1- Un fragmento de ADN clonado, con extremos cohesivos generados por EcoRI, lleva
el gen que codifica para un polipéptido de la cápside de un virus que infecta a
humanos. Ese fragmento de ADN, que tiene 8 kpb de longitud, se inserta en el
plásmido bacteriano pBR322 en su único sitio para EcoRI. El plásmido recombinante
es clivado por dos endonucleasas de restricción (EcoRI y BamHI, por separado o
juntas) y luego es sometido a electroforesis en un gel de agarosa y teñido con bromuro
de etidio. En la figura se muestra el patrón de bandas (visualizadas por medio de luz
UV) originado por cada uno de los tratamientos y, debajo, el mapa genético del
plásmido generado:
Al realizar Southern blots de los geles “A”, "B" y "C", ¿qué fragmentos hibridarán con
una sonda del gen completo de la cápside del virus?
Aclaración: Las distancias que se encuentran dentro del círculo son las
correspondientes a los sitios de cortes BamHI. Las subrayadas, más externas, marcan
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la distancia, en kpb, entre los dos sitios EcoRI y las que están en negrita corresponden
a las distancias entre cada sitio de corte (representado por las flechas).
2 Un investigador está estudiando un polimorfismo en el largo de los fragmentos de
restricción (RFLP) ubicado en el cromosoma 7, que presenta dos alelos. El sitio de
corte para EcoRI indicado con la flecha está presente en uno de los alelos (A1) y
ausente en el otro (A2).
a) ¿Cuál será el patrón de bandas del RFLP para un individuo A1A1 utilizando la
sonda 1? ¿Y para uno A2A2? ¿Y para el heterocigota?
b) ¿Y con la sonda 2?
3- Se lleva a cabo el análisis de ADN en una familia numerosa en la que algunos
miembros están afectados (indicados en negro) por una enfermedad rara autosómica
dominante de manifestación tardía (hacia los 40 años). Se extrae el ADN genómico de
todos los miembros de la familia, se digiere con HaeIII y los fragmentos obtenidos se
separan por tamaño en un gel de agarosa. Mediante la técnica de Southern se
transfieren dichos fragmentos a una membrana de nylon y se hibrida con una sonda
radiactiva procedente de un fragmento de ADN humano de secuencia única clonado
de un vector bacteriano y se obtienen los resultados indicados en la autorradiografía
(ver debajo del pedigrí).
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a) Explique la variación obtenida con la sonda dibujando la región cromosómica
correspondiente.
b) ¿Cómo se explica el tercer hijo?
c) ¿Tendrían alguna utilidad estos resultados para aconsejar a las personas de esta
familia?
4- Se desea hallar un marcador molecular asociado al locus que determina resistencia
al barrenador del tallo (Diatraea saccharalis) en maíz para utilizarlo en programas de
selección indirecta. Por esta razón se analizó el patrón de bandas generado por
RAPD utilizando una población de 23 líneas recombinantes endocriados provenientes
de un cruzamiento entre un padre resistente por otro sensible al ataque del insecto.
Además se determinó para cada una de estas líneas el fenotipo resistente o sensible
al barrenador del tallo.
a) ¿Qué marcadores son polimórficos en la población estudiada?
b) ¿Qué marcadores están ligados a la resistencia y cuál/es aconsejaría usted utilizar
para evaluar la resistencia a D. saccharalis?
c) Indique qué marcadores NO están ligados a la resistencia.
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d) Suponiendo que pudiese clonar y secuenciar todas las bandas del RAPD, ¿podría
usted informar el locus que está implicado directamente en la resistencia a D.
saccharalis?
e) Suponiendo que pudiese clonar y secuenciar todas las bandas del RAPD,
¿esperaría obtener algún polimorfismo entre las bandas A de la población estudiada?
¿Y algún polimorfismo entre las bandas A de la población resistente?
5- La figura muestra la autoradiografía de un único locus analizado para varias muestras de ADN
provenientes de un caso de violación. Las muestras de ADN fueron sembradas en las siguientes
calles: (1) Muestra de sangre de la víctima; (2) Muestra de sangre del sospechoso A; (3) Muestra
de sangre del sospechoso B; (4) DNA markers; (5) Isopado vaginal de la víctima (fracción
femenina); (6) Isopado vaginal de la víctima (fracción masculina). ¿Qué se puede concluir de esta
autoradiografía? ¿Cómo se imagina que podría diferenciar la fracción masculina de la femenina en
un isopado vaginal?
6- Los siguientes resultados corresponden al análisis de único locus para una pareja y sus cuatro
hijos. ¿Puede alguno de los niños no ser el hijo biológico del padre?
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