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MARCADORES MOLECULARES DE
DIAGNÓSTICO ASOCIADOS A CÁNCER
HEREDITARIO
Silvia Liliana Cossio, PhD.
Laboratório de Medicina Genômica
Centro de Pesquisa Experimental
Hospital de Clínicas de Porto Alegre
Cáncer
• Es un problema significativo de salud pública en el mundo
• La incidencia está en aumento
• Se lo define como una enfermedad genómica, que surge como
consecuencia de alteraciones que se acumulan en el material genético
de células normales, las cuales sufren transformaciones hasta
volverse malignas.
• El proceso carcinogénico resulta de múltiples etapas
Normal
Tiempo
Hiperplasia
Displasia
Carcinoma
in situ
Carcinoma invasivo
Secuencia adenoma-carcinoma , Fearon y Vogelstein, 1990
Enfermedad multifactorial
Historia
personal/hábitos
Ambiental
Genéticos
Factores de riesgo
Factor de riesgo: EDAD
Riesgo de Cáncer y Edad
Cólon
400
Mama
Número de casos
300
de cáncer
(por 100,000 pers.)
200
100
0
20
40
Edad en años
60
80
Tipos de cáncer
Esporádico
(70-80%)
Familiar (20-30%)
Hereditario (5%-10%)
Mutaciones somáticas
Mutaciones germinativas
Progenitor
Mutación en
células de un tejido
Mutación
en células
germinales
Prole
Todas las
células
afectadas
ESPORÁDICO
HEREDITARIO
Ocurre a edad avanzada
Ocurre a edad temprana
Acumulo de alteraciones genéticas a lo
largo de la vida del individuo
Alteraciones heredadas en genes de alta
penetrancia
Bajo riesgo de desarrollar cáncer
Alto riesgo de desarrollar cáncer
Sin desarrollo de tumores asociados
Otros tumores asociados
Casos aislados de individuos afectados
Varias generaciones afectadas
Qué es un Síndrome de Predisposición
Hereditária al Cáncer?
Condición en la que un indivíduo hereda una probabilidad mayor de
desarrollar determinado(s) tipo(s) de tumor
Esta predisposición es causada por mutaciones en:
oncogenes,, genes supresores de tumor o genes de reparo del DNA
El indivíduo afectado hereda una predisposición al cáncer
No todo indivíduo con un gen mutado desarrolla cáncer
Existen factores externos que influencian la penetrancia
Factores que afectan la Penetrancia
Genes
modificadores
Respuesta al
daño del DNA
Exposición a
carcinógenos
Factores
hormonales y
reproductivos
Laboratório de Medicina Genômica:
Cáncer de Mama y Ovario Hereditario - Hereditary Breast and Ovarian Cancer
Syndrome (HBOC)
Síndrome de Lynch - Lynch Syndrome (HNPCC)
Síndrome de Li-Fraumeni y Li-Fraumeni-like - LFS and LFL
Cáncer de Mama y Colon Hereditario - Hereditary Breast and Colon Cancer
Syndrome (HBCC)
Poliposis Asociada a MUTYH - MUTYH Associated Polyposis (MAP)
Síndrome HBOC
Síndrome autosómica dominante, causado por mutaciones germinativas en BRCA1 y BRCA2
Mutaciones en estos genes predisponen al desarrollo de ciertos tipos de tumores: mama, ovario,
próstata, páncreas, melanoma.
Screening de mutaciones germinativas:
DHPLC 5382insC (BRCA1),
PCR-Secuenciamiento 185delAG y 3450del4 (BRCA1)
5382insC y 6174delT (BRCA2)
MLPA reordenamientos génicos en BRCA1/2
• MLPA: Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification
Ligación
Hibridización
Amplificación
Electroforesis capilar
www.mrc-holland.com
Síndrome de Lynch
Síndrome autosómico dominante de predisposición a cáncer de colon, endometrio, ovario,
intestino delgado, tracto hepatobiliar, tracto uroepitelial, estómago, cerebro.
Mutaciones germinativas en genes del sistema MMR de reparo (MLH1, MSH2, MSH6 y PMS2)
han sido asociadas con SL.
Screening de mutaciones germinativas del SL:
Análisis por IHQ expresión de proteínas
Analisis de IMS Inestabilidad de Microsatélites (TT y TN)
Análisis por MS-MLPA análisis de metilación
•
IHQ
mlh1 -
msh 2 -
msh 6 -
pms2 -
mlh1 +
msh2 +
msh6 +
pms2 +
PCR Multiplex
SSCP BAT26
TN
TN
NR24
PentaC
TT
TN
NR21
BAT25
MONO27
TT
TN
BAT26
PentaD
TT
TT
Síndrome de Li-Fraumeni y Li-Fraumeni-like
Síndrome autosómico dominante caracterizado por predisponer a pacientes portadores de
mutación germinativa en TP53 a varios tipos de tumores en edad joven.
Entre los principales tumores asociados: tumores de mama, carcinomas, sarcomas, sistema
nervioso central, adrenocortical.
Otros tumores asociados (LFL): leucemias, melanomas, cancer colorrectal, de pulmon,
gastrico, de celulas germinales, plexo coroideo y tumor de Wilms.
Screening para mutaciones germinativas en TP53:
RT-PCR (Ensayo TaqMan) mutación R337H (exon 10),
PCR-Secuenciamiento gen completo
Análisis por MLPA reordenamientos génicos
Síndrome HBCC
Mutaciones germinativas en el gen CHEK2 predisponen al desarrollo de cáncer de mama y colon
principalmente.
La mutación germinativa 1100delC (exón 10) es la mutación mas comúnmente encontrada en
familias HBCC.
Screening de mutación germinativa:
Long-range PCR + Secuenciamiento mutación 1100delC
Síndrome MAP
Síndrome autosómico recesivo que causa oligopoliposis colónicas en presencia de mutaciones
germinativas en el gen MUTYH.
Clínicamente, pacientes con MAP tienen características similares a individuos con FAP
atenuada, presentando entre 15 a 100 pólipos con histología idéntica a los casos de FAP.
El fenotipo de MAP puede solapar completamente al fenotipo de poliposis clásica, haciendo
difícil el diagnóstico diferencial.
Screening de mutaciones germinativas en MUTYH:
RT-PCR (ensayo TaqMan) Y179C (exón 7) y G396D (exón 13)
PCR-Sequenciamiento gen completo
Por qué es importante identificar
individuos en riesgo para cáncer
hereditário?
?
•
•
•
•
Riesgo de cáncer superior al de la población
Riesgo para diversos tipos de tumores
Medidas eficaces de reducción de riesgo
Tratamientos específicos para formas hereditarias de cáncer
Implementar um screening histo-molecular para casos de sospecha de
síndrome de Lynch en el HCPA:
Avaliação do Heredograma: HNPCC
Critérios de Amsterdam
Critérios de Bethesda
IHQ
Diagnóstico clínico de
HNPCC
Expressão anormal
Expressão normal
Extração e quantificação
DNA TEP
IMS
Qual gene MMR
mutado?
Negativo
Positivo
IHQ
Qual gene MMR
alterado?
Especialmente
Seqüenciamento
gene(s) MMR
selecionado(s)
se hMLH1
Metilação
Não metilado
Encerrar
investigação
Metilação somática
Laboratório de Medicina Genômica, CPE – HCPA
Coordinador: Patricia Ashton-Prolla
Ana Paula Brandalize (biol)
Ingrid Petroni Ewald (biol)
Juliana Giacomazzi (biomed)
Diego Paskulin (biol)
Mariana Fitarelli (biol)
Barbara Alemar (biol)
Gabriel Macedo (biol)
Patricia Izetti (med)
Patricia Silva (enf)
Telma Machado (enf)