Bacilos Gram + Esporulados

Práctica 9
BACILOS GRAM POSITIVOS ESPORULADOS
Bacillus
Características generales:
Son bacilos rectos, que se pueden encontrar solos o agrupados en cadenas, Gram
positivos, móviles por flagelos perítricos, aerobios o anaerobios facultativos y
oxidasa positivos.
Generalmente poseen cápsula de naturaleza polipeptídica o polisacárida o
ambas. Son formadores de endosporas; la forma elíptica, la posición central o
terminal y el tamaño de la espora son de utilidad taxonómica.
Especies importantes:
-B. anthracis
-B. cereus
-B. subtilis
-B. licheniformes
-B. alvei
-B. piliformis
Habitat y enfermedades asociadas a los animales domésticos:
El género Bacillus se encuentra distribuido ampliamente, la mayoría son
saprofitos del aire, suelo y agua. Se consideran como los principales
contaminantes en los laboratorios.
La mayoría de las especies son apatógenas para los animales y el hombre.
-B. anthracis: es la especie patógena más importante, causa el ántrax o fiebre
carbonosa. Esta enfermedad es de distribución mundial y afecta a todos los
mamíferos y puede presentarse en forma aguda, subaguda, y crónica.
-B. cereus: está involucrado en problemas de intoxicación alimentaria, mastitis y
aborto.
-B. subtilis: produce intoxicación alimentaria.
-B. licheniformis: causa úlcera corneal.
-B. alevei: causa loque americano en abejas.
-B. piliformis: causa la enfermedad de Tyzzer en ratones.
Requerimientos para cultivo in vitro:
El género Bacillus no es exigente en sus requerimientos nutricionales, se
desarrolla bien en medios generales como agar tripticasa soya, agar nutritivo,
agar sangre y agar bicarbonato.
Las colonias se desarrollan de 35-37ºC a las 24 hrs de incubación. Su forma
puede variar según la especie.
Las colonias de B. anthracis son rizadas presentando la característica de “cabeza
de medusa” y no producen hemólisis. En el agar bicarbonato e incubadas con
5% de CO las colonias son lisas, grises mucoides y brillantes.
Pruebas complementarias de ID:
En el caso de B. anthracis:
-Pruebas de precipitación de ASCOLI.
-Pruebas de ID por bacteriófagos.
-Inoculación en cuyes y ratones por vía intraperitoneal o endovenosa. Les
produce la muerte en 24-48 hrs.
Clostridium
Características generales:
Son bacilos Gram +, móviles o inmóviles. Las especies presentan flagelos
perítricos.
Son bacterias productoras de esporas de forma oval o esféricas, la posición de la
endospora varía según la especie. Son catalasa negativos.
La mayoría de las especies de Clostridium son anaerobias obligadas y algunas
especies son tolerantes al oxígeno. Se ha demostrado que algunas especies
crecen enpresencia de oxígeno pero no esporulan. No poseeen cápsula, excepto
C. Perfringens. Se desarrollan a temperaturas entre 30-37ºC.
Los bacilos pueden observarse, según la especie, rectos o cuervos, delgados,
variando lo largo y lo ancho, los ectremos pueden ser romos, redondos y
afilados.
Especies Importantes:
-C. chauvoei
-C. septicum
-C. novi D
-C. perfringens
-C. novyi
-C. tetani
-C. boulinum
-C. sordelii
Hábitat y enfermedades asociadas a los animales domésticos:
Los clostridios son m.o ubicuos. Algunas especies son comensales del tracto
intestinal de los animales y del hombre. La patogenicidad de éstos depende de
factores predisponentes, así como de la cantidad y actividad de las toxinas que
producen.
-C. perfingens: produce enterotoxemia en diferentes especies animales y en el
hombre. Las cepas de esta especia se dividen en cinco tipos conocidos como A,
B, C, D, y E, basado en la cantidad de toxina letal producida. La enteroteoxemia
llamada también “riñón pulposo” es una enfermedad clásica y fatal producida
por el tipo D en ovinos.
-C. chauvoei: produce la pierna negre de bovinos y ovinos.
-C. septicum, edema maligno en bovinos, ovinos, equinos y cerdos.
-C. haemolyticum (C. novyi D): produce hemoglobinuria bacilar en bovinos y
ovinos.
-C. novyi tipo B: produce hepatitis necrótica en bovinos y ovinos.
-C. tetan y C botilium: producen neurotoxinas causando tétanos y botulismo
respectivamente.
Requerimientos para cultivo in vitro:
Los clostridios se desarrollan adecuadamente en medios enriquecidos y por ser
bacterias anaerobias requieren de medios de cultivo prerreducidos e incubados
en atmósfera de anaerobiosis estricta. Actualmente se cuenta con métodos para
el cultivo de bacterias anaerobias que se basan en el principio de eliminar el
oxígeno libre cercano a los m.o. La efectividad de la técnica de anaerobiosis
utilizada, se puede comprobar por la adición de agentes indicadores de óxidoreducción como el azul de metileno y la resarzurina.
Las técnicas para lograr la anaerobiosis se clasifican en físicas y químicas. Las
físicas incluyen la ebullición del medio previo al sembrado, cámaras de
anaerobiosis al vacío con ctalizadores. Un método químico es el que utiliza la
jarra de Gas-pak donde el catalizador es el paladio y la reacción química se
realiza al agregar agua al borhidrato de sodio, bicarbonato de sodio y ac cítrico.
Otro método químico es el que utiliza caldo tioglicolato que es un medio
nutritivo que contiene tioglicolato de sodio como agente reductor.
Medios de cultivo:
-Agar sangre prerreducida
-Caldo carne
-Caldo tioglicolato
En agar sangre cultivado en anaerobiosis desarrollan colonias que pueden ser
circulares, grises y lisas, en el caso de C. perfringens, a diferencia de otras
especies de clostridium que son pequeños, con bordes irregulares o se
desarrollan en oleadas por su motilidad.
Los clostridium ususalmente presentan colonias con zonas de hemólisis beta y
meuchas cepas de C. perfringens producen una zona de doble hemólisis. En
leche tornasolada C. perfringens fermenta la lactosa, se produce coágulo y gas
que rompe este último dando una reacción característica conocida como
fermentación tormentosa.
Pruebas complementarias de ID:
-Inmuno fluorescencia para la id de C. chauvoei, C. septicum y C. novyi B.
-La inoculación intradérmica de cuyes con las toxinas y la neutralización de su
efecto necrosante mediante las antitoxinas específicas, permite la id de los
distintos tipos de C. perfringens.
-Las pruebas de protección pueden realizarse también para el Dx de botulismo y
tétanos mediante la inoculación en ratones y cuyes por vía endovenosa e
intramuscular respectivamente.