Test CEDIA® Opiaceos 2K Assay

Test CEDIA® Opiaceos 2K Assay
In Vitro Diagnosticum
100090 (Kits de 3 x 17 mL)
100099 (Kits de 65 mL)
1815296 (Kits de 495 mL)
Uso
Precauciones y advertencias
El Test CEDIA® Opiáceos 2K está diseñado para la determinación cualitativa de opiáceos en la
orina humana (en una concentración de umbral de 2000 ng/mL).1
El test proporciona únicamente un resultado analítico preliminar. Se debe utilizar un método
químico alternativo más específico para confirmar el resultado analítico. La gascromatografía/
espectrometría de masa (GC/EM) es el método de confirmación preferido.2 Siempre deben
aplicarse consideraciones clínicas y el juicio profesional con todo resultado de test
de consumo de estupefacientes, especialmente cuando se utilicen resultados positivos
preliminares.
Resumen y explicación del test
El opio se obtiene de las vainas no maduras de la amapola opiácea Papaver somniferum.3,4
La morfina y la codeína son alcaloides naturales del opio.3,5 Ambas tienen usos médicos
generalmente aceptados, en particular como analgésicos. Sin embargo, ambas drogas
presentan riesgos de toxicomanía.3-7 La heroína es un compuesto sintetizado de la morfina y es
el opiáceo más común en la drogadicción.8
El cuerpo metaboliza los opiáceos con gran rapidez, y el sitio principal del metabolismo es
el hígado.5,6,9 La morfina se excreta en la orina como morfina conjugada, morfina libre y otros
metabolitos en estado vestigial.4,5,9 La codeína se excreta en la orina como codeína libre
y conjugada y morfina libre y conjugada.4,5 Después de una administración de codeína, la
codeína total puede eliminarse más rápidamente que la morfina total, de manera que algunas
muestras de orina de usuarios de codeína pueden llegar a revelar solamente la presencia de
morfina total o una relación de morfina total a codeína total mayor que uno.4,6,8 La heroína se
metaboliza rápidamente en sangre entera resultando en 6-monoacetilmorfina, que luego se
hidroliza para formar morfina conjugada en el hígado.4,7 Se excreta en la orina principalmente
como morfina conjugada, pero también en pequeñas cantidades bajo la forma de morfina libre y
6-monoacetilmorfina.4,7 La codeína no es metabolito de la heroína o morfina como anteriormente
lo aseveraran ciertos investigadores.4,7 Sin embargo, la codeína se ha revelado como impureza
en ciertas preparaciones de heroína, lo que explica su presencia en la orina de algunos adictos
a la heroína.3,5,7 Según la dosis y la sensibilidad del método analítico, la morfina total puede
detectarse en la orina hasta 72 horas después de la última administración de morfina, codeína
o heroína.4,6,8,9
El Test CEDIA Opiáceos 2K recurre a la tecnología del ADN recombinante (patente
estadounidense N° 4708929) para producir un sistema de enzimoinmunoensayo homogéneo sin
igual.10 El test se basa en la enzima bacteriana -galactosidasa, que se divide en dos segmentos
inactivos por medio de procedimientos de ingeniería genética. Estos fragmentos se recombinan
espontáneamente para formar una enzima activa que, al reaccionar con el substrato, ocasiona
un cambio de color que puede medirse por medio de la espectrofotometría.
En el test, la droga en la muestra compite con la droga conjugada con un fragmento inactivo
de la -galactosidasa en busca de un sitio de fijación de anticuerpos. Si la muestra contiene la
droga, ésta se fija al anticuerpo, permitiendo que los fragmentos inactivos formen una enzima
activa. Si la muestra no contiene droga, el anticuerpo se fija a la droga conjugada con el
fragmento inactivo, e impide la reasociación de los fragmentos inactivos de -galactosidasa,
impidiendo a su vez la formación de enzima activa. La cantidad de enzima activa formada y el
correspondiente cambio de absorbancia son directamente proporcionales a la concentración
de droga en la muestra.
Reactivos
1 Tampón de reconstitución AE: Contiene 13 μg/mL anticuerpo monoclonal anti-opiáceos,
sales de tampón y conservante.
1a Reactivo AE: Contiene 0,171 g/L aceptor enzimático, sales de tampón, detergente y
conservante.
2 Tampón de reconstitución DE: Contiene tampón fosfato.
2a Reactivo DE: Contiene 23,3 μg/L dador enzimático conjugado a un derivado de la
morfina, 1,67 g/L rojo de clorofenol- -D-galactopiranósido, estabilizador y conservante.
Material adicional: Etiquetas de código de barras alternativas (Nos de catálogo 100090 y
100099 únicamente. Hágase referencia a la aplicación específica al analizador para obtener
las instrucciones para el uso). Envase de analizador vacío para trasvasar la solución DE/AE
(no de cat. 100099). Envase de analizador vacío para trasvasar la solución DE (no de cat. 1815296
únicamente).
Material adicional necesario (venta por separado):
Calibrador CEDIA Multidrogas, Cut-offs Primarios
Los reactivos contienen azida sódica. Evitar el contacto con la piel y las mucosas. Enjuagar
las áreas afectadas con agua en abundancia. En caso de contacto con los ojos o de ingestión,
consultar inmediatamente a un médico. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o el
cobre de las cañerías hasta formar azidas metálicas potencialmente explosivas. Al desechar
el reactivo debe enjuagarse con abundante agua para evitar la acumulación de azidas. Limpiar
las superficies metálicas expuestas a la azida con hidróxido sódico al 10%.
Preparación y almacenamiento del reactivo
A continuación se describe la preparación de las soluciones para los analizadores Hitachi.
Para otros analizadores, utilícese la aplicación específica al analizador. Retirar el kit del
almacenamiento refrigerado (2-8°C) inmediatamente antes de preparar las soluciones. Preparar
las soluciones en el orden siguiente para reducir el riesgo de una posible contaminación.
R2 Solución donadorr enzimático: Conectar el envase 2a (ED Reactivo) al envase 2 (ED
Tampón de reconstitución) utilizando uno de los adaptadores suministrados en el kit. Mezclar
cuidadosamente por inversión, procurando que todo el material liofilizado del envase 2a se
transfiera al envase 2. Evitar la formación de espuma. Desconectar el envase 2a y el adaptador
del envase 2 y desecharlos. Tapar el envase 2 y dejar reposar durante aproximadamente 5
minutos a temperatura ambiente (15-25°C). Volver a mezclar. Anotar la fecha de reconstitución
en la etiqueta del envase.
R1 Solución aceptor Enzimático: Conectar el envase 1a (AE Reactivo) al envase 1 (AE
Tampón de reconstitución) utilizando uno de los adaptadores suministrados en el kit. Mezclar
cuidadosamente por inversión, procurando que todo el material liofilizado del envase 1a se
transfiera al envase 1. Evitar la formación de espuma. Desconectar el envase 1a y el adaptador
del envase 1 y desecharlos. Tapar el envase 1 y dejar reposar durante aproximadamente 5
minutos a temperatura ambiente (15-25°C). Volver a mezclar. Anotar la fecha de reconstitución
en la etiqueta del envase.
N° de catálogo 100099 - Analizador Hitachi 717, 911, 912 ó 914: Transvasar los reactivo
reconstituidos a los francos de 100 mL vacíos R1 y R2 correspondientes suministrados con el
kit. envases directamente en el compartimiento de reactivos del analizador. Analizador Hitachi
917 y Sistema Modular analytics P: Emplear los reactivos reconstituidos sin trasvarlos a los
envases. Desechar los envases de 100 mL vacios.
N° de catálogo 1815296 - Analizador Hitachi 747 y Sistema Modular analytics D: Transvasar
mediante el embudo parte de la solución R2 al envase suministrado de solución R2,
adecuadamente etiquetado.
NOTA 1: Los componentes suministrados en este kit deben utilizarse en su conjunto. No mezclar
componentes de lotes diferentes.
NOTA 2: Para evitar la contaminación recíproca de los reactivos, no intercambiar los tapones de
los envases de reactivo. La Solución R2 debe presentar un color amarillo naranja. Un color rojo
o rojo púrpura indica que el reactivo está contaminado y debe desecharse.
NOTA 3: Las Soluciones R1 y R2 deben estar a la temperatura del compartimiento de
almacenamiento de reactivos del analizador antes de proceder al test. Véase la aplicación
específica al analizador para obtener informaciones adicionales.
NOTA 4: Proteger el reactivo AE de una exposición prolongada y continua a una luz intensa para
asegurar su estabilidad.
Almacenar los reactivos a 2-8°C. NO CONGELAR. Para averiguar la estabilidad de los
componentes sin abrir, véanse las etiquetas de la caja o de los envases para obtener la fecha
de caducidad.
Solución R1: 60 días refrigerados en el analizador o a 2-8°C.
Solución R2: 60 días refrigerados en el analizador o a 2-8°C.
Recogida y manipulación de muestras
Las muestras de orina deben recogerse en recipientes limpios de vidrio o de plástico.
Centrifugar las muestras muy turbias antes de realizar la prueba. Manipular la orina humana
como si se tratara de material potencialmente infeccioso. Si se sospechara una adulteración,
deberá obtenerse otra muestra para el análisis, ya que la adulteración de las muestras de orina
puede afectar los resultados del test.
Los Lineamientos imperativos para los programas federales de control de drogas en el lugar
de trabajo; Lineamientos Finales; Circular (Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug
Testing Programs; Final Guidelines; Notice) recomiendan que las muestras no sometidas a
un test inicial dentro de los 7 días de su llegada al laboratorio se conserven en unidades de
refrigeración seguras.11
Procedimiento del test
Especificidad
Al analizar los siguientes opioides con el Test CEDIA Opiáceos 2K se comprobaron las reacciones
cruzadas indicadas a continuación:
Para efectuar este test pueden utilizarse analizadores químicos capaces de mantener una
temperatura constante, de pipetear muestras, de mezclar reactivos, de medir la velocidad
de absorbencia y de cronometrar la reacción con exactitud. Microgenics, parte de Thermo
Fisher Scientific pone a su disposición las hojas de aplicación con los distintos parámetros
correspondientes a los instrumentos específicos. Efectuar la programación por medio de la
lectura de los parámetros de aplicación a partir del diskette de aplicaciones o la hoja de códigos
de barra según corresponda.
Concentration
ensayada (ng/mL)
% Reactividad cruzada
Morfina
2000
100
Compuesto
Codeí na
1600
107
Usar el Calibrador Multidrogas, Cut-offs Primarios, para analizar los resultados. Para los
analizadores Hitachi, colocar el calibrador de umbral en la posición estándar apropiada
(S1) seleccionada por el usuario. Consultar la aplicación específica del analizador para más
información.
Diacetilmorfina
2000
65
Dihidrocodeína
2000
89
Hidrocodona
2000
77
La buena práctica de laboratorio recomienda emplear los controles cada día que se analicen
muestras de paciente y cada vez que se efectúe una calibración. Se recomienda utilizar dos
niveles de controles: uno 25% por encima y el otro 25% por debajo del umbral seleccionado.
Los valores obtenidos para los controles deben recaer dentro de los límites especificados. Si
se detectaran tendencias o variaciones repentinas, se deben revisar todos los parámetros
operativos u obtener la asistencia del Apoyo Técnico al Cliente de Microgenics. Todos los
requisitos de control de calidad deben realizarse de acuerdo con las normas o los requisitos de
acreditación locales, estatales o federales.
Hidromorfona
2000
79
Control de calidad y calibración12
Imipramina
Resultados y valores esperados
El calibrador de umbral de 2000 ng/mL se utiliza como referencia para distinguir entre muestras
positivas y negativas. Las muestras que produzcan valores de respuesta iguales a o mayores
que el valor de respuesta del calibrador se consideran positivas. Las muestras que produzcan
valores de respuesta menores que el valor de respuesta del calibrador se consideran
negativas. Para otros analizadores, véase la aplicación específica al analizador para obtener
informaciones adicionales.
Limitaciones
1. Un resultado positivo únicamente indica la presencia de opiáceos. No indica ni mide
la intoxicación.
2. Las semillas de amapola puede contener opiáceos, y el consumo de alimentos que
contienen semillas de amapola puede causar un resultado de test positivo.13
3. Otras sustancias y/o factores no enumerados aquí pueden interferir con el test y causar
resultados erróneos (p.ej., errores técnicos o de procedimiento).
Características específicas
13
Los resultados típicos que se obtienen con el analizador Hitachi 747 se indican a continuación.
Los resultados obtenidos en su laboratorio pueden ser distintos.
Precisión
Los estudios de medición de la precisión, utilizando reactivos y calibradores comerciales,
rindieron los siguientes resultados en mA/min con un analizador Hitachi 717 siguiendo los
lineamientos para un experimento NCCLS de repetición modificado.
Precisión Intraserie (n=21)
x̄
SD
%CV
Control Bajo
247.6
3.01
1.2
Calibrator de umbral
301.6
3.37
1.1
Control Alto
362.2
4.73
1.3
Control Bajo
64
Morfina-6-glucurónido
3500
57
6-Monoacetilmorfina
2500
80
Meperidina
1.000.000
0,2
Oximorfona
100.000
2,4
Oxicodona
64.000
3,9
Compuesto
ng/mL
Compuesto
ng/mL
Acetaminofeno
500.000
Fenciclidina
500.000
Acido acetilsalicílico
500.000
Fenobarbital
500.000
Acido salicilúrico
500.000
Fluoxetina
500.000
Amoxicilina
100.000
Levotiroxina
Anfetamina
500.000
Metadona
500.000
Benzoilecgonina
500.000
Metanfetamina
500.000
Captopril
500.000
Nifedipina
500.000
Cimetidina
500.000
Propoxifeno
500.000
Clordiazepóxido
100.000
Ranitidina
500.000
Diazepam
500.000
Secobarbital
500.000
9
Digoxina
100.000
11-nor-∆ -THC-COOH
Enalapril
500.000
Verapamil
Substance
10.000
500.000
Concentratión
Substance
Concentratión
Acetona
< 1,0 g/dL
Galactosa
< 10 mg/dL
Acido ascórbico
< 1,5 g/dL
-globulina
< 0,5 g/dL
x̄
SD
%CV
247.9
10.62
4.3
Acido oxálico
< 0,1 g/dL
Glucosa
< 3,0 g/dL
< 0,5 g/dL
Hemoglobina
< 0,3 g/dL
Calibrator de umbral
301.6
13.09
4.3
Albumina sérica humana
Control Alto
365.1
15.47
4.2
Cloruro de sodio
< 6,0 g/dL
Riboflavina
Creatinina
< 0,5 g/dL
Urea
Etanol
< 1,0 g/dL
Exactitud
Con el Test CEDIA Opiáceos 2K se analizaron 200 muestras clínicas de orina y 20 muestras
a las que se había agregado morfina hasta ± 25% del umbral de prueba de 2000 ng/mL en un
analizador Hitachi 717 utilizando el Test CEDIA Opiáceos como referencia, con los siguientes
resultados:
+
84
35*
-
0
101
< 7,5 mg/dL
< 5,0 g/dL
Sensibilidad
La sensibilidad del test, o su límite de detección (LOD por sus siglas en inglés), representa
la menor concentración de opiáceos que puede distinguirse del calibrador negativo, y es de
60,8 ng/mL.
Test CEDIA
Opiáceos 2K
+
Test CEDIA
Opiáceos
50.000
No se observó interferencia alguna con las siguientes sustancias agregadas a las
concentraciones endógenas normales presentes en la orina en análisis realizados con el Test
CEDIA Opiáceos 2K:
Precisión Interserie (n=61)
Muestra
2,3
2000
Compuestos sin relación estructural analizados con el Test CEDIA Opiáceos 2K arrojaron
resultados negativos en las concentraciones indicadas a continuación.
Los resultados de este test únicamente diferencian entre muestras positivas (> 2000 ng/mL) y
negativas, sin estimar la cantidad de droga detectada en una muestra positiva.
Muestra
90.000
Morfina-3-glucurónido
* Las 35 muestras se analizaron con GC/EM y revelaron un contenido de 172-1899 ng/mL de morfina.
2
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Microgenics Corporation
46500 Kato Road
Fremont, CA 94538 EE.UU.
Servicio al cliente y de
asistencia técnica en EE.UU:
1-800-232-3342
Microgenics GmbH
Spitalhofstrasse 94
D-94032 Passau Germany
Tel: +49 (0) 851-88 68 90
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CEDIA es una marca registrada de Roche Diagnostics.
10006525-2-ES
2014 06
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