la
HQ
inhibición
en
la
del
transformación
se ha
por
la
que presentó
con
parecen
aunque
actividad
ser
no
esta
fluorescencia
formado
la
separarse
enmascarados.
la p o s i b l e
obtenidos
si
experiencia
disminución
fluorescente
luego
la f l u o r e s c e n c i a
una
que
los e n s a y o s .
enzimática,
de
más
de
se p r o d u c i a
secuestrador
realizamos
caso
la e n z i m a p o d r í a
determinar
cinética
efecto
el
a
enzimática
Para
de
unida
proteinas
actividad
en
tiempo
de
los d i f e r e n t e s
dihidropterina
sería
el
sustrato
de
mayor
importancia
i.n
yi.yo
(Unnasch
y
Brown,
1982).
La
segunda
transformación
recientemente
capaz
de
de s í n t e s i s
Para
al
eliminadas
no
para
encontrado
Ür-R.
Las
en
algo
normal.
disminución
menos
Estos
r eal
de
no s e h a n e n c o n t r a d o
la p o s i b i l i d a d
i.n yi.yo,
ensayos
entre
las
de un
es
la H a BP.
incluyen
peso
que
una ruta
(c n _ r e d , r e d
y ü r - R ).
de
que
ya que en
enzimáticos
los
han sido
molecular.
en
las a c t i v i d a d e s
las c e p a s
cn_red,
dos p ri m e r a s
tercio de
resultados
e
la
PH*.PTE e n H ^ BP ,
la SP y
sintasa
de b a j o
de
de
analizadas
los
oxidasa
de p t e r i n a
de
diferencias
actividades
disminuidas
han d e t e c t a d o
existencia
o activador
las s u s t a n c i a s
dihidropterín
la
biopterina
inhibidor
enzima
(1984)
a partir
sin embargo,
Se h an
cepa
tiempo
cataliza
en di h id r o b i o p t e r i n a > a u n q ue
al..
las c e p a s
utilizados
sintasa»
transformación
la H ^ B P
entre
algún
extractos
et
la
mismo
la e n z i m a
datos,
la b i o p t e r i n a
sepiapterina
Switchenko
para
diferencias
exista
de
producir
cuestionando
Estos
enzima»
la
red
y
se e n c u e n t r a n
la a c t i v i d a d
concordarían
i s o xa n to pt e ri na que
de
de
con
la
la
presentan
ambas
obtenidos
para
cepas.
Los
las
datos
enzimas
de a c t i v i d a d e s
GTPCH,
H SPTE
enzimáticas
oxidasa
explicar,
en parte,
los p a t r o n e s
las c e p a s
mutantes
de
drosopterinas
podría
de
la c e p a
explicarse
si
red.
la
un
lado,
<42% de
cantidad
“ 185-
BP sintasa
de p t e r i d i n a s
P or
cn_red
y
de
la del
permiten
que presentan
la c a n t i d a d
tipo
H SPTE
de
salvaje)
estuviera
disminuida
de
en
la c e p a
la c a n t i d a d
precursor
podido
que
no
e n el
puede
y
ser
la H ^ P T E
paso
laterales
como
en
Como
necesario,
por
forma
para
por
un
que
ser
explicada,
otro
al
una
la
PH^PTE
se
que
de
la
baja
menos
de
más
entre
con
cadenas
la f o r m a
en H ePTE es
lateral
tetrahidro-
baja
esta
las e n z i m a s
p or
en
bastante
-186-
como
que
H S PTE.
la d i s m i n u c i ó n
más baja
la
enzima
de
e n _red,
G T P C H y HePTE
la
esta
forma,
drosopterinas
que
a
lleva a cabo
De e s t a
de
la
y Brown,
la c a d e n a
e nz i m a que
de
la
que esta enzima
transforme
actividad
que
funcional
drosopterinas disminuidas
en parte,
cantidad
queda
probado»
(Unnasch
d i s m i n u c i ó n de su precursor
mucho
posición
sepiapterina»
H aPTE oxidasa.
las
ha
fluorescente
reducidas
la
no
y
también
la e l i m i n a c i ó n d e
lado, la c a n t i d a d
las a c t i v i d a d e s
provocaría
ser la
de
como
otro
p o r q u e se
una e n z i m a
y PTE sino
reducción
tendría
a una
es
lado,
creemos
podría
consecuencia
red ,
la
bien
nunca ha sido
pterinas
6»
del
H aPTE
azulada
la d i h i d r o b i o p t e f i n a
lado,la
e n __ r e d
Po r
y
que
dihidro-,
conduciría
sustrato
descenso
la m i s m a
menos
esto
oxidasa podría
posición
otro
reducción
cepa
la H a P T E m u c h o
e n t r e He PTE
dihidroneopterina
y»
La
la H a P T E , y a q u e se h a c o m p r o b a d o
utilizar
19BE).
ADHP.
se s i t úa en
Aunque
el
la a c u m u l a c i ó n
fluorescencia
oxidadas.
creemos
PH-C.PTE
y
los c r o m a t o g r a m a s »
porque
de
al
las p t e r i n a s
en
o bien
mancha
enmascarada»
solo
drosopteriñas
detectada
a pterina
otra
lo q u e p r o d u c i r í a
las d r o s o p t e r i n a s , la
ser
oxida
que
de
de
cn_red,
la c e p a
podría
conjunta
oxidasa,
de Ha PTE
s er
de
lo q u e
que en
la
cepa c n _ r e d .
La
otra
patrones
aumento
de
de
característica
pteridinas
la c a n t i d a d
de
cn_red
ruta,
y por
de b iopterina,
pteridina
partir
que
esta
en base
a
incluso
r ed
presenta
serían
mayor
actividad GTPCH
Una
el
del
adulto
Por
dicha
en que
e da d,
bajas
los
es
en
la
de
de
las
s er
lá
que
A
demás
de B P
explicadas
cepas,
ya q u e
la
la p r i m e r a
Las cantidades
que
sino
que
la c e p a
posee
los
de 9 dias
han depositado,
de
que
menor
el
que
de
patrones
de
recien nacidas,
pico
de m á x i m a
los d o s d i a s de
ha
la B P e n m o s c a s
días,
frente
n u e ve días.
pero
a la c e p a
Esto
-187-
rechaza
en
las
que es
actividad
desaparecido.
de un dia
guardaban
tipo
que
de
la e m e r g e n c i a
las c a n t i d a d e s d e B P e r a n
9
e d a d,
mientras
GTPCH prácticamente
se c u a n t i f i c ó
relativas
de
y
red
enzima
todas
estas
es
e s el
trifosfato.
no p u e d e n
sería
en moscas
a partir
en a d u l t o s
adultos
BP
produce
la a c t i v i d a d
proporciones
forman
se m i d e n en m o sc a s
encontrándose
que
de
ya s e
se
ya q u e
razón,
G T P C H de
explicación
GTPCH
enzimática,
solo
de red
y viceversa.
los p i g m e n t o s
estadio
la c a n t i d a d
contradictorias,
se c u a n t i f i c a n
actividades
no
cantidad
posible
pteridinas
las q u e
red
los
salvaje,
la p r i m e r a
la b i o p t e r i n a .
las a c t i v i d a d e s
estas
se
de
la c e p a
la d i h i d r o n e o p t e r i n a
a
y en
que en
t i po
es
controla
sustancia
incluyendo
las c e p a s
la del
La GTP C H
la q u e
se f o r m a ,
de
pteridinas,
en
d e u n 2 00%.
tanto
sobresaliente
las c e p a s m u t a n t e s
de a p r o x i m a d a m e n t e u n 400*/. d e
cepa
más
mucho
de
más
las m i s m a s
salvaje
que
la p o s i b i l i d a d
en
de
que
la c a n t i d a d
de
BP
en
moscas
recién nacidas
fuera más
4
baja
y acorde
cantidad
de
explicada
que
con
B P , observada
por
hace
que
la
debe
en
de
La
enzimas
ser
de
existiera
paso
entre
cuestionada
indican
ensayos
al
que
la
no
elevada
puede
la m i s m a
se m a n t e n g a
la
BP
y
y parece
estar
activada.
cantidad
no
fuera
s er
causa
de BP est é
este
aumento
en
Esta
idéntico
alguna
la
de
las
síntesis
de
activación
de enzima,
obtenidos
se
la
que
que
al
podría
a q u e el
de Or-R,
enzima
o a
que
activador.
al
analizar
describió
H aBP,
actúa
entre
dado
podría
l u eg o
la PH*.PTE y
método
ocurrir
¿n yi^vg a l g ú n a c t i v a d o r
los e x t r a c t o s
que
enzimática
el
la b i o p t e r i n a
primeramente
pero
de a c t iv i da d
y O r - R . Aunque
pasar
en
intervienen
que
enzimáticos,
presentaran
perdido
enzima
diferencias
r e d , cn_red
que
consistiría
compuesto
resultados
una
t a n to »
la c a n t i d a d
que
mayor
mutantes
algún
Los
sintasa,
ruta
a una
las c e p a s
sino
nacidas
la q u e h a g a
pudiera
debida
GTPCH,
recién
posibilidad
la
biopterina
Por
9 d í as .
otra
de
ser
GTPCH.
e n a d u l t o s d e 9 d í a s,
actividad
en moscas
aumentada,
adultos
la a c t i v i d a d
o
utilizado
inhibidor
b r u t o s p or
ha
sido
la H*.BP,
entre
que
p a r a el
no
las c e p a s
para
estas
del
los
cepas
enzima,
las c o l u m n a s
de
Sephadex.
Los patrones
mutantes
de
red
totalmente.
bastante buena
Se
de p t e r i d i n a s
no
siempre
ha
entre
han
encontrado
las
de
podido
una
cantidades
-1 8 8 -
las o t r a s c e p a s
ser
interpretados
correlación
de
HQ
dobles
de
negativa
la s c e p a s
mutantes
de
red
presentaba
un
v _ r e d , que
de
de
la
actividades
resultado
a
la
cepa
ligeramente
Los
red,
de
de
teniendo
que
la
cantidad
ser
a
similar
cantidad
más
tener
en cuenta
Las
r ed,
ruta de
alta
sus
de
interpretar
de
efecto
la c e p a
mayor
el
que
GTPCH
el
solo
interacción
entre
Como
ya
a
se
y
cepas
GTPCH,
la
en,
de
de cn_red
y rb_red.
de
la
Por
cm_red
el
debería
m á s a l ta .
cepa
au nq u e en e s t a
para
l_td y rtD» y
oxidasa
sin embargo,
de
es
cepa
hay
la m u t a c i ó n
las c e p a s r ed,
la x a n t o m a t i n a ,
red
son
actividad
drosopterinas
las m u t a c i o n e s
en,
son
anteriormente.
que conocer
y rb_red
que
clot
en
mutantes.
de BP
descritas
ltd_red
Itd_red
observado
las c a n t i d a d e s
habría
la
las
y es,
dobles
las q u e
de
red,
dihidropterín
la e s p e r a d a ,
el
síntesis
importante
que
totales*
una a c t i v i d a d
d r o s o p ter inas
cantidades
las h i p ó t e s i s
cepas
de
cepas
en
de
las c e p a s
la de r b _ r e d
mucho
cd
la d e
en
presente
la a c t i v i d a d
contrario,
de
fue
drosopterinas
presente
d r o s o p ter i ñ a s
a
varias
de
las c e p a s
sea e q u i v a l e n t e
La
cepa
mayor.
interpretables
suponiendo
discrepante
resulta excesivamente
teniendo
valores
cantidad
La única
adelante.
cantidad
la c e p a c d _ r e d
GTPCH.
fuertemente
trataremos más
Respecto
valor
y sus
de
si
y y cd
afectan
interpretables
P or
el
biopterina
se produce
c n _ r e d , v_red
resto
otro
la
según
contario,
del
algún
a
y
para
de
las
tipo
de
las o t r a s m u t a c i o n e s .
ha dicho
la h i p ó t e s i s
anteriormente,
planteada
-1 8 9 -
se
la e x c e p c i ó n m á s
centra
en
la c e p a y
red
la c u a l ,
una
sin poseer
cantidad
l a s de
en que
la
mutación
de
drosopteriñas.
y afectara a
Los
efecto
la G T P C H ,
sobre
seguridad
ser
no
para
llevar
de
la c e p a
detectarse
producir
actividad
p or
y__red,
una
la m o r t a l i d a d ,
lo
efecto
no
general
Esta
tener
un
de
TRP
medio,
similar
a
fuera
la c e p a
al
de
y
red
la c e p a
po r
T RP,
origina
la s í n t e s i s
e x p e r i e n c i a de
se
determinó
el
de
por
y,p o r
sobre
la
el
Sin embargo,
que
podía
TRP podría
y de
una
la
ligera
aumento
de
de un
metabolismo.
que
en un medio
presentara
no p o d r í a
la e x i s t e n c i a
demostrarlo
el
un
TRP
donde
patrón
estar
pudiera
la s í n t e s i s
habría
controlada.
podríamos
-190-
tener
de
la G T P C H y d e
ta nt o ,
cn_red,
al
un c o n s i d e r a b l e
descartaba
v_red
fue
único
observó
indicar
de
v_red
drosopterinas
se
podría
lo
y
cepa
las m o s c a s
acumulación
si
para poder
baja
y a
una
excepción
que
los o m o c r o m o s .
mayor
inhibidor
la c e p a
GTPCH
experiencia
de
específico
efecto
triptófano
de
ingerido
no
esta
La
acompañada
experiencia
crecer
que
concluyentes.
disminución
que
de
los q u e
esta
TRP
una
d r o s o p t e r i n a s , pero
hecho
mayores
y
de d r o s o p t e r i n a s
Aunque,
vino
en
ya a c u m u l a b a
mayor
disminución,
GTPCH
las c a n t i d a d e s
la r u t a
si
GTPCH.
y
muy
el
de
la a c t i v i d a d
a cabo
que
era
plausible
triptófano,
fueron
metabolizado
como
ligeramente
resultados
con
elegida
más
la a c u m u l a c i ó n
suplementación
biopterina,
solo
actividad
red.
interpretación
consistiría
presenta una
de d r o s o p t e r i n a s
la c e p a
La
HQ,
la
Si
de
de
que haber
cantidad
en este
pteridinas
seguros
de que
el
triptófano
era
Desgraciadamente,
sintéticos,
la
donde
aminoácidos
causante
obtención
l as
al
los
de
en
estén
de s a r r o 1 1 larse
aminoácidos
esta
inhibición.
Drosophila
cantidades
esenciales
complicado,
cuando
el
de
cada
larvas
suministrados
que
ha
de
es
mucho
son
medios
uno
controladas,
las
de
lo s
bastante
peor
en
que
forma
de
protei ñ a s .
Un ú l timo
más
la e x p l i c a c i ó n
actividad
en
resultado
GTPCH
la c e p a
cepa
de e s t a excepción,
la c a n t i d a d
v_cn_red.
y
red,
resultó
mucho
cepa
y
como
El
cabía
alto
que
c n _ r e d . Esto
pone
de
génicas
de
primero
más
interacciones
contribuido
ha sido
drosopterinas
resultó
esperar,
la c e p a
la
in t e r p r e t a r l a s .
-191-
ser
v_red,
valor
al
q u e el
y similar
la
que
de
la
segundo
al
la c o m p l e j i d a d
dificultad
de
encontrados
similar
mientras
manifiesto
y
el
a dificultar
de
de
la
las
supone
CONCLUSIONES
1. — S e
han
mejorado
pteridinas
p or
los
métodos
de
cuantificación
c r o m a tografía en capa
2 . — Se ha d e s a r r o l l a d o
un
isoxantopterina»
nuevo
que
método
resulta
de
fi na .
de c u a n t i f i c a c i ó n
mucho
más
de
rápido
y
p r e c is o .
3 . — Se h a d e s a r r o l l a d o
actividad
detecta
la
actividad
del
eliminar
la
mayor
antes
que
se
Se
han
método
degradación
extractos.
los e n s a y o s
de
fluorescencia
nuevas
cepas
son,
otras
Una
que
la r e a c c i ó n ,
lleven a cabo
dos
sus
otra
idénticos
Rfs
presenta
a
de
los del
a
la
en
los
Drosogh. i.1.a
productos
sido
como
método
enzimáticos.
presentes
ha
la
fluorescentes
presumiblemente,
ellas
p or
la
mutantes
de
y permite
manchas
pteridinas
de
Este
base
compuestos
Ambas
caracterizada
de
en
de
de
Q3® I é D S g a s t e r .
enzimática
parte
de m e d i c i ó n
en D ro sophila.
producto
detectado
cromatogr amas
mientras
nuevo
GTP ciclohidrolasa
fluorescencia
de
un
en
de
los
parcialmente
6-formilpterina,
unos
ácido
máximos
de
dihidropterín
carboxílico.
5 . — Se
dos
han
detectado,
formas
descubiertas
en
las p l a c a s d e c r o m a t o g r a f í a , las
racémicas
por
Rokos
de
la
y Pfleiderer
-193-
aurodrosopterina
( 1975).
6 . — La
mancha
n c# 18
(d ih i d r o f orm i lp ter i n a ) e s t á
la s u p e r p o s i c i ó n d e d o s
racémicast
al
igual
manchas,
que ocu rr e
7 . — L a d i h i d r o f o r m i 1p t e r i na y
preferentemente,
en
Esto
de
dihidroneopterina
diferente
de
de
que
se
llevan
se
formas
pteridinas.
acumulan,
la
mutación
produce
trifosfato,
por
a partir
una
la q u e se s i n t e t i z a n
ácido
dihidropterín
en
la
ruta
p i r uv o i1tetrahidropterina
loci
garnet,
de m a n e r a
Por
ruta
el
de
ojos,
produciendo
que
disminuidas,
que
incluso
la
que
resto
a
un
desde
la
la d i h i d r o p t e r i n a .
y ruby parecen
actuar
de
pteridinas.
combinaciones
de
dos
producen
alelos
cantidades
f r e n t e a las e s p e r a d o s .
con
parte
en
otras
de p t e r i d i n a s
de
lo e s p e r a d o ,
estarlo
es
síntesis
patrones
a
síntesis
rose
loci
mayor
aumentada
de
interaccionan
frente
suele
no
la
inferiores
sustancias
los
las
estos
pteridinas muy
mismas
durante
razón,
c a r b o x í 1 ico
conduce
lightoid,
similar
dicha
mutantes
la
que
su s í n t e s i s
la r u t a p o r
intermediario
en
con o t r a s
ser
por
las p t e r i d i n a s .
8 . — El
9.— Los
que podrían
neopterina
cepas
purple.
la
indica
la
formada
menor
siendo
Estas
de color
de
esperados,
las p t e r i d i n a s
están
la b i o p t e r i n a
proporción,
en a l g u n a s ocasiones.
- 1 9¿t-
no
de
estando
1 0 . — La
que
mutación
afectan
l as c e p a s
que
clüt
a
interacciona
la s í n t e s i s
cantidad
varias
de pter id in a s»
dobles mutantes
la
con
mutaciones
produciendo
patrones
de
pteridinas
de d r o s o p t e r i n a s
es
muy
en
superior
en
lo s
a
la
esperada.
1 1 . — La
mutación
afectan
a
rosy
interacciona
la s i n t e s i s
de
las c e p a s
dobles
que
drosopterinas
la
las
pterina
parece
de
estén
que
unión
de
mutaciones
que
produciendo
en
pteridinas
disminuidas»
en
los
mientras
que
aceti I d i h i d r o h o m o p t e r i n a
aumentadas.
indicar
la
patrones
están
la
las
xantomatina,
mutantes
sepiapterina»
con
el
Este
paso
de
tipo
enzimático
la
de
y
la
interacción
afectado
dihidropterina
sería
el
con
la
a c e t i Id ih i d r o h o m o p t e r i n a .
1E.—
La m u t a c i ó n
a
la a n t e r i o r ,
síntesis
13.—
safranin presenta
epistasia
se
prune,
parcial
acumulos
recessive
I*».— No
las
interacción»
mutaciones
que
similar
afectan
a
la
de omocromos.
Las mutaciones
grandes
con
una
raspberry
con
de
las
y purple
mutaciones
pteridinas,
como
presentan
que
sepia
una
producen
o
Henna
3.
ha d e t e ct a do
síntesis
-195-
de p t e r i d i n a s
en n i n g u n a
cepa doble
15.— La
enzima
actuar
la
multante p o r t a d o r a
dihidropterín
e n el
paso
pterina,
entre
que
entre
actuar
la
la m u t a c i ó n b r o w n .
oxidasa,
enzimático
podría
enzimáticos
de
i.n yjLvg p a r e c e
la d i h i d r o p t e r i n a
también en uno
de
y
los p a s o s
p i r u v o i 1te t r a h i d r o p t e r i n a
y
la
d i h i d r o p t e r ina.
16.— La
mutación
síntesis
red
Malpighian
de pter id in a s,
enzima
oxidasa.
explicaría
las
pterina
isoxantopterina,
cantidades
17.— La
sintetizado
partir
de
actividad
GTP
de d i c h a
1 8 . — El
de
y
el
e ll a ,
la m u t a c i ó n
red
de
y
probablemente
de
la
drosopterinas,
aumento
de
las
y biopterina.
de
GTPCH
directa
negativa
entre
de
cepas
la
se h a
la a c t i v i d a d
de 3 - h i d r o x i q u i n u r e n i n a .
la
3-hidroxiquinurenina
no
parece
sobre
en
las c e p a s
disminución
estas
las d i f e r e n t e s
a diferencias
en
En
la c a n t i d a d
inhibidor
inhibición
la
disminución
produce
una
c i c l o h i d r o 1a s a .
enzima
la , a c t i v i d a d
deben
cantidades
una c o r r e l a c i ó n
efecto
a
de 3 - h i d r o x i q u i n u r e n i n a , o un m e t a b o l i t o
a
portadoras
detectado
bajas
Esta
de a c e t i 1d i h i d r o h o m o p t e r i n a
presencia
afecta
d i s m i n u y e n d o la a c t i v i d a d
dihidropterín
e
tubules
la
ser
enzima,
actividades
la c a n t i d a d
-196-
debido
sobre
a
una
sino
que
enzimáticas
de e n z i m a .
se
1 9 . — El
la
aumento
de
presencia
explicado»
de
aumento,
2 0 . — La
de
cepa
re d
entre
excepción
es
en esta
triptófano,
actividad
general
debida
o no
por
no
ser
puede
disminución
GTPCH y H^PTE
de
las
oxidasa.
Este
con
un
biopterina sintasa.
una
excepción
a
la
de HQ y a c t i v i d a d
debida
a la
correlación
GTPCH.
Esta
acumulación
de
cepa.
de
la d i e t a
pr o d u c e una
GTPCH
la
producido
podidocorrelacionarse
cantidad
s u p 1e m e n t a c i ó n
embargo,
ha
p u e de ser
triptófano
por
las e n z i m a s
la a c t i v i d a d
y
de b i o p t e r i n a
3-hidroxiquinurenina
tampoco
negativa
2 1 . — La
de
únicamente,
actividades
aumento
la c a n t i d a d
de
de
pequeña
la c ep a .
probablemente
específico.
-197-
la
cepa
y
red
disminución
Esta d is m inución
a
un e f ec t o
de
con
la
es, s i n
metabólico
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M.D.,
y MENSUA,
J.
eye-colour
of
fo r
t he
and
other
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J.
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q u a n t if icat ion
(Blair,
MENSUA,
use
389-398.
metabolites.
de G r u y t e r , B e r l i n - N e w
R E AL ,
D.
t he
related
Pteridines
cartridges
350:
Comparative
B i o logy of
in
271-280.
reversed-phase
FERRE,
M.
de Valencia.
y
pteridines.
G.
triphosphate
synthesis
las p t e r i d i n a s
de D r g s g g h i ¿ a
y BROWN,
guanosine
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QCBü°QtlÍl§
D.
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MENSUA,
mutants
pteridines
of
Chem. 260: 7 5 0 9 - 7 5 1 4 .
M.
in
mutants
and
Biochem.
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L.
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the
xanthommatin
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durcht
den
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6 - ( D - e r y t h r o - 1 ’ , 2 * , 3 7- t r i h y d r o x y p r o p y l >
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ry
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M.,
COLLINS,
Characterization
G e n e t i c s 77:
G H O S H , D.
triphosphate
of
locus
in
XDH
P.
y CHOVNICK,
structural
Drosqghi_l.a
A.
mutants
meianoqaster.
s24-s25.
y FÜRREST,
H.
h y d r o x y l a t ion
S.
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kynurenine
CQ§I§DQ9§5Í9!I ■ G e n e t i c s 55:
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Drgsggh¿l_a g e l . a n g q a s t e r . B i o c h e m .
of
occurring
1-13.
K.
white
of
ISO: 5 7 8 - 5 8 2 .
role
patterns
in
Inhibition
naturally
Biophys.
excretory
SUMMERS,
Developmental
mutants
S.
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HDWELLS,
H.
color
Genet.
17s
149-158.
HUBBY,
J.
L.
metabolism
(196 2) .
in
A
mutant
Drgsgghüa
affecting
pteridine
G e n e t i c s 47:
0el.angqaster .
109-114.
IKEMOTQ,
H.
( 198 1) .
haemolymph
hylas
INAGAMI,
of
of
J a p a n 23:
Chemical
of
in
howk
the
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l ar va l
Cheghgngdes
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L.
K.
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A
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relationship
K.,
BUCHANAN,
naturally
M.
occurring
Chemical
to
PFLEIDERER,
a nd
W.,
V.
y
M c C L O S K E Y , J.
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spectral
drosopterin.
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Biochemistry
and
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that
V.
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Drgsgg.hi.la
r nelanogaster.
in t h e
Insect
The
pyrrolase
in
807-817.
structure
Proc.
cofactor.
of
the
Nat.
Acad.
1085-1098.
y
BROWN,
properties
K.
119-1E3.
S.
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RAJAGOLAPAN,
oxidase
555:
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5L°=Lggh i,l_a m e i a n o g a s t e r . Dros.
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new spots
color
Inform.
on
mutants
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C.
and
L.,
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K.
—£05-
y
CHAO,
J.
Y.
y
tetrahydrobiopterin
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542-623.
D.,
with
screening
GTP
D.
defective
neopterin,
action
2d:
M.
LEUPÜLD,
with
deficiencies
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dopamine
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biosynthesis
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BETTÜNI ,
p h e n y 1k e t o n u r i a
tetrahydrobiopterin
of
tetrahydrobiopterin
H.
p h e n y 1keto nu ri a
synthetase
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Ann. Rev. Biochem. 5 4 s 7 2 9 - 7 6 4 .
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R Y A L L , R.
L.
y
Ber.
108:
aus
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y K I R K S T A E D T E R S , H.
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J.
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in
J.
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J.
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R.
(196 6) .
eyes
of
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Insect B i o chem.
wild
K.
y
tetrahydropterin
novo
Biophys.
Biol.
NICHOL,
Comm.
of
of
the
of p i g m e n t
a nd
29:
C.
intermediates
biosynthesis
Res.
type
d r o s o p t e r in p a t t e r n
fruitfly
Genet. 46: 4 1 - 5 8 .
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Cell.
C.
The
mutants
Dr o s o g h l 1.a me.1 a n o g a s t e r . Arch.
de
aurodrosopterin
der
47-61.
SCHWINCK,
SMITH,
u nd
Determination
HOWELLS,
intermediates
SHOUP,
abbau
875-886.
Variations
in
th e
Isolierung,
alkalischer
H.
and
of
1061-1078.
(1 97 5 ).
excretion
xanthopterin
biosynthetic
4:
FRISIUS,
urinary
11:
Ul.
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mutants
Drosgghüa
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J.
y
Genetic
Transport
color
eye
Genet.
mutants
of
13: 6 0 3 - 6 1 3 .
SULLIVAN,
studies
defects
M.
on
C.
( 19 7 3) .
kynurenine
f r o m Drgsggh¿l,a m e i a n g g a s t e r . G e n e t i c s 75:
hydroxylase
651-661.
SULLIVAN,
D.
S.
localization
S u b c e l l u 1ar
the
GRILLO,
T.,
[D^I^nogas t er . J . exp.
C.
D.
T.,
( 197 9) .
A.,
eye
O ^ I a n g g a s t e r . B iochem.
A.
G.,
Intermediates
in
three
pathway
PATON,
by
in
J.
R.
y
enzymic
D r o s o g h i.l.a
Biochem.
Comm.
120:
TAIRA,
T.
red
Ja p.
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17: 5 6 5 - 5 7 3 .
P.
the
D.
malpighian
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Genet.
PRIMUS,
R.
188: 2 2 5 - 2 3 3 .
transport
Purine
KITOS,
t he f i r s t
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B E LL ,
p t e r id i n e - d e f i c ient
SWITCHENKD,
of
y
synthetic
ommochrome
SULLIVAN,
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the
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T.
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y BROWN»
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of
G.
C.
K.
y
hydroxylases
xanthine
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Chem. 261:
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M.
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red
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the
G.
J.,
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of
• J-
T.
D.
of
G.
R.
the
BROWN,
intermediate
G.
K.
M.
(19 84 ).
triphosphate
involved
drosopterins
Biol. Chem.
y JACOBSON,
y
dihydroneopterin
pyrimidodiazepine
biosynthesis
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PATON,
in
in t h e
Drosoghíl^
259: 2 1 9 5 - 2 2 0 0 .
B.
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-2 0 9 -
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Isolation
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and
Drosqqhüa
Í D^I sn og a st e r
T.
G.
y
modified
Genet.
JACOBSON,
in D r o s o p h i l a .
mutant
Drgsgghj..la
of
T.
T.
variants
y
of
J.
J.,
GLASSMAN,
GRELL,
Mechanism
of
sepiapterin
E.
58:
H.
at
in
Genet.
E.
Mechanism
of
of
t he p u r p l e
the
pteridine
15: 3 2 1 — 332.
( 19 65) .
Electrophoretic
dehydrogenase
in
D r g s o g h i,l_a
977-981.
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supression
synthase
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Localization
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chromatography
15: 3 0 7 - 3 2 0 .
ID§l2D2995ter
pathway.
T.,
thin-layer
K.
supression
biosynthetic
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Detection
and
QE252BbÍI§
0 9 l 2 D 2 9 2 2 ter
from
some
K.
dihydroneopterin
B.
y
C R U M M E T T , D.
properties
that
of
releases
triphosphate.
363-370.
-210-
an
the
C.
(1981).
enzyme
side
from
chain
Insect Biochem.
11:
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El Secretario,
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