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RESUMEN
En la actualidad, el diagnóstico de la tuberculosis se basa, fundamentalmente,
en la observación del bacilo en muestras clínicas y en su posterior desarrollo en
medios de cultivo selectivos, así como diversas pruebas fenotípicas. No
obstante lo anterior, existe un creciente interés en el desarrollo y aplicación de
técnicas más sensibles y específicas que reduzcan notablemente el tiempo
requerido para el diagnóstico eficaz. En el presente trabajo se realizó la
caracterización genotípica y polifásica de 31 cepas silvestres de micobacterias,
aisladas de muestras clínicas humanas y de origen bovino, así como de tres
cepas previamente tipificadas. Primeramente se evaluó el desarrollo de las
cepas en el medio de Bromocresol el cual contribuyó a la identificación de
cepas de M. tuberculosis mediante el cambio del color del medio. Para la
extracción de ADN, se evaluó un procedimiento con Chelex 100, mismo que
permitió la obtención rápida, económica y de material de buena calidad para el
subsiguiente análisis genotípico. Para la genotipificación se utilizaron las
técnicas de PCR-RFLP del gen gyrB, PCR-RFLP del gen hsp65, PCR-Loci
independientes y ERIC-PCR. La utilización combinada de las técnicas
moleculares mencionadas y de pruebas fenotípicas realizadas previamente,
permitió identificar 22 cepas de M. tuberculosis, cinco cepas de M. fortuitum,
dos cepas de M. bovis, una cepa de M. massiliense y una cepa de M.
flavescens. Por otro lado, se logró identificar a M. tuberculosis, a partir de la
extracción directa de ADN en tres muestras clínicas y la aplicación de las
técnicas de PCR-RFLP del gen gyrB, PCR-RFLP del gen hsp65, PCR-Loci
independientes. Finalmente, si bien la técnica de ERIC-PCR no permitió el
agrupamiento preciso de cepas por especie, si proporcionó suficiente
información para la diferenciación a nivel de especie y de cepa.
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