UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANALISIS LICENCIATURA EN QUIMICA CLINICA CAMPUS XALAPA CATEDRATICA: M. en C. Roclo I. Hernandez Coria EXPERIENCE RECEPCIONAL “Riesgo de zoonosis para los alumnos de la Unidad de Ciencia de la Salud al manipular animates de laboratorio” MONOGRAFIA PRESENTA; Maria del Carmen Diaz Mendez DIRECTORA: M. en E. Mercedes Acosta Aviles MIEMBROS DEL JURADO M en C. Isela Santiago Roque M. S.A.N. Francisco Solis Paez M. en C. Claudia Belen Ortega Planell XALAPA DE ENRIQUEZ., VER., JUNIO DE 2013 Indice Resumen.....................................................................................................................................2 Objetivo General:.................................. .................................................................................. 4 Objetivos Especificos................................................................................................................ 4 Justification:............................................................................................................................... 5 Capitulo 1 ................................................................................................................................... 6 Datos H istoricos................................................. 6 1.1 Periodo Clasico:................................................................................................................. 6 1.2 Edad M edia.............................................................. 7 1.3 Edad Moderna.................................................................................................................... 8 1.4 llustracion.................................. 9 1.5 S igloX IX .......................................................................................................................... 11 1.6 SigloXX y actualidad......................................................................................................12 Capitulo 2 .................................................................... . ...................................................... . . 1 6 Principales animales usados en investigacion y docencia actualmente........................... 16 2.1 Bioterio......................, .................................................................................................... 16 2.2 Instalaciones y condiciones generales para un bioterio:............................................. 17 2.3 Especies mas empleadas en la investigacion................................................... 18 2.4 Estadisticas...................................................... 21 2.5 Especies que manejan los alumnos de la Unidad de Ciencias de la S a lud ............... 23 Capitulo 3 .................................................................................................................................25 Zoonosis................................... 3.1 25 Zoonosis Genericas...................................................................................................... .2 6 3.1.1 Tuberculosis.................................................................................................................... 26 3.1.2 Brucelosis....................................................................................................................... 27 3.1.3 Salmonelosis.................................................................................................................. 28 3.1.4 Sarna o escabiosis......................................................... 29 3.1.5 Rabia........................................................................................................................ 31 3.1.6 Tetanos............. 32 3.1.7 Himenolepiosis................................................................ 32 Capitulo 4 ................................................................................................................................. 34 Zoonosis Especificas..............................................................................................................34 4.1 Roedores.........................................................................................................................34 4.1.1 Fiebre por mordedura de rata........................................................................................34 4.1.2 Fiebre de Lassa........................................... 35 4.1.3 Leptospirosis.................................................................................................................. 36 4.1.4 Infection por Hantavirus................................................................................................ 37 4.1.5 Peste o Plaga................................................................................................................. 39 4.1.6 Coriomeningitis linfocitica.............................................................................................. 39 4.1.7 Tifus murino........................................................................................ 4.2 40 Lagomorfos (Conejos).................................................................................................40 4.2.1 Pasteurelosis.............. 41 4.2.2 Tularemia........................................................................................................................41 4.2.3 Dermatomicosis o Tinas....................................................................................... 42 4.2.4 Pseudotuberculosis:..................... ................................................................................ 43 4.2.5 Encefalitis Powassan.....................................................................................................44 ) f Capitulo 5 Prevencion y Medidas deSeguridad.................................................................... 45 5.1 Relacionados con el personal..................... 45 5.1.1 Capacitacion del personal............................................................................................45 5.1.2 Programa de Salud Ocupacional ySeguridad del personal........................................46 5.1.3 Identification de los riesgos derivados del trabajo con anim ales.......................... 47 5.1.4 Prevencion de los riesgos derivadosdel trabajo con anim ales................................. 48 5.1.5 Higiene y Protection Personal..................................................................................... 48 5.1.6 Medicina Preventiva para el Personal......................................................................... 50 5.2 Condiciones para los animalesde laboratorio con NB-1................................. 51 5.2.1 Instalaciones.................................................................................................................. 51 5.2.2 Alojamiento de los animales.......................................................................................... 52 5.3 Recomendaciones para el bioterio de Ciencias de la Salud..................................... 53 5.4 Conclusion....................................................................................................................... 55 5.5 Referencias...................................................................................................................... 56 A n e xo s..................................................................................................................................... 64 DedicD Bste trab ajo a mi paquEfio gran hijo, Emmanuel, par ser la fuErza que me impulsa a anfrentar tadas aquellas pruabas qua la vida ma presenta. 1 Resumen Este es un trabajo de investigation documental acerca de las principales zoonosis que afectan al hombre al estar en contacto con animates de experimentation, asi mismo, se indican los riesgos inherentes derivados del contacto estrecho con animates de experimentation. El objetivo de esta monografia es recopilar information documental acerca de las zoonosis que transmiten los animates de laboratorio utilizados en el bioterio de la Unidad de Ciencias de la Salud, con el proposito de contar con una fuente de information que permita dar a conocer las diferentes zoonosis que se pueden adquirir al manipular roedores y lagomorfos, animates utilizados por los alumnos, asi como, recomendar algunas medidas de seguridad para evitar riesgos a la salud a los alumnos que cursan las diferentes experiencias educativas al manejar los especimenes. Para contextualizar el uso de los animates de experimentation se describen algunos datos acordes a los periodos historicos en que se desarrollaron. Posteriormente se hace mention a las principales especies animates de experimentation y los avances cientificos que se han llevado acabo con estos. Se indica tambien una relation de los animates que se emplean mundialmente asi como los utilizados por los alumnos, docentes e investigadores en la Unidad de Ciencias de la Salud. Se mencionan las principales zoonosis genericas y especificas, detallandose los riesgos derivados del contacto estrecho con animates de experimentation. Finalmente se emiten recomendaciones tanto para las instalaciones como para el personal usuario del bioterio, con el proposito de minimizar riesgos y cuidar el bienestar de los animates. Palabras clave: zoonosis, riesgos, roedores, lagomorfos. 2 Introduccion Este es un trabajo de investigation documental acerca de las principales zoonosis que afectan al hombre al estar en contacto. con animates de experimentacion, haciendo entasis en aquellas zoonosis a las que estan expuestos los alumnos de la Unidad de Ciencias de la Salud en las Experiencias Educativas (EE) que conforman su plan de estudios en las cuales requieren especimenes tales como ratas, ratones y conejos. Teniendo en cuenta que las zoonosis son enfermedades de los animates vertebrados que se transmiten naturalmente al hombre, los alumnos y personal que trabajan con estos animates estan expuestos a contagiarse o a sufrir algun accidente con el animal de experimentacion. Esta monografia se estructura en cinco capitulos. En el primero se mencionan datos historicos acerca del uso de animates a traves de las diferentes etapas de la historia, en el segundo se hace referenda a los principales animates de investigation cientifica que se utilizan actualmente y los lugares de production y mantenimiento, en el capitulo siguiente se habla de las principales zoonosis generates que menciona la NOM-62-ZOO-1999 y otras recopiladas de literatura cientifica; en el cuarto se hace mention a aquellas zoonosis que afectan a roedores y lagomorfos que son los animates con los que realizan sus practicas de laboratorio los alumnos de la Unidad de Ciencias de la Salud, finalmente se mencionan la normatividad y las medidas de seguridad que deben seguirse para evitar riesgos a la salud. 3 Objetivo General: Recopilar informacion documental acerca de las zoonosis que transmiten los animates de laboratorio utilizados en el bioterio de la Unidad de Ciencias de la Salud. Objetivos Especificos • Contar con una fuente de informacion que permita dar a conocer las diferentes zoonosis que se pueden adquirir al manipular roedores y lagomorfos. • Recomendar algunas medidas de seguridad para evitar riesgos a la salud a los alumnos que cursan las diferentes experiencias educativas al manejar animates de laboratorio. 4 Justification: Dentro de los programas de estudio de las licenciaturas que ofrece la Unidad de Ciencias de la Salud se ofertan diferentes experiencias educativas en las que los alumnos utilizan animales de laboratorio como modelos biologicos. Tales como: Toxicologla, Ciencias Morfologicas y Fisiologicas, Laboratorio Clinico Veterinario e Inmunologia (Lie. Quimica Clinica); Fisiologia I y II, Farmacologia, * Embriologia (Lie. de Medico Cirujano); Embriologia y Fisiologia (Lie. de Cirujano dentista). Existen otras actividades como la de investigacion en donde se hace uso de animales de laboratorio por parte de profesores de la Facu|tades de Bioanalisis y Medicina. Durante dichas practicas educativas o proyectos de investigacion existe contacto con roedores y lagomorfos, por consiguiente estos ameritan un manejo cuidadoso para evitar contagios y accidentes para los alumnos, el personal encargado del cuidado de los animales, investigadores y docentes que manejen dichos animales en sus procedimientqs. Debido que los animales son fuente potencial de enfermedades se considera relevante la realization de este trabajo a fin de que sea un recurso informativo para alumnos, personal tecnico, docentes e investigadores que manipulan animales en la Unidad de Ciencias de la Salud y de esta forma evitar riesgos de trabajo profesional como son mordeduras, salpicaduras de sangre, orina o saliva del animal. Aunado a esto, en la Unidad de Ciencias de la Salud no se cuenta con un documento que contenga un objetivo similar al de este trabajo que reune de diferentes fuentes y puede consultarse con el proposito de conocer y evitar las zoonosis. 5 Capitulo 1 Datos Historicos La experimentacion aninial se ha realizado desde la antiguedad, los inicios del uso de animales para comprender la anatomia, fisiologla del ser humano as! como las semejanzas y diferencias entre este y los animales data desde epocas antiguas. Para su mejor comprension del uso de los biomodelos se describen acorde al periodo historico en que se presentaron. 1.1 Periodo Clasico: Aparecen experimentadores biologicos que hacen importantes deducciones racionales acerca de los diferentes procesos anatomofisiologicos del ser humano tal es el caso de Alcmeon de Crotona, Hipocrates, Aristoteles y Claudio Galeno. Alcmeon de Crotona (siglo VI a.C.) es el primer experimentador biologico del que se tiene referencia, fue un filosofo presocratico y medico, se ajusto a la observacion y a la deduccion racional. Concluyo con la idea de que en el cerebro se encuentra la psique, observo al seccionar el nervio optico de una oveja que los nervios sensoriales se dirigen y penetran en el cerebro, en consecuencia la oveja perdio la vision.1 Muchos de los conocimientos de Alcmeon influiran en Hipocrates de Cos (440-370 a. C) en sus trabajos se menciona las diferentes investigaciones llevadas a cabo en los animales para interpretar fenomenos biologicos observados en el ser humano, por ejemplo, en su Corpus Hipocraticus describe el proceso de deglucion en el que secciona la garganta de un cerdo al que previamente, le habia hecho beber agua coloreada. Al paso de los anos la experimentacion con biomodelos va documentandose, Aristoteles, (384-322 a.C) considerado el fundador de la biologia utiliza tambien animales para estudiar similitudes y diferencias entre el organismo y sus funciones de estos y los del hombre. 6 Sienta las bases de la validez de la experimentacion animal al afirmar “...en muchos casos, la description de los atributos de distintas especies son similares, tanto en el caballo, como en el perro y en el ser humano” De sus numerosos escritos destacan De partibus animalium, De motu animalium y De ambulatione animalium.2 Es el anatomista Claudio Galeno (130-210 a. C.) quien mejora las tecnicas de diseccion. Gran parte de sus conocimientos medicos se deben a practicar innumerables disecciones en animates, uso diferentes especies: animates domesticos, leones, elefantes, cerdos y monos. Escribio las bases para el estudio de la medula espinal. Otro fruto de sus experiencias fue establecer que los vasos sanguineos nacen del corazon y los nervios salen del cerebro, no solo fue un buen anatomista, sino que logra interpretar diferentes funciones del cuerpo humano, como por ejemplo, la funcion de los pulmones y la del corazon.3 1.2 Edad Media En esta etapa hay un retraso muy grande de los conocimientos que habian sido establecidos por los notables griegos, no solo en el campo de la medicina sino en todas las disciplinas. Segun los historiadores tres fueron las causas de este estancamiento: la caida del Imperio Romano y con ello la sapiencia griega, la invasion de los Barbaras, que era una cultura menos desarrollada que la griega y la difusion del Cristianismo que atendia principalmente cuestiones espirituales que corporales. A pesar de que en la epoca medieval se extendian los dogmas teocraticos Razes y Avicena pudieron sobresalir en las ciencias. Razes (865-925) de origen persa, sobresalio en filosofia, fisica, medicina y quimica, a el se le debe el descubrimiento del acido sulfurico, tuvo su laboratorio en la Universidad de Bagdad.1 7 Por su parte el gran medico, cientifico y filosofo tambien de origen persa Avicena (980-1037) dedico gran esfuerzo a la medicina. Por sus actividades cientlficas y medicas fue perseguido y encarcelado, pese a ello el no abandonaba la medicina. Destaco por proponer leyes para mantener la salud, formulo reglas de higiene, describio la sintomatologia de la peste, advirtio de la peligrosidad de la viruela, senalo sintomas de la diabetes, describio la estructura del ojo. Escribio su Canon de la Ciencia Medica, donde reune los conocimientos medicos, esta obra fue un marco de referencia por encima de Galeno y Razes.15 Se sabe que en los siglos IX al XII, se practicaba la medicina cientifica siguiendo los metodos de Galeno, en el Codigo de Breslau se describen disecciones realizadas en el cerdo por ser el “animal mas parecido al hombre”. 4 1.3 Edad Moderna Renacimiento Luego de grandes retrocesos tanto en la investigacion biomedica como en las demas disciplinas, surge en esta etapa de la historia el interes en hacer renacer la cultura clasica anterior a la Edad Media, personales como Andres Vesalio, William Harvey, Robert Hooke, entre otros, sobresalen por sus brillantes aportaciones ya sea en la diseccion de cadaveres o con estudios experimentales en animates, tal es el caso del medico Andres Vesalio (1514-1564) a quien se le considera el “fundador de la anatomia moderna”, con el se inicia una especie de revolucion cientifica puesto que se oponia a los textos milenarios de Galeno, “el preferia hacer las disecciones personalmente en cadaveres, fue asi como se dio cuenta de que la anatomia humana de Galeno estaba realmente basada en animales y ademas contenia numerosos errores”, con respecto a animates utilizo cerdos y perros en sus demostraciones de anatomia mediante vivisecciones, publico De humani corporis fabrica, dicha publicacion fue de gran impulso ya que se pudo correlacionar la anatomia con la fisiologia.5 8 A quien se le considera el iniciador del metodo experimental William Harvey (1578-1657) por demostrar que la circulacion sangulnea a traves del sistema vascular, basado en investigaciones morfologicas al practicar disecciones y la experimentacion con animales. A Harvey se le debe el conocimiento que se tiene ahora en medicina sobre la administracion de medicamentos por via intravenosa, realizo las primeras transfusiones sanguineas entre animales, despues de animales al hombre y finalmente entre humanos.6 Rene Descartes (1596- 1650) por su parte se intereso por las experiencias de Harvey y el mismo experimento con animales, establecio la teoria de que “el hombre y los animales son maquinas automaticas que obedecen a leyes mecanicas”, distingue al hombre. por ser racional, que atribuye al alma, y sostiene que los animales carecen de alma y deduce que no padecen dolor, esta teoria creo muchas controversias. 4 ’ Otro estudioso experimental fue Robert Hooke (1635-1703) que al conocer la bomba neumatica de Boyle tuvo la idea de construir una bomba de respiracion artificial para un perro, con la ayuda de dos balones elasticos. Posteriormente este instrumento se ha perfeccionado ha sido y sigue siendo, de vital importancia no solo en experimentacion animal sino en medicina humana.1 1.4 llu s tra c io n En esta etapa se multiplican los avances experimentales en Europa, hay un aumento del saber y las investigaciones se vuelven mas especializadas, por ejemplo Albrecht von Haller (1708-1777) fisiologo aleman, estudio los procesos de la fecundacion en los mamiferos, llegando a descubrir el desprendimiento del ovulo desde el ovario y la formacion del cuerpo luteo, experiencias que realizo en los rumiantes: vacas, ovejas y cabras. Dentro de sus escritos destaca A dissertation the Sensible and Irritable Parts of Animals en el que senala “desde el ano 1751 he experimentado en 190 9 animales, lo que me produce una sensacion de crueldad por la que siento rechazo, ello se puede soportar solo por el deseo de contribuir al beneficio de la especie humana y lo puedo excusar por el mismo motivo que induce a las personas de temperamento mas humanitario a comer cada dla cebados e inocentes animates”1 Por otra parte al biologo estudioso e incansable observador de la naturaleza Lazzaro Spallanzani (1729-1799), se le debe el estudio de la reproduction de los mamiferos, descubrio que el espermatozoide es el agente masculino que precisa del ovulo para la generation de un nuevo ser; la demostracion consistio en ser el primero que practico la insemination artificial en una perra. Entre tantos estudios mas dedico especial atencion al sistema grastroenterico, analizo el jugo gastrico de diversas especies animales y de los humanos, llego asi a la conclusion de que en cada especie su composition era la indicada para digerir los alimentos propios de la especie, tales experimentos los realizaba con acidos, bases, alimentos y trozos de estomagos en tubos de ensayo, por lo que se le considera el iniciador de las pruebas de laboratorio in vitro. 1 Igualmente Luigi Galvani (1737-1798) fue un medico que trabajo arduamente con ranas muertas, observando que con estimulos electricos producia la contraction de las patas, tan importante fenomeno ha dado lugar a varias leyendas, una de ellas describe que Galvani al iniciar sus disecciones de una rana cuando por accidente toco con el bisturi el extremo metalico de un aparato dando lugar a que se produjeran contracciones en las patas de la rana.1 Por otra parte a Antoine Laurent de Lavoisier (1743-1794), se le considera “padre de la quimica”. Estudio el fenomeno de la combustion por combination del oxigeno con otros elementos, dedico parte de sus experimentos a comprobar como era utilizado dicho gas por los animales y los humanos, concluyendo que “los animales que respiran son verdaderos cuerpos combustibles que arden y se 10 consumen”, sus aportaciones se encuentran en su conocido trabajo Memoires sur le chaleur que fue publicado en 1784.1 1.5 S ig lo XIX . En este siglo hay notables avances en las areas de Inmunologia, Bacteriologia, es asi como despues de muchas observaciones cllnicas el medico ingles Edwar Jenner (1748-1822) realizo su primer experimento en el ambito de la vacunacion al inocular en una herida que realizo en el brazo a un nino de 8 anos de edad llamado James Phipp, secrecion obtenida de las pustulas de la mano de una ordenadora que se habia infectado con el virus de la vaccinia durante el ordeno. Posteriormente a las 6 semanas, inoculo nuevamente al nino, esta vez con pus de una persona enferma de viruela. El resultado fue que el nino no desarrollo la enfermedad, ante tal hecho quedo demostrada la accion profilactica de la inoculacion contra la viruela humana.7 Mientras que el mayor merito de Claude Bernard (1813-1878) fue sistematizar, sintetizar y exponer con claridad filosofica, el sentido de su propia experiencia cientifica y hacerla modelo de conducta en el laboratorio. Su primer gran descubrimiento fue encontrar que el pancreas es capaz de degradar las grasas neutras de la dieta, fue un gran innovador en el estudio de sustancias toxicas, estudio la accion del curare, veneno usado por los cazadores de Sudamerica, que inmoviliza a los animales que mueren sin reaccionar. Al ligar la arteria femoral de una rana, a la que luego inyecto curare, observo que todos los musculos de la rana quedaban paralizados, excepto los de la pata cuya irrigacion habia interrumpido, deduciendo asi que el veneno transportado por la sangre actuaba especificamente en la union muscular. Entre otro de sus descubrimientos fue el de los nervios vasomotores, al observar las orejas rosadas de los conejos, secciono el simpatico cervical con el fin de conocer su participacion en la regulacion de la temperatura tisular, encontrando que la temperatura se habia elevado en toda la region inervada por 11 el nervio seccionado, infiriendo entonces que el nervio simpatico causaba cambios qulmicos y no vasoconstriccion.8 Por otra parte quien es reconocido como el principal exponente del Aprendizaje por condicionamiento Clasico es el medico Ivan Petrovich Pavlov (1849-1936), quien realizo numerosas investigaciones y experimentos sobre los reflejos en animates y llego a la conclusion de que existlan dos clases: reflejos innatos o no condicionados y los “adquiridos o condicionados”. Con los estudios de salivacion de los perros, probo que la secrecion gastrica estaba controlada por mecanismos nerviosos, como sucedla al colocar comida en la boca de un perro, observo que se producia saliva y secrecion gastrica si se permitia que el animal viera u oliera la comida. 9 La gran figura de la Inmunologia, el quimico trances Louis Pasteur (18221895), de entre tantos estudios, destacan sus grandes experimentos con la vacuna del carbunco en ovejas, del colera en las gallinas y la vacuna de la rabia en perros.4 Igualmente al medico aleman Robert Koch (1843-1910) se le conoce como el fundador de la Bacteriologla, para sus estudios el animal de experimentacion que mas utilizo fue el cobayo. En 1905 Recibio el Premio Nobel de Medicina por el descubrimiento del bacilo Mycobacterium tuberculosis, descubrimiento que posteriormente llevarian a Albert Calmette y Camille Guerin al desarrollo de la vacuna BCG y a su administracion en humanos.10 1.6 S ig io XX y a ctu a lid a d El uso de los animates como biomodelos durante el sigio XX ha contribuido a importantes avances del conocimiento cientifico y medico, permitiendo asi la expansion enorme de las ciencias biomedicas experimentales. Es asi como Santiago Ramon y Cajal (1852-1934) neurocientlfico que sento las bases de la neuroanatomla moderna, describio detalladamente la organizacion de las celulas del sistema nervioso central y periferico de muchas especies animales.11 12 Ramon y Cajal investigo 50 especies de animales, entre estas estudio a ratas, ratones, conejos, perros y algunas especies de invertebrados1. Gracias a sus tecnicas histologicas, a sus grandes aportaciones sobre el conocimiento del sistema nervioso en 1906 recibe el Premio Nobel de fisiologia y medicina junto a Camillo Golgi.12 Por su parte Camillo Golgi (1843-1926) medico italiano revela la morfologia neuronal completa y lo fundamenta mediante su tecnica de impregnacion neuronal argentica o tecnica de Golgi, este metodo histologico revoluciono la neurociencia a finales del siglo XIX y aun sigue vigente a pesar de los avances tecnologicos modernos. En 1906 recibe el Premio Nobel junto a Santiago Ramon y Cajal.13 Asi mismo el cientifico trances Alexis Carrel (1873-1944), logro suturar vasos sanguineos cabo con cabo sin dejar tejido libre en su interior que pudiera actuar en la formacion de coagulos, gracias a esos avances obtuvo en 1912 el Premio Nobel de Medicina. Carrel realizo numerosos trasplantes en perros y gatos. Es importante aclarar que los terminos de Carrel aun se utilizan algunas veces, pero los nombres preferidos son alotrasplantes o aloinjertos, para trasplantes entre miembros de la misma especie y xenotrasplante o xeninjerto, para aquellos que se realizan entre distintas especies.14 Quien tambien en 1945 recibe el Premio Nobel de Medicina es Alexander Fleming (1881-1955) por su contribucion a la farmacologia, utilizo animales como modelo de experimentacion, basicamente uso ratones para probar su antibiotico: la penicilina,1 pero si alerto de “la importancia de los tratamientos con dosis y duracion adecuada para impedir el desarrollo de bacterias mutantes”19 Henry H. Dale (1875-1968) fisiologo y zoologo ingles compartio con Otto Loewi (1873-1961) quien fue un farmacologo aleman el Premio Nobel de Medicina en 1936 por sus contribuciones al “conocimiento de la transmision quimica de los 13 impulsos nerviosos”4, para sus pruebas experimentales utilizaron corazones de rana.1 En la investigacion clinica un descubrimiento que se celebra es el uso terapeutico de la insulina por el gran aporte que significa para la Diabetes tipo 1 y fueron Frederick G. Banting (1891-1941) y su ayudante Charles H. Best (18991978) quienes despues de tantas pruebas experimentales observaron que perros diabeticos a los que previamente les habian extirpado el pancreas, habia una disminucion de la glucemia y glucosuria al inyectarles un extracto pancreatico al que llamaron “isletina”17, lo que ahora se conoce como insulina, estos animales seguian con vida mientras eran inyectados con el extracto pancreatico. Descubrimiento por el que Banting recibio el Premio Nobel de Fisiologia y Medicina en 1923.18 A su vez, el medico y bioquimico argentino Luis Federico Leloir (1909-1987) describio la galactosemia (enfermedad hereditaria) y las funciones de las glicoproteinas16, en 1970 se hizo acreedor al Premio Nobel de Quimica por el “descubrimiento de nucleotidos sacaridos y su papel en la biosintesis de carbohidratos”, “Leloir esclarecio la biosintesis del glucogeno, la principal reserva de azucar en muchos animales y microorganismos”.20 En 1981 Gordon y Ruddle obtienen los primeros ratones transgenicos realizando por primera vez la tecnica de microinyeccion de DNA exogeno en el pronucleo de cigotos de raton. Posteriormente en 1982 Palmiter y col. obtienen ratones transgenicos gigantes inyectando un gen modificado de la hormona del crecimiento de la rata en un cigoto fertilizado de rata. As! seguirian los trabajos cientificos relacionados con animales transgenicos, para el ano 1985 Hammer y colaboradores obtienen animales de granja transgenicos, obteniendo conejos, ovejas y cerdos, con el transgen de la hormona del crecimiento. Anos despues en 1989 Capechi, Smithies y Evans crean el primer raton knockout o bloqueado, es decir, un raton al cual durante la fase embrionaria se le 14 ha modificado el funcionamierito de uno de sus genes. Los 3 autores reciben el Premio Nobel de Medicina en 2007 por su contribucion a la ciencia. En 1997 Schnieke y col., obtienen ovejas clonicas transgenicas por transferencia nuclear a partir de celulas fetales diferenciadas, tan solo un ano despues en 1998 Cibelli y col., obtienen vacas clonicas transgenicas por transferencia nuclear a partir de celulas fetales diferenciadas.21 En el ano 2002 Simon Gregory y colaboradores secuencian el genoma completo del raton C57BL/6J esto permitio establecer que el humano y el raton comparten entre un 80 y un 90% de sus genes.22 Actualmente la utilizacion de animales de experimentacion sigue siendo una herramienta indispensable para el avance de las ciencias biomedicas. Es importante aclarar que se han desarrollado tecnicas alternativas que sustituyen el uso de los animales parcialmente, pero hasta ahora es imposible simular un modelo tan complejo como lo es un organismo vivo. Tambien los avances en biomedicina y otras disciplinas han generado . normas bioeticas que obligan a los investigadores a utilizar tecnicas que reducen el numero de animales, los reemplazan si es posible y refinan los procedimientos con el proposito, cada vez mas importante y necesario de crear una conciencia de respeto y proteccion a las otras especies. 15 Capitulo 2 Principales animales usados en investigation y docencia actualmente Para realizar actividades de ensenanza e investigation, se necesitan animales de experimentation, los cuales requieren de instalaciones apropiadas, denominadas mas comunmente bioterios. Actualmente son muchas las especies y millones de animales experimentales empleadas en diversas investigaciones biomedicas y para la ensenanza. 2.1 B io te rio No se pueden negar las inmensas contribuciones que diversas investigaciones basadas en el empleo que los biomodelos han dado al desarrollo de las Ciencias Biologicas, gracias a estos avances se han podido prevenir y curar varias enfermedades tanto en humanos como en animales. Asi es como se justifica el empleo de animales de laboratorio en las diferentes areas de estudio en la Unidad de Ciencias de la Salud. Para criar y mantener a dichos animales en optimas condiciones es necesario cubrir las necesidades basicas de sobrevivencia, para que puedan desarrollarse y crecer apropiadamente, para lo cual requieren un espacio adecuado, buena alimentacion asi como condiciones ambientales favorables, de tal forma que estos factores garanticen un crecimiento saludable de la especie animal y las procesos de experimentacion sean exitosos. Estas condiciones se logran actualmente en espacios denominados bioterios. Segun la Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tecnicas para la produccion, cuidado y uso de los animales de laboratorio, revisada en 2001, un bioterio es un “Conjunto de instalaciones, muebles e inmuebles destinados al alojamiento y manutencion de animales de laboratorio durante una o varias de las fases de su ciclo vital; esto es, nacimiento, desarrollo, reproduccion y muerte”. 16 El manejo de los animales para fines de docencia e investigation esta reglamentado en Mexico por la misma norma en la que se manifiesta: “Todos los bioterios independientemente de su tipo tienen que designar como personas encargadas del cumplimiento de la Norma a un Medico Veterinario responsable, que estara adscrito tiempo completo o tiempo parcial dependiendo del tamano y las necesidades del bioterio”. El bioterio tiene entre sus funciones: 1. Proporcionar un sistema de manutencion y cuidado que permite a los animales de laboratorio crecer, madurar, mantener buena salud y reproducirse. 2. Proveer animales de laboratorio para cubrir de manera oportuna las necesidades de docencia e investigacion. 3. Asesorar a los usuarios en el cuidado, manejo y uso de los animales. Por lo cual es importante que el bioterio cuente con instalaciones adecuadas para albergar a los animales de experimentacion, estas seran disenadas de acuerdo a la ©specie de investigacion. 2.2 In s ta la cio n e s y co n d ic io n e s generates para un b io te rio : Las instalaciones para un bioterio deben reunir ciertas caracteristicas para asegurar la eficacia de los resultados experimentales y para mantener el cuidado adecuado de los animales. Un bioterio debe contar con areas para animales que aseguren la separacion fisica de especies o su aislamiento, asi mismo con cuartos para procedimientos diversos: para la manipulacion tratamientos, necropsias, preparacion quirurgica u otros. experimental, sus Tambien debe contar con area de cirugia, la cual debe estar destinada y equipada de acuerdo con el desarrollo de procedimientos experimentales, analiticos o de ensenanza; area de recuperacion, destinada a atender aquellos sujetos sometidos a procedimientos invasivos. A su vez debera tener un almacen que permita guardar accesorios de 17 uso de rutina, es importante que cuente con un area de lavado y el equipo necesario para realizar las actividades de limpieza y desinfeccion del bioterio. Es importante un area de administracion adjunta, lugar donde se lleve a cabo el control del trabajo que se realiza diariamente23 Los factores ambientales que ejercen un efecto sobre los animates tanto en su bienestar como en su respuesta fisiologica deben ser controlados, ejemplo de ellos es la temperatura, la humedad, la iluminacion y el ruido. Los anteriores factores asi como las particulas gaseosas y contaminantes en las jaulas y areas de los animates requieren de monitoreo diario.24 2.3 E species mas em pleadas en la in v e s tig a c io n La Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, define al animal de laboratorio como “Animal usado en la investigacion cientifica, desarrollo tecnologico e innovacion, pruebas de laboratorio y ensenanza”. Tates modelos experimentales son empleados principalmente en biologia (biomedicina), veterinaria y agropecuaria para las siguientes areas de conocimiento: Estudios biologicos • Desarrollo y control de calidad de productos y aplicaciones para medicina humana y veterinaria. Fabrication de farmacos o productos alimenticios. • Diagnostico y prevencion de enfermedades, prevencion de anomalias o sus efectos, diagnostico y tratamiento de estas. • Estudios de valoracion, detection normalization o modification de las condiciones fisiologicas en el hombre. • Protection del hombre, a los animates y al ambiente de sustancias toxicologicamente activas (evaluaciones de seguridad en general). • Education, adiestramiento y formation en Ciencias Biomedicas. • Otras aplicaciones como: estudios ecologicos o investigacion medico-legal y forense.25 18 k ■ Los siguientes son algunos ejemplos, tanto de los modelos animales utilizados como de las lineas de investigacion en las que se emplean: El raton (Mus musculus) se emplea en investigacion sobre el cancer, nuevos farmacos, en la toxicidad de nuevos productos, preparacion de vacunas y produccion de monoclonales, la rata (Rattus norvegicus) se usa para estudios del sistema nervioso, toxicologicos, para el metabolismo de lipidos, diabetes, artritis y observacion de la conducta animal. El hamster sirio (Mesocricetos auratus) ha servido como modelo en estudios de circulation sanguinea, hipotermia, procesos neoplasicos y caries dental. En cuanto al cobayo (Cavia porcellus) se utiliza principalmente en produccion y control de sueros, vacunas; estudios de enfermedades infecciosas por su alta susceptibilidad, por ejemplo a tuberculosis, difteria, leptospirosis y brucelosis; estudios hormonales en el proceso de gestation y en estudios de otologia.25 Por su parte el jerbo (Meriones ungiculatus) se emplea como modelo de estudio para la epilepsia, en estudios videos, en investigacion sobre cancerigenos y en ensayos gerontologicos.26 El conejo (Oryctolagus cunicullus)27 es util como modelo para experimentos relacionados con oftalmologia, reproduction, aterosclerosis, microbiologia, ortopedia, produccion de anticuerpos y diversos estudios de toxicologia preclinica. El perro (Cam's familiaris) se destina para estudios cardiovasculares referentes al gasto y monitorizacion cardiaca; arteriosclerosis; trasplantes, desarrollo de tecnicas quirurgicas, en estudios digestivos relacionados con el analisis de las secreciones de jugo gastrico y de la secretion pancreatica, obesidad, regeneration hepatica y en estudios dentales. El gato (Felis catus) se emplea en el desarrollo de farmacos y estudios de drogas que actuan en el sistema nervioso central, en investigacion sobre patologia cardiovascular; en estudios motrices por el gran desarrollo de sus reflejos, entre otros.28 19 Tambien se emplean grandes marmferos: el cerdo (Sus scrofa domesticus) es empleado para estudios cardiovasculares, como arteriosclerosis, infartos o anomalias congenitas y electrocardiologia; en ensayos hematologicos, en estudios de coagulacion, tambien en estudios de denticion, se usa en aprendizaje de tecnicas quirurgicas en tecnicas asociadas con cirugia endoscopica y laparoscopia y en el desarrollo de la tecnica de xenotrasplantes. La oveja (Ovis aries) se emplea para estudios renales, musculares e investigaciones perinatales y de desarrollo fetal.25 La cabra (Capra hircus) se utiliza para investigaciones de circulacion cerebral y como donante de sangre para medios de cultivo microbiologicos.3 A los monos se les emplea para investigaciones de la enfermedad del Parkinson y SIDA. Las aves tambien son empleadas en diversos ensayos biomedicos, por ejemplo la codorniz (Coturnix coturnix) se utiliza en embriologia, farmacologia y toxicologia. Las palomas (Columba livia) y las tortolas (Streptopelia risoria) se destinan a estudios de fisiologia, aterosclerosis y toxicologia. De la gallina (Gallus gallus) se utilizan los huevos frescos para la preparacion de medios de cultivo, los huevos embrionados se emplean para la fabricacion de vacunas; los polluelos se utilizan en test biologicos y los adultos en pruebas de diagnostico, ensayos de vacunas, en diferentes investigaciones sobre nutricion, inmunologia y toxicologia.26 Algunas especies de peces son empleadas como biomodelos, por ejemplo con el pez guppy (Poecilia reticulata), el pez cebra (Brachydanio rerio) y el pez medaka (Oryzias latipes) se hacen estudios comparativos en embriologia, neurobiologia, endocrinologia, genetica y recientemente en biologia molecular y estudios de toxicologia acuaria. Algunos anfibios utilizados en experimentation pertenecen a la clase anura, la Rana spp. se emplea como bioindicador en estudios de toxicidad ambiental, embriogenesis y organogenesis y en el estudio de ensayos de nuevos farmacos. 20 Algunos insectos como la mosca (Drosophila melanogaster) se emplean en estudios geneticos, bioquimicos y fisiologicos.25 Tambien son empleados aunque de manera esporadica algunos de los siguientes animales: algunos marmferos pequenos como la marmota (Marmota monax), el armadillo (Dasypus novemcintus mexicanus) y la chinchilla (Chinchilla laninger), asi como algunos quiropteros: como el murcielago (Desmodus rotundus, Diaemuys youngi), algunas aves pequenas como el canario (Serinus canaria), asi tambien se han utilizado reptiles de las ordenes de Cocodrila y Rhynochocephalia, y algunas especies acuaticas, como salamandras y tritones, algunos crustaceos: como el camaron y acocil.22 Considerando todas las especies antes mencionadas, cabe senalar que en cuanto a numero los animales mas empleados son los roedores, principalmente el raton. 2.4 Estadisticas Datos estadisticos recientes indican que a nivel mundial se utilizan aproximadamente entre 50 a 100 millones de animales por ano para investigacion cientifica y ensenanza. Un estudio publicado en 2008 con datos recopilados en 2005 arrojo los siguientes datos estadisticos (Tabla 1) para animales de laboratorio en los principales paises que realizan investigacion cientifica con respecto al numero de publicaciones cientificas de cada pais.29 21 Tabla 1 Cifras de animales de experimentacidn reportados para el ano 2005 Pais Animales/ano Numero de revistas cientificas Estados Unidos 17,317,147 54, 453 Japon 11, 154,961 13,416 Australia 2,389,813 3,343 Francia 2,325,398 5592 Canada 2,316,281 6071 Inglaterra 1,874,207 8,822 Alemania 1,822,424 8,199 Brasil 1,169,517 2,983 Italia 896,966 4,295 Espana 595,597 3,475 Suiza 550,457 1,950 ' Mexico 341,870 995 Argentina 296,789 877 Rusia 220, 252 672 Modificado de Taylor et at. (2008). El sexto Informe publicado en 2010 sobre las estadlsticas relativas al numero de animales utilizados para experimentacion y otros fines cientificos en los Estados miembros de la Union Europea revelan que los roedores y los conejos representan mas del 80% del total de animales utilizados en investigation. Los ratones fueron empleados en un 59% y las ratas 17%, mientras que el grupo de animales de sangre fria ocuparon casi el 10% y las aves el 6%.30 En Mexico se reportan la utilization de las mismas especies animales para las investigaciones, representando el grupo de los roedores el mayor porcentaje.22 22 2.5 Especies que m anejan los alum nos de la Unidad de C iencias de la Salud En la Unidad de Ciencias de la Salud se cuenta con roedores y lagomorfos para cubrir la demanda en investigacion y ensenanza (Tabla 2), los roedores son el raton y la rata y los lagomorfos el conejo. En los siguientes parrafos se hace una breve descripcion de estas especies: El raton es un animal de talla pequena, con un peso que oscila entre 20 40g en la edad adulta, de tiempo generacional mantenimiento de 6 semanas, es docil y su facil y economico, ademas de que tiene un gran rendimiento reproductive al producir entre 6-12 crias por camada, con un periodo de gestacion de entre 19 -21dias. Las cepas que se mantienen en el bioterio de la UCS son: BALB/cy CD1. En cuantp a la rata, su peso oscila entre 250-500g en la edad adulta, de tiempo generacional de 10-12 semanas, es docil y su mantenimiento facil y economico, posee un gran rendimiento reproductive al producir 7-14 crias por camada, con un periodo de gestacion de 20-22 dias. En el bioterio se mantiene la cepa Wistar.28 Por lo que respecta al conejo, se cuenta con la cepa Nueva Zelanda; este animal es de tamano medio, pesa de 2-5 kg en su edad adulta, tambien posee un gran rendimiento reproductive al generar entre 6 - 1 0 crias por camada, su periodo de gestacion es de 30-33 dias.28 23 Tabla 2. Animales empleados segun la Experiencia Educativa en la Unidad de Ciencias de la Salud. Facultad 7 Experiencias Educativas Animales empleados. Laboratorio Clinico Veterinario Ratas y conejos Toxicologia Ratas y ratones Ciencias Morfologicas y Fisiologicas Ratas Inmunologia Conejos Education Quirurgica Conejos Farmacologia Conejos ratas Fisiologia Conejos y ratas Odontologia Embriologia Ratas Laboratorio de Neurotoxicologia Diversas lineas de investigacion Ratas y ratones Centro Diversas lineas de investigacion y Ratas y ratones Bioanalisis Medicina de cerebrales investigaciones cursos Registro interno de solicitudes de animales de laboratorio realizadas por los alumnos, docentes e investigadores archivados en el bioterio de la Unidad de Ciencias de la Salud. Ademas, el bioterio de la Unidad de Ciencias de la Salud provee de animales de experimentation a diferentes investigadores que desarrollan sus lineas de investigation en las instituciones que para este fin tiene la Universidad, tales como: el laboratorio de Neurotoxicologia, el Centro de Investigaciones Cerebrates, el Instituto de Neuroetologia entre otros.31 24 Capitulo 3 Zoonosis Segun la Organization Mundial de la Salud, el termino describe como zoonosis se “enfermedades de los animales vertebrados que se transmiten naturalmente al hombre”. De los patogenos humanos conocidos en el mundo, la mayoria son zoonoticos, por lo cual se relacionan directamente con las actividades de la Salud Publica Veterinaria.33 Otros terminos relacionados directa o indirectamente con las zoonosis son el parasitismo, la infestation e infection, el primero ha sido definido como una forma de simbiosis, termino que se refiere a la asociacion biologica entre dos seres vivos para protegerse u obtener ventajas uno de otro; en este caso el hospedador es danado de manera metabolica y/o ecologica; infestation se refiere a la relation hospedador - parasito, en la que el parasito se alberga en la superficie externa del hospedador, por lo tanto es un ectoparasite. Mientras que la infection es la invasion, desarrollo y multiplication de un agente patogeno en las celulas o tejidos del hospedador susceptible.34 Clasificacion de las zoonosis: Existen varias clasificaciones de las zoonosis, la mas aceptada es la que se hace segun criterios epidemiologicos sobre todo basados en el ciclo evolutivo del agente causal: Ortozoonosis o zoonosis directa: la transmision tiene lugar a partir del animal infectado por contacto directo, el agente causal no sufre modificaciones en todo el proceso, ejemplo de ello es la rabia. Ciclozoonosis: el agente patogeno necesita mas de una especie de vertebrado para desarrollar su ciclo evolutivo, la hidatidosis por mencionar alguna. Metazoonosis: los agentes causales exigen para desarrollarse la intervention al menos de un invertebrado. Este es el caso de la rikettsiosis. Saprozoonosis: son procesos que exigen, ademas del animal reservorio, un sustrato inanimado (tierra, agua) donde el agente causal completa alguna fase de su desarrollo, por ejemplo los parasites del genero Fasciola. 4 25 Otra forma de clasificacion de las zoonosis es en genericas y especificas, las primeras son aquellas que pueden transmitirse por varias especies animales utilizadas en experimentacion, mientras que las especificas son aquellas que se transmiten a partir de una especie en particular. En este trabajo se tomo esta clasificacion. 3.1 Z o o n o sis G enericas Principals Zoonosis de Animales Experimentales al Hombre (Anexo 1). Las zoonosis que por su relacion con el hombre preocupan a la Salud Publica Veterinaria son: 3.1.1 T u b e rc u lo s is Agente causal. Causada por especies del genero Mycobacterium, las que afectan al hombre son M. tuberculosis (el principal causante de tuberculosis humana) y M. bovis. Se han aislado en animales de laboratorio, incluidos los primates no humanos, perros y cerdos. M. microti se ha aislado en roedores. La tuberculosis es una enfermedad de declaracion obligatoria.35 Aspectos epidemiologicos. La tuberculosis tiene una distribution mundial, aunque la enfermedad es mas frecuente en el sudeste Asiatico, Africa subsahariana y el este de Europa; un tercio de la poblacion mundial esta infectada por este microorganismo. Algunos estudios indican que hay 9 millones de casos nuevos cada ano y 2 millones de muertes anuales por esta enfermedad. La prevalencia de la tuberculosis humana de origen animal ha disminuido mucho en los paises donde se impuso la pasteurization obligatoria de la leche y donde se realizaron exitosas campanas de control y eradication de la infection bovina.36 Modo de transmision. La tuberculosis se transmite por via respiratoria al inhalar pequenas gotitas que contienen la bacteria M. tuberculosis 37 26 Manifestaciones clinicas. Afecta al pulmon en la mayoria de los casos, sus sintomas iniciales son un cuadro catarral con tos productiva, frecuentemente se atribuye a un mal resfriado o bronquitis persistente, neumoma, el ser humano presenta fiebre alta. Tambien puede aparecer esputo hemoptoico y dolor pleuritico. En ocasiones, afecta a multiples organos con o sin infeccion pulmonar. La tuberculosis multiorganica, antiguamente una enfermedad en ninos y jovenes predomina actualmente entre los mas ancianos e individuos inmunocomprometidos, principalmente los infectados por VIH.38 Prevencion. Es importante aplicar la vacuna BCG desde el momento del nacimiento, asi mismo los enfermos deben cubrirse la nariz y la boca al toser o estornudar. Posterior a ello el papel usado se debe depositar en una bolsa la cual debe quemarse despues de usarla. El paciente debe lavarse las manos frecuentemente.39 3.1.2 B ru c e lo sis Agente causal. Es una zoonosis ocasionada por bacterias del genero Brucella (B), cuyas especies patogenas para los animales y el hombre son ocho principalmente: B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. neotomae, B. ovis, B. canis, B. pinnipediae y B. cetaceae, las tres primeras especies denominadas "brucelas clasicas", las cuales afectan al humano, siendo B. melitensis la mas comun, con mayor virulencia y se asocia con mayor frecuencia a la fase aguda de la enfermedad. De entre los animales son afectados principalmente cabras, vacas, cerdos, perros, roedores, ovinos y algunos mamiferos marinos. Esta enfermedad, conocida tambien como fiebre Melitococica, fiebre de Malta, fiebre ondulante, o fiebre del Mediterraneo, es de declaration obligatoria.40 Aspectos epidemiologicos. La incidencia y prevalencia de la brucelosis tienen importantes variaciones geograficas. Las zonas de mayor prevalencia corresponden a la region del Mediterraneo, Asia occidental, algunas partes de 27 Africa y America (Estados Unidos, Mexico, Brasil, Peru, Colombia y Argentina). B. melitensis es la especie mas difundida seguida de B. abortus y B. su/s.41 Modo de transmision. Los casos de infeccion ocurren por la ingestion de alimentos lacteos no pasteurizados y a la exposition ocupacional a B. abortus del ganado bovino, aquellas personas cuyas actividades representan un riesgo para contraer la infeccion, actividades que permiten el contacto directo con la placenta, secreciones u otros tejidos contaminados, tal es el caso de veterinarios, granjeros y trabajadores de mataderos42 Manifestaciones clinicas. La infeccion inicia con fiebre alta, malestar general, cefalea, sudoracion y artralgias, estrenimiento, dolor lumbar y perdida de peso, el individuo puede llegar a perder 10 kg en 2 meses. La infeccion en el ser humano presenta tambien hepatomegalia que puede indicar hepatitis granulomatosa o un absceso y puede haber esplenomegalia.42 Los sintomas de la brucelosis pueden manifestarse en diversos sistemas de organos, como el tracto gastrointestinal y los sistemas esqueletico, neurologico, cardiovascular y pulmonar.43 Prevention. Promover entre las personas expuestas, como ganaderos, medicos veterinarios, trabajadores de rastros, etc., el uso de ropa y equipo que disminuya el riesgo que existe por el contacto con los animales, subproductos y desechos. Llevar a cabo practicas de higiene y seguridad en sitios de trabajo, como son unidades de production pecuaria, rastros, mercadqs y laboratories.40 3.1.3 Salmonelosis Agente causal. Pertenece al genero amplio de bacilos gramnegativos de la familia de las enterobacterias. Actualmente todas las cepas de Salmonella se agrupan en una unica especie: S. enterica, que esta formada aproximadamente por 2,500 serotipos distintos, entre los cuales se encuentran typhimurium y typhi, que tienen importancia clinica. 41 El serotipo typhi es un patogeno exclusivamente 28 humano mientras que otras cepas se asocian con primates no humanos, ratas, ratones, hamsters, cobayos, conejos, gatos y perros.35 Aspectos epidemiologicos Las enfermedades gastrointestinales son uno de los principales problemas de salud publica en Mexico. Mundialmente, las infecciones gastrointestinales son una de las causas mas importantes de morbimortalidad entre los lactantes y ninos. La Organizacion Mundial de la Salud (OMS) estima que cada ano tienen lugar 1,500 millones episodios en palses en vias de desarrollo 44 Modo de transmision. Se transmiten por via fecal/oral casi siempre tras la ingestion de alimentos o aguas contaminadas, y en algunos casos por el estrecho contacto con mascotas y animates de experimentacion.45 Manifestaciones clinicas La forma cllnica de la infeccion se manifiesta como un episodio de enterocolitis autolimitante, con slntomas que desaparecen en cinco dlas. El periodo de incubacion es generalmente de 8 a 72 horas, los sintomas comunes son diarrea acuosa y dolor abdominal, la diarrea puede ser severa y el paciente puede requerir hospitalizacion. La susceptibilidad es mayor en ninos, ancianos e inmunodeficientes.44 Prevencion: Las medidas sanitarias son imprescindibles en la elaboration de alimentos, as! como el suministro de agua potable.43 Se debe dar tratamiento a aquellos animates infectados despues de tipificar el agente causal y efectuar una desinfeccion exhaustiva de las instalaciones donde habiten, segun estudios recientes las cepas del agente causal son multirresistentes.35 3.1 .4 S a rn a o e s c a b io s is Agente causal. Infestation cutanea causada por un acaro, Sarcoptes scabiei variedad hominis, altamente pruriginosa y contagiosa, de distribution mundial, endemica en palses en vias de desarrollo, que afecta a todos los grupos 29 socioeconomicos y a todas las edades y se transmite generalmente por contacto cutaneo directo45 con los animates infectados, como perros, gatos, conejos, hamsters, ratones entre otros y en ocasiones se transmite por fomites. Otros acaros pueden afectar al hombre son Notoedres cati y Otodectes cynotis que producen lesiones cutaneas y otitis en las personas que manipulan los animales de laboratorio.46 Modo de transmision. La transmision es generalmente de persona a persona, por contacto directo. En el ser humano, el modo de transmision puede ser por contacto sexual. Tambien se ha reportado el contagio por el uso o manejo de ropa contaminada y otros fomites, ademas del contacto directo con los animales.47 Aspectos epidemiologicos La escabiosis es una enfermedad facilmente transmisible y de alta frecuencia especialmente en paises en vias de desarrollo, con una incidencia aproximada de 300 millones por afio a nivel mundial, constituyendo un problema de salud publica, que puede afectar la calidad de vida del paciente. En Mexico y en algunos otros paises esta ectoparasitosis no es de notification obligatoria, por lo que su frecuencia real se desconoce.48 Manifestaciones clinicas. Esta dermatosis en el ser humano se presenta con papulas eritematosas que aparecen en aquellas regiones anatomicas que han estado en contacto con el animal, generalmente brazos, espacios interdigitales de las manos piernas, pecho y abdomen; normalmente el cuadro viene acompanado de un prurito bastante severo que se hace mucho mas patente por la noche. 46 Prevention. Cuando se tiene contacto profesional con animales que pueden estar infestados se deben usar guantes y botas altas de un material que no pueda ser atravesado por los acaros.36 30 3.1.5 Rabia La Rabia y el Tetanos son enfermedades zoonoticas que representan un riesgo para la salud en personal que debido a sus actividades laborales conviven con los animales transmisores, situaciones que pueden vivir los veterinarios y algunos bioterios en los que empleen caballos, ovejas o perros para la investigation cientifica, a continuation se hace una mention de estas enfermedades de manera somera, se incluyen por su importancia en zoonosis genericas. La rabia es una encefalitis viral aguda, progresiva e incurable. Los agentes causales son los ARN virus de la familia Rhabdoviridae, genero Lyssavirus. Los mamiferos reservorios son organismos de los ordenes Carnivora y Chiroptera, pero a nivel mundial los perros representan el principal riesgo para la salud. La transmision viral ocurre por la mordedura de un animal; si el virus es depositado dentro de la herida, se irriga al sistema nervioso central; pero cuando el virus comienza a multiplicarse, la puerta de salida mas importante son las glandulas salivates.49 Las primeras manifestaciones son la fiebre, que a menudo se acompana de dolor o parestesias, sensation inusual o inexplicada de hormigueo, picor o quemazon, en el lugar de la herida. A medida que el virus se propaga por el sistema nervioso central se produce una inflamacion progresiva del cerebro y la medula espinal que acaba produciendo la muerte. La enfermedad puede adoptar dos formas. En la primera, la rabia furiosa, con signos de hiperactividad, excitation, hidrofobia y, a veces, aerofobia, la muerte se produce a los pocos dias por paro cardiorrespiratorio. La otra forma, la rabia paralitica, representa aproximadamente un 30% de los casos humanos y tiene un curso menos dramatico y generalmente mas prolongado que la forma furiosa. Los musculos se van paralizando gradualmente, empezando por los mas cercanos a la mordedura o aranazo. El paciente va entrando en coma lentamente, produciendose la muerte.50 31 3.1.6 Tetanos El tetanos se define como una vulneroinfeccion producida por proteinas toxicas del microorganismo Clostridium tetani, que afecta principalmente a los equidos, aunque tambien a otros mamlferos como ovejas, cabras, cerdos, perros y gatos y por supuesto al hombre. Los esporos tetanicos (forma de resistencia) se encuentran en el suelo y en las heces de animales y del hombre. La transmision al hombre ocurre siempre a traves de heridas o pequenas abrasiones de la piel a partir de heces o materiales contaminados. La enfermedad en el ser humano se caracteriza por contraccion muscular espasmodica y generalizada (paralisis espastica). Comienza en la musculatura facial y del cuello para extenderse luego por la musculatura de la columna vertebral, del abdomen, y de las articulaciones. El paciente presenta disnea, sudoracion copiosa e hipertermia. El desenlace suele ser fatal por colapso cardiaco e insuficiencia respiratoria. Incluso en el caso de que el paciente supere la fase aguda suelen observarse secuelas y danos neurologicos.51 3.1.7 Himenolepiosis Los agentes etiologicos de importancia medica son los cestodos Hymenolepis nana e Hymenolepis diminuta. Son parasitos de distribucion cosmopolita, comunes en ratas y ratones, roedores que actuan como hospederos definitivos; se ha encontrado esporadicamente en el humano en varios paises del mundo. Especialmente relacionados con personas de habitos higienicos deficientes y sobre todo, con la presencia de roedores dentro y fuera de las casas habitacion. Siendo la via de transmision oral- fecal.52 Un estudio de origen Brasileho publicado en 2011 revela una prevalencia mayor de H. diminuta en ratas de laboratorio que en ratas salvajes. Las ratas Wistar en estudio fueron obtenidas del Instituto Veterinario Indio.53 32 Los sintomas que se presentan basicamente en esta parasitosis son dolor abdominal, diarrea abundante, nauseas, vomitos, anorexia y por consiguiente perdida de peso.54 Esta zoonosis puede prevenirse en bioterios implementando un programa de desparasitacion periodico, ademas del empleo de buenos habitos de higiene y del uso de equipo de proteccion.55 33 Capitulo 4 Zoonosis Especificas Este capitulo trata de las zoonosis particularmente aquellas provenientes especificas mas comunes, de roedores y lagomorfos, que son los animales con los que cuenta el Bioterio de la Unidad de Ciencias de la Salud y con los que los alumnos realizan sus practicas. Las zoonosis presentes con mas frecuencia en roedores y lagomorfos se mencionan a continuacion. 4.1 Roedores 4.1.1 Fiebre por m ordedura de rata Agente causal. Enfermedad bacteriana producida por Streptobacillus moniliformis, bacilo gran negativo, cerca de 50 a 100% de las ratas salvajes y 10 a 100% de las ratas de laboratorio lo portan en la nasofaringe, se encuentra en los dientes y encias de las ratas y es excretado por la orina. Alrededor de 25% de las ratas portan Spirillum minus, hecho predominante en ratas de Asia y Africa, en conjuntivas, secreciones corporales y sangre. Ambos agentes estan asociados a la fiebre por mordedura de rata.56 Aspectos Epidemiologicos: Generalmente este tipo de zoonosis ocurre en personas bajo condiciones de extrema pobreza y en ninos menores de 5 anos de edad, los cuales son mordidos en la noche mientras duermen; en estas circunstancias las mordeduras se ubican por lo general en cara y brazos.56 Actualmente las ratas se han convertido en populares mascotas y animales de estudio, las caracteristicas demograficas de las victimas potenciales se han ampliado para incluir a los trabajadores de tiendas de mascotas y tecnicos de laboratorio.57 34 Via de transmision. El ser humano adquiere la infeccion por mordedura, aranazo o a traves de la ingestion de agua y alimentos contaminados con excretas de roedores.57 Manifestaciones clinicas. Las heridas infectadas por S. moniliformis suelen sanar sin inflamacion, a menudo antes de que aparezcan los primeros sintomas de fiebre por mordedura de rata. La enfermedad generalmente comienza de manera abrupta, con fiebre y escalofrlos. Otros sintomas comunes incluyen mialgia severa y dolor en las articulaciones, dolor de cabeza, nauseas y vomitos. La mayorla de los pacientes tambien tienen una erupcion maculopapular, o presencia de petequias. Esta erupcion se produce con mayor frecuencia en las extremidades, particularmente las manos y los pies, pero a veces puede afectar todo el cuerpo.59 La infeccion en el ser humano por S. minus ocasiona una fiebre recurrente tambien llamada Sodoku, en la que se presenta una erupcion exantematica generalizada y la herida producida por la mordedura aunque cicatriza, muestra una infiltracion edematosa y en ocasiones, se ulcera.4 Prevencion. El personal que maneja los criaderos de ratas y los estudiantes e investigadores debe ser instruido en el manejo apropiado de los roedores, asi como usar el equipo personal de proteccion. En las instalaciones se procurara colocar barreras que eviten la entrada de roedores salvajes.60 4.1.2 Fiebre de Lassa Agente causal. La fiebre de Lassa es una enfermedad hemorragica aguda causada por un virus ARN, del genero de los Arenavirus. Infecta especificamente a roedores de la especie Mastomys netalensis 5 En estos animates es habitual una infeccion cronica asintomatica que provoca una viremia cronica y la diseminacion del virus en su saliva, orina y heces.35 35 Aspectos epidemiologicos. El virus de Lassa es sumamente virulento en humanos; la tasa de mortalidad es cercana al 15%. Este virus es endemico de Africa Central y Occidental, donde la cifra alcanza varios cientos de miles de infecciones.61 Via de transmision. El ser humane puede contraer la infeccion por inhalacion de gotas de los aerosoles, consumo de alimentos contaminados o por el contacto con fomites.35 Manifestaciones clinicas. El cuadro clinico se inicia en forma gradual con fiebre, astenia, malestar general, sintomas gastrointestinales, tos dolor de garganta, dolor abdominal, diarrea, nausea y vomito. Posteriormente el paciente presenta hemorragia conjuntival, edema facial, derrame pericardico, hipotension, en algunos casos se llega a presentar encefalitis.62 Prevencion. Una medida preventiva adecuada consiste en el uso de barreras protectoras entre la persona receptora y la fuente de virus como guantes, mascarillas y ropa protectora por los usuarios de animates, asi como el evitar la entrada de roedores silvestres al bioterio.51 4.1.3 L e p to s p iro s is Agente causal. Causada por espiroquetas del genero Leptospira, siendo la especie Leptospira interrogans patogena para el ser humano, los roedores son los reservorios de esta zoonosis.35 Aspectos epidemiologicos. La leptospirosis ocurre en todo el mundo. La leptospirosis ocupacional puede ocurrir entre las personas expuestas a los animates, los productos de los animates o suelo o agua contaminados, como parte de su trabajo.35 En Mexico es una enfermedad de notificacion obligatoria.63 36 Via de transmision. La infeccion se produce generalmente por ingestion de agua y alimentos contaminados con orina de animales infectados, los microorganismos pueden penetrar la conjuntiva o la piel a traves de pequenas roturas dela epidermis, mediante la manipulacion de tejidos de animales infectados.64 Manifestaciones clinicas. Se presenta en dos formas, la anicterica y la icterica, en la primera la fase inicial es semejante a un sindrome pseudogripal, con fiebre y mialgias, sintomas que pueden ceder despues de una semana, pero el paciente puede pasar a la segunda fase la cual comienza con inicio subito de cefalea, mialgias, escalofrios, dolor abdominal y enrojecimiento de los ojos. La enfermedad grave puede evolucionar a colapso circulatorio, trombocitopenia, hemorragia, asi como disfuncion hepatica y renal. En la forma icterica o sindrome de Weil, es la presentacion grave y con mayor mortalidad de la leptospirosis en humanos. El sindrome afecta distintos organos y sistemas incluyendo dafio renal, hepatico y vascular.65 Prevencion. Orientar a trabajadores en situacion de riesgo a utilizar equipos de protection individual, tales como mascaras, guantes, botas y en ausencia de estos, bolsas de polietileno cubriendo las manos y los pies del trabajador; orientar sobre el consumo de agua filtrada, hervida o clorada, manteniendo limpios los estanques de agua; limpiar y desinfectar el medioambiente. Asi como evitar el ingreso de roedores a almacenes de alimentos.66 4.1.4 In fe ccio n p o r H antavirus Agente causal: Los hantavirus son un grupo de patogenos emergentes (familia Bunyaviridae\ genero Hantavirus) identificados como agentes etiologicos de la Fiebre Hemorragica con Sindrome Renal (FHSR) en Europa y Asia y el Sindrome Cardiopulmonar por Hantavirus (SCPH) en las Americas. La FHSR esta 37 relacionada con roedores de las subfamilias Murinae y An/icolinae, el SCPH con roedores de las subfamilias Sigmodontinae y Arvicolinae67 Aspectos epidemiologicos. Mexico tiene una gran diversidad de roedores que pueden ser reservorios potenciales de los hantavirus, ya que se ubica en una region geografica comprendida entre Sudamerica. Norteamerica y America Central y De las mas de 120 especies conocidas de roedores en Mexico, alrededor de 80 pertenecen a cinco generos (Peromyscus, Reithrodontomys, Oligoryzomys, Oryzomys y Sigmodon) que son reservorios para los hantavirus. A pesar de la ubicacion geografica del pals, la abundancia de roedores y poblacion humana susceptible a la infeccion por hantavirus, no hay mucha informacion o estudios sistematicos sobre la busqueda de infeccion en roedores o casos de Slndrome Pulmonar por Hantavirus.68 Via de transmision. El hantavirus se transmite al hombre a traves de la manipulacion y contacto directo de roedores infectados o tejidOs y sus secreciones orina, heces y saliva.68 Manifestaciones clinicas. Ambas enfermedades por hantavirus, Fiebre Hemorragica con Slndrome Renal (FHSR) y el Slndrome Cardiopulmonar por Hantavirus (SCPH), son infecciones febriles agudas. Los primeros slntomas son muy similares e incluyen aparicion abrupta de fiebre alta, malestar general, mialgias, dolor de espalda y abdominal y otros slntomas parecidos a la gripe. La primera se caracteriza principalmente por el fracaso renal y las hemorragias, que van desde pequenas petequias a hemorragia interna grave y el slndrome de la coagulacion intravascular diseminada. La neumonla y la disfuncion cardiovascular son caracterlsticasdelSCPH.69 Prevencion. En toda circunstancia se deben mantener los alimentos almacenados en lugares o envases a prueba de roedores. Las personas que deban ingresar a lugares cerrados potencialmente infestados por roedores, deberan hacerlo utilizando todos los elementos de proteccion 38 personal, incluida la protection respiratoria con mascaras o equipos con presion positiva, ambos provistas de filtros de alta eficiencia (HEPA).70 La Norma Oficial Mexicana-062-ZOO-1999, Especificaciones tecnicas para la production, cuidado y uso de los animates de laboratorio menciona mas zoonosis relacionadas con roedores, aqui se mencionan de manera somera dado que se presentan de manera esporadica. 4.1.5 Peste o Plaga La plaga o peste es una enfermedad infectocontagiosa, causada por la bacteria Yersinia pestis y transmitida por la pulga Xenopsylla cheopis que afecta tanto a animales como a humanos. Su reservorio natural en los vertebrados son los roedores silvestres. Los conejos y las liebres, los carnivoros silvestres y los gatos domesticos tambien pueden ser fuente de infection para los seres humanos. La manera mas comun en que se transmite la peste de un roedor a otro o a los seres humanos medies ante la picadura de pulgas infectadas. En el ser humano la peste puede aparecer en tres formas diferentes: peste bubonica, peste neumonica o pulmonar y peste septicemica, siendo la peste bubonica la forma mas comun de la enfermedad. Los signos y sintomas iniciales pueden ser inespecificos, como fiebre, escalofrios, malestar general, mialgias, nauseas, postracion, dolor de garganta y cefalea. La linfadenopatia (bubas) aparece junto con, o poco despues de la fiebre. Se afectan con mayor frecuencia los ganglios linfaticos femorales o inguinales, seguidos de los axilares y cervicales. Habitualmente, los ganglios son extrem adam ente dolorosos a la palpation y firmes, los cuales se rodean de un notable edema. Pueden supurar durante la segunda semana. La piel situada por encima de ellos suele aparecer lisa y enrojecida, pero generalmente no presenta calor. Algunas veces aparece, en el lugar de la picadura de la pulga una pequena vesicula con una region circundante edematizada.71 4.1.6 C o rio m e n in g itis lin fo c itic a 39 Esta enfermedad es transmitida por un Arenavirus, el virus de la Coriomeningitis linfocitica (CML). Su reservorio principal es el raton. Las personas se pueden infectar a traves del contacto directo con las secreciones nasales, orina y heces, aunque Existen evidencias de que tambien a traves de la inhalacion del virus se puede transmitir, no descartando otras vias de entrada como las mucosas o la ingestion.72 Cuando se manifiesta clmicamente, puede presentar tres formas, a) enfermedad febril, con sintomatologia gripal, b) meningitis aseptica y c) meningoencefalitis. La enfermedad comienza con un cuadro febril, mialgias, dolor retrocular, decaimiento y anorexia. Puede haber artralgias, artritis, parotiditis. En una semana pueden desaparecer esos sintomas o evolucionar a meningitis aseptica. Raramente progresa hacia una encefalitis, la que puede ser fatal.72 4.1.7 Tifus murino Tifus es el nombre comunmente utilizado para un grupo de enfermedades ocasionadas por organismos intracelulares que pertenecen a la familia Rickettsiaceae. Tifus murino es causado por Rickettsia typhi. Esta zoonosis, es transmitida por la pulga Xenopsylla cheopis que pica al ser humano a partir de su convivencia con los roedores; sin embargo, tambien se han asociado casos de tifus a otras especies de pulgas.73 El cuadro clinico inicial se caracteriza por la presencia de fiebre elevada asociada a escalofrios, cefalea intensa y exantema cutaneo que desaparece gradualmente, sin embargo en personas de edad avanzada o pacientes inmunocomprometidos pueden presentarse afecciones renales, hepaticas y pulmonares.74 4.2 La g o m o rfo s (C onejos) 40 4.2.1 P a ste u re lo sis Agente causal. La mayoria de las infecciones por especies de Pasteurella en seres humanos son causadas por P. multocida, las especies de Pasteurella constituyen parte de la flora habitual gastrointestinal y del tracto respiratorio superior de perros, gatos, conejos y otros animales, tanto domesticos como salvajes.75 Via de transmision. Su infection suele producirse por contacto directo o tras la mordedura o aranazo de animales portadores.76 Manifestaciones clinicas. Se presentan diferentes tipos de infecciones; de tejidos blandos, artritis y osteomielitis; infecciones orofaringeas y respiratorias, mas frecuentes en pacientes con enfermedades pulmonares cronicas y las infecciones invasivas graves como meningitis, endocarditis, infecciones intraabdominales y oculares.75 Prevention. Como medida aconsejable de protection individual se recomienda el uso de botas, guantes, y en ocasiones mascarillas para los cuidadores de animales de laboratorio e investigadores en riesgo.51 4.2.2 T ularem ia Agente causal. Enfermedad febril causada por Francisella tularensis. Se encuentra de manera natural en los conejos, liebres y roedores, especialmente en los silvestres. Asimismo, se ha descrito que se pueden infectar una amplia gama de mamiferos y diversas especies de aves.77 Aspectos epidemiologicos. Tiene predominio cosmopolita, se presenta en ambos sexos y predomina en jovenes y adultos es mas frecuente en cazadores de roedores silvestres. En Mexico es frecuente en el centro y sur del pais.78 41 Via de transmision. Se transmite al hombre, fundamentalmente por el contacto con animales infectados, aunque tambien es posible el contagio por inhalacion o ingestion de animales infectados y por picaduras de artropodos.79 Manifestaciones clinicas. La tularemia por lo general se presenta en forma brusca con sintomas de fiebre, escalofrios, cefalea, malestar general, anorexia y fatiga, ademas de tos, dolor toraxico, dolor abdominal y diarrea, posterior a este cuadro sistemico se observa en la mayoria de los casos, en la que los pacientes refieren contacto con animales o picadura de garrapatas la presentation de tularemia ulceroglandular que se observa como una papula roja y dolorosa en una region que drena hacia los ganglios linfaticos afectados, esta papula evoluciona a necrosis y se forma una ulcera dolorosa con un borde sobreelevado.62 Prevention. En personas expuestas en laboratories han de usarse medidas protectoras para manipular los materiales infectados, tomar precauciones especiales como llevar ropa apropiada, para evitar la infestation por garrapatas y otros artropodos, ademas de guantes, mascarilla y protectores oculares.51 4.2.3 D e rm a to m ico sis o Tinas Agente causal. Se conoce con este nombre a un grupo de padecimientos de la piel y sus anexos, ocasionados por hongos queratinofilicos denominados dermatofitos que pertenecen a tres generos: Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton. Se observan principalmente en animales domesticos y salvajes, se hallan en los ganados bovino, porcino y equino, perros, gatos, conejos y aves.80 Aspectos epidemiologicos. En Mexico las tinas se encuentran entre las diez dermatosis mas frecuentes, constituyen el 70-80% de todas las micosis. La tina de la cabeza tiene una frecuencia de 4-10%, afecta por igual a ambos sexos, se presenta en ninos en un 98% de los casos, siendo la edad preescolar y escolar las mas afectadas.78 42 Modo de transmision. Los dermatofitos son un grupo de hongos que se pueden transmitir por contacto directo con animales y personas; Otro mecanismo de transmision es a traves de las escamas de queratina que se depositan en el cuerpo, los pies o la cabeza.81 Manifestaciones clinicas. Las dos formas de dermatomicosis que puede presentar el hombre con un origen animal son tinea capitis y tinea glabrosa, la primera desarrollandose en el cuero cabelludo, cejas y pestanas mientras que la segunda en areas escasamente pilosas. Las lesiones varian desde una simple descamacion a eritema y vesiculas o lesiones granulomatosas bastante extensas4 Prevencion. Se debe realizar una limpieza de suelos, jaulas y utensilios con el fin de eliminar los pelos infectados y despues llevar a cabo una desinfeccion de superficies a base de una solucion de hipoclorito sodico (dilucion 1/10) o con enilconazol.4 La Norma Oficial Mexicana-062-ZOO-1999, Especificaciones tecnicas para la produccion, cuidado y uso de los animales de laboratorio menciona mas zoonosis relacionadas con lagomorfos, aqui se mencionan de manera somera dado que se presentan de manera esporadica y en asociacion con otros animales. 4.2.4 P s e u d o tu b e rcu lo sis. Esta zoonosis es causada por la bacteria Yersinia Pseudotuberculosis, es transmitida por lagomorfos, roedores y aves. Aunque en el hombre no son abundantes los procesos atribuidos a Y. pseudotuberculosis, siendo la linfadenitis mesenterica en ninos la forma mas frecuente de presentacion Las formas septicemicas descritas en la literatura son escasas y con frecuencia afectan a pacientes con problemas previos como cirrosis hepatica o diabetes. Puede provocar tambien manifestaciones clinicas atipicas como nefritis intersticial, linfadenitis supurativa, prostatitis cronica y adenitis cervical.82 43 Su designation, pseudotuberculosis, fue derivada, por el aspecto histopatologico, caracteristico encontrado en ganglios linfaticos mesentericos, que se asemejan, a los observados durante la infection de la tuberculosis.83 4.2.5 Encefalitis Powassan Es producida por un virus Pow de genoma ARN, del genero Flavivirus, de la familia Flaviviridae, transmitido por garrapatas, los lagomorfos y roedores silvestres son los reservorios naturales. El hombre se infecta por la picadura de garrapatas. La encefalitis se manifiesta inicialmente en dolor de cabeza, nauseas, vomitos, fiebre y suefio profundo y meningitis, aunado a paralisis partial.84 44 Capitulo 5 Prevencion y Medidas de Seguridad 5.1 R elacionados con el personal Como se describio anteriormente hay diversas vias de transmision de las zoonosis por todo ello es importante que todo el personal susceptible este consciente de ello y se sujete a medidas preventivas o de control para evitar riesgos. A continuacion se mencionaran algunos aspectos importantes tendientes a la seguridad de quienes manejan animales. 5.1.1 Capacitacion del personal El personal que cuida y maneja a los animales de laboratorio debe estar entrenado apropiadamente para su manejo, la institucion debe ofrecer capacitacion formal o entrenamiento durante el desempeno del trabajo, para facilitar el cuidado y uso humanitario de los animales.85 La preparacion academica y los requisitos del personal requerido para conducir y apoyar el programa de cuidado y uso de animales, depende de varios factores que incluyen: el tamano y tipo de institucion, la estructura administrativa para suministrar un cuidado animal adecuado, las caracteristicas de las instalaciones, el numero de animales mantenidos y la naturaleza de la investigacion cientifica y las actividades educativas que se realicen en la institucion.86 El personal que utilice o cuide a los animales debe participar regularmente en las actividades de educacion continua relevantes para sus responsabilidades. Se espera una participacion activa del personal en reuniones locales y nacionales de organizaciones afines. El entrenamiento durante el desempeno de sus labores debe ser parte del trabajo de todos los tecnicos y estar complementado con discusiones auspiciadas por la institucion, programas de entrenamiento y con materiales bibliograficos aplicables a su trabajo y a las especies con las cuales laboran.85 En Mexico, la Asociacion Mexicana de Ciencias de los Animales de Laboratorio (AMCAL) imparte diferentes cursos de capacitacion en esta area. 45 Los investigadores, personal tecnico, aprendices e investigadores visitantes que realicen anestesia, cirugia u otras manipulaciones experimentales en animales deben estar capacitados a traves de entrenamiento para efectuar estas labores de una manera humanitaria y cientificamente apropiada.85 5.1.2 Programa de Salud Ocupacional y Seguridad del personal El programa de salud y seguridad ocupacional deber ser parte del programa general de cuidado y uso de los animales. Un programa eficaz depende de un solido apoyo administrative y de las interacciones entre las actjvidades institucionales, incluyendo los funciones o programas de investigacion, el programa de cuidado y uso de los animales, los servicios de salud y seguridad ocupacional y la administration.85 Las recomendaciones a consideraren este programa son: • Deberan existir botiquines de primeros auxilios colocados en lugares estrategicos, con el fin de facilitar su acceso cuando se requiera utilizarlos. • El personal de limpieza y el administrative deberan estar instruidos, respecto de los riesgos posibles del bioterio y del material que en el se manipula. • Colocar de forma destacada avisos que den information sobre la localization de los primeros auxilios, los numeros de telefono de los servicios de emergencia, etc. • Se debe advertir a las mujeres en edad fertil de las consecuencias de trabajar con microorganismos infecciosos, agentes carcinogenos, mutagenos y teratogenos en el caso de que se manejen en el bioterio. • Indicar a las mujeres en edad fertil que, si estan embarazadas o tienen sospechas de estarlo, deben informar al personal medico de modo que se establezcan otras disposiciones de trabajo para ellas en caso necesario. • Establecer un programa de immunization apropiado para el trabajo que se hace en el Bioterio. • Mantener los registros de enfermedades y accidentes. 46 • Utilizar carteles de advertencia y prevention de accidentes para reducir al minimo los riesgos laborales. • Adiestrar al personal para que siga las practicas apropiadas en materia de bioseguridad. • Instar al personal del bioterio para que notifique las posibles exposiciones.87 5.1.3. Identification de los riesgos derivados animales Al seleccionar los dispositivos de seguridad del trabajo con espetificos para la experimentation con agentes peligrosos en animales se debe prestar especial atencion a los procedimientos de cuidado y alojamiento de animales, almacenamiento, distribution de los agentes, preparation y administration de dosis, manejo de fluidos y tejidos corporales, disposition de los desechos y cadaveres y protection del personal. El equipo especial de seguridad se debe usar en combination con las practicas de seguridad y manejo apropiados.87 El personal profesional que lleve a cabo y apoye programas de investigation que involucren agentes fisicos, quimicos o biologicos infecciosos, debe estar capacitado para valorar los peligros asociados a los programas y para seleccionar los dispositivos de seguridad apropiados para tales riesgos. Siendo estos, aquellos que se derivan de su comportamiento agresivo o defensivo, tales como mordeduras, aranazos, picotazos, etc., como los que provienen de su capacidad de portar y transmitir enfermedades zoonoticas al personal que los manipula.51 Por otra parte, cuando se trata de evaluar el riesgo biologico es fundamental conocer la especie animal con la que se esta investigando, las infecciones que puede transmitir y la naturaleza de los agentes infecciosos, ya que cuanto mas alejada filogeneticamente sea una especie del ser humano, menor suele ser el riesgo de transmision de infecciones.51 47 El investigador y los alumnos, as! como personal a cargo del bioterio estan expuestos a diferentes riesgos a la salud derivados del contacto estrecho y por las diferentes practicas que se realizan, desde inoculacion de animates, toma de muestras sangulneas, cirugia, necropsia, eutanasia y tratamiento de residuos peligrosos, biologico-infecciosos, ademas del riesgo de heridas producidas por objetos punzocortantes.88 5.1.4 P revencion de los rie sgo s d e riva d o s del tra b a jo con anim ates Las personas que manipulan animales de experimentacion deben estar debidamente informadas de los riesgos inherentes al trabajo que realizan y recibir la formacion sistematica necesaria en materia de tecnicas, instrumentacion, metodos de trabajo y equipos de proteccion individual, con el fin de evitar la posibilidad de contraer enfermedades, asi como de impedir la dispersion de los agentes biologicos dentro y fuera del laboratorio. Desde el punto de vista estructural, los servicios relacionados con las instalaciones de los animales, asi como los vestuarios y lavabos del personal, excepto cuando el nivel de seguridad requerido indique lo contrario, deben hallarse fuera de la unidad animal, pero cerca de ella.51 5.1.5 Higiene y Proteccion Personal La higiene personal es una barrera importante contra la infeccion, y lavarse las manos despues de manipular un animal reducira el riesgo de diseminacion de enfermedades y de infectarse. Es esencial que todo el personal mantenga altos estandares de limpieza personal. La institucion debe suministrar servicio de lavanderia y ropa apropiada para vestirse en el bioterio y los laboratorios en donde se utilizan animales. En algunas circunstancias podrian ser desechables los guantes, cubrebocas, gorros, batas, overoles y cubrezapatos. El personal debe lavarse las manos y cambiarse de ropa tan frecuente como sea necesario para mantener la higiene personal. La 48 ropa de trabajo usada en los cuartos de los animales no debera usarse fuera de las instalaciones. No se debe permitir al personal que coma, beba, fume o se aplique cosmeticos en los cuartos de los animales.85 Toda persona sea investigador, alumno o personal que mantenga estrecho contacto con animales del bioterio debera seguir las siguientes recomendaciones de proteccion personal y portar las siguientes equipos de proteccion 1. Se usaran en todo momento overoles, batas o uniformes especiales para el trabajo en el bioterio. 2. Se usaran guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que puedan entranar contacto directo o accidental con sangre, liquidos corporales y otros materiales potencialmente infecciosos o animales infectados. Una vez utilizados, los guantes se retiraran de forma aseptica y despues se lavaran las manos. 3. El personal debera lavarse las manos despues de manipular materiales y animales infecciosos, asi como antes de abandonar las zonas de trabajo del laboratorio. 4. Se usaran gafas de seguridad, cubre bocas u otros dispositivos de proteccion cuando sea necesario proteger los ojos y el rostro de salpicaduras. 5. Estara prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio por ejemplo en cafeterias, oficinas, bibliotecas, salas para el personal y banos. 6. Debera usarse calzado cerrado y preferentemente con suela antiderrapante. 7. En las zonas de trabajo estara prohibido comer, beber, fumar, aplicar cosmeticos o manipular lentes de contacto. 8. Estara prohibido almacenar alimentos o bebidas para consumo humano en las zonas de trabajo del bioterio. 9. La ropa protectora de laboratorio no se guardara en los mismos armarios que la ropa de calle. 10. Cuando este indicado, el personal debe banarse al abandonar las areas de cuidado animal, de procedimientos o de preparacion y dosificacion. 49 11. Al personal que labora en areas en donde puede estar expuesto a aerosoles o vapores contaminantes se le debe suministrar proteccion respiratoria adecuada.87 5.1.6 Medicina Preventiva para el Personal Mientras que la mayorla de los agentes infecciosos tienen un grado de especificidad importante, su virulencia puede, de vez en cuando, variar considerablemente; como tambien puede variar su capacidad para penetrar las barreras entre especies. Asi, infecciones que generalmente no se consideran para ser zoonoticas, pueden afectar esporadicamente a animates o personas susceptibles. Las personas potencialmente con riesgo mas alto son las que sufren de deficiencias del sistema inmunitario, y las que viven estreses importantes o que tienen una enfermedad clinica no declarada. Muchos microorganismos patogenos, como los responsables de la tuberculosis, brucelosis, rabia, etc., son transmitidos normal y directamente de una o mas especies de animates vertebrados a otras, y son tambien facilmente trasmisibles al hombre. Es aconsejable hacer una evaluacion de la historia clinica antes de asignar el trabajo, para valorar los riesgos potenciales para cada uno de los empleados. Son recomendables evaluaciones medicas periodicas para la gente que trabaja en ciertas categorias de riesgo. Se debe adoptar un calendario apropiado de inmunizaciones, el toxoide tetanico es una de las vacunas que debe aplicarse. Ademas, en casos especiales se debe ofrecer inmunizacion a la gente expuesta a riesgos de infeccion, antes de la exposicion, a agentes tales como la rabia o el virus de la hepatitis B.51 Por la importancia de la prevencion, los objetivos de los programas de vacunacion en el personal sanitario deben estar orientados a: a) mejorar la proteccion de los trabajadores frente a los riesgos de infecciones transmitidas por los animates y que puedan ser prevenidas con vacunas. b) evitar que los trabajadores sean fuente de infeccion para los animates a los que atienden, para otros trabajadores del centra o incluso para la comunidad. 50 c) salvaguardar la salud del trabajador que presente situaciones de inmunosupresion o enfermedades cronicas de base y que, por tanto, tenga un riesgo superior de contagio o de complicaciones derivadas de la adquisicion de ciertas enfermedades infecciosas en el bioterio. 5.2 C o n d icio n e s para los anim ales de la b o ra to rio con NB-1 (N ivel de B io se g u rid a d - 1) Dado que en el bioterio adscrito a la Unidad de Ciencias de la Salud se encuentra en la categoria 1 respecto al Nivel de bioseguridad (NBS-1), este trabajo se encamina a mencionar las recomendaciones respecto a los espacios de este nivel para evitar los riesgos a la salud. 5.2.1 Instalaciones Los locales deben ser cerrados y protegidos procurando que las salidas hacia el exterior sean las menos posibles. Las puertas de la unidad animal deben tener un dispositivo de cerradura automatica y permanecer cerradas.51 Los techos, paredes y suelos deben ser de materiales resistentes y con un recubrimiento no poroso facil de lavar y de desinfectar. El suelo debe ser uniforme, impermeable y antideslizante, capaz de soportar sin peligro el peso y el desplazamiento de las jaulas.51 Las tuberias de los desagues deben ser descontaminados regularmente. Todas las aberturas como puertas, ventanas, bocas de aireacion, orificios de evacuacion de liquidos, etc., deben estar provistas de tela metalica que impida la entrada de insectos, roedores salvajes u otros animales que pueden ser portadores de agentes patogenos para el hombre.51 En cada local destinado a la instalacion de animales debe haber un lavabo para el lavado de manos y se ha de prever una instalacion para el lavado de jaulas. La superficie que recubre el suelo de las jaulas no solo debe mantenerse 51 limpia sino que es imprescindible que sea renovada periodicamente a fin de evitar que se convierta en una fuente de infeccion. Las jaulas limpias se guardaran en un local separado.51 Debe disponerse de locales separados para el almacenaje de los alimentos y para las camas de los animates. El almacen de alimentos debe situarse en una zona fresca, seca y libre de parasitos e insectos, mientras que el de camas debera situarse en un lugar seco y libre de parasitos e insectos.51 Segun el origen de los animates, los locales deben estar preparados para una cuarentena, cuya duracion sera variable segun las especies y tanto mas larga cuanto mayor sea el riesgo de zoonosis. Deben tomarse medidas de seguridad para evitar fugas de animates al exterior, si se escapan de las jaulas pequenos roedores u otros animates de laboratorio, se sacrificaran una vez capturados.51 Habra que notificar inmediatamente al responsable del bioterio cualquier enfermedad o muerte inesperada que se produzca entre los animates, asi como de aquellos que presenten una enfermedad imprevista.51 El sistema de ventilacion debe ser apropiado a las exigencias termohigrometricas de las especies albergadas y garantizar alrededor de 15 renovaciones/hora para la reduccion de los mates olores y las concentraciones de gases y vapores en aire, circulando siempre del lugar menos contaminado al mas contaminado. En algunas circunstancias puede requerirse un factor de renovacion mayor (hasta 20 o mas renovaciones/hora), o bien, cuando la densidad de ocupacion sea baja, podrian ser suficientes de 8 a 10 renovaciones/hora o incluso no ser imprescindible la renovacion mecanica.51 5.2.2 Alojamiento de los animates Las jaulas, cajas, estanterias e instalaciones en general, deben construirse con materiales apropiados y estar concebidos de manera que no presenten ningun riesgo para el animal y puedan desinfectarse facilmente. Debe estar garantizado 52 un control periodico de los animales. A su llegada, deben ser cuidadosamente examinados por una persona competente, que defina las medidas de cuarentena eventuates. No pueden introducirse animales provenientes del exterior sin la autorizacion del responsable de la unidad.51 Los cadaveres y desechos de los animales deben eliminarse en las condiciones que se expresen en la Norma Oficial Mexicana ambiental-Residuos NOM-087-ECOL-SSA1-2002, peligrosos Proteccion ambiental-Salud biologico-infecciosos-Clasificacion y especificaciones de manejo. (Anexo 2). En este sentido es importante tambien considerar que el personal debe estar capacitado para la identificacion y separation correcta de los residuos. 5.3 R ecom endaciones para el b io te rio de C iencias de la Salud. Recomendaciones: Por toda la information y observaciones directas en el bioterio de la unidad de ciencias de la salud se considera pertinente emitir las siguientes recomendaciones en funcion de la mejora continua tanto del personal responsable del bioterio, como de los usuarios incluyendo alumnos, docentes e investigadores. Personal y usuarios: • Uso de equipo de proteccion personal durante todo el tiempo de permanencia en el bioterio. • Capacitacion en el manejo y uso de los animales de laboratorio al personal suplente, con el proposito de evitar riesgos a la salud. • Difusion de la normatividad en materia de bioseguridad aplicable a los bioterios. • Implementar un programa de Salud Ocupacional para todo el personal asignado al Bioterio, incluyendo suplentes. Este se pondria en marcha con la participation conjunta de Bioanalisis, Medicina y Odontologia. 53 • Contar con un Comite Institucional de Cuidado y Uso de Animates de Laboratorio, en el cual participen tanto personal del bioterio como docentes, investigadores y estudiantes. • Capacitar a los alumnos sobre procedimientos especificos antes de la realizacion de las practicas con el proposito de minimizar riesgos y cuidar el bienestar de los animales. Instalaciones: • Es necesario una readecuacion de la infraestructura para mejorar las condiciones de bienestar de los animales de experimentacion, la separacion de las especies asi como las de bioseguridad del personal. • Separar fisicamente las areas del bioterio de otros espacios utilizados para otros fines y evitar que los pasillos del bioterio sean de acceso comun a personal externo. • Implementar un area de recepcion de animales para que los usuarios no tengan que ingresar al bioterio a solicitar o entregar sus animales de experimentacion. • Implementar barreras apegadas a la normatividad para evitar el ingreso de fauna nociva y la fuga de los especimenes. • Colocar extractores de aire para mejorar la ventilacion en las areas de alojamiento de animales. • Completar todos los senalamientos tanto de areas como de ruta de evacuacion que un bioterio debe tener. 54 5.4 Conclusion Por toda la informacion recabada anteriormente se concluye que los animales destinados a la experimentation representan un riesgo latente de transmision de zoonosis, derivado del contacto estrecho con estos, para evitarlas es necesario llevar a cabo medidas preventivas relacionadas con las instalaciones que los albergan y el personal que los maneja, el cual debe estar capacitado para ello, aunado a que debe portar su equipo de protection personal. Conocer las zoonosis mas frecuentes tanto genericas como especificas nos permiten adoptar conductas sanitarias enfocadas a minimizar riesgos a la salud. Se espera que este trabajo de informacion documental sea de utilidad, principalmente para los alumnos de las diferentes licenciaturas de esta Unidad de Ciencias de la Salud que emplean animales de laboratorio en sus diferentes experiencias educativas y se pueda consultar con el proposito de evitar las zoonosis a las que podrlan estar expuestos. 55 5.5 Referencias 1. Giraldez, A. (2008). Breve historia de la experimentation animal. Real Academia National de Farmacia Madrid; Recuperado de: http://www.analesranf.com/index.php/lectur/article/view/34/73 2. De la Garza, A. (2007). Algunas notas sobre la historia del laboratorio de cirugia experimental, Redalyc, 75 (06), 499-501. 3. De la Vega, E. (1988). Apuntes sobre Cria, Manejo, Patologia y Uso de los Animates de Laboratorio. 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Enfermedad en el hombre Agente causal Huesped Forma de disemiriacidn Antrax Bacillus antracis Animates de granja, salvajes y de zoolog ico Contacto, inhalacion, ingestion Brucelosis B. B. B. B. B. Campilobacteriosis Colibacilosis C. fetus, C. jejuni E. coli Contacto e ingestion de leche y productos lacteos y came fresca Ingestion Ingestidn Leptospirosis Leptospira spp Porcinos, ganado bovino y vino, ovinos, caprinos, ovinos, perros Conejos Ganado bovino, borregos, aves Roedores Pasteurolosis P. multocida P. hemolitica P. neumotrdpica Yersinia pestis Conejos Pseudotuberculosis Yersinia Pseudotuberculosis Roedores, lagomorfos Fiebre por mordedura de rata Salmonelosis S. moniliformis Spiritum minus Salmonella spp Roedores Shigelosis Shigella spp. Primates humanos Tetanos Cl. tetani Perros, caballos Tuberculosis M. tuberculosis M. bovis M. avium Tularemia Fiebre del conejo F. tularensis Primates no humanos, ganado vacuno, perros ganado vacuno, ves, porcinos, ovejas Lagomorfos, roedores Plaga suis abortus melitensis ovis canis Roedores Roedores no gatos, Por contacto, orina contaminada Contacto por mordida y por inhalacidn. Contactos: mordida de pulga y agua contaminada. Contacto por ingestion de comida y agua contaminada Mordida del roedor Ingestion, inhalacion y contacto Contacto, materia fecal, ingestion Por mordida, por punciones contaminadas Contacto, ingestion e inhalacion Vectores y notas sobre ciclo vital Esporas de larga duracion.. en suelo Pulgas Saliva infectada Directo fomites por tierra Antropozoonotica contacto, agua contaminada Fuente: NORMA Oficial Mexicans NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tecnicas para la produccion, cuidado y uso de los animates de laboratories 64 Enfermedades por Rickettsias. Enfermedad en el hombre Agente causal Huesped Fiebre Q. Coxiella Ganado vacuno, ovino y caprino Viruela rickettsial R. akari Roedores Fiebre manchada R. Rickettsia (de las montanas Rocallosas) Tifo siberiano R. siberica (fiebre de la garrapata asiatica) Tifo murino R. tiphy Roedores, conejos Varios salvajes Forma de diseminacion Inhalacion, ingestion de leche contaminada, sangre chupada por artropodos, por contacto con liquido amniotico de la placenta Mordedura acaros Mordedura garrapata roedores Mordedura garrapata Roedores de de de Mordedura de pulga y alimentos contaminados Fuente: NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tecnicas para la produccion, cuidado y uso de los animales de laboratorio. Enfermedades por Arbovirus. Enfermedad en el hombre Fiebre hemorragica Encefalitis de California Fiebre Colorado Encefalitis equina del Este Encefalitis Ponwasan Encefalitis de San Luis Encefalitis equina venezolana Agente causal Hu§sped Arbovirosis asiatica Encefalitis de California Roedores, liebres Conejos y roedores Virus por piquete de garrapata EEE Ardilla Deromyscus Virus Ponwasan ESL Encefalitis equina venezolana Caballos y p^jaros Conejos salvajes y roedores Aves Caballos Forma de diseminacion Mordedura de garrapata Ciclo natural en roedores y conejos Mordida de garrapata Vectores Ciclo natural en roedores Picadura de mosco Mordedura de garrapata Ciclo natural en aves Ciclo natural en caballos Fuente: NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tecnicas para la produccion, cuidado y uso de los animales de laboratorio. 65 Enfermedad en el hombre .. Enfermedad por Marburg Fiebre hemorrdgica suramericana y coreana Enfermedad por otros virus Agente causal Huesped Virus de fiebre hemorragica Mono verde del Africa Macaca sp. Roedores salvajes Mastomys ratelensis Hepatitis A Virus de la hepatitis Chimpance Encefalitis por herpes B Linfocoriomeningitis Herpes simae Rhesus Virus LCM Roedores, otros mamiferos Rabia Virus de la rabia Perros, gatos, murcielagos Filovirus Forma de diseminacion Contacto directo de tejidos de mono Contacto: contaminacion de alimentos con excreta de roedores Enfermedad antropozoonotica Heridas por mordedura, Inhalacidn, transmision congenita por cultivo de tejido Mordeduras, contacto con saliva, el virus se concentra en la saliva. Fuente: NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tecnicas para la produccion, cuidado y uso de los animates de laboratorio. Enfermedades por hongos y protozoarios Enfermedad en el hombre Balantidiasis Agente causal Huesped Balantidium coli Primates no humanos Coccidiomicosis Coccidioides imitis Ganado, perros Amibiasis, disenteria amibiana Giardiasis Entamoeba histolytica Primates no humanos Giardia intestinalis Primates no humanos, perros Histoplasmosis Histoplasma capsulatum Toxoplasmosis Toxoplasma gondii Perros y otras especies domesticas y salvajes Gatos Dermatomicosis Enfermedades sanguineas protozoarios Trichophyton sp Microsporum sp por Otros dermatofitos Trypanosoma sp, Plasmodium sp Leishmania sp Roedores, conejos Roedores Forma de diseminacion Ingestion de alimento, contaminado, fomites Inhalacidn de esporas aereas, hongo presente en tierra del desierto. Contaminacion de alimentos. Ingestion de quistes en agua o alimentos contaminados. Inhalacidn del hongo, puede crecer en el suelo. Ingestion de ovoquistes del gato, transmision fetal. Contacto directo. Transmision insecto. saliva- Fuente: NORMA Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tecnicas para la produccion, cuidado y uso de los animales de laboratorio. 66 Anexo 2 Manejo de re sid u o s p e lig ro so s b io lo g ic o in fe c c io s o s Tipo de residuos Estado Fisico Envasado Sangre Liquidos Recipientes hermeticos Cultivos y cepas de Solidos Bolsas de agentes infecciosos polietileno Patologicos Bolsas de Solidos polietileno Liquidos Recipientes hermeticos Residuos no anatomicos Solidos Bolsas de polietileno Recipientes Liquidos hermeticos Objetos punzocortantes Solidos Recipientes rigidos polipropileno Color Rojo Rojo Amarillo Amarillo Rojo Rojo Rojo Fuente: Norma Oficial Mexicana. NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Proteccion ambiental - Salud ambiental - Residuos peligrosos biologico-infecciosos - Clasificacion y especificaciones de manejo Caracteristicas de las bolsas. Las bolsas deberan ser de polietileno de color rojo traslucido de calibre mlnimo 200 y de color amarillo traslucido de calibre minimo 300, impermeables y con un contenido de metales pesados de no mas de una parte por millon y libres de cloro, ademas deberan estar marcadas con el simbolo universal de riesgo biologico y la leyenda Residuos Peligrosos Biologico-infecciosos.88 Caracteristicas de recipientes. Los recipientes de los residuos peligrosos punzocortantes deberan ser rigidos, de polipropileno color rojo, con un contenido de metales pesados de no mas de una parte por millon y libres de cloro, que permitan verificar el volumen ocupado en el mismo, resistentes a fracturas y perdidas de contenido al caerse, destructibles por metodos fisicos, tener separador de agujas y abertura para deposito, con tapa(s) de ensamble seguro y cierre permanente, deberan contar con la leyenda que indique "RESIDUOS PELIGROSOS PUNZOCORTANTES BIOLOGICO- INFECCIOSOS" y marcados con el simbolo universal de riesgo biologico. 67 a) La resistencia minima de penetracion para los recipientes tanto para punzocortantes como para liquidos, debe ser de 12.5 N (doce punto cinco Newtons) en todas sus partes y sera determinada por la medicion de la fuerza requerida para penetrar los lados y la base con una aguja hipodermica calibre 21 x 32 mm mediante calibrador de fuerza o tensiometro. b) Los recipientes para los residuos peligrosos punzocortantes y liquidos se llenaran hasta el 80% (ochenta por ciento) de su capacidad, asegurandose los dispositivos de cierre y no deberan ser abiertos o vaciados.89 68