Patología molecular del carcinoma de cólon. Dra. Eva Musulén

PATOLOGIA MOLECULAR
DEL CARCINOMA DE
COLON
Eva Musulén
Patología molecular del CCR
1. Identificar pacientes de riesgo
(Síndrome de Lynch)
Inestabilidad de microsatélites
2. Guiar estrategia terapéutica
Inestabilidad de microsatélites
Dianas terapéuticas
RAS
Síndrome de Lynch
• Sd de predisposición al cáncer + frecuente
Síndrome de Lynch
• Sd de predisposición al cáncer + frecuente
• Autosómico dominante
Síndrome de Lynch
• Sd de predisposición al cáncer + frecuente
• Autosómico dominante
• Alteración genética:
- Genes reparadores del DNA
(Mismatch repair genes)
Síndrome de Lynch
• Sd de predisposición al cáncer + frecuente
• Autosómico dominante
• Alteración genética:
- Genes reparadores del DNA
(Mismatch repair genes)
• Presentación clínica:
- Sd Lynch I
- Sd Lynch II
Sd Lynch tipo I
• CCR edad precoz
• Histología:
– Medular, mucinoso,
anillo de sello
• Inestabilidad de microsatélites
(IMS)
Sd Lynch tipo II
• Carcinoma colorrectal
• Otros carcinomas relacionados (endometrio,
estómago, uréter / pelvis renal, etc)
GENES REPARADORES DEL DNA
Mismatch repair system
GENES REPARADORES DEL DNA
Mismatch repair system
GENES REPARADORES DEL DNA
Mismatch repair system
hMLH1 / hMSH2 / hMSH6 / hPMS2
Positividad nuclear
Proteína funcional
Gen íntegro
hMLH1 / hMSH2 / hMSH6 / hPMS2
Positividad nuclear
Proteína funcional
Gen íntegro
Negatividad nuclear
Proteína no funcional
Alteración del DNA
MLH1
PMS2
MSH2
MSH6
GEN
ALTERADO
(-)
(-)
(+)
(+)
MLH1
(+)
(-)
(+)
(+)
PMS2
(+)
(+)
(-)
(-)
MSH2
(+)
(+)
(+)
(-)
MSH6
Microsatélites
• Zonas repetitivas del DNA:
Mononucleótidos (AAAAAAAA)
Dinucleótidos (CACACACA)
Trinucleótidos (AGCAGCAGC)
etc…
• Polimórficas (longitud variable):
Entre individuos
Entre alelos de un mismo individuo
Inestabilidad de microsatélites
El sistema de reparación de DNA falla y no
se corrigen los nucleótidos introducidos de
más o de menos durante la replicación del
DNA
Inestabilidad de microsatélites
en el CCR
Panel de 5 microsatélites:
NR27, NR21, NR24, BAT25 i BAT26
Estable
MSI-Low
MSI-High
0 microsatélites mutados
1 microsatélite mutado
2 microsatélites mutados
Boland et al.
Cancer Res 1998;58:5248-57
Inestabilidad de microsatélites
• MSI-H ≥2 microsatélites mutados
NR27
NR21
NR24
bat25
bat26
TEJIDO
TUMORAL
TEJIDO
NORMAL
MLH1
PMS2
MSH2
MSH6
GEN
ALTERADO
IMS
(-)
(-)
(+)
(+)
MLH1
INESTABLE
(+)
(-)
(+)
(+)
PMS2
INESTABLE
(+)
(+)
(-)
(-)
MSH2
INESTABLE
(+)
(+)
(+)
(-)
MSH6
ESTABLE
INESTABLE
MLH1 / BRAF
PROTEÍNA
MLH1
V600E
BRAF
ALTERACIÓN
GEN MLH1
CONCLUSIÓN
(-)
MUTACIÓN
HIPERMETILACIÓN
PROMOTOR
CCR
ESPORÁDICO
(-)
WILD TYPE
MUTACIÓN
CCR
HEREDITARIO
EPCAM
Chromosome 2
EPCAM
Chromosome 2
MSH2
Chromosome 2
EPCAM
3’
EPCAM
3’
EPCAM
3’
MSH2
Exon 1
promoter
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
EPCAM
3’
MSH2
Met
Met Met
promoter
Exon 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
EPCAM
3’
MSH2
Met
Met Met
promoter
Exon 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
EPCAM
3’
MSH2
Met
Met Met
Exon 1
2
promoter
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
Met
Met Met
LYNCH SYNDROME
EPCAM
Deletion of exon 9
MSH2 GERMLINE MUTATION
MSH2
EPCAM
MSH2 GERMLINE MUTATION
MSH2
EPCAM
EPCAM GERMLINE DELETION
MSH2
EPCAM
CRC
IHC
MLH1
MSH2
MSH6
(-)
BRAF
V600E
gene mutation
<50 years
Lynch phenotype
(-)
MSI-H
(+)
(+)*
*
(-)
* MSI PCR
EPCAM
IHC
SPORADIC
PROBABLY LS-RELATED
Patologia molecular CCR
1.- Identificar pacientes de riesgo
(Síndrome de Lynch)
Inestabilidad de microsatélites
2.- Guiar estrategia terapéutica
Inestabilidad de microsatélites
Algorithm for utilizing microsatellite instability alongside clinical pathological
factors in stage II and III colorectal cancer.
First published in Nat Rev Clinic Oncol 2011;8:222–232
Patología molecular del CCR
1. Identificar pacientes de riesgo
(Síndrome de Lynch)
Inestabilidad de microsatélites
2. Guiar estrategia terapéutica
Inestabilidad de microsatélites
Dianas terapéuticas
RAS
Cell signalling pathways in CRC
Cell signalling pathways in CRC
RAS
KRAS
LA MUESTRA
• ¿Cual es la mejor muestra para hacer el
estudio mutacional de KRAS en el CCRm?
• En el caso de +1 muestra tumoral de un
paciente
Estudiar la MT más reciente
• En el caso de CCR-P sincrónicos
Analizarlos todos
(neoplasias independentes !)
EL MÉTODO
KRAS Strip Assay
Secuenciación Sanger
GGT > TGT
Pirosecuenciación
LAS MUTACIONES
Mutaciones de KRAS
Exón 2 codones 12 y 13
PEAK Trial
mFOLFOX6 + Panitumumab or Bevacizumab in 1st-line
Treatment of WT KRAS exon 2 mCRC (Open Label, Phase 2)
mFOLFOX6 (Q2W) +
panitumumab 6 mg/kg
(Q2W)
Metastatic
CRC
(n=285)
R
1:1
mFOLFOX6 (Q2W) +
bevacizumab 5 mg/kg
(Q2W)
Tumour Assessment Q8W (±7 days);
Treatment administered until
disease progression, death,
or withdrawal from study

S
A
F
E
T
Y
E
N
D
O
F
T
R
E
A
T
M
E
N
T
30 days
(+ 3 days)
F
O
L
L
O
W
U
P
P
O
S
T
T
R
E
A
T
M
E
N
T
E
N
D
O
F
F
O
L
L
O
W
S
T
U
D
Y
U
P
Every 3 months (±28 days)
until end of study
Study endpoints: PFS* (1°); OS, ORR, resection rate, safety, exploratory biomarker analysis
*PFS, progression-free survival; defined as time from date of randomisation to date of first radiographic disease (per modified RECIST v1.0), or death
within 60 days after the last evaluable tumour assessment or randomisation (whichever is later). Patients not meeting the criteria by the cut-off date
were censored at the last evaluable tumour assessment date; OS, overall survival; ORR, objective response rate; mFOLFOX6, modified FOLFOX6
Schwartzberg L, et al. J Clin Oncol 31, 2013 (suppl; abstr 3631); Protocol ID: 20070509; ClinicalTrials.gov identifier:
NCT00819780.
PEAK Trial Expanded RAS Analysis
KRAS
EXON 1
EXON 2
59 61
4%
12 13
N/A
NRAS
EXON 1
EXON 2
12 13
5%
BRAF
EXON 1
EXON 3
EXON 3
59 61
6%
EXON 15
EXON 16
600
6%
Schwartzberg L, et al. J Clin Oncol 31, 2013 (suppl; abstr 3631)
EXON 4
117 146
7%
EXON 4
117 146
0%
PEAK Trial Biomarker Analysis
PFS in Patients with WT KRAS exon 2 and WT RAS
mCRC Treated with Panitumumab + mFOLFOX6#
WT RAS (exons 2,3,4 of KRAS/NRAS)
100
100
90
90
Proportion event-free (%)
Proportion event-free (%)
Original WT KRAS exon 2 (ITT set)
80
70
60
50
40
30
20
80
70
60
50
40
30
20
10
10
0
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Months
Events
n (%)
Median (95% CI)
months
Panitumumab +
mFOLFOX6 (n=142)
90 (63)
10.9 (9.4–13.0)
Bevacizumab +
mFOLFOX6 (n=143)
94 (66)
10.1 (9.0–12.6)
HR*=0.87 (95% CI: 0.65–1.17)
p=0.35
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
Months
Events
n (%)
Median (95% CI)
months
Panitumumab +
mFOLFOX6 (n=88)
50 (57)
13.0 (10.9–15.1)
Bevacizumab +
mFOLFOX6 (n=82)
60 (73)
9.5 (9.0–12.7)
HR*=0.65 (95% CI: 0.44–0.96)
p=0.03
Schwartzberg L, et al. J Clin Oncol 31, 2013 (suppl; abstr 3631).
RAS TOTAL
Mutaciones de KRAS
Exón 2 codones 12 y 13
Exón 3 codones 59 y 61
Exón 4 codones 117 y 146
Mutaciones de NRAS
Exón 2 codones 12 y 13
Exón 3 codones 59 y 61
Exón 4 codones 117 y 146
Cell signalling pathways in CRC
RAF
LAS MUTACIONES
Exón 15 codón 600 (V600E)
Cell signalling pathways in CRC
PIK3