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Monitoreo de hygiene para ATP
Documento Técnico
Dispositivo de prueba Hygiena para la detección de levaduras
Propósito
En la fabricación de alimentos y bebidas, la presencia de levaduras no deseadas en el equipo de procesamiento
puede introducir problemas de deterioro del producto o sabores indeseables (por ejemplo, en la producción de la
cerveza y vino). Una parte importante de un proceso de limpieza profundo es monitorear en tiempo real la efectividad
de la limpieza. Fabricantes de alimentos y bebidas al rededor del mundo utilizan el sistema de monitoreo de Hygiena
para ATP para verificar que los procesos de limpieza han funcionado correctamente y que residuos microbianos y
otros residuos se han eliminado de manera efectiva de las superficies. Dado a que los sistemas de ATP detectan
trifosfato de adenosina (ATP) y no pueden diferenciar entre células microbianas y otras materias orgánicas. Esto no
debería importar para la persona a cargo del saneamiento, ya que el objetivo principal es eliminar todos los residuos
orgánicos de las superficies durante el proceso de limpieza. Sin embargo, la detección de los organismos específicos
a bajos niveles, tales como levaduras, por el sistema de Hygiena para ATP es importante para las procesadoras de
alimentos y bebidas que manejan levaduras y puede llegar a ser problemático si no se detectan. El propósito de este
estudio es demostrar la detección de una variedad de levaduras en ausencia de una matriz alimentaria en una gama
de dispositivos de prueba Hygiena. (Es importante señalar que no existen levaduras en el aislamiento y en una planta
de fabricación de alimentos las levaduras siempre se encuentran dentro de una matriz alimentaria.) Este estudio
demostrará que los dispositivos de prueba de Hygiena ATP detectan eficazmente una variedad de levaduras a niveles
bajos con poca variación en los resultados.
Métodos
Todas las levaduras se cultivaron en PDB (caldo de dextrosa de patata) a 37 ° C y 30 ° C durante 72 horas y luego subcultivadas en PDA (agar de dextrosa de patata) para comprobar la pureza. Las levaduras se cultivaron de nuevo en
PBD antes de ser diluido en MRD (diluyente de recuperación máxima). No había necesidad de lavar la levadura en
solución salina antes de la medición, ya que es más práctico medir el fondo del ATP (ATP sin levaduras) en lugar de
tratar de removerlo y estresar la levadura en el proceso. Las levaduras en el campo nunca se lavaran a fondo del ATP
(libre), por lo que este método es más práctico. El ATP de fondo (ATP sin levaduras) se detectó utilizando un dispositivo
de prueba de propiedad interno de control de calidad que detecta ATP no microbiano.
Levaduras usadas en este experimento:
1. Saccharomyces cerevisiae
2. Candida albicans
3. Zygosaccharomyces bailii
4. Candida parasilosis
5. Rhodotorula rubra
Los siguientes dispositivos de Hygiena fueron probados:
1. SuperSnap High-Sensitivity Surface ATP
2. UltraSnap Surface ATP
3. AquaSnap Total Water ATP
Las series de dilución utilizadas fueron las siguientes:
1. Neat culture (Cultura Neat)
2. Dilución -1
3. Dilución -2
4. Dilución -3
5. Dilución -4
6. Dilución -5
7. Dilución -6
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De cada dilución se añadió 10 μL directamente a la yema del hisopo o se añade 100 μL al cucharón. Cada dispositivo
se activó y se leyó en el sistema de monitoreo EnSURE. Cinco repeticiones se ejecutaron de cada dilución. Placas de
referencia también se realizaron utilizando el método de Miles y Mizra mediante la inoculación de cada dilución como
manchas de 10 μL en el PDA para estimar exactamente el número por 10 μL y también para estimar a partir del
método M&M el %CV del método de la inoculación independientemente de los resultados de las URL.
Resultados
Levadura 1: Saccharomyces cerevisiae
Comenzando un cultivo durante la noche = 2e7 levaduras por mL (25,500,000)
Tabla 1: Promedio de Saccharomyces cerevisiae en la detección de dispositivos de prueba Hygiena (RLU) (n = 5)
SuperSnap UltraSnap AquaSnap Non-yeast ATP (ATP sin levaduras)
Neat
9235
7969
9888
245
-1
7966
5312
9790
42
-2
2486
765
7648
8
-3
183
77
1116
1
-4
28
23
246
0
-5
0
0
12
0
Neat CV%
1
9
1
17
-1 CV%
3
8
2
11
-2 CV%
9
6
4
11
-3 CV%
9
10
13
149
-4 CV%
8
21
7
NA
-5 CV%
NA
NA
18
NA
Tabla 2: Recuentos de placas de Saccharomyces cerevisiae (CFU)
Dilución
Rep 1
Rep 2
Rep 3
Neat
-1
-2
-3
-4
-5
TNTC
TNTC
TNTC
255
21
1
TNTC
TNTC
TNTC
241
22
2
TNTC
TNTC
TNTC
274
27
2
Rep 4
Rep 5
TNTC
TNTC
TNTC
291
21
2
TNTC
TNTC
TNTC
243
24
2
Promedio / Limite de
las UFC
NA
NA
NA
261 (<500 CFU)
23 (<50 CFU)
2 (<10 CFU)
Tabla 3: Limite de detección para Saccharomyces cerevisiae (CFU)
SuperSnap UltraSnap AquaSnap
LoD Yeast CFU
<50
<50
<10
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Levaduras 2: Candida albicans
Comenzando un cultivo durante la noche = 2e7 levaduras por mL (23,660,000)
Tabla 4: Promedio de Candida albicans en la detección de dispositivos de prueba Hygiena (RLU) (n = 5
SuperSnap UltraSnap AquaSnap Non-yeast ATP (ATP sin levaduras)
Neat
9083
8068
9891
257
-1
7664
6864
9374
74
-2
2838
996
8265
8
-3
290
95
1146
0
-4
91
30
133
0
-5
1
5
9
0
Neat CV%
2
3
1
3
-1 CV%
2
2
4
20
-2 CV%
10
4
3
10
-3 CV%
8
5
13
NA
-4 CV%
6
11
15
NA
-5 CV%
37
16
8
NA
Tabla 5: Recuentos de placas de Candida albicans (CFU)
Dilución
Rep 1
Rep 2
Rep 3
Neat
-1
-2
-3
-4
-5
TNTC
TNTC
TNTC
201
24
4
TNTC
TNTC
TNTC
250
27
2
TNTC
TNTC
TNTC
266
21
1
Rep 4
Rep 5
TNTC
TNTC
TNTC
191
31
1
TNTC
TNTC
TNTC
275
16
2
Promedio / Limite
de las UFC
NA
NA
NA
237 (<250 CFU)
24 (<50 CFU)
2 (<10 CFU)
Tabla 6: Límite de Detección de Candida albicans (CFU)
SuperSnap UltraSnap AquaSnap
LoD Yeast CFU
<50
<50
<10
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Levaduras 3: Zygosaccharomyces bailii
Comenzando un cultivo durante la noche = 1e6 levaduras por mL (1,280,000)
Tabla 7: Promedio de Zygosaccharomyces bailii de detección en los dispositivos de prueba Hygiena (RLU) (n = 5)
SuperSnap UltraSnap AquaSnap Non-yeast ATP (ATP sin levaduras)
Neat
6928
7892
9917
659
-1
1718
2993
9400
174
-2
243
263
4023
19
-3
34
27
480
1
-4
4
5
47
0
-5
0
0
5
0
Neat CV%
5
2
1
7
-1 CV%
7
4
3
10
-2 CV%
8
11
5
14
-3 CV%
7
19
14
91
-4 CV%
15
32
10
NA
-5 CV%
NA
NA
9
NA
Tabla 8: Recuentos de placas para bailii Zygosaccharomyces (CFU)
Dilution
Rep 1
Rep 2
Rep 3
Neat
-1
-2
-3
-4
-5
TNTC
TNTC
142
11
0
0
TNTC
TNTC
112
25
0
1
TNTC
TNTC
128
18
2
0
Rep 4
Rep 5
TNTC
TNTC
114
14
3
0
TNTC
TNTC
144
19
1
0
Promedio / Limite de
las UFC
NA
NA
128 (<250 CFU)
17 (<50 CFU)
1 (<10 CFU)
0 (<10 CFU)
Tabla 9: Límite de detección para Zygosaccharomyces bailii (CFU)
SuperSnap UltraSnap AquaSnap
LoD Yeast CFU
<50
<50
<10
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Levaduras 4: Candida parasilosis
Comenzando un cultivo durante la noche = 3e7 levaduras por mL (3,124,000)
Tabla 10: Detección Promedio parasilosis Candida en dispositivos de prueba Hygiena (RLU) (n = 5)
SuperSnap UltraSnap AquaSnap Non-yeast ATP (ATP sin levaduras)
Neat
8874
8351
9999
129
-1
8122
4875
9999
25
-2
3124
478
8114
7
-3
284
58
897
1
-4
33
12
142
0
-5
0
0
8
0
Neat CV%
2
11
2
11
-1 CV%
4
5
5
9
-2 CV%
4
6
5
14
-3 CV%
8
8
12
121
-4 CV%
9
15
9
NA
-5 CV%
NA
NA
14
NA
Tabla 11: Recuentos de placas de Candida parasilosis (CFU)
Dilution
Rep 1
Rep 2
Rep 3
Neat
-1
-2
-3
-4
-5
TNTC
TNTC
TNTC
312
28
2
TNTC
TNTC
TNTC
347
24
3
Rep 4
Rep 5
TNTC
TNTC
TNTC
284
18
1
TNTC
TNTC
TNTC
294
27
1
TNTC
TNTC
TNTC
325
31
3
Promedio / Limite de
las UFC
NA
NA
NA
312 (<500 CFU)
26 (<50 CFU)
2 (<10 CFU)
Tabla 12: Límite de Detección para Candida parasilosis (CFU)
SuperSnap UltraSnap AquaSnap
LoD Yeast CFU
<50
<50
<10
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Levaduras 5: Rhodotorula rubra
Comenzando un cultivo durante la noche = 1e7 levaduras por mL (1,130,000)
Tabla 13: Detección Promedio Rhodotorula rubra en dispositivos de prueba Hygiena (RLU) (n = 5)
SuperSnap UltraSnap AquaSnap Non-yeast ATP (ATP sin levaduras)
Neat
8712
7894
8989
88
-1
5841
5111
8478
11
-2
2811
1421
7133
4
-3
198
88
1011
0
-4
21
4
114
0
-5
0
0
5
0
Neat CV%
2
1
1
1
-1 CV%
4
4
4
8
-2 CV%
4
4
6
10
-3 CV%
8
5
10
88
-4 CV%
11
12
19
NA
-5 CV%
NA
NA
14
NA
Tabla 14: Recuentos de placas de Rhodotorula rubra (RLU)
Dilution
Rep 1
Rep 2
Rep 3
Neat
-1
-2
-3
-4
-5
TNTC
TNTC
TNTC
112
14
0
TNTC
TNTC
TNTC
147
16
0
TNTC
TNTC
TNTC
125
15
0
Rep 4
Rep 5
TNTC
TNTC
TNTC
84
14
1
TNTC
TNTC
TNTC
94
17
0
Promedio / Limite de
las UFC
NA
NA
NA
113 (<250 CFU)
15 (<50 CFU)
0 (<10 CFU)
Tabla 15: Límite de Detección de Rhodotorula rubra (CFU)
SuperSnap UltraSnap AquaSnap
LoD Yeast CFU
<50
<50
<10
Conclusión
En general, los dispositivos de prueba para superficies SuperSnap y UltraSnap para ATP detectan aproximadamente
<50 UFC/mL de levaduras. La variación en los resultados a este bajo nivel fue muy mínima con el rango de %CV como
sigue: SuperSnap (6-11%), UltraSnap (12-21%) y AquaSnap (8-18%).
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