Características espectrofotométricas del fluido vaginal de perras y

XIV Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2013. Jornada Latinoamericana
Facultad de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de Rosario
Características espectrofotométricas del fluido vaginal de
perras y de ovejas con y sin aporte de Metronidazol
Coletti Zabala, T.; Pidello, A
Laboratorio de Química Biológica, Facultad de Ciencias Veterinarias,
Universidad Nacional de Rosario
[email protected]
Las secreciones del tracto genital femenino mantienen la humedad del
epitelio vaginal. El fluido vaginal está compuesto por transudado plasmático,
secreciones glandulares vestibulares, mucus cervical, secreciones
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endometriales, además de urea y células epiteliales . Las características y
composición de este fluido determinarán en gran medida las interacciones
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entre la microbiota nativa y las especies patógenas . El reconocimiento de
algunas características fisicoquímicas en los fluidos vaginales normales es
de fundamental importancia para disponer de herramientas analíticas que
permitan detectar las alteraciones que se producen en estados patológicos.
El Metronidazol es un antibiótico y antiprotozoaricida que tiene un amplio
espectro de acción que incluye la mayoría de las bacterias anaeróbicas
gram positivas y gram negativas. Ejerce su actividad bactericida cuando
dentro de la célula bacteriana su grupo nitro es reducido. Fue demostrado
que la eficacia de los compuestos 5-nitroimidazoles depende de su grado de
reducción. Si son solo parcialmente reducidos, el potencial de reducción es
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mayor y la eficacia del compuesto es menor . Si bien a nivel intracelular este
mecanismo es bien conocido, es escaso el conocimiento de la interacción
entre el profármaco Metronidazol y los componentes moleculares presentes
en el espacio extracelular dentro del ambiente vaginal, que produzca
cambios que potencialmente sean efectores del estado redox en términos
de factor de capacidad. En este trabajo se decidió utilizar fluido vaginal de
perras (como modelo de gran importancia en la clínica de pequeños
animales) y de ovejas (sugerida como modelo extrapolable al humano para
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evaluar la seguridad de potenciales microbiocidas) . En este estudio se
planteó: (1) caracterizar espectrofotométricamente el comportamiento de
cada uno de los fluidos utilizados como modelo; y (2) suplementar los
mismos fluidos vaginales con Metronidazol, y someter la mezcla al análisis
espectrofotométrico, con el objetivo de determinar si aparecían cambios en
la absorbancia de los compuestos preexistentes y si aparecían compuestos
neoformados. Para obtener fluido vaginal se realizó un hisopado del la
región caudal de la vagina. El hisopo se introdujo en 4ml de solución
fisiológica, se agitó en Vortex y se filtró con Millipore® de 0,2 micras. Se
sembraron alícuotas de 0,4ml de fluido vaginal sin suplementar y 0,4ml de
fluido vaginal suplementado con 0,1ml de Metronidazol 0,14 mM en una
matriz de gel Sephadex G25® (Pharmacia). Mediante un colector de
fracciones se recuperaron 26 fracciones (2,8ml cada una) a las cuáles se les
midió la absorbancia a 200 nm. En el caso de los fluidos vaginales de
XIV Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2013. Jornada Latinoamericana
Facultad de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de Rosario
Absorbancia (200 nm)
perras sin suplementar (Figura) se observó que en todas las muestras se
presentó un grupo de moléculas de bajo peso molecular (similar a la talla
molecular del Azul de Bromofenol; 699 daltons) y una elevada
concentración de compuestos insaturados que corresponden a la fracción
excluida cuando se utiliza este tamiz molecular (n=11). En el caso de los
fluidos vaginales de perras suplementados con Metronidazol se observa un
aumento de la cantidad de compuestos insaturados y por lo tanto de la
cantidad de compuestos oxidables del sistema (n=11).
En el caso de los fluidos
0.5
vaginales
de
ovejas
sin
suplementar
(Figura) la
absorbancia correspondiente a
la
fracción
excluida
se
comporta de manera similar
que en perras, es decir,
siempre se encuentra en el
0.25
mismo volumen de elución
aunque con variada intensidad
(n=4). En el caso de los fluidos
vaginales
de
ovejas
suplementados
con
Metronidazol se observa que la
0
absorbancia correspondiente a
0
40
80
la fracción excluida disminuye
Volúmen (ml)
(n=4). Este resultado sugiere
Caninos
Ovinos
que la estabilidad del grupo
funcional –NO2 fuera de la
célula microbiana podría ser afectada. Por lo tanto estos resultados son
relevantes en dos aspectos: (i) existió una diferencia en el comportamiento
de los dos fluidos vaginales; (ii) que el metronidazol podría modificar su
especiación y a través de este tipo de cambio, su mecanismo de pasaje al
interior de la célula microbiana y aún en el caso de que el pasaje no sea
afectado, la especie que ingrese tenga modificada su capacidad de
reducción intracelular, proceso que está a la base de su acción antibiótica.
BIBLIOGRAFÍA
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