Ejercicio # 7 Flora normal del cuerpo Objetivos • Determinar la importancia de la flora normal del cuerpo. • Describir algunos ejemplos de organismos que forman parte de la flora normal. • Aislar microorganismos de varias partes del cuerpo como: Area urogenital, Perineo, Ano, Piel, y Superficies ambientales utilizando medios de cultivo diferenciales y selectivos. Repaso medios selectivo, diferencial y enriquecido Medio Selectivo: Para aislar un grupo de bacteria específico.Se incorporan sustancias químicas que ayudan al crecimiento de cierto organismo e inhiben el crecimiento de otros grupos de bacterias Diferencial: Distinguir entre grupos de organismos relacionados tanto morfológica como bioquímicamente.Se le incorporan compuestos químicos que producen un cambio característico en el crecimiento de la bacteria y sus alrededores. Enriquecido: Posee características nutricionales específicas para estimular la producción de algún componente. Repaso de medios Medio Descripción Mac Conkey Agar Medio selectivo y diferencialSelectivo- para gram negativos Diferencial- para fermentadores de lactosa Fermentan lactosa- colonias púrpuras No fermentan lactosa- colonias incoloras Potato Dextrose Agar (PDA) Medio enriquecido para hongos Contiene ácido láctico al 25% bajando el pH lo cual inhibe el crecimiento de las bacterias y permitiendo el crecimiento de hongos Mannitol Salt Agar Medio selectivo y diferencial- medio de color rojo selectivo- para gram positivos diferencial- fermentadores de mannitol Fermentan mannitol- medio cambia a amarillo No fermentan- medio permanece rojo Tryptic Soy Agar Medio enriquecido- posee muchos nutrientes permitiendo el crecimiento de diversos microorganismos Blood Agar Medio diferencial- observar propiedades hemolíticas (hemólisis beta, alfa y gamma) Flora Normal Grupo de microorganismos mayormente comensales con un rol muy importante en la supervivencia de los humanos. Beneficios de la flora normal o microbiota 1. Provee factores de crecimiento esenciales 2. Protege contra infecciones de microorganismos altamente virulentos 3. Estimula las respuestas inmunes Factores que determinan el tipo de microbiota 1. 2. 3. 4. 5. Edad Dieta Estado hormonal Salud Higiene La piel: Contiene una flora normal que normalmente no causan enfermedades. Dos tipos: Microbiota residente Microbiota transitoria (hrs a meses) Bacterias en células muertas o asociadas a glándulas de sudor u otras glándulas de la piel. La piel Es un ambiente desfavorable para los microorganismos Tiene periodos secos y con poca humedad Es un poco ácida (secreciones y producción de ácido por algunas bacterias Alta [ ] de NaCl (sudor) ambiente de estrés osmótico. Secreciones de inhibidores lisozima (enzima que causa lisis a S. epidermidis) Flora Normal de la Piel Algunos de los organismos que podrían formar parte de la microbiota de la piel son: Bacterias gram - en lugares húmedos de la piel. Staphylococcus spp. Levaduras y hongos. Ej.Candida albicans Flora normal Piel Staphylococcus epidermis Micrococcus sp. Staphylococcus aureus Staphylococcus mutans Corynebacteria Pitrosporum ovale Staphylococcus spp. Bacteria Gram + 27 especies y su mayoría son flora del ser humano. Las pruebas clínicas para Staphylococcus son para separar éste género de otras Gram + Especies de importancia clínica: Staphylococcus aureus * Puede aislarse de la piel y mucosas. Flora de la piel, nariz y perineo Puede causar impétigo, “scaled skin syndrome” y síndrome de choque tóxico S. aureus Staphylococcus epidermis Parte de la microbiota de la piel. Causa la mayoría de la endocarditis de válvulas artificiales Puede causar infección como oportunista Staphylococcus saprophyticus Puede causar infección urinaria, mayormente en mujeres jóvenes sexualmente activas. Técnica de Aislamiento de Piel Tomar muestra con un hisopo del área afectada Inocular en Mannitol Salt Agar Incubación a 37°C por 24 horas Selección y purificación de colonias positivas Positivo Entradas de patógenos al cuerpo Flora normal de la garganta El tracto respiratorio superior incluye boca, cavidad nasal, nasofaringe y garganta. El tracto respiratorio inferior incluye traquea y pulmones. Están protegidos de infecciones por la mucosa y la saliva. A través de la nariz los microorganismos entran a nuestro sistema y algunos son expulsados por los cilios y por la mucosa, otros llegan a ser residentes. La garganta es un ambiente caliente y húmedo, permitiendo que algunas bacterias se establezcan, pero el crecimiento de la microbiota suprime el crecimiento de otros microorganismos. Ejemplos: Streptococcus, Neisseria, Staphylococcus y Haemophilus se pueden encontrar como microbiota normal. Streptococcus spp. son las que predominan. Streptococcus spp. • Cocos gram + con arreglo en cadena. • Flora normal de piel, boca, intestino y aparato respiratorio • Aerotolerantes, no requieren de O2 para crecer • Identificados mediante su patrón de hemólisis • Se caracterizan por su resistencia a químicos y factores físicos. • Se pueden aislar en garganta y área nasofaringeal a S. pyogenes, S. salvarius y S. mutans. Hemolisis Beta, Alfa y Gamma (observar propiedades hemolíticas) Aislamiento Muestra: Con hisopo se toma muestra de la Faríngeo Medio de Cultivo : Agar Sangre al 5% Incubación a 37°C por 24 a 48 horas aeróbicamente o anaeróbicamente Práctica Cinco estudiantes (por cada grupo pequeño) se tomarán una muestra de alguna parte del cuerpo utilizando un swab: – Nariz, cuello, rodilla, oreja, mano Cada uno inocularán una placa en un medio de cultivo distinto selectivo y / o diferencial: – McConkey, PDA, MSA, TSA, Blood Agar Diagrama 1) Cultivo de piel y garganta 2) Medios selectivos y diferenciales Swab Urogenital, Perineo, Ano, Piel, Superficies ambientales MacConkey MSA 37ºC cuerpo 25ºC ambiente 10 10 Recapitulación • ¿Cuál es la función de la flora normal del cuerpo? • ¿Cuál es la función de la piel? • ¿Qué tipos de bacterias habitan en la piel? • ¿Qué protege a la garganta y nariz de bacterias patógenas? • ¿Qué bacterias encontramos en la garganta?