_ MEDIO DE CULTIVO Bacteriología General Catálogo 1306 ___________________________________________________ CALDO LACTOSADO CON MUG USO Medio de cultivo para investigar especialmente la presencia rápida de Escherichia coli detectada por fluorescencia iluminando con una lámpara de luz UV de 366 nm, en derivados de leche, agua y diversos productos farmacéuticos. Es el medio indicado para la detección y cuenta del número más probable (NMP) de organismos coliformes. PRINCIPIO La peptona y el extracto de carne proporcionan al medio los nutrientes necesarios para el desarrollo de los microorganismos. La lactosa es el carbohidrato de prueba y su fermentación se manifiesta por la formación de gas, que se observa en la campana de Durham, como una prueba presuntiva para coliformes. El sustrato 4-metilumbeliferil-β-Dglucorónido (MUG), es transformado por la enzima β-D-glucuronidasa de Escherichia coli, en 4-metilumbeliferona, este compuesto se caracteriza por ser fluorescente al iluminarse con una lámpara de luz UV de 366 nm, lo que permite su detección en forma inmediata, siendo esta prueba un indicador de la presencia de Escherichia coli. La evaluación de la muestra de ensayo se realiza conforme a los métodos descritos para la investigación bacteriológica de agua. Incubar 48 h a 35ºC. La presencia de gas en la campana de Durham indica la presencia de Escherichia coli o de otros coliformes. Utilizando una lámpara de luz UV de 366 nm, los tubos que muestran fluorescencia azul claro confirman la presencia de Escherichia coli. FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA Extracto de carne de res Lactosa 3.0 4-Metilumbeliferil-β-D-glucorónido 5.0 Peptona de gelatina pH 6.9 ± 0.2 0.1 5.0 PREPARACION Rehidratar 13.1 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos y mezclar hasta completa disolución. Distribuir en tubos de ensayo con campana de Durham. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Conservar en refrigeración de 2º a 8ºC. Antes de utilizar el medio verificar que en la campana no existan burbujas de aire. De acuerdo a la técnica a seguir será la alícuota de la muestra que se mezcle con determinadas cantidades de caldo lactosado. Incubar 18 – 24 h a 35ºC. Observar si hay producción de gas en la campana, lo que constituye una prueba presuntiva positiva de la presencia de coliformes. NOTA: Para alcanzar una concentración final constante en la composición del medio de cultivo (13.1 g/l) se debe partir de una concentración inicial adecuada de caldo lactosado. Las cantidades se indican en la siguiente tabla: DIBICO S.A. DE C.V. MEXICO, D.F. 3 MEDIO DE CULTIVO Bacteriología General Catálogo 1306 _ ___________________________________________________ INOCULO (ml) 1 10 10 100 100 100 CALDO LACTOSADO (ml) 10 10 20 20 35 50 CONCENTRACION DEL CALDO LACTOSADO (g/l) 13.1 26.2 19.65 78.6 50.44 39.3 CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO Escherichia coli CEPA ATCC 25922 Salmonella typhimurium Proteus vulgaris ATCC 14028 ATCC 8427 CRECIMIENTO Bueno, con fluorescencia al iluminar con luz UV de 366 nm Bueno, sin fluorescencia Bueno, sin fluorescencia BIBLIOGRAFIA Standard Methods for the Examination of Dairy Products 12th DE., Am. Publ. Health Assoc. Inc. New York, 1967 Standard Methods for the Examination of Water and Waste Water (12th Ed., Am Publ. Health Assoc., Inc. New York, 1965) United States Pharmacopeia XXIII cap. “Microbial Tests”, 1995 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. Sexta Edición pp 191, 1994 PRESENTACION No. Cat. 1306 1306-E Deshidratado 1000 g Deshidratado 500 g No. Cat. 1306-A Deshidratado 450 g DIBICO S.A. DE C.V. MEXICO, D.F. 3