MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL LABORATORIO DE

Código : UAPA
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL
LABORATORIO DE ANATOMÍA
PATOLÓGICA Y CITOPATOLOGÍA
Versión:1.0
Páginas: 1 de 17
Fecha de elaboración: Junio 2012
Vigencia: 3 años
Hospital Dr. Mauricio Heyermann T.
Unidad de Anatomía Patológica
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PARA EL LABORATORIO DE
ANATOMÍA PATOLÓGICA Y
CITOPATOLOGÍA
Índice
Sección
Página
Introducción
Objetivo
Alcance
Responsabilidades
Desarrollo
Evaluación
Actualización
Anexos
Preparado por:
T.M Susana Garcés Olave
Tecnólogo Médico Anatomía
Patológica
2
2
2
3
3
15
16
17
Revisado por:
EU. Claudia Navarro
Encargada Oficina de Calidad y
Seguridad del Paciente
Aprobado por:
D. René Lopetegui Carrasco
Director Hospital Angol
Este documento es propiedad del Hospital Dr. Mauricio Heyermann de T. Angol. Cualquier copia parcial o
total no es válida sin la debida autorización de la Dirección del establecimiento.
Código : UAPA
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL
LABORATORIO DE ANATOMÍA
PATOLÓGICA Y CITOPATOLOGÍA
Hospital Dr. Mauricio Heyermann T.
Unidad de Anatomía Patológica
I.
Versión:1.0
Páginas: 2 de 17
Fecha de elaboración: Junio 2012
Vigencia: 3 años
INTRODUCCIÓN
La Unidad de Anatomía Patológica (UAP) es una Unidad de Apoyo Clínico
fundamental en el proceso de diagnóstico de pacientes que han sido sometidos a
cirugías, por este motivo, resulta de máxima importancia la calidad de los procesos que
en él se realizan. El presente documento es complementario a todos los manuales y
protocolos vigentes en el servicio.
II.
OBJETIVOS
Generar una política de calidad continua de los procesos en el Servicio de Anatomía
Patológica.
III.
ALCANCE
Este manual será aplicado por el Anatomopatólogo, Tecnólogo Médico y Secretaria, cada
vez que se procesen muestras, se valide su resultado y se proceda realizar resguardo de
la información obtenida en la Unidad de Anatomía Patológica del Hospital Dr. Mauricio
Heyermann Torres de Angol.
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Unidad de Anatomía Patológica
IV.
Versión:1.0
RESPONSABILIDADES
Para dar cumplimiento al presente manual, es necesario indicar los niveles de
responsabilidad asociados al desarrollo del programa:
Jefe de Servicio
Tecnólogo
Médico
Técnico
Paramédico
V.
•
•
•
Supervisar el cumplimiento de las medidas indicadas en el presente
manual por parte de sus funcionarios.
Informar e indicar a cada funcionario bajo su dependencia, sobre los
procedimientos correctos a desarrollar en cada intervención.
Cumplir con lo establecido en el Instructivo de Procedimientos para
Laboratorio de Anatomía patológica.
Realizar medición de calidad de los procesos a través de
indicadores.
Cumplir con lo establecido en todos los manuales y protocolos del
Servicio de Anatomía Patológica.
Cumplir con lo establecido en el Protocolo.
RESPONSABLES DE LOS PROCEDIMIENTOS REALIZADOS
Patólogo: Encargado del análisis macroscópico y microscópico de las muestras,
validación de informes emitidos.
Tecnólogo Médico: Responsable de la correcta realización de las técnicas,
actualización de la estadística mensual y velar por el correcto uso y mantención de
la calidad de los reactivos presentes en los equipos de la Unidad de Anatomía
Patológica.
Secretaria: Responsable de la Recepción de muestras y de la correcta aplicación
de los criterios de rechazo de muestras con el fin de reducir al mínimo los eventos
adversos relacionados con la mala identificación de pacientes.
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PROCEDIMIENTO
DE
RESPALDO
Y MATERIAL DE ESTUDIO
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Unidad de Anatomía Patológica
VI.
Versión:1.0
DE
DOCUMENTACIÓN
La responsabilidad de entregar toda la información técnica para implementación,
desarrollo y funcionamiento de los archivos del Laboratorio de Anatomía Patológica es del
Jefe de la Unidad de Anatomía Patológica (UAP)
En la UAP existen dos tipos de archivos:
1) Archivos Permanentes:
• Láminas histológicas
• Inclusiones o tacos
• Respaldo de informes
2) Archivos Transitorios.
• Restos de material macroscópico de tejido no ingresado a proceso de biopsia
diferida.
Archivos permanentes
Procedimiento de Respaldo de Informes
Responsable: Secretaria.
Los informes generados por el Patólogo, durante el año en curso, serán guardados en
archivadores disponibles para su consulta en secretaría de la UAP.
Las copias de Informes de Biopsias Privadas serán almacenadas de igual forma en
Secretaría de la Unidad.
Los informes de años anteriores serán guardados en un closet destinado al
almacenamiento de documentación por un periodo de 10 años, en cajas rotuladas con su
contenido, año de emisión y rango de número entre el que se encuentran los documentos
contenidos.
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Procedimiento de Respaldo de Solicitudes de Examen Histopatológico y/o
Citológico
Responsable: Secretaria.
Las Solicitudes de Examen Histopatológico y/o Citológico del año en curso serán
guardadas en archivadores disponibles para su consulta en secretaría de la UAP. Las
solicitudes de años anteriores serán almacenadas en oficina de patólogo. Esta
información es resguardada por un periodo de 10 años.
Procedimiento de Respaldo de Láminas histológicas
Responsable: Técnico Paramédico supervisado por Tecnólogo Médico.
Una vez que las láminas son informadas, el Patólogo las devolverá al Técnico
Paramédico para su archivo.
Las láminas son archivadas en las dependencias de UAP por un lapso de 15 años para su
consulta en caso de ser requeridas. Las láminas del año en curso son almacenadas en
cajas de madera en el laboratorio de Anatomía Patológica.
El archivo de láminas de años anteriores se realiza en cajas de madera que indican entre
qué rangos de números identificatorios de lámina se encuentra el material contenido en su
interior y el año en el que fueron procesadas.
Procedimiento de Respaldo de Tacos
Responsable: Técnicos Paramédicos supervisados por Tecnólogo Médico.
Los tacos o cassette de inclusión son archivados en las dependencias de anatomía
patológica por un lapso de 30 años.
Los tacos correspondientes al mes anterior y al mes en curso son almacenados en cajas
en la sala de corte de la UAP y el resto en un closet destinado al almacenamiento de
documentación y tacos. Estas cajas son identificadas con mes y año de procesamiento.
Nota: Se deben almacenar lejos de aparatos que generen calor.
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Versión:1.0
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Vigencia: 3 años
Archivos Transitorios
Procedimiento de respaldo de material macroscópico de tejido no ingresado a
proceso de biopsia diferida
Responsable: Técnico Paramédico supervisado por Tecnólogo Médico.
El material de biopsia no elegido para representar la lesión se guarda en la misma bolsa
que lo contenía incluyendo su rótulo y número identificatorio, sin formalina. Las biopsias
con dictado macroscópico realizado diariamente deben ser almacenadas en una bolsa
negra, la que debe ser rotulada con día, mes y año de toma de muestra. Estas a su vez
son almacenadas en Bolsas Amarillas destinadas para el almacenamiento de material
orgánico, se encuentran identificadas con el símbolo de Riesgo Biológico, y con el mes y
año en que fueron analizadas.
El material de biopsia es almacenado en contenedor debidamente rotulado.
Las biopsias son almacenadas por un mes o hasta emitido el informe de biopsia. Luego
de lo cual sigue el procedimiento de eliminación de producto biológico orgánico según
norma.
VII.
TÉCNICAS DE PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
a) Procedimientos de técnicas histoquímicas comúnmente solicitadas
•
AZUL ALCIAN, PH 2,5
Propósito: La demostración de mucopolisacáridos ácidos.
Fijador: Formalina tamponada 10%.
Cortes: En parafina, de 4-5 µm.
Tejido control: cortes de intestino grueso, cartílago hialino.
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Soluciones:
1. Solución de ácido acético 3% acuoso.
2. Solución de azul alcián:
Azul alcián, 8gx_________________________1 gr.
Solución de ácido acético 3%________________100 ml.
3. Hematoxilina de Harris
Procedimiento:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Cortes desparafinados e hidratados.
Poner en sol. de ácido acético al 3% por 3 min.
Teñir en solución de Alcian Blue por 10 min. a temperatura ambiente.
Lavar con agua corriente, por 8 min.
Contrastar con Hematoxilina, por 20 seg.
Lavar con agua corriente por 8 min.
Deshidratar, aclarar y montar.
Resultados:
Mucinas ácidas, mucinas sulfatadas ácidas___________________calipso.
Núcleos_________________________________________________azul.
•
DIFF
Propósito: La demostración del microorganismo Helicobacter pylori.
Fijador: Formalina al 10% neutra. (Necesaria)
Cortes: En parafina, de 4-5 µm.
Control: Helicobacter pylori
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Vigencia: 3 años
Soluciones:
1. Azul de metileno solución madre :
Azul de metileno……………..1.4 grs.
Alcohol de 95º………………………….100 ml.
2. Solución de trabajo:
Solución madre…………………10 ml.
Agua destilada………………….90 ml.
3. Eosina
Procedimiento:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Corte histológico desparafinado e hidratado.
Teñir en eosina por 5 min.
Lavar hasta sacar la capa impermeable de eosina.
Teñir con solución de trabajo de azul de metileno por 8 min.
Sacar el exceso de colorante con agua corriente.
Dejar secar las placas.
Deshidratar desde alcohol de 100º, xilol y montar.
Resultados:
Helicobacter pilory_______________________________azul intenso.
Fondo__________________________________________azul.
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•
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PAS, ÁCIDO PERIÓDICO DE SCHIFF
Propósito: identificación de glucógeno, mucinas y algunas membranas basales.
Fijador: Formalina al 10%
Cortes: En parafina, de 4-5 µ.
Tejido Control: Hígado.
Soluciones:
1. Sol. de acido peryódico al 0.5 %, acuoso
2. Sol. de HCl 1N :
HCl:______________________________83.5 ml.
Agua destilada______________________916.5 ml.
3. Reactivo Schiff de Coleman :
Fucsina básica______________________1 gr.
Agua dest. en ebullición_______________200 ml.
Agitar por 5 min , enfriar a 50ºC y filtrar.
HCl 1N____________________________20 ml.
Enfriar a 25°C
Metabisulfito de Na___________________1 gr.
Dejar aclarar durante 18 – 24 hrs.
Carbón activado………………………………...2 gr.
Agitar por 1 min., filtrar y guardar en frasco ámbar en refrigerador.
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Vigencia: 3 años
4. Hematoxilina de Harris
Procedimiento:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Desparafinar e hidratar los cortes hasta agua destilada.
Oxidar en solución de Acido Peryódico durante 5 min.
Lavar en 2 cambios de agua destilada.
Incubar en reactivo Schiff de Coleman por 15 – 18 min.
Lavar con agua corriente por 8 min.
Contrastar con hematoxilina de Harris por 20 seg.
Lavar con agua corriente por 8 min.
Deshidratar, aclarar y montar.
Resultados:
Glucógeno, mucina, algunas membranas basales.___________rojo a púrpura.
Hongos_______________________________________________rojo a púrpura.
Núcleos_______________________________________________azul.
b) Citologías ginecológicas y misceláneas
El citodiagnóstico tiene por objeto interpretar las lesiones presentes sobre células
descamadas libremente de las superficies epiteliales; su principal ventaja sobre la biopsia
es la posibilidad de realizar un muestreo de la lesión mucho más amplio y reiterado, de
manera que permite dar un seguimiento dinámico de la conducta biológica de las
lesiones. Desde el punto de vista técnico el diagnóstico citológico es simple, rápido,
poco agresivo y de bajo costo, por lo que permite detectar en poco tiempo la mayor
parte de las lesiones, sobre todo las de carácter tumoral o pre-neoplásicas.
La UAP recibe Citologías Misceláneas, las que corresponden a Punciones de órganos
como Tiroides, cavidad Peritoneal o Pleural, etc. Estas pueden venir con el extendido
listo y fijado con citospray o bien se recibe el fluido correspondiente, sin fijar. Además se
reciben Citologías Ginecológicas correspondientes a Papanicolaou.
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CITOLOGÍA MISCELÁNEA
Encargado: Tecnólogo Médico
Extendido de células
1.- Una vez recibidas las láminas con el extendido fijado, se procede a la rotulación de
éstas con el número identificatorio.
2.- Al reverso de su solicitud se debe indicar el número de láminas que se recibieron.
3.- Las láminas son colocadas en el Teñidor Automático para realizar Tinción de
Papapanicolaou.
4.- Montaje
5.- Entrega de láminas al Patólogo.
Fluidos
Procesamiento en Citocentrífuga
1.- Al momento de recibir el frasco con la muestra, se debe medir el volumen de fluido
recibido y registrarlo al reverso de la solicitud, es ideal que el volumen de la muestra
no supere los 20 ml.
2.- Rotular la lámina a utilizar
3.- Realizar centrifugación en Cytospin.
4.- Una vez obtenida la lámina con la muestra, fijar con citospray y proceder a la tinción
con Papanicolaou.
5.- Montaje
6.- Entrega de láminas.
Técnica de Bloque celular
1.- Al momento de recibir el frasco con la muestra, se debe medir el volumen de fluido
recibido y registrarlo al reverso de la solicitud, es ideal que el volumen de la muestra
no supere los 20 ml.
2.- La muestra debe ser fijada inmediatamente con Formalina 10% Tamponada con un
volumen igual al de la muestra.
3.- Centrifugar a 2000 rpm por 10 minutos.
4.- Eliminar el sobrenadante, tomar el pellet con cuidado, éste debe ser colocado sobre un
papel filtro y su vez debe ser envuelto en gasa. Procesarlo igual que una biopsia.
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CITOLOGÍA GINECOLÓGICA
Encargado: Tecnólogo Médico
Extendido de células
1.- Una vez recibidas las láminas con el extendido fijado se procede a la rotulación de la
lámina con el número identificatorio correspondiente.
2.- Tinción con Papanicolaou.
3.- Montaje.
4.- Entrega de láminas.
c) Procedimientos para inmunohistoquímica
En el laboratorio de Anatomía Patológica el procedimiento para realizar Técnicas
Inmunohistoquímicas es manual y se realiza según el siguiente protocolo:
1.- Desparafinación de cortes.
2.- Lavar en agua destilada por 5 minutos.
3.- Recuperación Antigénica con calor en vaporera:
- Cargar vaporera con agua destilada hasta la línea FULL.
- Colocar en su interior los recipientes con el Buffer de recuperación VECTOR
ANTIGEN UNMASKING SOLUCION.
- Para preparar la solución recuperadora se debe tomar 1,9 ml de la solución VECTOR
ANTIGEN UNMASKING SOLUCION y diluirla en 200 ml de agua destilada.
- Poner la cubierta de la vaporera lo mas hermética posible, encender la vaporera y
calentar por 20 minutos o hasta alcanzar una temperatura mínima de 85 °C. Luego
cargar cada recipiente con las láminas respectivas a recuperar. Las muestras a
estudio deberán permanecer por un mínimo de 20 minutos expuestas a la
temperatura de la cámara de vapor. Cumplido el tiempo de recuperación, la vaporera
se cortará automáticamente. Allí los cortes permanecerán por 15 minutos con la
cámara descubierta, luego de lo cual se procederá a cambiar el buffer por agua
destilada.
4.- Bloqueo de Peroxidasa endógena durante 15 minutos a temperatura ambiente, con
Peróxido de Hidrógeno.
5.- Lavado en agua destilada.
6.- Lavado en PBS, lavar 3 veces por 1 minuto cada uno.
7.- Bloqueo de uniones inespecíficas durante 10 minutos a temperatura ambiente, con
NORMAL HORSE SERUM listo para usar.
8.- Incubación con Anticuerpo Primario, dejar incubando toda noche a 4°C.
9.- Lavado en PBS, 3 por 2 minutos cada uno.
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10.- Incubar con polímero Peroxidasa IMPRESS listo para usar, durante 30 minutos a
temperatura ambiente (20-25 °C).
11.- Lavado en PBS, 3 veces por 2 minutos cada uno.
12.- Revelar con cromógeno DAB durante 2 a 5 minutos. Este se prepara diluyendo 1 gota
de CROMÓGENO DAB en 1 ml de DILUYENTE.
13.- Lavar en agua destilada.
Tinción de contraste con Hematoxilina por 3 minutos.
14.- Deshidratar y montar.
VIII.
PROTOCOLO DE CONTROL DE CALIDAD
Control de Calidad de la Técnica de rutina
El Tecnólogo Médico de la UAP será el responsable de analizar previamente la calidad
de las láminas que serán entregadas al Patólogo para su posterior diagnóstico, eligiendo
al azar el 10% de éstas para luego observarlas al microscopio, verificando:
•
•
Calidad del corte: El corte de tejido contenido en la lámina debe estar
completo, incluyendo todos sus bordes.
Calidad de tinción: En el caso de la tinción de rutina (hematoxilina-eosina) la
coloración con Hematoxilina debe permitir observar claramente las
características nucleares en tanto que, la coloración con eosina debe permitir
diferenciar claramente entre el núcleo y el citoplasma.
Control de Calidad de la Técnica Especial
Así como en el análisis químico y/o bioquímico se requiere de elementos de juicio que nos
permitan darle garantía a los resultados que se obtienen, así también los métodos
histológicos e histoquímicos, requieren de estos elementos, por esta razón es de vital
importancia la utilización de controles para cada Técnica a realizar.
a) Cada tanda de THQ deberá ir acompañada de los respectivos controles positivos
externos o internos.
b) Los controles positivos son responsabilidad del Tecnólogo Médico que realiza la
técnica especial.
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c) Las láminas control deben ser marcadas con el número de paciente y la palabra
Control positivo, Caso o Control Negativo, escrita debajo de la técnica identificatoria en la
etiqueta. Estas láminas control deben ser archivadas con las láminas del paciente para
una rápida consulta y referencia.
d) El Tecnólogo Médico revisará al microscopio cada control positivo, para validar la
correcta ejecución de la técnica.
e) El Tecnólogo Médico, deberá garantizar el stock y correcto estado de los reactivos
necesarios para todas las THQ realizadas.
f) La Unidad de Anatomía Patológica (UAP) del Hospital de Angol se guiará por las
técnicas histoquímicas descritas en documento de Procedimiento de técnicas
histoquímicas.
Nota: Todas las láminas deben ser sometidas a las mismas condiciones.
IX.
PLAZOS DE ENTREGA DE RESULTADOS DE EXÁMENES
•
Biopsias diferidas, citológicos y Papanicolaou: 7 días hábiles a partir de la
recepción de la muestra.
•
Biopsias diferidas, citológicos y Papanicolaou solicitados en forma urgente
por médico clínico: 24 a 48 hrs a partir de la recepción de la muestra.
•
Biopsias de piezas quirúrgicas con diagnóstico de cáncer clínico: 14 días
hábiles.
•
Biopsias de piezas quirúrgicas con diagnóstico de cáncer clínico con
solicitud de urgente por médico clínico: 7 días hábiles.
•
Biopsias intraoperatorias: 10 a 15 minutos.
•
Autopsia: 25 días hábiles.
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X.
Versión:1.0
EVALUACIÓN
Denominación
Indicador
del Porcentaje de láminas sin artefacto Responsable
de la técnica
Tecnólogo
Médico AP
Objetivo
Lograr que la calidad del corte y tinción del tejido sea optima.
Excepciones
No hay
Fórmula
Nº de láminas sin artefacto de la técnica en el periodo
x 100
Nº de láminas entregadas para diagnóstico en el periodo
Umbral de cumplimiento
95%
Umbral SIS-Q
Optimo: 95%-100%
Aceptable: 90%- 95%
Crítico: ≤ 90%
Fuente de Datos
Hoja de evaluación de Frecuencia
corte y tinción.
Mensual
Niveles de Aplicación
Unidad de
Patológica
Tecnólogo Médico
Anatomía Usuarios
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XI.
Versión:1.0
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Vigencia: 3 años
ACTUALIZACIÓN
La vigencia del presente Protocolo corresponderá al período de 3 años, sin perjuicio de
ello, será el responsable del indicador en conjunto con sus pares clínicos el encargado de
realizar modificaciones, si producto de la dinámica de las operaciones o de nuevas formas
de trabajo implementadas, el documento requiere de una actualización. Para ese efecto,
las modificaciones propuestas deberán ser remitidas a la Oficina de Calidad para revisión
y publicación.
El proceso de actualización del Protocolo debe ser registrado en documento que
especifique los respectivos cambios, según se especifica en el anexo
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Formulario registro de modificaciones.
MODIFICACIONES
FECHA
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