Microbiología de Agua: Coliformes, coliformes fecales y Escherichia

Microbiología de Agua:
Coliformes, coliformes
fecales y Escherichia coli
Laboratorio Microbiología
Aplicada
Spring 2007
Microbiología de Agua
¿Qué es un coliforme?
Grupo de especies de varios géneros
Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
Citrobacter freundaii
Enterobacter aerogenes
Microbiología de Agua
¿Qué es un coliforme?
zCaracterísticas en común
{Gram-negativos
{Bacilos no formadores de esporas
{Algunos son mótiles
{Anaeróbos fermentativos
{Fermentadores de lactosa
produciendo gas y ácido luego de 48
hrs a 32 o 35oC
Coliformes
zPueden estar presentes en:
{heces fecales de animales de sangre
caliente
{pájaros
{tierra
Coliformes fecales
zIncluye E. coli y algunos
Klebsiella y Enterobacter spp.
{Temperaturas de incubación: 44.5 o
45oC por 24 hrs.
Tipos de E. coli
z Cuatro tipos de E. coli
enterovirulentos
(EEC)
{ E. coli
enterotoxigénico
(ETEC)
{ E. coli
enteropatogénico
(EPEC)
{ E. coli
enterohemorrágico
(EHEC)
{ E. coli enteroinvasivo
(EIEC)
E. coli enterotoxigénico (ETEC)
z Causante de la
diarrea del viajero
z Dosis infecciosas
altas
z Vehículo: agua o
alimento
contaminado con
aguas usadas
E. coli enteropatogénico (EPEC)
zMecanismo de virulencia
probablemente por la producción
de una verotoxina (Shiga-like
toxin)
zAlimentos implicados son carne
molida y pollo
E. coli enterohemorrágico
(EHEC)
z E. coli O157:H7 es habitante
normal de los intestinos de todos
animales incluyendo los
humanos
zProducción de una verotoxina
zDosis tan bajas como 10
organismos
zNo fermenta sorbitol, MUG
negative
E. coli enterohemorrágico
(EHEC)- Alimentos implicados
E. coli enteroinvasivo (EIEC)
z Parte de la flora intestinal
normal de los humanos y otros
primates
zDosis infecciosa ~ 10 organismos
zProduce “bacillary dysentery”
zSe confunde con shigellosis
zVehículos: hamberguer, leche no
pausterizada
Infecciones E. coli O157:H7
Septiembre-Octubre 2006
199 personas afectadas;3 muertos
Taco Bell – Dic 2006
71 personas afectadas
Métodos para Detectar
Coliformes
zMPN
{Basado en probabilidad estadistica
{NO es contaje directo
{Técnica líquida
zSólido
{Contaje directo en medio
Coliformes
MPN - Continuación
El objetivo es “diluir el organismo
zSeleccione la muestra más
diluída con todos los tubos
positivos y los próximos dos
{3,2,1 – Nuestra combinación
zDetermine el MPN utilizando la
tabla de MPN
Coliformes
Se asume en MPN
zDistribución al azar de la
bacteria
zLos organismos no se aglutinan
zSi hay un microorganismo
presente, crecerá
zExisten las condiciones
apropiadas para crecer
Ventajas sobre el uso de placas
zEl tamaño de la muestra puede
ser mayor
zMejor para números bajos de
organismos
zEl medio líquido es más suave
para el organismo porque no se
expone al calor
zRequiere preparación de medio
con antelación
Medios - LST
z Lauryl Sulfate Tryptose Broth
z Prueba PRESUMPTIVA para coliformes
{ Se informa como “presumptive coliforms/g”
z Ingredientes
{ Lauryl Sulfate – Algunas bacterias no
pueden crecer - Selectivo
{ Lactosa – Producción de gas – Diferencial
w/durham tubo
{ NaCl – Aumenta razón de reproducción
{ Tryptona – Fuente de Nitrógeno
z Incube a 35oC por 48 horas
Medio - BGLB
z Brilliant Green Lactose Bile
z Incube a 35oC por 48 horas
z Producción de gas – Positivo
z Ingredientes
{Oxgall – forma de bilis
{Brilliant Green Dye – Inhibe Gram +
z Resultados son coliformes
confirmados
z No utilize BGLB directamente –
Altamente inhibitorio
Medio – EMB Agar
Eosine Methylene Blue Agar
Placas ya servidas
Estriado para aislar del MPN
Ingredientes - Diferencial
{ Peptona – Proteína
{ Lactosa – Producción de ácido
{ Tinte Eosine – Inhibitorio
{ Azul de metileno – Indicador de pH
z E. coli and Enterobacer
{ Nucleated, dark centered, with or without
a metallic green sheen – CONFIRMED
COLIFORMS
z
z
z
z
Coliformes
Coliformes
Método Sólido
zVRBA
{Violet Red Bile Agar
zPeptona – Fuente de nitrógeno
zLactosa – Producción de ácido
zRojo neutral – Indicador (6.8 rojo, 8.0
amarillo)
zCristal Violeta – Inhibe Gram +
zNaCl – Aumenta razón de crecimiento
zSales biliares
VRBA
zTípica – Rojo-púrpura, Colonias
Elípticas, puede ser una zona de
precipitación
zSe recomiendan placas con 10100 colonias– Colonias más
grandes
zPonga una capa de agar luego
que la primera solidifique
zResultados – Presumptiva
Coliformes
Coliformes